全 文 ：１０１７（Ｃ５），１４０７（Ｃ６）；Ｒｉｂ，８７６（Ｃ１′），６９９（Ｃ
２′），７３５（Ｃ３′），８４８（Ｃ４′），６０８（Ｃ５′）。以上数据
与文献报道［８］的尿苷相符合。
［参考文献］
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ＳｔｕｄｉｅｓｏｎｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｉｎｈｅｒｂｏｆＬａｍｉｕｍｍａｃｕｌａｔｕｍｖａｒｋａｎｓｕｅｎｓｅ（Ⅱ）
ＤＥＮＧＹａｎｒｕ１，ＤＩＮＧＬａｎ２，ＷＵＳｈｕｉｘｉａｎ１，ＷＡＮＧＨａｎｑｉｎｇ１
（１ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＯＳＳＯ，ＬａｎｚｈｏｕＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｅｍｉｃａｌＰｈｙｓｉｃｓ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００００，Ｃｈｉｎａ；
２ＣｏｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅ，ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｌａｎｚｈｏｕ７３００７０，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｆｒｏｍＬａｍｉｕｍｍａｃｕｌａｔｕｍｖａｒｋａｎｓｕｅｎｓｅＭｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎ
ｓｔｉｔｕｅｎｔｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄａｎｄｒｅｐｅａｔｅｄｌｙｐｕｒｉｆｉｅｄｏｎｓｉｌｉｃａｇｅｌｃｏｌｕｍｎａｎｄｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｗｅｒｅｅｌｕｃｉｄａｔｅｄｂｙｔｈｅＮＭＲｓｐｅｃｔｒａａｎｄｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ
ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓＲｅｓｕｌｔ：ＳｉｘｃｏｍｐｏｕｎｄｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄａｓｐｏｌｙｐｏｄｉｎｅＢ（Ⅰ），５ＯＨ８ｅｐｉｌｏｇａｎｉｎ（Ⅱ），ｓｈａｎｚｈｉｓｉｄｅｍｅｔｈｙｌｅｓｔｅｒ
（Ⅲ），ｌｉｒｉｏｄｅｎｄｒｉｎ（Ⅳ），ｑｕｅｒｃｉｔｒｏｓｉｄｅ（Ⅴ），ｕｒｉｄｉｎｅ（Ⅵ）Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＣｏｍｐｏｕｎｄⅣｗａｓｆｏｕｎｄｆｒｏｍｇｅｎｕｓＬａｍｉｕｍｆｏｒｔｈｅｆｉｒｓｔｔｉｍｅａｎｄｔｈｅ
ｒｅｓｔｏｆｔｈｅｃｏｍｐｏｕｎｄｓｗｅｒｅｆｏｕｎｄｆｒｏｍＬａｍｉｕｍｍａｃｕｌａｔｕｍｖａｒｋａｎｓｕｅｎｓｅｆｏｒｔｈｅｆｉｒｓｔｔｉｍｅ
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｌａｍｉｕｍｍａｃｕｌａｔｕｍｖａｒｋａｎｓｕｅｎｓｅ；ｉｒｉｄｏｉｄｇｌｕｃｏｓｉｄｅ；ｌｉｇｎａｎｄｉｇｌｕｃｏｓｉｄｅ ［责任编辑 李 禾］
［收稿日期］ ２００３０９１５
［通讯作者］ 刘斌，Ｔｅｌ：（０２２）２７８１０４１６，Ｅｍａｉｌ：ｂｉｎｌｉｕ＠ｐｕｂ
ｌｉｃｔｐｔｔｊｃｎ。
直接荧光法测定槐胺碱的含量
刘 斌，王 智，李培凡，沈 彬
（天津医学高等专科学校，天津 ３０００５２）
［摘要］ 目的：建立一种利用荧光分光光度法快速、灵敏地测定槐胺碱浓度的方法，并应用于苦参碱与氧化苦
参碱粗品中槐胺碱含量的测定。方法：采用乙醇水（２∶８）混合溶剂，在激发波长与发射波长分别为３９４ｎｍ和４６７
ｎｍ条件下，用荧光光度计直接测定槐胺碱溶液的荧光强度。结果：此方法在１０～２００μｇ·ｍＬ
－１线性良好，回归方程
为Ｉｎｔ＝１１３７Ｃ＋３８７５，ｒ＝０９９８３，回收率为９８％～１０２％。结论：利用槐胺碱的荧光特性可快速、灵敏地检测槐胺
碱含量，此方法不受苦参碱与氧化苦参碱的影响，具有较高的选择性，结果令人满意。
［关键词］ 槐胺碱；荧光光谱法；含量测定
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００５）０４０２７４０３
槐胺碱（ｓｏｐｈｏｒａｍｉｎｅ）是从豆科槐属植物苦豆草 ｓｏｐｈｏｒａａｌｏｐｅｃｕｒｏｉｄｅｓＬ中提取获得的生物碱。实验
发现槐胺碱可抗多种实验性心律失常，具有减慢心
率，增加冠状动脉流量［１］，发生免疫抑制等［２］多种药
理作用。槐胺碱的分析方法主要有高效液相色谱
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第３０卷第４期
２００５年２月
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法［３］等，有关槐胺碱的荧光性能尚未见文献报道。
荧光分光光度法由于具有灵敏度高，选择性好等特
点在药物分析中得到广泛应用［４］。作者研究了槐胺
碱的荧光光谱与激发光谱，建立了直接荧光法测定
槐胺碱含量的方法。
１ 仪器与试剂
ＶａｒｉａｎＣａｒｙＥｃｌｉｐｓｅ荧光分光光度计；槐胺碱、苦
参碱、氧化苦参碱购自内蒙古额克托前旗扶贫麻黄
素厂，使用前经无水乙醇重结晶，并经红外、核磁光
谱、质谱鉴定，分析数据与文献值相符［５７］。其他试
剂为分析纯。实验用水为双蒸水，无水乙醇使用前
经重新蒸馏，经检验均无荧光性杂质。
２ 方法
槐胺碱标准溶液的配制 用电子分析天平准确
称取槐胺碱００５０３ｇ，用乙醇水（２∶８）混合溶剂溶
解并稀释至５０ｍＬ，得到１００６ｍｇ·ｍＬ－１的槐胺碱储
备液。取１００６ｍｇ·ｍＬ－１槐胺碱储备液适量于 １０
ｍＬ比色管中，以乙醇水（２∶８）混合溶剂定容，在激
发波长λｅｘ为３９４ｎｍ，λｅｍ为４６７ｎｍ的条件下进行荧
光测定。
３ 结果与讨论
３１ 荧光光谱 槐胺碱属于喹喏里西啶类生物碱，
其结构见图１。
图１ 槐胺碱结构式
与苦豆草中所含其他生物碱相比，因其有较大
的共轭体系结构而具有荧光特性。用２００μｇ·ｍＬ槐
胺碱溶液进行激发光谱与发射光谱测定，结果见图
２。
图２ 槐胺碱溶液的激发光谱与发射光谱
稀溶液中有机分子的发光大多属于分立中心发
光，由于分子存在着振动弛豫，依据能量守恒定律和
ｓｔｏｋｅｓ定律，分子的激发光谱与荧光光谱呈现镜像对
称关系。通过镜像对称分析，可以鉴别出所测得的
荧光光谱是否是其他杂质的发光［４］。从图 ２可见，
槐胺碱的发射光谱与激发光谱有很好的镜像关系，
说明其基态和第一电子激发态中的振动能级分布情
况相似，这样分子吸收与发射光子，电子在激发态不
同振动能级与基态不同能级跃迁时，跃迁几率相似，
产生如图２的镜像关系。
３２ 溶剂对槐胺碱荧光稳定性的影响 选择纯净
双蒸水、无水乙醇及乙醇水（１∶９，２∶８）混合溶剂作
为溶剂，测定５ｈ内槐胺碱的荧光光谱强度在不同
溶剂中的稳定性。当以纯水为溶剂时，槐胺碱的荧
光强度在２ｈ内衰减为初始测定值的９０％，５ｈ后衰
减为初始测定值的８０％。而以无水乙醇做溶剂，槐
胺碱的荧光强度在２ｈ内没有变化，５ｈ后的荧光强
度与初始荧光强度相比，仅下降了２％，可以认为槐
胺碱在无水乙醇的荧光光谱在５ｈ内是稳定的。实
验中还发现，随着水中乙醇比例的增加，槐果碱的荧
光光谱稳定性逐渐增加。当乙醇与水比例达到２∶８
时，槐胺碱的荧光强度在５ｈ内为初始值的９８％，与
无水乙醇中的数值基本一致。综合考虑荧光光谱的
稳定性及溶剂的价格，选择乙醇水（２∶８）混合溶剂
测定槐果碱的荧光光谱。
３３ 溶液ｐＨ对荧光强度的影响 按实验方法，在
约１５０μｇ·ｍＬ
－１的槐胺碱溶液中，以 ＨＣｌ及 ＮａＯＨ溶
液调节溶液ｐＨ，测定酸度对体系荧光强度的影响。
图３表示了不同ｐＨ下槐胺碱溶液荧光光谱强度。
图３ 溶液ｐＨ对槐胺碱溶液荧光光谱强度影响
图中吸收曲线从上至下分别为
ｐＨ＝１１２５，７１９，７００，４４７，３３０，２２０
从图３可见，溶液 ｐＨ对荧光强度的影响较大。
槐胺碱为生物碱，具有弱碱性，其乙醇水（２∶８）混合
溶剂的溶液 ｐＨ为 ７１９。当溶液中加入 ＨＣｌ时，随
溶液 ｐＨ值降低，其荧光强度逐渐减小，这显然是由
于槐果碱与ＨＣｌ成盐的结果；而在碱性溶液中槐果
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碱仍保持原来的存在形式，所以当向溶液中加入
ＮａＯＨ时，槐果碱荧光强度变化不显著（ＲＳＤ＝
０６％）。因此，利用荧光法测定槐果碱的含量，应选
择在碱性条件下进行。
３４ 标准曲线的绘制 在乙醇水（２∶８）混合溶剂
中，激发波长与发射波长分别为 ３９４ｎｍ和 ４６７ｎｍ
条件下，直接测定不同浓度下的槐胺碱的荧光强度。
在溶液含量为 １０～２００μｇ·ｍＬ
－１，槐胺碱荧光强度
与溶液含量呈现良好的线性关系，其线性回归方程
为：Ｉｎｔ＝１１３７０５Ｃ＋３８７５，ｒ＝０９９８３。
３５ 回收率试验 精密称取槐胺碱标准品适量，置
于１０ｍＬ容量瓶中，用乙醇水（２∶８）混合溶剂定容，
配成一定浓度的槐胺碱溶液。激发波长与发射波长
分别为３９４ｎｍ和４６７ｎｍ条件下，测定荧光强度，并
根据回归方程计算出槐胺碱的含量，计算回收率，实
验结果见表１。
表１ 荧光分光光度法测定槐胺碱回收率试验结果（ｎ＝４）
配制含量
／μｇ·ｍＬ
－１
测得含量
／μｇ·ｍＬ
－１
ＲＳＤ
／％
回收率
／％
平均值
／％
２０ １９６ １４ ９８０
５０ ４９９ ０２ ９９８ ９９８
１００ １０１５ ０６ １０１５
３６ 样品含量测定 购得的苦参碱与氧化苦参碱
经重结晶后，以乙醇水（２∶８）混合溶剂配制为 ０２
ｍｇ·ｍＬ－１溶液，在激发波长与发射波长分别为 ３９４
ｎｍ和４６７ｎｍ条件下，无可测荧光强度。
称取未提纯苦参碱和氧化苦参碱样品，以乙醇
水（２∶８）混合溶剂配制为 ３５３ｍｇ·ｍＬ－１苦参碱及
３４２ｍｇ·ｍＬ－１氧化苦参碱溶液，其荧光光谱与槐胺
碱荧光光谱相同，说明样品中含有微量的槐胺碱。
在激发波长与发射波长分别为３９４ｎｍ和４６７ｎｍ条
件下，测定荧光强度，利用回归方程计算出苦参碱和
氧化苦参碱中槐胺碱的含量分别为 １３４％（ＲＳＤ＝
０７％，ｎ＝４）和０４５％（ＲＳＤ＝１２％，ｎ＝４）。
以上结果表明，本法快速、灵敏，线性范围较宽，
可用于苦参碱与氧化苦参碱粗品中槐胺碱含量的测
定，结果令人满意。
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ＬＩＵＢｉｎ，ＷＡＮＧＺｈｉ，ＬＩＰｅｉｆａｎ，ＳＨＥＮＢｉｎ
（ＴｉａｎｊｉｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｅｇｅ，Ｔｉａｎｊｉｎ３０００５２，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｈｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｐｒｏｐｅｒｔｙｏｆｓｏｐｈｏｒａｍｉｎｅｗａｓｓｔｕｄｉｅｄａｎｄａｓｐｅｃｔｒｏｆｌｕｏｒｉｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｔｏｄｅｔｅｒ
ｍｉｎｅｔｈｅｓｏｐｈｏｒａｍｉｎｅｃｏｎｔｅｎｔＭｅｔｈｏｄ：Ｉｎ２０％ｅｔｈａｎｏｌｓｏｌｕｔｉｏｎ，ｗｉｔｈｅｘｃｉｔａｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈａｔ３９４ｎｍａｎｄｅｍｉｓｓｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈａｔ４６７ｎｍ，
ｔｈｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｔｅｎｓｉｔｙｏｆｓｏｐｈｏｒａｍｉｎｅｃａｎｂｅｄｅｔｅｃｔｅｄｂｙｔｈｅｆｌｕｏｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒＲｅｓｕｌｔ：Ｓｏｐｈｏｒａｍｉｎｅｃｏｎｔｅｎｔｃａｎｂｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｗｉｔｈｅｘｔｅｒ
ｎａｌｓｔａｎｄａｒｄｍｅｔｈｏｄｂｙｆｌｕｏｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｅｒＴｈｅｌｉｎｅａｒｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｂｅｔｗｅｅｎｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｔｅｎｓｉｔｙａｎｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｉｓｋｅｐｔｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ１０～
２００μｇ·ｍＬ
－１ＴｈｅｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎｅｑｕａｔｉｏｎｉｓＩｎｔ＝１１３７Ｃ＋３８７５Ｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｙｒａｔｅｉｓ９８％１０２％Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｕｔｉｌｉｚｉｎｇｔｈｅｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ
ｃｈａｒａｃｔｅｒｏｆｓｏｐｈｏｒａｍｉｎｅ，ｉｔｓｃｏｎｔｅｎｔｃａｎｂｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｆａｓｔａｎｄｓｅｎｓｉｔｉｖｅｌｙｔｈｅｅｘｉｓｔｉｎｇｍａｔｒｉｎｅａｎｄｏｘｙｍａｔｒｉｎｅＴｈｅａｎａｋｙｓｉｓｉｓｎｏｔｉｎｔｅｒｆｅｒｅｄ
ｂｙＴｈｅｍｅｔｈｏｄｈａｓｈｉｇｈｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｓｓａｔｉｓｆｙｉｎｇ
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