全 文 ：４ 讨论
鸡内金具有健胃消食，涩精止遗的功效。生鸡
内金长于攻积，通淋化石。炒鸡内金质地酥脆，便于
粉碎，并能增强健脾消积的作用，用于消化不良，食
积不化，脾虚泄泻，小儿疳积。鸡内金为临床常用的
健胃消食化积中药，多用于治疗小儿厌食、消化不良
等，姜春侠等［９］给患儿连续２周服用小儿复方鸡内
金散治疗厌食证效果明显。基于临床处方规定，一
般情况下每张处方剂量为３剂，对于慢性疾病不得
超过７日用量，而厌食或消化不良常为慢性疾病，因
此本研究中给大鼠连续用药７ｄ后检测相应指标。
实验结果表明，鸡内金的不同炮制品对大鼠的
胃液量与胃蛋白酶活性都有一定影响，使各指标上
升，结果与鸡内金具有消食化积的传统功效相一致。
本研究旨在了解鸡内金不同炮制品对大鼠胃液
及胃蛋白酶的影响，得出新炮制方法是否可以进一
步推广使用。结果可知，新法对胃液的影响主要在
增加游离酸浓度方面，而且影响非常显著，同时新法
生品与新法炒品具有同样的效果；在对胃蛋白酶活
性及胃蛋白酶排出量的影响方面，新法炒品与药典
炒品不存在明显差异。
新法生品与新法炒品显著增加胃游离酸度的机
制，考虑是否因为鸡内金碱水洗净后没有漂洗干净，表
面残存有碱，导致大鼠服用含碱的药液后反馈性的引
起游离酸分泌增加，但在药物的制备过程中，对碱洗后
的鸡内金用大量清水进行了反复漂洗，不至于引起表
面残留碱液；是否碱液渗入了鸡内金内部，或者与大鼠
服药后其他机体因素相关，还有待进一步探讨。
［参考文献］
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临床疗效观察［Ｊ］．井冈山医专学报，２００６，１３（５）：３０．
［责任编辑 古云侠］
［收稿日期］ ２００８０３２１
［通 讯 作 者］ 张 振 秋，Ｔｅｌ：（０４１１）８７５８６０５８，Ｅｍａｉｌ：
ｚｈａｎｇｚｈｅｎｑｉｕ＠ｓｉｎａ
黄连提取物中盐酸小檗碱在大鼠体内的药动学研究
王 静１，袁子民１，张 朔１，张振秋１，李可强２
（１．辽宁中医药大学 药学院，辽宁 大连 １１６６００；２．辽宁省中药研究所，辽宁 沈阳 １１０１６１）
黄连是临床常用的清热解毒类药物之一，其性
味苦寒，入心、肝、脾、胃、大肠诸经，具有较强的清
热，燥湿，泻火，解毒的功效。黄连的主要成分盐酸
小檗碱药动学研究大多采用兔子，这与人的药动学
有一定的差异，而且很少采用内标法，试验结果缺乏
准确性，其方法采用液相质谱联用技术较多，但不具
有应用广泛性。本研究以大鼠为药动学研究对象，
以盐酸两面针碱为内标，对血浆样品采用浓缩富集
的办法，建立高效液相色谱法研究黄连药材提取物
中盐酸小檗碱的药动学，为其药动学研究提供补充。
１ 材料
１．１ 动物
ＳＤ大鼠雌、雄兼用，体重２５０～３００ｇ，购自大连
医科大学实验动物中心，合格证号 ＳＣＸＫ（辽）２００４
００１７。
１．２ 药物
盐酸小檗碱对照品（纯度 ＞９８５％，批号
１１０７１３２００２０８），氯化两面针碱对照品（批号 ８４８
９００１），均购自中国药品生物制品检定所。黄连购
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第３３卷第１９期
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中 国 中 药 杂 志
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自河北安国，经辽宁中医药大学中药鉴定教研室李
锋教授鉴定为毛茛科植物黄连 Ｃｏｐｔｉｓｃｈｉｎｅｎｓｉｓ
Ｆｒａｎｃｈ的干燥根茎。
１．３ 试剂
甲醇、乙腈为色谱纯，购自天津科密欧有限公
司。磷酸二氢钾为分析纯，购自沈阳化学试剂一厂。
１．４ 仪器
ＬＣ－１０ＡＴｖｐ输液泵，ＳＰＤ－１０Ａｖｐ紫外检测器
（日本岛津公司），ＴＧＬ－１６Ｇ型离心机（上海安亭仪
器厂），ＸＷ－８０Ａ涡旋混合器（上海沪西仪器厂）。
２ 血浆样品中盐酸小檗碱的含量测定
２．１ 色谱条件
色谱柱：ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８（４６ｍｍ×１５０ｍｍ，５
μｍ），流动相乙腈甲醇００５ｍｏｌ·Ｌ－１磷酸二氢钾
溶液（２０∶１０∶７０），流速 １０ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长
３４５ｎｍ，柱温３５℃。
２．２ 溶液配制
２．２．１ 对照品溶液 精密称取盐酸小檗碱适量，用
甲醇溶解制成８８ｍｇ·Ｌ－１的储备液。分别精密量
取储备液适量，用甲醇逐级稀释成０００８８，００２２，
００４４，００８８，０１７６ｍｇ·Ｌ－１的盐酸小檗碱系列对
照品溶液，置４℃冰箱中保存。
２．２．２ 内标溶液 精密称取氯化两面针碱适量，用
甲醇溶解制成２４０ｍｇ·Ｌ－１的储备液。取 ０３ｍＬ
内标储备液至５０ｍＬ量瓶中，用甲醇定容至刻度，制
成１４７ｍｇ·Ｌ－１的内标溶液，置４℃冰箱中保存。
２．３ 血浆样品的处理
取血浆样品２００μＬ，置５０ｍＬ离心管中，加入
内标溶液５０μＬ，加入１ｍｏｌ·Ｌ－１磷酸二氢钾１００
μＬ，甲醇２０ｍＬ，涡旋２ｍｉｎ，离心５ｍｉｎ（１万 ｒ·
ｍｉｎ－１），取上清液，４０℃空气流下吹干，用５０μＬ甲
醇溶解，取２０μＬ进样。
２．４ 方法专属性
大鼠空白血浆、空白血浆加对照品及内标、灌胃
后血浆样品加内标的色谱图见图１。结果表明，盐
酸小檗碱与内标色谱峰分离良好，不受内源性物质
的干扰。
２．５ 线性范围
Ａ．空白血浆；Ｂ．空白血浆＋内标（盐酸两面针碱）＋盐酸小檗碱；Ｃ．大鼠灌胃黄连提取物后１ｈ的血浆；１．盐酸小檗碱；２．氯化两面针碱
图１ 大鼠血浆中盐酸小檗碱和内标的高效液相色谱图
精密吸取内标溶液５０μＬ与系列对照品溶液
１００μＬ，置 ５０ｍＬ离心管中，加入大鼠空白血浆
２００μＬ，配制成相当于大鼠血浆药物浓度０００４４，
００１１，００２２，００４４，００８８ｍｇ·Ｌ－１。按 ２．３项下
操作，进行测定，建立标准曲线。以血浆中盐酸小檗
碱的浓度（Ｘ）为横坐标，盐酸小檗碱与内标峰面积
比（Ｙ）为纵坐标，用加权（１·Ｃ－２）最小二乘法进行
回归计算，求直线回归方程 Ｙ＝８５６００Ｘ＋
００４４１２，ｒ＝０９９０１。表明血浆中盐酸小檗碱在
０００４４～００８８ｍｇ·Ｌ－１内线性关系良好，定量限
为０００２ｍｇ·Ｌ－１。
２．６ 提取回收率
取大鼠空白血浆２００μＬ，按２．５项下方法制备
含盐酸小檗碱分别为 ０００４４，００２２，００８８ｍｇ·
Ｌ－１的对照品血浆，每一浓度进行６样本分析，另取
空白血浆２００μＬ，按２．３项下操作，取上清液，分别
加入相应浓度的对照品溶液１００μＬ（各浓度平行操
作３个样品），于４０℃空气流下水浴下吹干，残留物
溶于５０μＬ甲醇，涡流１ｍｉｎ，离心后吸取２０μＬ进
行ＨＰＬＣ分析，获得相应峰面积值（３次测定的平均
值）。以每一种浓度２种处理方法得峰面积比值计
算提取回收率，经测定，本法在低、中、高３个浓度的
提取回收率分别为 （９４１±３８）％，（９５５±
１７）％，（９３２±２１）％。同法考察内标回收率为
（９０２±３４）％。
２．７ 精密度与准确度
制备含盐酸小檗碱分别为 ０００４４，００２２，
００８８ｍｇ·Ｌ－１的对照品血浆，６样本，连续测定 ３
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ｄ，随行标准曲线，测定浓度，并与配制浓度对照，求
得血浆样品测定方法的精密度与准确度。日内精密
度分别为７４％，６１％，５０％，日间精密度分别为
５７％，５０％，４５％，准 确 度 分 别 为 ９３８％，
１０７７％，９９１％。
２．８ 稳定性
按２．５项下方法制备含盐酸小檗碱分别为
０００４４，００２２，００８８ｍｇ·Ｌ－１的对照品血浆各 ６
样本，然后置于室温保存（约 ２０℃）１ｄ后重新测
定，将２次测得结果对照，计算 ＲＥ。低、中、高３种
浓度的ＲＥ值分别为 －６２％，７７％，－８９％，试验
结果表明，对照品血浆经处理后于室温保存１ｄ，盐
酸小檗碱的浓度仍可被准确测定。
３ 盐酸小檗碱在大鼠体内的药动学研究
３．１ 黄连提取物的制备
取黄连药材，加入１０倍药材量的６５％乙醇溶
液，回流提取１５ｈ，提取３次，合并提取液，置水浴
锅浓缩至浸膏，干燥，备用。
３．２ 样本采集与处理
取健康雌、雄大鼠各３只，实验前禁食２４ｈ，自
由饮水，取空白血０５ｍＬ后，按１５３３４ｇ（黄连生
药材）·ｋｇ－１大鼠体重灌胃给予３．１项下制备的黄
连提取物，于０２５，０５，０７５，１，２，３，４，６，８，１２，２４ｈ
眼眶取血０５ｍＬ，置于预先肝素化的离心管中，离
心５ｍｉｎ（１万ｒ·ｍｉｎ－１），得血浆。精密吸取血浆样
品２００μＬ及内标溶液５０μＬ，自“加入１ｍｏｌ·Ｌ－１
磷酸二氢钾１００μＬ”起，按２．３项下方法操作，进行
分析。
３．３ 血药浓度时间曲线及药动学参数
盐酸小檗碱的平均药时曲线见图２，其中最大
血浆浓度及达峰时间用实测值表示，数据用 ＤＡＳ
２０软件处理，主要药动学参数见表１。
图２ 大鼠灌胃黄连提取物后盐酸小檗碱的
平均药时曲线
４ 讨论
曾用不同方法提取血浆样品，提取回收率均不
满意。用乙醚进行液液萃取，血浆中内源性物质没
表１ 大鼠灌胃黄连提取物后盐酸小檗碱的药动学参数
（珋ｘ±ｓ，ｎ＝６）
参数 盐酸小檗碱
ｔ１／２Ｋａ／ｈ ０２１５２±０２２１１
Ｋｅ／１·ｈ－１ ０１３４±００５５８３
ＡＵＣ０→∞ ／ｍｇ·Ｌ
－１·ｈ－１ ０２０４４±００５０４３
ＡＵＣ０→ｔ／ｍｇ·Ｌ
－１·ｈ－１ ０１７７６±００２７８３
Ｔｍａｘ／ｈ １３５±０９２８７
Ｃｍａｘ／ｍｇ·Ｌ－１ ００２６±０００８６３１
有干扰，但是提取回收率很低。最后确定用磷酸二
氢钾碱化血浆样品，用甲醇沉淀蛋白，同时用甲醇提
取盐酸小檗碱，因为预实验发现，盐酸小檗碱在甲醇
中溶解性最好，这种提取方法不但提取回收率高，而
且血浆中内源性物质没有干扰。有资料报道［１２］，液
相质谱联用采用四氢小檗碱、巴马亭、氯苄律定作
内标，但是均用以盐酸小檗碱单体的药动学研究，本
试验研究黄连药材中盐酸小檗碱的药动学研究，黄
连药材本身含有大量与盐酸小檗碱结构相似的生物
碱，经实验，选择氯化两面针碱为内标，其结构与盐
酸小檗碱相似，而且血浆中内源性物质无干扰，提取
回收率满足要求，稳定、重现性好，二者完全分离，且
保留时间适中。采用 Ｃ１８色谱柱，对甲醇水，乙腈
水，甲醇乙腈水按不同比例流动相进行考察［３４］，
结果发现乙腈甲醇００５ｍｏｌ·Ｌ－１磷酸二氢钾
（２０∶１０∶７０）时，黄连提取物和血浆样品中，盐酸小
檗碱达到基线分离，出峰时间适中，血中内源性物质
无干扰。血浆样品中盐酸小檗碱的最大浓度较低，
吸收快，消除较慢，与盐酸小檗碱单体的药动学研究
结果相似，可能黄连药材中其他成分对其影响不大，
其机制有待进一步研究。
［参考文献］
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ｂｅｒｂｅｒｉｎｅｉｎｈｕｍａｎｐｌａｓｍａｂｙＬＣＥＩＭＳ［Ｊ］．ＪＰｈａｒｍＢｉｏｍｅｄ
Ａｎａｌ，２００７，４４（４）：９３１．
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ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ
ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓｔｕｄｙｏｆｗｏｇｏｎｏｓｉｄｅｉｎｒａｔｓｅｒｕｍ ａｆｔｅｒｏｒａｌ
ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅ ｍｅｄｉｃｉｎａｌｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ
ＨｕａｎｇＬｉａｎＪｉｅＤｕｄｅｃｏｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＢｉｏｍｅｄＣｈｒｏｍａｔｏｇｒ，２００６，２０
（１０）：１０９８．
［３］ 钟大放．以加权最小二乘法建立生物分析标准曲线的若干问
题［Ｊ］．药物分析杂志，１９９６，１６（５）：３４３．
［４］ 刘 李，邓远雄，张冬梅，等．小檗碱对黄芩苷在大鼠中药代动
力学的影响［Ｊ］．中国天然药物杂志，２００７，５（２）：１３７．
［责任编辑 古云侠］
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