全 文 ：丹参酮ⅡＡ抑制大鼠血管平滑肌细胞
增殖及其机制研究
李 欣１，２，杜俊蓉２，白 波２，余 彦２，郑晓媛２，杨 芳２，郑 虎２
（１天津医科大学 基础医学院，天津 ３０００７０；
２四川大学 华西药学院，四川 成都 ６１００４１）
［摘要］ 目的：观察丹参酮ⅡＡ（ｔａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡ，ＴＡ）对１０％胎牛血清诱导的大鼠血管平滑肌细胞（ＲＶＳＭＣ）增
殖的抑制作用，并探讨其可能的作用机制。方法：体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞 Ａ７ｒ５细胞株，以终浓度为１０％
的胎牛血清（ＦＢＳ）作为刺激因素，用细胞计数法、噻唑蓝（ＭＴＴ）比色法和５溴脱氧尿嘧啶（ＢｒｄＵ）掺入法测定ＴＡ对
细胞增殖的影响，用流式细胞术（ＦＣＭ）分析细胞周期分布特征，用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ实验测定细胞外信号调节激酶１／２
（ＥＲＫ１／２）磷酸化活性，用ＲＴＰＣＲ测定ｃｆｏｓ的表达水平。结果：细胞计数、ＭＴＴ比色法和ＢｒｄＵ掺入实验表明丹参
酮ⅡＡ能抑制１０％ＦＢＳ所诱导的ＶＳＭＣ增殖，作用强度呈剂量依赖性；细胞周期分析显示，ＴＡ处理组Ｇ０／Ｇ１期细胞
百分比高于１０％ＦＢＳ组，而Ｓ期比例低于１０％ＦＢＳ组，表明ＴＡ可阻止１０％ＦＢＳ所诱导的细胞周期由Ｇ０／Ｇ１期向Ｓ
期推进；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示与１０％ＦＢＳ组相比，ＴＡ处理组ＥＲＫ１／２磷酸化活性降低；ＲＴＰＣＲ结果显示 ＴＡ处理
组ｃｆｏｓ表达水平降低。结论：丹参酮可抑制１０％ＦＢＳ诱导的体外培养大鼠动脉平滑肌细胞增殖，此作用可能与其
阻止细胞周期由Ｇ０／Ｇ１期向Ｓ期推进，抑制ＭＡＰＫ信号转导通路激活，进而下调ｃｆｏｓ表达有关。
［关键词］ 丹参酮ⅡＡ；平滑肌细胞；细胞周期；丝裂素活化蛋白激酶；ｃｆｏｓ
［中图分类号］Ｒ２８５５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）１７２１４６０５
［收稿日期］ ２００７１１１０
［通讯作者］ 杜俊蓉，Ｔｅｌ：（０２８）８５５０３９３８，Ｆａｘ：（０２８）８５５０３９
３８，Ｅｍａｉｌ：ｄｕｊｒ＿１＠１６３ｃｏｍ
血管平滑肌细胞（ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌ，
ＶＳＭＣ）的增殖和迁移是冠脉介入治疗后再狭窄等
血管增殖性疾病主要发病机制之一［１２］，抑制 ＶＳＭＣ
增殖可能是治疗这些疾病的有效途径之一。丹参酮
ⅡＡ（ｔａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡ，ＴＡ）是从丹参中提取出来的脂
溶性有效成分之一，可改善心肌缺血区冠脉血流
量［３４］，抑制血小板聚集［５］，保护血管内皮细胞［６］
等，对心血管系统具有较明显的保护作用。本课题
组以前研究发现，丹参酮ⅡＡ对以生长因子为始因的
人动脉平滑肌细胞增殖具有抑制作用，且此种抑制
作用呈剂量依赖性［７］。本实验在此研究基础上，利
用体外培养大鼠血管平滑肌细胞（ｒａｔｖａｓｃｕｌａｒ
ｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌ，ＲＶＳＭＣ），观察丹参酮ⅡＡ单体成
分对胎牛血清刺激的 ＲＶＳＭＣ增殖的抑制作用，并
对其作用机制进行探讨。
１ 材料与方法
１１ 药物与试剂 丹参酮ⅡＡ对照品（中国药品生
物制品检定所）；ＤＭＥＭ培养基（高糖型），胎牛血清
（美国 ＧＩＢＣＯ公司）；噻唑蓝（ＭＴＴ，美国 Ｓｉｇｍａ公
司）；ＢｒｄＵ及抗体（武汉博士德生物技术公司）；磷
酸化 ＥＲＫ１／２一抗、二抗（ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司）；ＴＲＩｚｏｌ
（美国 Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司）；ｃｆｏｓ以及 ＧＡＰＤＨ引物由
Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司合成；ＲＴＰＣＲ试剂盒（成都博瑞克公
司）；其余试剂皆为市售分析纯。
１２ 细胞培养 Ａ７ｒ５大鼠主动脉平滑肌细胞株，
购自美国模式菌种收集中心（ａｍｅｒｉｃａｔｙｐｅｃｕｌｔｕｒｅ
ｃｏｌｅｃｔｉｏｎ，ＡＴＣＣ）。将 Ａ７ｒ５细胞置于 ３７℃，５％
ＣＯ２培养箱中培养，培养液为 １０％ＦＢＳＤＭＥＭ，３ｄ
换液，４～５ｄ用０２５％胰蛋白酶消化传代。传至第
８～１０代的细胞用于实验。
１３ 细胞计数 取对数生长期的细胞以 ５×１０３
个／ｍＬ均匀接种于２４孔板中 ＢＦＱ，每孔１ｍＬ。培
养２４ｈ后，然后随机分为对照组、ＤＭＳＯ对照组，ＴＡ
０１，０２５，０５，１ｍｇ·Ｌ－１组，每组设５个复孔。继
续培养２４，４８，７２ｈ，在不同时间消化细胞并进行细
胞计数。
１４ ＭＴＴ法测定细胞增殖 细胞５×１０３个／ｍＬ均
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匀接种于 ９６孔板中，每孔 ０２ｍＬ，常规培养 ２４ｈ
后，分为对照组、ＤＭＳＯ对照组、ＴＡ０１，０２５，０５，
１ｍｇ·Ｌ－１组，每组设６个复孔。换０４％ＦＢＳ培养
以制备处于Ｇ０／Ｇ１期的静息状态细胞，同时加入不
同剂量丹参酮ⅡＡ。２４ｈ后，补足血清至１０％刺激
细胞进入细胞周期，继续培养２４ｈ。在培养结束前
４ｈ每孔加入 ＭＴＴ（５ｇ·Ｌ－１）２０μＬ。终止培养，
小心吸弃孔内培养上清夜。每孔加入１５０μＬＤＭ
ＳＯ，振荡使结晶物充分融解。选择５７０ｎｍ波长，在
酶联免疫检测仪上测定各孔吸光度（Ａ）。
１５ ＢｒｄＵ掺入测定 ＤＮＡ合成 接种细胞于６孔
板，待细胞生长至４０％～５０％融合时，分为对照组、
ＴＡ０１，０２５，０５，１ｍｇ·Ｌ－１组。制备静息状态细
胞，同时加入不同剂量丹参酮ⅡＡ。２４ｈ后补足血
清至１０％刺激细胞进入细胞周期，同时加入 ＢｒｄＵ，
继续培养２４ｈ，结束实验。用固定液（甲醇丙酮１∶
１）室温下固定１０ｍｉｎ，免疫组化测定ＢｒｄＵ表达。
１６ 流式细胞术测定细胞周期分布 接种细胞
５×１０５个／ｍＬ均匀接种于６孔板中，每孔１ｍＬ。常
规培养２４ｈ后，分为静息组、对照组和 ＴＡ１ｍｇ·
Ｌ－１组，每组设３个复孔。制备静息状态细胞，同时
加入丹参酮ⅡＡ。２４ｈ后，补足血清至１０％刺激细
胞进入细胞周期，继续培养２４ｈ后，用流式细胞术
测定细胞周期。
１７ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法测定 ｐＥＲＫ１／２ 取对数生长
期的细胞以２×１０５个／ｍＬ均匀接种于６孔板，每孔
２ｍＬ。细胞贴壁２４ｈ后随机分为静息组、对照组、
ＴＡ０２５，０５，１ｍｇ·Ｌ－１组，制备静息期细胞，同时
加入不同剂量丹参酮ⅡＡ。２４ｈ后补足血清至１０％
刺激细胞进入细胞周期，３０ｍｉｎ后结束培养，提取蛋
白质。采用 ＳＤＳＰＡＧＥ分离蛋白质（上样量约 ４０
μｇ总蛋白），将蛋白电转移至 ＰＶＤＦ膜，封闭后，
一抗４℃孵育过夜，二抗室温孵育１ｈ，发光剂孵
育，显影。
１８ ＲＴＰＣＲ测定ｃｆｏｓ表达 取对数生长期的细
胞以２×１０５个／ｍＬ均匀接种细胞于６孔板，每孔２
ｍＬ。２４ｈ后随机分为静息组、对照组、ＴＡ０２５，
０５，１ｍｇ·Ｌ－１组。制备静息细胞，同时加入丹参酮
ⅡＡ。２４ｈ后补足血清至１０％，３０ｍｉｎ后结束培养。
提取总 ＲＮＡ，转录为 ｃＤＮＡ，然后进行 ＰＣＲ扩增。
ｃｆｏｓ引物序列 ５′ＣＡＣＡＣＡＧＧＡＣＴＴＴＴＧＣＧＣＡＧ３′，
５′ＣＡＡＴＣＴＣＧＧＴＣＴＧＣＡＡＣＧＣＡ３′，扩增片断 ４２１
ｂｐ；ＧＡＰＤＨ ５′ＣＣＴＧＣＡＣＣＡＣＣＡＡＣＴＧＣＴＴＡ３′，５′
ＡＴＧＣＣＡＧＴＧＡＧＣＴＴＣＣＣＧＴＴ３′，扩增片断２４０ｂｐ。
扩增条件：９４℃预变性５ｍｉｎ；９４℃变性３０ｓ，５７℃
退火３０ｓ，７２℃延伸１ｍｉｎ，循环２４次；最后７２℃再
延伸５ｍｉｎ。制备１５％琼脂糖凝胶，扩增产物进行
电泳，于凝胶成像系统下观察ＤＮＡ电泳条带并摄像
保存。
１９ 统计学分析 数据以 珋ｘ±ｓ表示，均数比较用
ＳＰＳＳ１００统计软件进行单因素 ＡＮＯＶＡ检验，并
进行Ｔｕｋｅｙ检验。Ｐ＜００５为有显著性差异。
２ 结果
２１ ＴＡ对培养大鼠血管平滑肌细胞计数的影响
细胞计数表明１０％ＦＢＳ能促进 ＲＶＳＭＣｓ增殖，且呈
时间依赖性，与溶媒组相比在各时间点均无显著性
差异，说明溶媒对细胞生长无影响。在不同浓度ＴＡ
存在的情况下细胞增殖受到不同程度的抑制，随浓
度增加细胞数目逐渐降低，在１ｍｇ·Ｌ－１时抑制率
达最大值，与溶媒组比较，抑制率分别为 ５３９％，
７８９％，９１８％，差异具有显著性（Ｐ＜００１）。由此
可见ＴＡ能抑制１０％ＦＢＳ所诱导的ＲＶＳＭＣ增殖，其
效应呈时间和剂量依赖性。见表１。
表１ ＴＡ对大鼠血管平滑肌细胞数的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝５）
组别
剂量
／ｍｇ·Ｌ－１
细胞数／×１０４个
２４ｈ ４８ｈ ７２ｈ
ＦＢＳ － １２２±０１３ ４２８±０９５ １１２３±１４５
ＤＭＳＯ ０ １２０±００９ ４２０±０８４ １０９８±１３３
ＴＡ ０１ １１０±０１４ ３１２±０３２１） ９７９±１００
０２５ ０９４±００８１） ２６０±００３１） ６４９±１３４１）
０５ ０８０±０１１１） ２０９±０２３１） ３８０±０８２１）
１０ ０５５±０１６１） ０８９±０１１１） ０９０±００８１）
注：与ＤＭＳＯ组比较１）Ｐ＜００１
在实验过程中，ＴＡ各处理组细胞生长良好，未
见悬浮细胞，台盼蓝染细胞数目不超过３％，但能减
少活细胞数，这说明ＴＡ抗ＲＶＳＭＣ增殖的作用是由
于细胞增殖的抑制而非细胞毒性所致。
２２ ＴＡ对大鼠血管平滑肌细胞代谢率的影响 联
合应用ＭＴＴ法观察 ＴＡ对 ＲＶＳＭＣｓ增殖２４ｈ的抑
制作用。溶媒组 ２４ｈ的 Ａ（０５０２±００６３），ＴＡ
０１，０２５，０５和１０ｍｇ·Ｌ－１处理组吸光度分别为
０３７６±００３６，０３５２±００４２，０２８６±００２４，
０２３４±００２２；抑 制 率 分 别 为 ２５０％，２９８％，
４３１％和５３４％，与溶媒组比较，各剂量组差异具
有显著性（Ｐ＜００１），且呈剂量依赖关系。１０％ＦＢＳ
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组与溶媒组吸光度值无显著性差异，进一步说明溶
媒对细胞生长无影响。
２３ ＴＡ对大鼠血管平滑肌细胞 ＤＮＡ合成的影响
溶媒组 ＢｒｄＵ阳性率是（６８３２±４９３）％，ＴＡ处
理组与溶媒组相比较，细胞 ＢｒｄＵ掺入率明显下降，
各剂量组分别为（５３９８±３５１）％，（４４７８±
３２２）％，（３４９１±３２２）％，（２１２１±５２８）％，差
异具有显著性（Ｐ＜００１），呈剂量依赖性，结果与细
胞计数及ＭＴＴ结果相同 （图１）。
ＡＦＢＳ组；ＢＴＡ１ｍｇ·Ｌ－１组
图１ ＴＡ对大鼠血管平滑肌细胞ＢｒｄＵ掺入的影响
（ＢｒｄＵ免疫组化染色，×４００）
２４ ＴＡ对大鼠血管平滑肌细胞周期分布的影响
经０４％ＦＢＳ静息后有（７９８３±６３４）％的 ＲＶＳＭＣ
处于 Ｇ０／Ｇ１期，Ｓ期细胞仅为（１２６７±２１５）％；
１０％ＦＢＳ作用 ２４ｈ后，ＲＶＳＭＣ从 Ｇ０／Ｇ１期进入 Ｓ
期，Ｓ期细胞比例显著增高，而 Ｇ０／Ｇ１期明显下调；
加用ＴＡ后 Ｇ０／Ｇ１期细胞增高１７４０％，Ｓ期细胞减
少１２８４％。结果提示 ＴＡ主要作用于 Ｇ１／Ｓ限制
点，能阻止 １０％ＦＢＳ所诱导的 ＲＶＳＭＣ由 Ｇ０／Ｇ１期
向Ｓ期推进，从而将 ＶＳＭＣ阻滞于 Ｇ０／Ｇ１期。但对
Ｇ２／Ｍ期的影响较小。见表２。
表２ ＴＡ对培养大鼠血管平滑肌细胞周期分布的影响
（珋ｘ±ｓ，ｎ＝３） ％
组别 Ｇ０／Ｇ１ Ｓ Ｇ２／Ｍ
静息 ７９８３±６３４ １２６７±２１５ ７４７±４２５
ＦＢＳ ５８２７±６１８ ２６１７±４２５ １５３３±３４
ＦＢＳ＋ＴＡ ７５６７±５５１１） １３３３±４１４１） １０９３±１６７１）
注：与ＦＢＳ组比较１）Ｐ＜００５
２５ ＴＡ对大鼠血管平滑肌细胞 ＥＲＫ１／２磷酸化的
影响 经０４％ＦＢＳ同步化的平滑肌细胞ＥＲＫ１／２磷
酸化程度低，加入１０％ＦＢＳ３０ｍｉｎ可见ＥＲＫ１／２磷酸
化程度增加。与１０％ＦＢＳ组相比，ＴＡ处理组ＥＲＫ１／２
磷酸化程度均减弱，且呈剂量依赖性，提示 ＴＡ能抑
制１０％ＦＢＳ诱导的ＥＲＫ１／２磷酸化激活，影响ＭＡＰＫ
通路信号转导从而抑制细胞增殖（图２）。
２６ ＴＡ对大鼠血管平滑肌细胞 ｃｆｏｓ表达的影响
图２ ＴＡ对大鼠血管平滑肌细胞
ＥＲＫ１／２磷酸化的影响
经０４％ＦＢＳ同步化的平滑肌细胞ｃｆｏｓ表达水平极
低，加入１０％ＦＢＳ３０ｍｉｎ可见 ｃｆｏｓ表达明显增加。
与１０％ＦＢＳ组相比，ＴＡ处理组 ｃｆｏｓ表达程度均减
弱，且呈剂量依赖性，提示ＴＡ能抑制１０％ＦＢＳ诱导
的ｃｆｏｓ表达（图３）。
图３ ＴＡ对大鼠血管平滑肌细胞
ｃｆｏｓ表达的影响
３ 讨论
血管损伤后的再狭窄过程就是ＶＳＭＣ的增殖、迁
移和合成分泌大量细胞外基质的过程［８］。介入治疗
损伤血管后，在血管损伤局部，血小板、冠状动脉内皮
细胞、炎性细胞和ＶＳＭＣ产生很多促细胞分裂剂，其
中以ＰＤＧＦ最为重要，它可结合于特异细胞表面受
体，使受体分子构象发生改变，活化酪氨酸激酶，可通
过ＲａｓＲａｆＭＥＫＭＡＰＫ途径激活丝裂素活化蛋。
白 激 酶 （ｍｉｔｏｇｅｎａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｋｉｎａｓｅ，
ＭＡＰＫ）［９１１］，活化的 ＭＡＰＫ从胞浆进入细胞核内，
通过磷酸化一些转录因子，启动基因转录，促进早期
反应基因如ｃｆｏｓ，ｃｊｕｎ和ｃｍｙｃ的表达，诱导ＶＳＭＣ
增殖［１２］。
正是由于ＶＳＭＣ是再狭窄发生的中心环节，因
此寻找具有抑制血管平滑肌细胞增殖迁移的药物已
成为当今研究再狭窄的热点。笔者前期研究发现，
丹参酮ⅡＡ对以生长因子为始因的人动脉平滑肌细
胞增殖具有抑制作用，且此种抑制作用呈剂量依赖
性［７］，但作用机制尚未阐明。
本实验首先采用细胞计数法测定丹参酮ⅡＡ单
体对ＲＶＳＭＣ增殖的影响。结果显示，经不同浓度
丹参酮ⅡＡ处理的 ＲＶＳＭＣ，细胞数目比溶媒对照组
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减少，而且随浓度的增加逐渐减少，表明丹参酮ⅡＡ
对１０％ＦＢＳ诱导的ＲＳＭＣ增殖有明显的抑制作用，
且呈显著的剂量效应依赖关系。同时，本实验还采
用 ＭＴＴ法及溴脱氧尿嘧啶核苷（５ｂｒｏｍｏｄｅｏｙｕｒｉ
ｄｉｎｅ，ＢｒｄＵ）标记技术检测丹参酮ⅡＡ对 ＲＳＭＣ增殖
的影响，结果均显示，丹参酮ⅡＡ能够剂量依赖性地
抑制ＶＳＭＣ的增殖。
丹参酮ⅡＡ对细胞周期分布的影响结果显示，丹
参酮ⅡＡ处理组与１０％ＦＢＳ组相比周期分布发生了
明显的改变，Ｇ０／Ｇ１期增高了 １７４０％，Ｓ期细胞则
减少了１２８４％。提示丹参酮ⅡＡ可能通过阻止血
管平滑肌细胞通过细胞周期中的 Ｇ１／Ｓ限制点，使
其不能进入Ｓ期来实现其抑制体外培养的ＶＳＭＣ增
殖的作用。
ＭＡＰＫ是一组丝氨酸／苏氨酸蛋白激酶，它主要
包括３个成员，即细胞外信号调节的蛋白激酶途径
（ｅｘｔｒａｃｅｌｕｌａｒｓｉｇｎａｌｒｅｇｕｌａｔｅｄｋｉｎａｓｅ，ＥＲＫ１／２）、应激
活化蛋白激酶／ｃＪｕｎＮ末端激酶途径（ｓｔｒｅｓｓａｃｔｉｖａ
ｔｅｄｐｒｏｔｅｉｎｋｉｎａｓｅ／ｃＪｕｎＮｔｅｒｍｉｎａｌｋｉｎａｓｅ，ＳＡＰＫ／
ＪＮＫ）和ｐ３８途径，其中 ＥＲＫ１／２信号通路是最为普
遍的促进细胞增殖和分化的信号途径。ＥＲＫ１／２激
活后转位至核内激活多种转录因子，刺激ｃｆｏｓ等及
早反应基因及周期蛋白的表达，引起细胞增殖［１３］。
本实验发现，丹参酮ⅡＡ具有抑制ＥＲＫ１／２磷酸化激
活及ｃｆｏｓ表达的作用。经同步化的细胞加入１０％
ＦＢＳ刺激３０ｍｉｎ后，丹参酮ⅡＡ处理组与血清对照
组相比，ＥＲＫ１／２磷酸化程度减弱，ｃｆｏｓ表达也减
少，说明丹参酮ⅡＡ能抑制１０％ ＦＢＳ诱导的ＥＲＫ１／２
活化及ｃｆｏｓ表达，提示丹参酮ⅡＡ阻止细胞周期由
Ｇ０／Ｇ１期向Ｓ期推进可能与此有关。
本次结果表明，丹参酮ⅡＡ能抑制胎牛血清诱导
的体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞的增殖，作用呈
剂量依赖性，其作用机制可能与抑制 ＥＲＫ１／２磷酸
化激活影响 ＭＡＰＫ信号转导通路，下调 ｃｆｏｓ表达，
进而影响细胞周期进程，阻止细胞由 Ｇ０／Ｇ１期进入
Ｓ期有关。这为临床冠脉介入治疗后再狭窄等血管
增殖性疾病提供了一种新的思路，有望成为防治再
狭窄新的治疗措施。
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第３３卷第１７期
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ＩｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｅｃｔｓａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆｔａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆ
ｒａｔａｏｒｔｉｃｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｓ
ＬＩＸｉｎ１，２，ＤＵＪｕｎｒｏｎｇ２，ＢＡＩＢｏ２，ＹＵＹａｎ２，ＺＨＥＮＧＸｉａｏｙｕａｎ２，ＹＡＮＧＦａｎｇ２，ＺＨＥＮＧＨｕ２
（１ＢａｓｉｃＭｅｄｉｃａｌＳｃｈｏｏｌ，ＴｉａｎｊｉｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ３０００７０，Ｃｈｉｎａ；
２ＳｃｈｏｏｌｏｆＨｕａｘｉＰｈａｒｍａｃｙ，ＳｉｃｈｕａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｅｎｇｄｕ６１００４１，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆｔａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡ（ＴＡ，ｏｎｅｏｆｔｈｅａｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｏｆＳａｌｖｉａｍｉｌｔｉｏｒｈｉｚａ
Ｂｇｅ），ｏｎｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆｃｕｌｔｕｒｅｄｒａｔｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｓ（ＶＳＭＣ），ａｎｄｔｏｃｌａｒｉｔｙｔｈｅｐｒｏｂａｂｌｅｍｅｃｈａｎｉｓｍＭｅｔｈｏｄ：
Ｃｅｌｃｕｌｔｕｒｅｔｅｃｈｎｉｑｕｅｗａｓｕｓｅｄｉｎｖｉｔｒｏａｎｄｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈｏｒｗｉｔｈｏｕｔ１０％ ＦＢＳＴｈｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙｅｆｅｃｔｏｆＴＡｏｎｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＶＳＭＣｗａｓ
ｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙｃｅｌｃｏｕｎｔ，ＭＴＴｍｅｔａｂｏｌｉｓｍｍｅａｓｕｒｉｎｇａｎｄＢｒｄＵｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎａｓｓａｙＦｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｔｏｔｒａｃｋｃｅｌｃｙｃｌｅ
ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎＷｅｓｔｅｒｎｂｏｌｔｓｗｅｒｅｐｅｒｆｏｒｍｅｄｔｏｅｖａｌｕａｔｅＥＲＫ１／２ａｃｔｉｖｉｔｙＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｆｏｓｗａｓｅｘａｍｉｎｅｄｂｙＲＴＰＣＲＲｅｓｕｌｔ：
Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｏｆｃｅｌｎｕｍｂｅｒ，ＭＴＴａｓｓａｙａｎｄＢｒｄＵｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＴＡｃｏｕｎｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｈｉｂｉｔ１０％ ＦＢＳｉｎｄｕｃｅｄｐｒｏｌｉｆｅｒａ
ｔｉｏｎｉｎａｄｏｓｅｄｅｐｅｎｄｅｎｔｍａｎｎｅｒＦｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ（ＦＣＭ）ａｎａｌｙｓｉｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅＧ０／Ｇ１ｐｈａｓｅｆｒａｃｔｉｏｎｒａｔｉｏｏｆＴＡｇｒｏｕｐｗａｓｈｉｇｈｅｒ
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ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎＣｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｓｅｒｅｓｕｌｔｓｓｕｇｇｅｓｔｔｈａｔＴＡｃａｎｉｎｈｉｂｉｔ１０％ ＦＢＳｉｎｄｕｃｅｄｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｏｆＶＳＭＣＴｈｉｓｅｆｅｃｔｍａｙｂｅｒｅ
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［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｔａｎｓｈｉｎｏｎｅⅡＡ；ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｓ；ｃｅｌｃｙｃｌｅ；ＭＡＰＫ；ｃｆｏｓ ［责任编辑 古云侠］
［收稿日期］ ２００７０９２０
［通讯作者］ 夏之柏，Ｔｅｌ：（０２０）８７７５５７６６８２１５，Ｅｍａｉｌ：
ｘｚｂ１２３４３２１＠ｓｏｈｕｃｏｍ
三氧化二砷治疗大鼠 Ｃ６脑胶质瘤的研究
夏之柏，吴新建，齐铁伟，黄正松
（中山大学 附属第一医院 神经外科，广东 广州 ５１００８０）
［摘要］ 目的：研究三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）体内外抑制脑胶质瘤生长的作用。方法：将不同浓度 Ａｓ２Ｏ３（１，２，４，
６，８μｍｏｌ·Ｌ－１）加入体外培养的Ｃ６脑胶质瘤，ＭＴＴ法检测体外细胞增殖率，ＰＣＮＡ染色检测细胞增殖活性、ＴＵＮＥＬ
法检测原位细胞凋亡和Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测Ｂｃ１２蛋白表达水平。另将大鼠 Ｃ６胶质瘤细胞（５×１０５个／１５μＬ）种植
于雄性ＳＤ大鼠右侧尾状核（模型组、治疗组各１０只），治疗组荷载 Ｃ６脑胶质瘤鼠用前面筛选的浓度（１ｍｍｏｌ·
Ｌ－１）实施肿瘤原位治疗，对照组仅注入生理盐水，观察动物一般情况、生存期、ＭＲＩ动态变化及病理改变。结果：与
模型组和低浓度组相比，中、高浓度治疗组 Ｃ６细胞增殖明显下降（Ｐ＜００１），ＴＵＮＥＬ法表明细胞凋亡指数上升
（Ｐ＜００１）；Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹显示凋亡相关基因Ｂｃｌ２蛋白表达水平呈下降趋势。模型组动物均于３周内死亡（１７８±
０９２）ｄ；治疗组８只动物死于２４～３６（３２１±１３５）ｄ；余２只第１２０天时处死。治疗组ＭＲＩ检查：４周时扫描的４
只动物，１只瘤体有缩小，另３只瘤体变化不大；８～１２周时，残存２只动物，１只瘤灶基本消失，１只残存小瘤灶。结
论：Ａｓ２Ｏ３具有体内外抑制脑恶性胶质瘤生长的作用，有可能成为临床治疗胶质瘤的候选化疗药物之一。
［关键词］ 三氧化二砷；Ｃ６鼠脑胶质瘤；细胞凋亡；Ｂｃｌ２蛋白
［中图分类号］Ｒ２８５５ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）１７２１５００４
２０世纪９０年代，我国学者应用以三氧化二砷
（ａｒｓｅｎｉｃｔｒｉｏｘｉｄｅ，Ａｓ２Ｏ３）为主要成分的“癌灵１号”
治疗急性早幼粒细胞性白血病（ａｃｕｔｅｐｒｏｍｙｌｏｃｙｔｉｃ
·０５１２·
第３３卷第１７期
２００８年９月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ １７
Ｓｅｐｔｅｍｂｅｒ，２００８