全 文 ：‹°≤测定附子及其炮制品中 v种双酯型
生物碱的含量
刘 芳t o于向红t o李 飞t o谈钰元u o乔延江t
kt1 北京中医药大学 中药学院 o北京 tsstsu ~u1 北京普润生物科技发展有限公司 o北京 tsstsul
≈摘要  目的 }建立同时测定附子中 v种双酯型生物碱 ) ) ) 新乌头碱 !乌头碱 !次乌头碱含量的 ‹°≤ 分析方
法 ∀方法 }²µ¥¤¬ ∞¦¯¬³¶¨ ÷⁄… ≤t{柱 ows °°²¯ 乙酸铵缓冲液2乙腈 o梯度洗脱 o流速 t1s °#°¬±pt o检测波长 uvs ±° ∀
结果 }v种双酯型生物碱新乌头碱 !乌头碱 !次乌头碱均达到了较好的分离 o分别在 s1svx z ∗ t1z{w Λªkρ€ s1||| |l o
s1stu y ∗ s1yvu Λªkρ€ s1||| zl和 s1svv w ∗ t1yzu Λªkρ€ s1||| zl呈良好的线形关系 ∀结论 }该方法简便 !快速 !灵
敏 o可有效地用于附子的鉴别和内在质量控制 ∀
≈关键词  附子 ~双酯型生物碱 ~定量分析 ~‹°≤ ~梯度洗脱
≈中图分类号  • u{w1t ~• u{u1w ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussyltw2ttys2sv
≈收稿日期  ussx2sz2tw
≈基金项目  国家/十五0科技攻关课题kussw…„zut„ttl
≈通讯作者  3 刘芳 oר¯ }kstslywzvw{us o∞2°¤¬¯}©¤±ªy{2{ ƒ «²·2
°¤¬¯q¦²°
附子来源于毛茛科植物乌头 Αχονιτυµ
χαρµιχηαελι ⁄¨ ¥¬1 的子根加工品 o具有回阳救逆 !补
火助阳 !逐风寒湿邪等功效 o是中医临床常用药之
一 ∀然而其良好的功效与毒性并存 o使用不慎极易
引起中毒 o所以大都经炮制后入药 ∀附子饮片现有
黑顺片 !白附片 !淡附片 !炮附片≈t  !刨附片 !熟附片 !
黄附片等多种炮制品 o生物碱是其中的主要有效成
分 o也是毒性成分 o但文献中有关其质量评价的报道
却不多 o而且对其中主要的二萜类生物碱成分的分
离不能达到满意的效果≈u ov  o为了探求附子在炮制
前后成分和含量的变化 o作者对四川江油附子的生
品及其各个炮制品的 ‹°≤ 图进行了研究 o以全面
考察其内在质量 ∀
1 仪器与试药
„ª¬¯¨ ±·ttss高效液相色谱仪k在线脱气机 !四元
泵 !自动进样器 !柱温箱 !∂ • ⁄检测器l ~乙腈为色谱
纯k美国 ƒ¬¶«¨µ公司l o水为高纯水 o其他试剂均为分
析纯 ∀乌头碱k批号 szus2|wsyl !新乌头碱k批号
z||2|usvl !次乌头碱k批号 z|{2|usul购于中国药品
生物制品检定所 o苯甲酰乌头碱由本实验室提供 ∀
生附片及其各种炮制品≈盐附子 o白附片k统货 !中
张l o黑顺片k统货 !二级 !一级 !特级l o刨附片 o炮附
子 o熟附片l 均由四川江油恒源药业集团有限公司
提供 o经北京中医药大学生药系陈玉婷副教授鉴定
为毛茛科植物乌头 Α1 χαρµιχηαελι的干燥子根 ∀
2 方法与结果
211 色谱条件 ²µ¥¤¬ ∞¦¯¬³¶¨ ÷⁄… ≤t{色谱柱kw1y
°° ≅ uxs °° ox Λ°l ~流动相 „ ws °°²¯ 乙酸铵缓冲
液2…乙腈 o梯度洗脱 }s ∗ tx °¬±ovv h …otx ∗ wx °¬±o
vv h ∗ xs h …~流速 t1s °#°¬±pt o检测波长 uvs ±°∀
212 对照品溶液的制备 精密称取新乌头碱 !乌头
碱和次乌头碱对照品适量 o加 s1st h盐酸2甲醇制成
每 t °含新乌头碱 uuv Λª!乌头碱 z| Λª和次乌头
碱 us| Λª的混合溶液 o作为对照品溶液 ∀
213 供试品溶液的制备 取生附片粉末k过 ws目
筛lt ªo精密称定 o置锥形瓶中 o加 ts h氨水 t °浸
润 o再精密加入乙醚 ux °o超声提取 vs °¬±o吸取上
清液 o残渣用乙醚洗涤 v次 o每次 x °o合并提取与
洗涤的乙醚液 oxs ε 水浴挥干乙醚 o用 s1st h盐酸2
甲醇 ts °溶解 o过 s1wx Λ°滤膜 o取续滤液作为生
品供试液 ∀
取附子各种炮制品粉末k过 ws目筛lu ªo精密
称定 o置锥形瓶中 o加 ts h氨水 u °浸润 o再精密加
入乙醚 xs °o超声提取 vs °¬±o吸取上清液 o残渣用
乙醚洗涤 v次 o每次 ts °o合并提取与洗涤的乙醚
液 oxs ε 水浴挥干乙醚 os1st h 盐酸2甲醇 u °溶
解 o过 s1wx Λ°滤膜 o取续滤液作为炮制品供试液 ∀
214 线性关系考察 精密吸取上述 v种对照品混
#sytt#
第 vt卷第 tw期
ussy年 z月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1vt oŒ¶¶∏¨ tw
∏¯¼ oussy
合溶液 s1u os1x ot ox ots °o分别置于 ux °量瓶
中 o用 s1st h盐酸2甲醇稀释至刻度 o摇匀 o得系列标
准溶液 ∀精密吸取 us ˏ注入液相色谱仪 o测定 ∀
以峰面积为横坐标 o进样量为纵坐标进行线性回归 o
绘制标准曲线 o计算回归方程 o结果见表 t ∀
表 t 新乌头碱 !乌头碱和次乌头碱线性回归方程
测定成分 回归方程 ρ 线性范围rΛª
新乌头碱 Ψ€ p s .stt u n { .s| ≅ tsp w Ξ s .||| | s .svx z ∗ t .z{w
乌头碱 Ψ€ p s .ssx y n y .tw ≅ tsp w Ξ s .||| z s .stu y ∗ s .yvu
次乌头碱 Ψ€ p s .ssz x n { .sy ≅ tsp w Ξ s .||| z s .svv w ∗ t qyzu
215 精密度试验 精密称取生附片药材 t ªo按照
213项下制备成供试品溶液 o在上述色谱条件下进
行分析 o连续进样 x次 o计算含量 ∀结果新乌头碱 !
乌头碱和次乌头碱的 • ≥⁄分别为 s1y h ou1v h 和
s1z h o表明精密度良好 ∀
216 稳定性试验 精密称取生附片药材 t ªo按照
213项下制备成供试品溶液 o在上述色谱条件下进
行分析 o分别在 s ou ow oy o{ «进样 o计算含量 ∀结果
表明供试品溶液在 { «内稳定 ∀
217 重复性试验 精密称取生附片药材 x份 o按照
213项下制备成供试品溶液 o在上述色谱条件下进
行分析 o计算含量 ∀结果新乌头碱 !乌头碱和次乌头
碱的 • ≥⁄分别为 u1{ h ou1{ h ou1z h ∀表明本方法
重复性良好 ∀
218 回收率试验 取生附片药材粉末 tx份 o分别
精密加入新乌头碱 !乌头碱和次乌头碱对照品适量 o
按照 213项下制备成供试品溶液 o在上述色谱条件
下进行分析 o计算回收率 o结果见表 u ∀
219 最低检出限 根据信噪比 ≥r‘∴v计算 o本实
验条件下测定新乌头碱 !乌头碱和次乌头碱的最低
检出限分别为 t1s| ≅ tsp v ou1yw ≅ tsp v ou1{x ≅ tsp v
Λª∀
2110 生附片与炮制品 ‹°≤ 图谱比较 生附片及
其各种炮制品的 ‹°≤图谱见图 t ∀
2111 含量测定 分别精密量取对照品溶液和各供
试品溶液 us ˏo注入液相色谱仪 o记录色谱图 o计算
各供试品溶液中新乌头碱 !乌头碱和次乌头碱的含
量 o结果见表 v ∀
3 讨论
311 本实验采用 ‹°≤ 使附子的 v种双酯型生物
碱新乌头碱 !乌头碱 !次乌头碱和单酯型苯甲酰乌头
碱均得到了很好的分离 o方法简便快速 !灵敏准确 o
表 u v种成分加样回收率
测定成分
样品中含量
r°ª
测得量
r°ª
回收率
r h
平均值
r h
• ≥⁄
r h
新乌头碱 s qvww v s qyyx t tss q| tst qx t q|
s qvuw w s qyw| u tsu qt
s qvtz u s qyw{ { tsw qv
s qvuv | s qyv| x || qu
s qvut y s qywu { tst qs
乌头碱 s qsw{ t s qs|w { tsu qt |{ qu u qy
s qswz | s qs|u u |y qz
s qswx t s qs|s v |{ qz
s qswz w s qs|t y |y qx
s qswy u s qs|s y |y q|
次乌头碱 s qvt{ u s qyxt s tst q{ |{ qy u qv
s qvuv | s qyww | |{ qu
s qvuw | s qyv| v |y qt
s qvux { s qywv u |z qs
s qvt{ v s qyww u || qz
注 }新乌头碱加入量为 s1vt{ °ª~乌头碱加入量为 s1swy °ª~次
乌头碱加入量为 s1vuz °ª
图 t 附子生品及其各种炮制品 ‹°≤图谱
„1v种双酯型生物碱对照品 ~…1 苯甲酰乌头碱对照品 ~≤1 生附
片 ~⁄1附子各炮制品≈自下向上依次为盐附子 o黑顺片k四川
统l o黑顺片k四川特级l o黑顺片k四川一级l o黑顺片k四川二
级l o白附片k四川统l o白附片k四川中张l o刨附片 o炮附片 o熟附
片 
t1新乌头碱 ~u1 乌头碱 ~v1 次乌头碱 ~w1 乌头次碱 ~x1 { °¬±峰 ~
y1 wy °¬±峰
对于附子 ‹°≤的深入研究以及用 ‹°≤ 图来控制
药材的内在质量提供了借鉴 ∀
312 附子的毒性主要由乌头碱类生物碱引起≈w  o由
#tytt#
第 vt卷第 tw期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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表 v 附子药材生品与炮制品中新乌头碱 !乌头碱
和次乌头碱的含量 °ª#ªp t
样品 新乌头碱 乌头碱 次乌头碱
生附片 s qxuv s qs|u s qyvx
盐附子 s qssy s qssw s qsts
白附片k四川中张l s qstt s qssv s qsvz
白附片k四川统l p s qssw s qsvy
黑顺片k四川特级l p s qssw s qstz
黑顺片k四川一级l p s qssu s qstx
黑顺片k四川二级l p s qssv s qstt
黑顺片k四川统l p s qssy s qsux
刨附片 s qsxu s qssv s qszs
炮附子 p s qssv s qssv
熟附片 s qss{ s qssu s qstw
注 }/ p 0表示未检出
上述含量测定结果可知生品附子中乌头碱类生物碱
的含量以次乌头碱最高 o新乌头碱次之 o而乌头碱最
低 o其余各炮制品中 v种生物碱含量均很低或检测
不到 ~充分说明了炮制减毒的目的 ∀
313 比较附子各个炮制品的 ‹°≤ 图 o在 wy °¬±左
右均有 t个色谱峰较稳定 o虽然经过浸 !漂 !加热等
不同的炮制方法处理后其仍然稳定 o此物质是否为
附子炮制后的某种活性成分 o尚待进一步研究 ∀除
wy °¬±色谱峰较明显 o在 { °¬±左右还有 t个色谱
峰 o此峰在不同的炮制品中含量略有不同 o但比起生
品含量有所增加 o同时其保留时间比单酯型生物碱
苯甲酰乌头碱的色谱峰kty °¬±l又有提前 o说明此
化合物的极性大于苯甲酰乌头碱 o推断此物质可能
为新乌头碱的水解产物苯甲酰新乌头碱 o尚需进一
步验证 ∀
≈参考文献 
≈t  中国药典 1 一部 qussx }tvu q
≈u  洪 波 o赵宏峰 o司云珊 o等 q中药附子的指纹图谱研究 q吉
林农业大学学报 oussv ouxkxl }xvy q
≈v  彭 波 o杨华元 o刘世瑞 q反相离子对高效液相色谱法测定川
乌和附片中乌头类生物碱的方法研究 q药物分析杂志 ot||x o
txkyl }tv q
≈w  丁兆梦 q中药药效与临床 q北京 }中国医药科技出版社 ot||| }
tsy q
∆ετερµινατιον οφ τηρεε κινδ οφ διεστερ διτερπενοιδ αλκαλοιδσ (∆∆Ασ)
ιν Αχονιτυµ χαρµιχηαελι ανδ ιτσ προχεσσεδ προδυχτσ βψ ΗΠΛΧ
Œ˜ ƒ¤±ªt o ≠˜ ÷¬¤±ª2«²±ªt oŒ ƒ ¬¨t oפ± ≠∏2¼∏¤±u o ±Œ„’ ≠¤±2­¬¤±ªt
(t . ∆επαρτµεντ οφ Χηινεσε Πηαρµαχψ, Βειϕινγ Υνιϖερσιτψ οφ Τραδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινε , Βειϕινγ tsstsu , Χηινα ;
u . Βειϕινγ Πυρυν Βιολογιχ Τεχηνολογψ Χο . Λτδ . , Βειϕινγ tsstsu , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¶¨·¤¥¯¬¶«¤± ‹°≤ ° ·¨«²§©²µ·«¨ §¨·¨µ°¬±¤·¬²± ²©·«µ¨¨®¬±§²©§¬¨¶·¨µ§¬·¨µ³¨ ±²¬§¤¯®¤¯²¬§¶k⁄⁄„¶l¬± Α2
χονιτυµ χαρµιχηαελι ¤±§¬·¶³µ²¦¨¶¶¨§³µ²§∏¦·¶±¤°¨¯¼ ° ¶¨¤¦²±¬·¬±¨ o¤¦²±¬·¬±¨ ¤±§«¼³¤¦²±¬·¬±¨ q Μετηοδ : „ ²µ¥¤¬ ∞¦¯¬³¶¨ ÷⁄… ≤t{¦²¯∏°±
º¤¶∏¶¨§o¤±§¤°°²±¬∏° ¤¦¨·¤·¨ ¶²¯∏·¬²±2¤¦¨·²±¬·µ¬¯¨ ¤¶·«¨ °²¥¬¯¨ ³«¤¶¨ oº¬·«¤©¯²º µ¤·¨ ²©t1s °#°¬±pt ¤±§¤ §¨·¨¦·¬²± º¤√¨¯ ±¨ª·«²©
uvs ±° q Ρεσυλτ :  ¶¨¤¦²±¬·¬±¨ o¤¦²±¬·¬±¨ ¤±§«¼³¤¦²±¬·¬±¨ oº µ¨¨ ¶¨³¤µ¤·¨§o¤±§·«¨ ¦¤¯¬¥µ¤·¬²±¦∏µ√ ¶¨²©·«¨ ° º µ¨¨ ¬± ª²²§ ¬¯±¨ ¤µ¬·¼ ²√ µ¨·«¨
µ¤±ª¨ ²©s1svx z2t1z{w Λªkρ€ s1||| |l os1stu y2s1yvu Λªkρ€ s1||| zl ¤±§s1svv w2t1yzu Λªkρ€ s1||| zl µ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ q Χονχλυ2
σιον : ׫¬¶° ·¨«²§¬¶¶¬°³¯¨¤±§¤¦¦∏µ¤·¨qŒ·¦¤± ¥¨ ∏¶¨§¬±·«¨ ¬§¨±·¬©¬¦¤·¬²± ¤±§ ∏´¤¯¬·¼ ¦²±·µ²¯ ²© Α. χαρµιχηαελι q
[ Κεψ ωορδσ] Αχονιτυµ χαρµιχηαελι ~·«µ¨¨®¬±§²©§¬¨¶·¨µ§¬·¨µ³¨ ±²¬§¤¯®¤¯²¬§¶k⁄⁄„¶l ~¤¶¶¤¼~ ‹°≤ ~ªµ¤§¬¨±·¨ ∏¯·¬²±
≈责任编辑 鲍 雷 
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·¬° ¶¨oº µ¨¨ ¤¦´∏¬µ¨§1  ¤¨±º«¬¯¨ o·«¨ ¶¬°¬¯¤µ¬·¼ ²©©¬±ª¨µ³µ¬±·¬±ª¥¤¶¨§²± ∞∏¦¯¬§¨¤± §¬¶·¤±¦¨ º¤¶¦¤¯¦∏¯¤·¨§¤±§ ¤¨¦«©¬±ª¨µ³µ¬±·º¤¶©¬·º¬·«
¦∏¥¬¦¶³¯¬±¨ 1 Ρεσυλτ : ≥¬°¬¯¤µ¬·¬¨¶²©©¬±ª¨µ³µ¬±·¶²©·«¨ ¬¨·µ¤¦·¶µ¨¶³²±§¨§·²·«¨ ©¯∏¦·∏¤·¬²± ²©³µ²¦¨¶¶¬±ª©¤¦·²µ¶o¤±§¬·¶«²º §¨·«¤··¤®¬±ª¶¬°2
¬¯¤µ¬·¼ ¤¶¬±§¨¬o ∏´¤±·¬·¤·¬√¨ µ¨ ¤¯·¬²± ¥¨·º¨¨ ± ¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦©¬±ª¨µ³µ¬±·¶¤±§ ³µ²¦¨¶¶¬±ª©¤¦·²µ¶¦²∏¯§ ¥¨ ¶¨·¤¥¯¬¶«¨ §1 Χονχλυσιον : ׫¨
° ·¨«²§³µ²³²¶¨§¬±·«¨ ³¤³¨µº¤¶¤¥¯¨·² §¨¶¦µ¬¥¨ ·«¨ ∏´¤¯¬·¼ ²©³µ²§∏¦·¶µ¨¶∏¯·¬±ª©µ²° ©¯∏¦·∏¤·¬±ª¦²±§¬·¬²±¶¬± ¬¨·µ¤¦·¬±ª³µ²¦¨¶¶o¤±§·«¨µ¨2
©²µ¨ o¦¤± ¥¨ §¨ √¨¯²³¨ §¤¶¤³µ¤¦·¬¦¤¥¯¨¶·µ¤·¨ª¼·² √¨¤¯∏¤·¨·«¨ ¶·¤¥¬¯¬·¼ ×µ¤§¬·¬²±¤¯ ≤«¬±¨ ¶¨  §¨¬¦¬±¨ ¶¬± ³µ²§∏¦·¬²± ³µ²¦¨¶¶1
[ Κεψ ωορδσ] ¦«¨ °¬¦¤¯ ©¬±ª¨µ³µ¬±·¬±ª~¶·¤¥¬¯¬·¼ ¤¶¶¨¶¶° ±¨·²©³µ²§∏¦·¬²± ³µ²¦¨¶¶~·µ¤§¬·¬²±¤¯ ≤«¬±¨ ¶¨ ° §¨¬¦¬±¨ ¶~µ¨§Š¬±¶¨±ª
≈责任编辑 鲍 雷 
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