全 文 :Limiteddeterminationoftracetoxicalaconitinealkaloidin
Guifudihuangpils
LIJunmei,JIANGYe
(SchoolofPharmacy,HebeiMedicalUniversity,Shijiazhuang050017,China)
[Abstract] Objective:Toestablishacapilaryelectrophoresiswithfieldamplifiedsamplestackingmethodfortheseparation
anddeterminationofaconitinealkaloidinGuifudihuangpils.Method:Anuncoatedfusedsilicacapilarycolumn(50μm×43cm,
efectivelength35cm)wasused.Therunningbuferwas50mmol·L-1phosphateelectrolytesolution(pH46)methanol(8∶2).
Theruuningvoltagewas10kVandthecapilaryinletwasdippedinmethanolfor5spriortoelectrokineticinjection(10kV,40s).
Thedetectionwavelengthwas235nm.Result:Thismethodalowed500foldenrichmentofaconitinealkaloid.Agoodlinearrelation
wasobtainedintherangeof3132×103μg·L-1(r=09996),withthedetectionlimitof94μg·L-1.Theaveragerecoverywas
980% withtheRSDof26%.Conclusion:Themethodissimple,rapidandspecificwithhighstackingeficiency;itprovidesanew
reliablemeansforproductionandqualitycontrolofGuifudihuangpils.
[Keywords] Fieldamplifiedsamplestackingcapilaryelectrophoresis;Guifudihuangpils;aconitinealkaloid;limiteddeter
mination [责任编辑 鲍 雷]
[收稿日期] 20080314
[基金项目] 国家自然科学基金项目(30672605)
[通讯作者] 王地,Tel:(010)83911628,Fax:(010)83911627,
Email:wangdi20022008@tomcom
利用流体动力式超声提取中药的实验研究
王 地1,关 怀1,邹海艳1,于 萍1,徐 扬2,张红月1
(1.首都医科大学 中医药学院,北京100069;
2.北京光慧晓明声能技术研究所,北京100083)
[摘要] 目的: 研究利用流体动力式超声提取中药的方法。方法:以黄芩苷含量为指标,利用高效液相色谱
法测定黄芩苷含量,以煎煮、回流、槽式超声等方法作对照,研究利用流体动力式超声提取黄芩苷的方法;以总黄酮
含量为指标,利用高效液相色谱法测定黄酮含量,槽式超声和回流等方法作对照,研究用流体动力式超声提取银杏
叶的方法,以浸出物含量为指标,煎煮法作对比,用流体声能提取中药复方。结果:利用流体动力式超声提取黄芩
苷含量显著高于其他方法,流体动力式超声提取银杏叶总黄酮含量与槽式超声无显著差异。用流体动力式超声提
取中药复方的浸出物含量显著高于煎煮法。结论:流体动力式超声可提高黄芩苷的提取效率,提取银杏叶总黄酮
含量与槽式超声相当并有利于中药复方中水溶性成份的溶出。
[关键词] 流体动力式超声;提取工艺;高效液相色谱法
[中图分类号]R283 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)14168704
近年来,在中药提取中,超声波以其节能、快速、
温度低等优点受到重视。超声波作用于液体时所产
生的空化效应以及热效应和机械效应,使其可缩短
植物药提取时间,提高提取率[1]。流体动力式超声
是由流体动力式超声发生器产生的混合频率的声
能。流体动力式超声发生器与目前常用的压电式超
声发生器一样,是功率超声的一种,其特点是以高速
流动的气体或液体为振动能量的来源而产生超声,
根据动力来源分为气哨和液哨 2种,频率通常在
20~30kHz。该设备具有节能、温度低、处理量大、
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快速,连续式加工过程、设备结构简单等特点[23]。
国内目前已将该技术应用于粉碎、除尘、乳化等多个
领域[4]。已有研究显示出混合频率的超声在提取
中更有优势[5],而流体动力式超声发生器所产生的
声能就具备这样的特点。流体动力式(气哨)超声
发生器主要由压缩空气泵、贮液槽、声能处理罐及气
哨、收集器等组成(图1),其工作原理是:由压缩空
气作为动力源,带动气哨产生超声作用于液体。
图1 流体动力式超声装置示意图
黄芩苷是黄芩的主要有效成分之一,是黄芩及
其制剂的主要质量控制指标成分。目前,文献报道
黄芩苷的提取方法有煎煮、回流、超声及微波提取法
等[611],生产中多用煎煮法。银杏叶中的黄酮为其
主要有效成分之一,银杏叶的提取目前以醇提应用
较多。以水提取中药成本低,对环境影响小,广泛用
于汤剂以及其他中药制剂的提取,但是能耗高、药物
受热时间长。本实验以水作溶剂,分别提取黄芩和
中药复方;以70%乙醇作溶剂提取银杏叶,研究利
用流体动力式超声提取中药的方法。
1 仪器与试药
Agilent1100型高效液相色谱仪;DAD检测器;
AR1140型电子天平(Adwenturer);Trassonic460型
超声波清洗仪(Elma);KQ-500型超声波清洗仪
(昆山市超声仪器有限公司);cs101-1E电热鼓风
干燥箱;1XJ-Ⅱ离心沉淀机(上海医用分析仪器
厂);流体动力式(气哨)超声发生器(北京光慧晓明
声能技术研究所研制和提供)。
黄芩苷(批号 110715200514)、槲皮素(批号
100081200406)、异鼠李素(批号 110806200407)、
山柰素(批号110861200707)皆购自中国药品生物
制品检定所;磷酸(分析纯,北京北化精细化学品有
限责任公司);乙腈(色谱纯,CALEDON),乙醇、氯
仿、甲醇、盐酸均为分析纯,乐百氏纯净水。黄芩饮
片(产地内蒙,每袋1kg,北京永兴中药饮片有限公
司,批号05101705);银杏叶(产地江苏,每袋1kg,
北京仟草中药饮片有限公司,批号060604004),黄
芪、水红花子、白花蛇舌草、马鞭草、龙葵等为市售中
药饮片(购自北京白塔寺药店)。
2 方法及结果
分别取黄芩饮片、银杏叶,干燥,粉碎,分别过
80,40目筛,备用。
21 黄芩的提取及含量测定
221 黄芩药材含量测定 按《中国药典》黄芩项
下含量测定方法,测得黄芩饮片中黄芩苷含量为
788%。
222 流体动力式超声提取黄芩 称取黄芩粉末
(80目)30g,精密称定,加入60倍水(常水,室温),
称定质量,浸渍 1h后,打开气泵,调至工作压力
(040MPa),将药粉与水(即料液)搅匀倒入流体动
力式超声发生器的贮液槽,料液经声能处理罐,进入
收集器,收集料液(料液经声能处理罐的全过程约
30s,提取后药液温度同室温),加水补足质量,离
心,取上清液备用。
223 其他方法提取黄芩 分别称取黄芩粉末各
(80目)30g,精密称定,加入60倍水,称定质量,分
别煎煮提取1h;置超声清洗仪(频率为40kHz)中
超声40min;煎煮提取1h;晾至室温后分别加水补
足质量,离心,取上清液备用。
224 样品中黄芩苷含量测定 色谱条件:色谱柱
ZORBAXSB-C18(46mm×250mm,5μm),流动
相乙腈02%磷酸(77∶23);检测波长280nm;流速
10mL·min-1;柱温 25℃;理论塔板数不低于
3000。
取黄芩苷对照品72mg,精密称定,加甲醇定容
至25mL,分别取1,15,25,30,60mL,定容至
10mL,分别取5个不同浓度的对照品溶液,过045
μm微孔滤膜,进样10μL,测定峰面积。
以峰面积为纵坐标,黄芩苷浓度为横坐标绘制
标准曲线,回归方程 Y=32495X-30333,r=
09995,黄芩苷浓度在2905~2905mg·L-1具有
良好的线性关系。
样品测定:分别取以上样品适量,过 045μm
微孔滤膜,弃去初滤液,取续滤液于干燥的进样瓶
中,进样10μL。根据回归方程计算溶液浓度及含
量,各样品黄芩苷含量见表1。
对以上实验结果进行方差分析,结果见表2,3。
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表1 3种提取方法黄芩苷质量分数(n=3)
方法 溶媒 平均值%
煎煮 水 584
槽式超声 水 396
流体动力式超声 水 767
表2 3种提取方法黄芩苷含量的方差分析
SS df MS F P
组间方差 20722 2 10361 156771 <0001
组内方差 0397 6 0066
总方差 21119 8
表3 3种提取方法黄芩含量的多重分析比较(LSD法)
(I)方法
(溶媒)
(J)方法
(溶媒)
MeanDiference
(IJ)
标准误 P
流体声能(水)煎煮(水) 18333 02099 <0001
槽式超声(水) 37167 02099 <0001
22 银杏叶的提取及含量测定
221 流体声能提取 取银杏叶粉末(40目)50
g,精密称定,加入 50倍量 70%乙醇,称重,浸泡 1
h,流体动力式超声处理。(处理方法与条件同黄芩
提取),补足减失的质量。过滤,取续滤液50mL,减
压蒸干,残渣加氯仿30mL超声30min,过滤弃去氯
仿液,挥干残渣中的氯仿,将滤纸和残渣一并放入圆
底烧瓶中加入甲醇25%的盐酸(4∶1)混合液25mL
回流30min,放冷,转移至50mL量瓶中,加甲醇定
容至刻度,摇匀,备用。
222 槽式超声和回流提取 分别取银杏叶粉末
(40目)500g,加入50倍量70%乙醇,称重,浸泡1
h,分别于超声清洗仪中超声40min和回流2h,提
取液至室温,称重并补足减失的质量。过滤,取续滤
液50mL,减压蒸干,残渣同221方法处理,备用。
223 黄酮的含量测定[12] 色谱条件 色谱柱:
ZORBAXSB-C18(46mm×250mm,5μm),流动
相甲醇04%磷酸(50∶50);检测波长360nm;流速
10mL·min-1;柱温25℃。理论塔板数以槲皮素
峰计不低于2500。
取槲皮素对照品 15mg,山柰素对照品 15
mg,异鼠李素对照品10mg,加甲醇使溶解并定容
至50mL量瓶中,制成每1mL分别含30,30,20μg
混合溶液。
分别取样品液和对照品溶液,过045μm微孔
滤膜,各注入高效液相色谱仪10μL,测定峰面积。
分别计算槲皮素、山柰素、异鼠李素的含量,按下式
计算总黄酮醇苷的含量:
总黄酮醇苷的含量 =(槲皮素 +山柰素 +异鼠
李素)×251
结果见表4。
表4 银杏叶中黄酮的质量分数(n=3)
样品液 槲皮素 异鼠李素
峰面积(平均值)
山柰酚 ∑A
质量分数
/mg·g-1
黄酮标准品 1084 589 638 2581
流体动力式超声 42443 41100 12291 95833 340
槽式超声 43477 42706 1161 97793 344
回流 141 1076 288 2774 094
23 中药复方的提取及浸出物含量测定
将中药复方1(由黄芪、水红花子、白花蛇舌草
等组成)、复方2(由马鞭草、龙葵等组成)各药干燥,
将两处方按比例称取,分别混合粉碎至一定程度,再
分别称取一定量,浸泡1h后,分别用流体声能处理
3次,煎煮两次(1h,45min),过滤,分别定量取药
液,水浴蒸干,于105℃干燥至恒重,精密称重,减去
容器重,计算浸出物含量。结果见表5。
表5 中药复方浸出物含量平均浸出物质量分数 %
样品来源方法 处方1 处方2
水煎煮 1995 1725
流体动力式超声 2950 2775
3 讨论
利用流体动力式超声提取黄芩,水提取液中黄芩
苷的含量显著高于槽式超声和煎煮法。用流体动力
式超声提取中药复方,其水浸出物含量高于煎煮法,
显示出流体动力式超声对黄芩苷、复方中水溶性成分
的溶出有较强的促进作用,并具有温度低的优点。
利用流体动力式超声以70%乙醇提取银杏叶,
总黄酮的含量与槽式超声相当,并显著高于回流法。
显示出流体动力式超声对银杏叶黄酮的提取作用与
槽式超声相当,但提取时间较后者明显缩短。
流体动力式超声提取中药,只需提取1次,时间
很短,即可达到较好的提取效果。显示出节能和降低
提取成本等方面的应用价值,因此对流体动力式超声
技术在中药方面的应用是值得的进一步研究的。
利用流体动力式超声提取中药,当粉碎度高(根
据药材的性质一般40~80目),溶剂用量大时,提取
效果好,否则易造成堵塞而影响提取速度和效果。发
生堵塞与设备结构有关。流体动力式超声提取中药
温度较低,温度低药材吸附能力强,增加溶剂用量,可
以减少吸附而提高提取效率。适当加温应可以改善。
[参考文献]
[1] 姜 峰,赵燕禹,姜兰梅,等功率超声在中药提取过程中的
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Experimentalresearchonapplicationofhydrodynamicacoustic
generatorinextractionofChinesemedicine
WangDi1,Guanhuai1,ZouHaiyan1,YuPing1,XuYang2,ZhangHongyue1
(1SchoolofTraditionalChineseMedicine,CapitalMedicalUniversity,Beijing100069,China;
2BeijingGuangHuiXiaoMingSonicTechnologyInstitute,Beijing100083)
[Abstract] Objective:TostudythehydrodynamicultrasonicenergyextractiontechniqueforChineseMedicineMethod:The
contentofbaicalininRadixScutelariaeextractsandtotalflavonesinFoliumGinkgoextractswereasindexesrespectivelyandmeasured
byhighperformanceliquidchromatographyWeinvestigatedthehydrodynamicultrasonicenergyextractionprocessfortheextractionof
RadixScutelariaeandFoliumGinkgorespectively,andcomparedwithrefluxingmethod,decoctionandultrasonicextractionWiththe
contentoftheextractsasindexes,CompoundprescriptionsofTraditionalChineseMedicinewereextractedbythehydrodynamicultra
sonicextractionanddecoctionextractionResult:Thecontentofbaicalinofhydrodynamicultrasonicenergyextractswassignificant
higherthanotherextractsThecontentofGinkgoleavesflavonesinhydrodynamicultrasonicenergyextractsandultrasonicextractshad
nosignificantdiferenceComparedwithdecoctingextracts,hydrodynamicultrasonicenergyextractsofTCMcompoundprescriptions
contentwashighergreatlyConclusion:Thehydrodynamicultrasonicenergyextractionprocessshowedhigherextractionrateofbaicalin
ofradixscutelariaethantraditionalextractionmethodsAnditwasbeneficialtothedissolutionofwatersolubleconstituentsincom
poundprescriptionsofTCMThecontentofGinkgoleavesflavonesinthehydrodynamicultrasonicenergyextractsandultrasonicex
tractshadnoobviousdiference
[Keywords] hydrodynamicultrasonicgenerator,extractionprocess,HPLC
[责任编辑 鲍 雷]
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