全 文 ：ｐｒｏｔｅｉｎｐａｔｅｒｎｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄ，ｍｏｒｅｔｈａｎ２０ｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｎｏｒｍａｌｇｒｏｕｐ，ａｂｏｕｔｆｉｖｅｋｉｎｄｓｏｆｐｒｏｔｅｉｎｗｅｒｅ
ｆｏｕｎｄｉｎｕｒｉｎａｒｙｓａｍｐｌｅｏｆｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ａｍｏｎｇｗｈｉｃｈＭ＞４３×１０３ｐｒｏｔｅｉｎｓｗｅｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ
ｔｒｅａｔｅｄｒｅｌａｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎ’ｓｋｉｎｄａｎｄｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｃｈａｎｇｅｓｉｎＡＥＲＡｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐａｎｄＡＥＦＣｇｒｏｕｐｗｅｒｅｆｏｕｎｄ．Ｕｒｉｎａｒｙｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎｄｓｗｅｒｅ
ｒｅｄｕｃｅｄ，ｅｓｐｅｃｉａｌｙｃｅｒｔａｉｎｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｓ（Ｍ＞５０×１０３）ｗｅｒｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｄｅｃｒｅａｓｅｄａｐｐｒｏａｃｈｔｏｎｏｒｍａｌｐａｔｅｒｎｓ．Ｎｏｎｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄｕ
ｒｉｎｅｓａｍｐｌｅｓ’ｐｒｏｔｅｉｎｐａｔｅｒｎｍａｉｎｌｙｉｎｃｌｕｄｅｄｗｅｒｅｐｒｏｔｅｉｎｓ（Ｍ＝２９，３２，４３，５２，６８，７６×１０３）ａｎｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄｕｒｉｎｅｓａｍｐｌｅｓ
ｍａｉｎｌｙｉｎｃｌｕｄｅｄｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｓ（Ｍ＝２２，２４，３２，４６×１０３）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＡＥＲＡａｎｄＡＥＦＣｃｏｕｌｄｒｅｄｕｃｅｔｈｅｕｒｉｎａｒｙｐｒｏｔｅｉｎａｎｄｍａｄｅ
ｐｒｏｔｅｉｎｐａｔｅｒｎｄｉｆｅｒｅｎｔ，ｗｈｉｃｈｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｒａｄｉｘａｓｔｒａｇａｌｉａｎｄｆｒｕｃｔｕｓｃｏｒｎｉｃｏｕｌｄｐｌａｙａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇｒｅｎａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆ
ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙｍｉｃｅａｎｄｆｉｎｄｉｎｇｔｈｅｔａｒｇｅｔｐｒｏｔｅｉｎｍａｒｋｅｒｓｒｅｌａｔｅｄｔｏＡＥＲＡａｎｄＡＥＦＣｅｆｅｃｔｓｏｎｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙｍｉｃｅ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｃｈｉｐｓ；ｕｒｉｎａｒｙｐｒｏｔｅｉｎ；ＲａｄｉｘＡｓｔｒａｇａｌｉ；ＦｒｕｃｔｕｓＣｏｒｎｉ；ｎｅｐｈｒｏｐａｔｈｙ
［责任编辑 古云侠］
［收稿日期］ ２００６０９１２
［基金项目］ 国家自然科学基金资助项目（３０６７２６４３）；甘肃省
自然科学基金资助项目（３ＺＳ０５１Ａ２５０７８）
［通讯作者］ 贾正平，Ｔｅｌ：（０９３１）８９７５４６０，Ｆａｘ：（０９３１）２６６２
７２２，Ｅｍａｉｌ：ｅｍｐｒｉｑｑｑ＠ｐｕｂｌｉｃ．ｌｚ．ｇｓ．ｃｎ
地黄寡糖对 ＨｅｐＧ２胞细增殖及胰岛素抵抗的作用
郭丽民１，２，张汝学２，贾正平２，李茂星２，王 娟２，尹 强２
（１．兰州大学 生命科学学院，甘肃 兰州 ７３００００；
２．兰州军区兰州总医院 国家中医药管理局临床中药学重点学科，甘肃 兰州 ７３００５０）
［摘要］ 目的：探讨地黄寡糖对ＨｅｐＧ２细胞增殖和胰岛素抵抗的影响。方法：将 ＨｅｐＧ２细胞分为空白组、罗
格列酮组（剂量３４ｍｇ·Ｌ－１）和地黄寡糖组（剂量分别为０１～３０ｍｇ·Ｌ－１），用四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）方法检测
ＨｅｐＧ２细胞的增殖，同时采用高胰岛素诱发ＨｅｐＧ２细胞建立胰岛素抵抗模型，研究地黄寡糖对胰岛素抵抗 ＨｅｐＧ２
细胞葡萄糖消耗的影响。结果：在中剂量葡萄糖培养基中，高剂量的地黄寡糖促进ＨｅｐＧ２细胞的增殖，低剂量则抑
制ＨｅｐＧ２细胞的增殖，作用呈明显的量效关系；地黄寡糖可促进 ＨｅｐＧ２细胞的葡萄糖消耗，最佳剂量为１０ｍｇ·
Ｌ－１；地黄寡糖能够促进胰岛素抵抗ＨｅｐＧ２细胞的葡萄糖消耗，增强对胰岛素的敏感性。结论：高剂量地黄寡糖促
进ＨｅｐＧ２增殖，低剂量则抑制其增殖，地黄寡糖对高胰岛素诱发的ＨｅｐＧ２细胞胰岛素抵抗具有明显的改善作用。
［关键词］ 地黄寡糖；ＨｅｐＧ２细胞；细胞增殖；胰岛素抵抗
［中图分类号］Ｒ２８５．５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００７）１３１３２８０５
地黄在中国用于治疗糖尿病已有数千年历史。
地 黄 寡 糖 （Ｒｅｈｍａｎｎｉａｇｌｕｔｉｎｏｓａｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，
ＲＯＳ）是地黄的主要成分之一，具有改善造血、促进
免疫、抗肿瘤等作用［１］。作者以往的研究表明，ＲＯＳ
无论以腹腔注射或灌胃均可降低四氧嘧啶（ＡＬＸ）
糖尿病大鼠的血糖［２，３］，对去胸腺大鼠及老年大鼠
受损的糖代谢（ｉｍｐａｉｒｅｄｇｌｕｃｏｓｅｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ）有改善
作用［４，５］，而且在２型糖尿病大鼠模型上具有降血
糖、降血脂作用［６］；在体外地黄寡糖能够改善地塞
米松诱导的胰岛素抵抗的３Ｔ３Ｌ１脂肪细胞，促进葡
萄糖消耗，其作用效果与罗格列酮类似［７］。为了进
一步研究地黄寡糖对胰岛素抵抗的作用，本实验采
用高剂量胰岛素诱导的 ＨｅｐＧ２细胞胰岛素抵抗模
型，研究地黄寡糖对ＨｅｐＧ２细胞体外降糖作用及在
ＨｅｐＧ２细胞胰岛素抵抗模型上的药理作用。
１ 材料
１．１ 药物和试剂
地黄经中国人民解放军总后勤部卫生部药品仪
器检验所刘云教授鉴定为怀庆地黄 Ｒｅｈｍａｎｎｉａｇｌｕ
ｔｉｎｏｓａＬｉｂｏｓｃｈ．。ＲＯＳ由兰州军区总医院全军临床
药理基地提供，其中四聚糖占６０％，三糖占２０％，其
余为单糖或二糖；ＨｅｐＧ２细胞由中国科学院兰州近
代物理研究所金小东教授惠赠；胰岛素（批号
０２４Ｋ０９８８）和 无 酚 红 ＤＭＥＭ 培 养 基 （批 号
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第３２卷第１３期
２００７年７月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ １３
Ｊｕｌｙ，２００７
０７４Ｋ８３００）购自 Ｓｉｇｍａ公司；ＲＰＭＩ１６４０（批号
１２４３０９８）培养基购自 Ｇｉｂｃｏ公司；ＭＴＴ（批号
１３１３Ｂ１１）购自 ａＭＲｅｓｃｏ公司；优级新生小牛血清
（批号２００６０５０９）购自兰州民海生物工程有限公司；
马来酸罗格列酮片（ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅｍａｌｅａｔｅｔａｂｌｅｔｓ）购
自葛兰素史克（天津）有限公司（批号０５０８００９２）；葡
萄糖临床检测试剂盒购自四川迈克公司（批号
０４０６０８１）。
１．２ 仪器
酶标仪（ＴｈｅｒｍｏＥｌｅｃｔｒｏｎ，美国），倒置显微镜
（ＯＬＹＭＰＵＳＩＸ７１，日本），ＢＰ２１０Ｓ电子天平（赛多利
斯有限公司，德国）等。
２ 方法
２．１ ＨｅｐＧ２细胞的培养
ＨｅｐＧ２细胞复苏后用含１０％灭活小牛血清的
ＲＰＭＩ１６４０培养液转入１００ｍＬ培养瓶中，在３７℃，
５％ＣＯ２条件下培养。当细胞贴壁长满后，倾去培养
基，用０２５％胰蛋白酶消化，每３ｄ按１∶３比例传代
１次，取对数生长期的细胞用于实验。
２．２ 葡萄糖消耗实验［８，９］
将ＨｅｐＧ２细胞用含１０％小牛血清的 ＤＭＥＭ培
养基转入９６孔板中，待细胞长至８０％ ～９０％融合
后，更换无血清的 ＤＭＥＭ培养液继续孵育１２ｈ，待
细胞适应无血清的环境后再将培养基移出，换上无
小牛血清的含药培养基，将细胞分为空白组、罗格列
酮组（终剂量为３４ｍｇ·Ｌ－１），ＲＯＳ处理组（终剂量
分别为０１，０３，１０，３０，１０，３０ｍｇ·Ｌ－１）。上述
各组再分别加胰岛素（１０ｎｍｏｌ·Ｌ－１）处理和不加胰
岛素处理。孵育２４ｈ后，用葡萄糖临床检测试剂盒
检测培养基上清的葡萄糖含量。以不铺细胞的空白
孔为空白对照，计算２４ｈ葡萄糖消耗量。不同浓度
葡萄糖的培养液由低糖 ＤＭＥＭ加入不同量的葡萄
糖后抽滤而成。
２．３ ＭＴＴ实验［１０］
葡萄糖消耗实验结束后，移出培养液，将５ｇ·
Ｌ－１的ＭＴＴ原液与无血清ＤＭＥＭ培养基按体积１∶９
配成ＭＴＴ培养液，每孔加入ＭＴＴ培养液，３７℃继续
培养，４ｈ后终止培养，小心吸弃孔内的培养上清
液，每孔加入２００μＬ的二甲基亚砜，震荡器震荡１０
ｍｉｎ，使结晶物充分溶解。在酶标仪５７０ｎｍ波长下
测定各孔的吸光度（Ａ），以监测细胞的数目与活力。
２．４ 胰岛素抵抗ＨｅｐＧ２细胞模型的建立及药物处
理
按文献方法［１１，１２］稍作改进。将处于对数生
长期的细胞消化后，用含２％ＦＢＳ的 ＤＭＥＭ培养基
调整细胞密度为１０６个／Ｌ，转入９６孔板中。待细胞
单层贴壁后，加入新配制的含有胰岛素的培养液，并
设无胰岛素的空白孔，于３７℃，５％ ＣＯ２培养箱中孵
育３６ｈ。弃去培养液，先用００１ｍｏｌ·Ｌ－１ＰＢＳ洗涤
１次，再用 ｐＨ６０的培养基３７℃孵育２０ｍｉｎ。重
复上述过程１次，最后用００１ｍｏｌ·Ｌ－１ＰＢＳ洗涤
后，换上无血清的培养基。孵育２４ｈ后，用葡萄糖
临床试剂盒检测培养基的葡萄糖含量。以不铺细胞
的空白孔为空白对照，计算２４ｈ各组细胞的葡萄糖
消耗量。采用此方法通过优化胰岛素浓度和胰岛素
作用时间建立适宜的高浓度胰岛素诱发的 ＨｅｐＧ２
细胞胰岛素抵抗模型。
在以高胰岛素诱发 ＨｅｐＧ２细胞建立的胰岛素
抵抗模型后，分别设空白组、胰岛素抵抗模型组、罗
格列酮组（终剂量为３４ｍｇ·Ｌ－１），ＲＯＳ处理组（终
剂量分别为 ０１，１０，３０，１０，３０，１００ｍｇ·Ｌ－１）。
上述各组均包括加胰岛素（１０ｎｍｏｌ·Ｌ－１）处理组和
不加胰岛素处理组。在药物处理２４ｈ后检测培养
基中葡萄糖含量。以不铺细胞的空白孔为空白对
照，计算２４ｈ各组细胞的葡萄糖消耗量。
２．５ 统计方法
测定的数据经ＳＰＳＳ１１０统计软件系统进行统
计学分析，以珋ｘ±ｓ表示，组间差异的显著性采用ｔ检
验方法进行。
３ 结果
３．１ 地黄寡糖对ＨｅｐＧ２细胞葡萄糖消耗的影响
如表１所示，与空白组相比，在中剂量（１１１
ｍｍｏｌ·Ｌ－１）葡萄糖且不含胰岛素的条件下，地黄寡
糖各质量浓度都能够促进 ＨｅｐＧ２细胞的葡萄糖消
耗，在０１～３０ｍｇ·Ｌ－１，尤以１０ｍｇ·Ｌ－１的效果最
好，可使细胞的葡萄糖消耗量增加 ７１６４％（Ｐ＜
００１），而罗格列酮也能使细胞的葡萄糖消耗量增
加３６４６％（Ｐ＜００５）；在培养基中加入胰岛素后，
地黄寡糖各质量浓度仍能增加 ＨｅｐＧ２细胞的葡萄
糖消耗，并且在地黄寡糖各质量浓度中，１０ｍｇ·Ｌ－１
的作用效果最佳，可使培养基中的葡萄糖消耗量增
加６１６５％（Ｐ＜００１），而罗格列酮使 ＨｅｐＧ２细胞
的葡萄糖消耗量增加４３０６％（Ｐ＜００１）。
３．２ 地黄寡糖对不同葡萄糖浓度培养基中葡萄糖
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Ｊｕｌｙ，２００７
表１ 地黄寡糖对ＨｅｐＧ２细胞葡萄糖消耗的影响
（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６）
组别
剂量
／ｍｇ·Ｌ－１
葡萄糖消耗／ｍｍｏｌ·Ｌ－１
不含胰岛素 含胰岛素
空白 － １４６７±００２９ １６３０±００２９
罗格列酮 ３４ ２００６±００１５１） ２３３２±０１０６２）
ＲＯＳ ０１ １８６４±００１４１） ２２０７±００３８１）
０３ １９０１±００５８１） ２２７４±００１２２）
１ １９２０±００１６１） ２２８１±００１５２）
３ １９８９±００２８１） ２３０９±００２８２）
１０ ２５１８±０００４２） ２６３５±０００７２）
３０ ２４２１±００２５２） ２４８８±００１３２）
注：与空白组比较１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１（表２同）
消耗的影响
如表２所示，高糖本身就可以上调 ＨｅｐＧ２葡萄
糖消耗量，当培养基中的葡萄糖浓度从５５ｍｍｏｌ·
Ｌ－１上升到２２２ｍｍｏｌ·Ｌ－１时，ＨｅｐＧ２细胞本身的
葡萄糖消耗量增加了２１倍。与空白组相比，在葡
萄糖浓度为５５～２２２ｍｍｏｌ·Ｌ－１，地黄寡糖均能
够促进ＨｅｐＧ２细胞的葡萄糖消耗（Ｐ＜００５）。罗
格列酮虽然也能够促进ＨｅｐＧ２对葡萄糖的消耗，但
未见统计学差异。
表２ 地黄寡糖对不同浓度葡萄糖培养基
中葡萄糖消耗的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６）
组别
剂量
／ｍｇ·Ｌ－１
葡萄糖
／ｍｍｏｌ·Ｌ－１
葡萄糖消耗
／ｍｍｏｌ·Ｌ－１
空白 － ５５ ２０８０±００３３
１１１ ２５９０±００９７
１６７ ２８６１±００４５
２２２ ４３５８±００９０
罗格列酮 ３４ ５５ ２３８５±００２１
１１１ ２７１０±００７２
１６７ ３１５９±００４６
２２２ ４９３９±００６６
ＲＯＳ １０ ５５ ２４２２±００２３２）
１１１ ２９５２±００３２１）
１６７ ３８６１±００５３１）
２２２ ５２１２±００１５１）
３．３ 地黄寡糖对ＨｅｐＧ２细胞增殖的影响
如表３所示，与空白组相比，在不含胰岛素时，
低剂量的地黄寡糖（０１～３ｍｇ·Ｌ－１）可抑制
ＨｅｐＧ２细胞的增殖，且０１ｍｇ·Ｌ－１时抑制效果最
好（Ｐ＜００１），高剂量地黄寡糖（１０～３０ｍｇ·Ｌ－１）
则促进ＨｅｐＧ２细胞的增殖（Ｐ＜０００１）；而在含胰
岛素时，高剂量地黄寡糖仍能够促进 ＨｅｐＧ２增殖
（Ｐ＜０００１）。罗格列酮在不含胰岛素时抑制
ＨｅｐＧ２细胞增殖，而在含胰岛素时促进ＨｅｐＧ２细胞
增殖，但未见统计学差异。
表３ 地黄寡糖对ＨｅｐＧ２细胞增殖（Ａ５７０）的影响
（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６）
组别
剂量
／ｍｇ·Ｌ－１
Ａ５７０
不含胰岛素 含胰岛素
空白 － １８５５±００７０ １７７１±００２６
罗格列酮 ３４ １７９９±００２６ １８１４±００２５
ＲＯＳ ０１ １６４５±００４０２） １７３８±００７８
０３ １７０５±００６２１） １７６１±００４７
１ １７９８±００２５ １７６５±００５３
３ １８１５±００６０ １８１８±００３９
１０ ２１６５±００３８３） ２１５９±００６７３）
３０ ３０２１±００９７３） ２７８４±００４４３）
注：与空白组比较１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１，３）Ｐ＜０００１
３．４ 不同浓度胰岛素和胰岛素作用时间对 ＨｅｐＧ２
细胞胰岛素抵抗的影响
如表 ４显示，与空白组比较，胰岛素浓度由
１０－８ｍｏｌ·Ｌ－１增加到１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１时，胰岛素组对
葡萄糖的摄取逐渐减少，１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１时达到最小
（Ｐ＜０００１），且使培养基中的葡萄糖消耗量降低
２０２２％。而如表５所示，在１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１的胰岛
素作用不同时间内，随着胰岛素作用时间的延长，胰
岛素组对葡萄糖的摄取均比空白组低，在３６，４８，６０
ｈ时间点，使胰岛素组的葡萄糖消耗量分别降低
１３１６％，１７０７％，３０５３％，并且在 ６０ｈ时两者葡
萄糖消耗差别最大，统计学处理差异均具有显著性
（Ｐ＜０００１）。
表４ 不同浓度胰岛素对ＨｅｐＧ２细胞胰岛素抵抗的影响
（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６）
组别 胰岛素浓度／ｍｏｌ·Ｌ－１ 葡萄糖消耗／ｍｍｏｌ·Ｌ－１
空白 ０ ３３８８±０００６
胰岛素 １０－５ ２９２８±００３２１）
１０－６ ２７０３±０００４２）
１０－７ ２８５９±００１３２）
１０－８ ３１６１±００１４１）
注：与空白组比较１）Ｐ＜００１，２）Ｐ＜０００１
３．５ 地黄寡糖对胰岛素抵抗ＨｅｐＧ２细胞模型葡萄
糖消耗的影响
如表６所示，经过高胰岛素作用后，模型组对胰
岛素的敏感性降低，对葡萄糖摄取减少，使葡萄糖消
耗量降低３５８５％，说明造模成功（与空白组比较，
Ｐ＜０００１）。加药处理２４ｈ后，与模型组相比，在中
（１１１ｍｍｏｌ·Ｌ－１）葡萄糖且不含胰岛素的条件下，
地黄寡糖各剂量（０１～１００ｍｇ·Ｌ－１）均能促进胰岛
素抵抗ＨｅｐＧ２细胞模型的葡萄糖消耗，并且在１０ｍｇ
·Ｌ－１时使培养基中的葡萄糖消耗量增加５１３４％
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第３２卷第１３期
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表５ 胰岛素作用时间对ＨｅｐＧ２细胞胰岛素抵抗的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６）
组别
葡萄糖消耗／ｍｍｏｌ·Ｌ－１
２４ｈ ３６ｈ ４８ｈ ６０ｈ
空白 ４４３６±００５９ ４３５３±００３０ ４１７２±００４７ ３９２１±００１０
胰岛素 ３８６０±００４０１） ３７８０±００１４２） ３４６０±００２７２） ２７２４±００２９２）
注：与空白组比较１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜０００１
（Ｐ＜０００１）。此外，罗格列酮也能促进胰岛素抵
抗ＨｅｐＧ２细胞的葡萄糖消耗，但统计学处理差异无
显著性；在培养基中加入胰岛素后，地黄寡糖各浓度
组均能促进胰岛素抵抗 ＨｅｐＧ２细胞模型的葡萄糖
消耗，以１０ｍｇ·Ｌ－１的效果最好，可使胰岛素抵抗
细胞的葡萄糖消耗量增加２９０４％（Ｐ＜０００１）。罗
格列酮也能使培养基中的葡萄糖消耗量增加
１０１５％（Ｐ＜００１）。
表６ 地黄寡糖对ＨｅｐＧ２细胞胰岛素抵抗模型
葡萄糖消耗的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６）
组别
剂量
／ｍｇ·Ｌ－１
葡萄糖消耗／ｍｍｏｌ·Ｌ－１
不含胰岛素 含胰岛素
空白 － ３５４０±００４４ ４０１１±０００６
模型 － ２２７１±００１０１） ３０５４±００２４１）
罗格列酮 ３４ ２９０５±００８９ ３３６４±０００６３）
ＲＯＳ ０１ ３０１５±００４１２） ３３３０±００１６２）
１ ３０６４±００４１３） ３３４６±００２６２）
３ ３１６７±００１２４） ３３９２±００１２３）
１０ ３４３７±００５４４） ３９４１±００１６４）
３０ ３１８２±００２６４） ３７４０±００３３３）
１００ ３１１０±００４９３） ３２６９±００１４２）
注：与空白组比较１）Ｐ＜０００１；与模型组比较２）Ｐ＜００５，３）Ｐ＜
００１，４）Ｐ＜０００１
４ 讨论
胰岛素抵抗是多种代谢相关疾病的共同病理生
理基础及共有的危险因素，已成为２型糖尿病发病
的中心环节，因此可从防治ＩＲ及其糖脂代谢紊乱入
手从中药中寻找优良的治疗糖尿病新药。本实验选
用人源肝癌细胞———ＨｅｐＧ２细胞株，研究地黄寡糖
对胰岛素抵抗ＨｅｐＧ２细胞的药理作用。
ＨｅｐＧ２细胞表面的胰岛素受体数目受胰岛素
水平和作用时间的调节，当胰岛素受体数目下调至
一定程度时，则该细胞对胰岛素的作用产生抗性。
本实验结果表明，不同浓度胰岛素诱发 ＨｅｐＧ２细胞
胰岛素抵抗模型时，以１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１时诱发的胰岛
素抵抗模型效果最佳；同时对胰岛素作用时间的研
究发现，胰岛素（１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１）作用 ３６，４８，６０ｈ
后，ＨｅｐＧ２细胞对葡萄糖的摄取逐渐减少，但在胰
岛素作用３６ｈ后细胞活力开始下降，死亡增多。因
此，综合以上情况确定高胰岛素诱发 ＨｅｐＧ２细胞胰
岛素抵抗模型的最佳方案为用１０－６ｍｏｌ·Ｌ－１的胰
岛素作用ＨｅｐＧ２细胞３６ｈ，此时ＨｅｐＧ２细胞对葡萄
糖的利用减少，即发生葡萄糖摄取和利用的障碍，说
明胰岛素抵抗模型建立成功。作者在上述条件下研
究了地黄寡糖对胰岛素抵抗 ＨｅｐＧ２细胞模型的影
响，结果表明地黄寡糖能显著促进高胰岛素诱发的
胰岛素抵抗ＨｅｐＧ２细胞模型的葡萄糖消耗，使胰岛
素抵抗细胞的葡萄糖消耗量明显增加。说明地黄寡
糖能够改善ＨｅｐＧ２的胰岛素抵抗状态，增强 ＨｅｐＧ２
细胞对葡萄糖的摄取和利用。
实验结果还表明，无论胰岛素存在与否，地黄寡
糖均能够显著地促进ＨｅｐＧ２细胞的葡萄糖消耗，罗
格列酮在胰岛素的存在下才能明显地增强 ＨｅｐＧ２
细胞葡萄糖消耗。在５５～２２２ｍｍｏｌ·Ｌ－１葡萄糖
范围内地黄寡糖均能够促进 ＨｅｐＧ２细胞的葡萄糖
消耗，尤以５５ｍｍｏｌ·Ｌ－１葡萄糖浓度下最为明显，
而罗格列酮在４个葡萄糖浓度范围内对 ＨｅｐＧ２细
胞的葡萄糖消耗影响并不显著。另外，无论胰岛素
存在与否，高剂量地黄寡糖均可促进 ＨｅｐＧ２细胞增
殖，而低剂量地黄寡糖仅在不含胰岛素时抑制
ＨｅｐＧ２细胞的增殖；罗格列酮仅在胰岛素存在下促
进ＨｅｐＧ２细胞的增殖。这种现象有待进一步研究。
综合以上结果，作者认为无论胰岛素存在与否，
地黄寡糖均显著促进正常 ＨｅｐＧ２细胞和胰岛素抵
抗ＨｅｐＧ２细胞模型的葡萄糖消耗，改善ＨｅｐＧ２细胞
的胰岛素抵抗，且不同剂量地黄寡糖对 ＨｅｐＧ２的增
殖具有不同的效果，而罗格列酮仅在胰岛素的存在
下明显促进正常 ＨｅｐＧ２细胞和胰岛素抵抗 ＨｅｐＧ２
细胞的葡萄糖消耗，并促进 ＨｅｐＧ２的增殖，说明地
黄寡糖的作用与罗格列酮类似，但有一定的区别。
作者推测，低剂量地黄寡糖可增强细胞对胰岛素的
敏感性，促进胰岛素抵抗 ＨｅｐＧ２细胞的葡萄糖消
耗，与罗格列酮作用类似；而高剂量地黄寡糖促进胰
岛素抵抗ＨｅｐＧ２细胞葡萄糖消耗可能是促进细胞
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第３２卷第１３期
２００７年７月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ １３
Ｊｕｌｙ，２００７
增殖，使细胞免受损伤，通过提高细胞数目而实现，
但这有待进一步的实验证明。地黄寡糖改善ＨｅｐＧ２
细胞胰岛素抵抗的作用机制的研究将作为下一步的
重点研究内容。
［参考文献］
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ＥｆｅｃｔｓｏｆＲｅｈｍａｎｎｉａｇｌｕｔｉｎｏｓａｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｏｎ
ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＨｅｐＧ２ａｎｄｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ
ＧＵＯＬｉｍｉｎ１，２，ＺＨＡＮＧＲｕｘｕｅ２，ＪＩＡＺｈｅｎｇｐｉｎｇ２，ＬＩＭａｏｘｉｎｇ２，ＷＡＮＧＪｕａｎ２，ＹＩＮＱｉａｎｇ２
（１．ＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＬａｎｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００００，Ｃｈｉｎａ；
２．ＣｌｉｎｉｃａｌＰｈａｒｍａｃｙＫｅｙＤｉｓｃｉｐｌｉｎｅｏｆＳｔａｔｅＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅ
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ＬａｎｚｈｏｕＧｅｎｅｒａｌＨｏｓｐｉｔａｌ，ＬａｎｚｈｏｕＣｏｍｍａｎｄ，ＰＬＡ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００５０，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆＲｅｈｍａｎｎｉａｇｌｕｔｉｎｏｓａｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ（ＲＯＳ）ｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＨｅｐＧ２
ａｎｄｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅＨｅｐＧ２ｃｅｌｓｗｅｒｅｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ｒｏｓｉｇｌｉｔａｚｏｎｅ（３４ｍｇ·Ｌ－１）ｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐａｎｄ
ＲＯＳ（０１～３０ｍｇ·Ｌ－１）ｔｒｅａｔｅｄｇｒｏｕｐ．ＴｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＨｅｐＧ２ｗａｓｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙＭＴＴｍｅｔｈｏｄ．ＩｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｔＨｅｐＧ２ｃｅｌｓｍｏｄ
ｅｌｗａｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｈｉｇｈｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｉｎｓｕｌｉｎ，ｔｈｅｎｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆＲＯＳｏｎｇｌｕｃｏｓｅｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎｉｎｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｔＨｅｐＧ２ｃｅｌｓｗｅｒｅ
ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｉｎｔｈｅｍｉｄｄｌｅｇｌｕｃｏｓｅｃｕｌｔｕｒｅｍｅｄｉｕｍ，ｔｈｅａｂｓｏｒｂａｎｃｅａｔ５７０ｎｍｏｆＨｅｐＧ２ｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｙｈｉｇｈｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ｏｆＲＯＳ，ａｎｄｄｅｃｒｅａｓｅｄｂｙｌｏｗｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＲＯＳｂｙｕｓｉｎｇＭＴＴｍｅｔｈｏｄ，ａｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅｒ．ＲＯＳｉｎｃｒｅａｓｅｄｇｌｕｃｏｓｅ
ｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎｉｎＨｅｐＧ２ｃｅｌｓ，ａｎｄｓｈｏｗｅｄａｂｅｔｅｒｅｆｅｃｔａｔｔｈｅｄｏｓｅｏｆ１０ｍｇ·Ｌ－１．ＲＯＳｐｒｏｍｏｔｅｄｔｈｅｇｌｕｃｏｓｅｃｏｎｓｕｍｐｔｉｏｎｉｎｉｎｓｕｌｉｎ
ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆＨｅｐＧ２ｃｅｌｓ，ｉｍｐｒｏｖｅｄｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆＨｅｐＧ２ｃｅｌｓｔｏｉｎｓｕｌｉｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｈｉｇｈｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆ
ＲＯＳｃａｎｐｒｏｍｏｔｅｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＨｅｐＧ２，ａｎｄｈｏｗｅｖｅｒｌｏｗｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＲＯＳｉｎｈｉｂｉｔｓｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＨｅｐＧ２ＲＯＳｃａｎｓｉｇ
ｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｍｐｒｏｖｅｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｏｆＨｅｐＧ２ｃｅｌｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｈｉｇｈｉｎｓｕｌｉｎ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｒｅｈｍａｎｎｉａｇｌｕｔｉｎｏｓａｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ＨｅｐＧ２ｃｅｌ；ｃｅｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；ｉｎｓｕｌｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ
［责任编辑 古云侠］
·２３３１·
第３２卷第１３期
２００７年７月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３２，Ｉｓｓｕｅ １３
Ｊｕｌｙ，２００７