全 文 ：［收稿日期］ ２００８０５１１
［基金项目］ 全军医药卫生科研基金课题Ｂ类（０１ＭＢ３１６）
［通讯作者］ 乔善义，Ｔｅｌ：（０１０）６６９３０６３４，Ｅｍａｉｌ：ｃｒｂｊ６１１２０２
＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
刺五加抗疲劳活性部位中刺五加苷
Ｂ的含量测定
李 辰１，王晓燕２，胡绪玮１，范海涛２，乔善义２
（１．沈阳药科大学，辽宁 沈阳 １１００１６；
２．军事医学科学院 毒物药物研究所，北京 １００８５０）
［摘要］ 目的：建立刺五加抗疲劳活性部位中刺五加苷Ｂ的含量测定方法。方法：用小鼠负重游泳实验，确定
刺五加粗提物的抗疲劳活性部位；硅胶柱色谱，ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０柱色谱，制备液相色谱对活性部位分离纯化，并对
分离所得化合物进行理化性质研究和结构鉴定；含量测定中高效液相色谱条件为 ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８柱（４６ｍｍ×２５０
ｍｍ，５μｍ），流动相乙腈水醋酸（１０∶９０∶００１），流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，紫外检测波长３４４ｎｍ。结果：从刺五加抗疲
劳活性部位Ａｓ１中分离得到一化合物，鉴定为刺五加苷Ｂ；刺五加苷Ｂ的线性范围为 ０１０４～２０８μｇ，ｒ＝０９９９９；
平均回收率为９７６８％，ＲＳＤ１４％（ｎ＝６）。结论：从刺五加抗疲劳活性部位Ａｓ１中分离得到含量较高的刺五加苷
Ｂ，作为质量控制的指标成分，并建立了刺五加抗疲劳活性部位中刺五加苷Ｂ含量测定方法。
［关键词］ 刺五加；抗疲劳；刺五加苷Ｂ；高效液相色谱
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）２３２８０００３
刺五加 ＡｃａｎｔｈｏｐａｎａｘｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓＨａｒｍ．为五加科
植物刺五加的根及根茎，中医认为具有益气健脾，补
肾安神之功效。刺五加的化学成分比较复杂，主要
有香豆素类、木脂素类、甾体类、三萜类、糖类、有机
酸等［１］。近年来，有文献报道其提取物及部分活性
成分具有抗疲劳作用［２］。为从中药中开发抗疲劳
军用特需药物，作者以小鼠负重游泳试验对刺五加
进行筛选，确定了抗疲劳活性部位，并从该部位中分
离得到含量较高的刺五加苷 Ｂ；采用高效液相色谱
法对刺五加苷 Ｂ进行了含量测定，为后续研究奠定
了基础。
１ 仪器与材料
ＪＮＭ－ＥＣＡ－４００型超导核磁共振仪（日本电子
株式会社），Ｘ－４型显微熔点测定仪（温度未校
正），ＡＰＩ３０００型质谱仪（美国 ＡＢＩ公司）。凝胶
（ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０）为 Ａｍｅｒｓｈａｒｍ中国分装，Ｃ１８反
相填料（１２ｎｍ，５０μｍ）为日本三菱公司生产，ＲＰ
１８Ｆ２５４为德国默克公司生产，大孔树脂（ＤｉａｉｏｎＨＰ
－２０）为日本三菱公司生产，ＨＩＴＡＣＨＩ高效液相色
谱仪，ＨＩＴＡＣＨＩＬ－２４２０ＵＶ－ＶＩＳ检测器，ＨＩＴＡＣＨＩ
Ｌ－２４９０ＲＩ检测器，天美Ｔ－２０００Ｌ色谱工作站，Ｄｉ
ａｍｏｎｓｉｌＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）为中国
迪马公司生产，ＭＮＣ１８制备色谱柱（１０ｍｍ×２５０
ｍｍ，５μｍ）为 ＭａｃｈｅｒｅｙＮａｇｅｌ公司生产。其他试剂
均为化学纯或分析纯。实验动物为昆明雄性小鼠，
购于军事医学科学院实验动物中心 ＳＣＸＫ－（军
２００２００１）。刺五加购于北京普生霖药业有限公司，
并经过军事医学科学院马其云高级实验师鉴定为
Ａ．ｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ。
２ 抗疲劳活性部位筛选
２．１ 抗疲劳活性部位的制备 取刺五加８０％乙醇提
取物５００ｇ，用水溶解后，通过大孔树脂柱，依次用水、
２０％乙醇、５０％乙醇、９０％乙醇梯度洗脱，收集２０％乙
醇洗脱部位（Ａｓ１）和５０％乙醇洗脱部位（Ａｓ２）。
２．２ 小鼠负重游泳实验 以 Ａｓ１和 Ａｓ２对小鼠连
续灌胃２０ｄ，末次给药 ３０ｍｉｎ后进行负重游泳实
验，记录小鼠游泳至死亡时间，分组、给药剂量及结
果情况见表１。Ａｓ１各给药组与空白组对照具有显
著差异性，表明Ａｓ１为刺五加主要抗疲劳活性部位。
３ Ａｓ１部位化学成分研究
３．１ 分离纯化 取Ａｓ１部位１５ｇ，经硅胶柱色谱分
离，氯仿甲醇梯度洗脱，每流分收集２００ｍＬ。合并
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中 国 中 药 杂 志
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Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００８
表１ 实验动物分组及给药剂量
分组
动物数量
／只
给药量
／ｍｇ·ｇ－１·ｄ－１
给药种类
负重游泳时间
／ｍｉｎ
１ １５ － 蒸馏水 ５０８３±１３６４
２ １５ ０５０ Ａｓ１部分 ６１３６±１００４１）
３ １５ １００ Ａｓ１部分 ６１９３±１２８７１）
４ １５ ２００ Ａｓ１部分 ７１２８±１５０２２）
５ １５ ０５０ Ａｓ２部分 ５８２９±１０６１
６ １５ １００ Ａｓ２部分 ５９９３±１５９１
７ １５ ２００ Ａｓ２部分 ６５９５±１５３６１）
注：与第１组比较１）Ｐ＜００５；２）Ｐ＜００１比较
１２０～１５０流分 ，回收溶剂得混合物，此混合物用适
量甲醇溶解，经制备液相色谱制备，再经 Ｓｅｐｈａｄｅｘ
ＬＨ－２０柱色谱反复精制，甲醇结晶，得白色针晶状
化合物（３２０ｍｇ）。
３．２ 结构鉴定 白色针晶（甲醇），ｍｐ１９２～１９３
℃。ＥＳＩＭＳｍ／ｚ３９５２［Ｍ＋Ｎａ］＋，４１１３［Ｍ＋
Ｋ］＋，７６７６［Ｍ×２＋Ｎａ］＋，７８３５［Ｍ×２＋Ｋ］＋，
３７１２［Ｍ－１］－；１ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６，ＭＨｚ）δ：３７６
（６Ｈ，ｓ，２×ＯＣＨ３）４０９（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝５０Ｈｚ，ＣＨ２
Ｏ），４８８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５５Ｈｚ，Ｈ１″），６３２（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝
１６０，５０Ｈｚ，Ｈ２′），６４５（１Ｈ，ｄｔ，Ｊ＝１６０Ｈｚ，Ｈ
１′），６７２（２Ｈ，ｓ，Ｈ３，５）；１３ＣＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ６，ＭＨｚ）
δ：１５２７（Ｃ２，６），１３３８（Ｃ１′），１３２５（Ｃ４），１３０１
（Ｃ２′），１２８４（Ｃ１），１０４４（Ｃ３，５），１０２５（Ｃ１″），
７７２（Ｃ５″），７６５（Ｃ３″），７４１（Ｃ２″），６９９（Ｃ６″），
６０９（Ｃ３′），５６３（２×ＯＣＨ３）。以上数据同文献
［３］对照一致，鉴定为刺五加苷Ｂ（紫丁香苷）。
４ 刺五加苷Ｂ含量测定
４．１ 色谱条件 实验中采用 ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８色谱柱
（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相为乙腈水醋酸
（１０∶９０∶００１），柱温３５℃，紫外检测波长３４４ｎｍ，
流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，每次进样２０μＬ。在上述色谱
条件下，Ａｓ１样品中刺五加苷 Ｂ与其他成分色谱峰
达到基线分离（图１）。
４．２ 对照品储备溶液的制备 称取刺五加苷 Ｂ
１０４ｍｇ置于１０ｍＬ量瓶中，以２０％甲醇溶解并稀
释至刻度，摇匀，得浓度为１０４ｇ·Ｌ－１的刺五加苷
Ｂ对照品储备溶液。
４．３ 供试品溶液的制备 称取 Ａｓ１干燥品约 ２５ｍｇ
置２５ｍＬ量瓶中，用２０％甲醇 溶解并定容，得供试
品溶液。
ＡＡｓ１部位；Ｂ对照品；１．刺五加苷
图１ 刺五加ＨＰＬＣ图
４．４ 线性范围 分别精密吸取刺五加苷 Ｂ储备溶
液，用２０％甲醇稀释成０００５２０，００１０４，００５２０，
０１０４，０５２０，１０４ｇ·Ｌ－１系列对照液。精密吸取
上述对照溶液各２０μＬ，注入液相色谱仪器，测得峰
面积。以刺五加苷 Ｂ对照品的进样量（μｇ）为横坐
标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为
Ｙ＝１０２×１０６Ｘ－７９８×１０４，ｒ＝０９９９９，表明刺五
加苷Ｂ在０１０４～２０８μｇ具有良好线性关系。
４．５ 精密度试验 精密吸取刺五加苷 Ｂ对照品溶
液２０μＬ，注入液相色谱仪，连续测定５次，峰面积
的ＲＳＤ０９９％，表明精密度良好。
４．６ 稳定性试验 取同一份供试品溶液，室温下放
置。每２ｈ精密吸取２０μＬ注入液相色谱仪，考察
样品溶液的稳定性，测定结果表明，１０ｈ内刺五加
苷Ｂ峰面积的ＲＳＤ１９％（ｎ＝６），说明供试品溶液
在１０ｈ内基本稳定。
４．７ 重复性试验 取Ａｓ１样品６份，制备成供试品
溶液，测得刺五加苷 Ｂ质量分数的平均值为
７５０％，其ＲＳＤ１５％，表明该方法重复性良好。
４．８ 加样回收率 精密称取Ａｓ１干燥品６份，分别
加入０５２０ｇ·Ｌ－１的刺五加苷Ｂ对照品溶液１ｍＬ，
用２０％甲醇溶解并定容至２５ｍＬ，按上述色谱方法
测定，计算后的平均回收率为 ９７６８％，其 ＲＳＤ
１４％（ｎ＝６）。
４．９ 活性部位中刺五加苷 Ｂ的含量测定 称取
Ａｓ１干燥品３份，按照４．３方法制备供试液。按上
述色谱条件，每次进样２０μＬ，测定刺五加苷Ｂ的峰
面积，代入回归方程，计算刺五加苷 Ｂ在 Ａｓ１中的
平均质量分数为７４５％，ＲＳＤ１６％。
５ 讨论
刺五加苷 Ｂ对照品溶液的全波长扫描紫外色
谱图显示其最大吸收波长为３４４ｎｍ，在实验过程中
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已分离到的其他糖苷类化合物的紫外较大吸收波长
也在３４４ｎｍ左右，因此选择３３４ｎｍ为检测波长。
流动相中加入一定量的酸对糖苷类成分的色谱
行为影响较大。本研究中加入适量醋酸可改善糖苷
类色谱峰的拖尾现象，使峰形对称。
流动相乙腈水醋酸（１０∶９０∶００１）对 Ａｓ１部位
的洗脱能力不强，进样分析结束后，甲醇冲洗色谱
柱，将其他保留能力较强的成分洗脱下来，再准备下
次进样，防止这些成分对实验结果产生干扰，同时也
提高了实验效率。
刺五加苷 Ｂ在 Ａｓ１部位的含量较高，可作为该
部位的质量控制指标之一，后续开发研究工作正在
进行中。
［参考文献］
［１］ 刘起华，朱 礼，李文兰．刺五加主要活性成分化学与药理研
究［Ｊ］．时珍国医国药，１９９９，１０（５）：３０５．
［２］ 倪 娜，刘向前．五加科五加属植物的研究进展［Ｊ］．中草药，
２００６，３７（１２）：１８９５．
［３］ 宋志中，贾忠建．新疆雪莲化学成分的研究［Ｊ］．中草药，１９９０，
２１（１２）：１２４．
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｅｌｅｕｔｈｅｒｏｓｉｄｅＢｉｎａｎｔｉｆａｔｉｇｕｅｆｒａｃｔｉｏｎｏｆ
ＡｃａｎｔｈｏｐａｎａｘｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓｂｙＨＰＬＣ
ＬＩＣｈｅｎ１，ＷＡＮＧＸｉａｏｙａｎ２，ＨＵＸｕｗｅｉ１，ＦＡＮＧＨａｉｔａｏ２，ＱＩＡＯＳｈａｎｙｉ２
（１．ＳｈｅｎｙａｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ｓｈｅｎｙａｎｇ１１００１６，Ｃｈｉｎａ；
２．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｎｄＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，ＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００８５０，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｄｅｖｅｌｏｐａｎＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｅｌｅｕｔｈｅｒｏｓｉｄｅＢｉｎＡｓ１（ｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｆｒａｃｔｉｏｎｆｒｏｍ
Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ，ｗｈｉｃｈｈａｓａｇｏｏｄｅｆｅｃｔｏｆａｎｔｉｆａｔｉｇｕｅ）．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅａｎｔｉｆａｔｉｇｕｅｅｆｅｃｔｏｆＡｓ１ｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄｂｙｍｉｃｅｂｕｒｄｅｎ
ｓｗｉｍｍｉｎｇｔｅｓｔｉｎｇ．Ｏｎｅｃｏｍｐｏｕｎｄｗａｓｉｓｏｌａｔｅｄｂｙｓｉｌｉｃａｇｅｌ，ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０ｃｏｌｕｍｎｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙａｎｄｐｒｅｐａｒａｔｉｖｅｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍ
ａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．Ｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓａｎｄｓｐｅｃｔｒａｌｅｖｉｄｅｎｃｅｓ．ＥｌｅｕｔｈｅｒｏｓｉｄｅＢｉｎＡｓ１
ｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＨＰＬＣ．ＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｉｎｃｌｕｄｅｄＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８ｃｏｌｕｍｎ（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）ａｎｄｔｈｅｍｏｂｉｌｅ
ｐｈａｓｅｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇｏｆａｍｉｘｔｕｒｅｏｆａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅｗａｔｅｒｅｔｈａｎｏｉｃａｃｉｄ（１０∶９０∶００１）．ＴｈｅＵＶｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓｓｅｔａｔ３４４ｎｍ．Ｒｅ
ｓｕｌｔ：Ａｓ１ｓｈｏｗｅｄａｎｅｘｃｅｌｅｎｔａｎｔｉｆａｔｉｇｕｅａｃｔｉｖｉｔｙ；ＯｎｅｃｏｍｐｏｕｎｄｗａｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍＡｓ１ａｎｄｉｔｓｓｔｒｕｃｔｕｒｅｗａｓｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｓＥｌｅｕｔｈｅｒｏ
ｓｉｄｅＢ；Ｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｅｗａｓｌｉｎｅａｒｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ０１０４２０８μｇ（ｒ＝０９９９９），ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓ９７６８％，ＲＳＤ１４％
（ｎ＝６）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｉｓＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ａｃａｎｔｈｏｐａｎａｘｓｅｎｔｉｃｏｓｕｓ；ａｎｔｉｆａｔｉｇｕｅ；ｅｌｅｕｔｈｅｒｏｓｉｄｅＢ；ＨＰＬＣ
［责任编辑 王亚君］
首届中国道地药材文化建设学术研讨会征文通知
一、目的：促进道地药材学术研究，弘扬道地药材文化，推动道地药材产业发展。
二、组织：主办单位：中国药文化研究会；协办单位：中医杂志，中国中药杂志；地点：北京京东宾馆；时间：
２００９年３月１７～１８日。
三、征文内容：道地药材文化研究思路与方法；道地药材文化挖掘与保护；道地药材博物馆藏品设置与征
集；道地药材文化建设与产业发展的关系；道地药材文化与养生保健的关系；道地药材文化与中成药品牌创
建的关系；道地药材文化与地方经济建设的关系；道地药材文史文献文物研究进展；药用与药食两用药材文
化的差异化研究；濒危道地药材保护研究；道地药材文学与科普创作；道地药材书画摄影创作；道地药材学术
与文化关系研究。来稿请寄：１００１９０北京市海淀区知春路４９号希格玛公寓 Ｂ１００２中国药文化研究会秘书
处。
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