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Study on effects of anticancer and immunoregulation of Fuganchun 6 on hepatoma of mouse

复肝春6号对小鼠肝癌的抑制作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响



全 文 :®¬±§¶²© ¬¨·µ¤¦·¶µ¨§∏¦¨§·«¨ §¤°¤ª¨ §§¨ ªµ¨¨¥¼ µ¤§¬¤·¬²±1 Χονχλυσιον: ׫¨ ¬¨·µ¤¦·²©¦«¯²µ²©²µ° ¬¨¨ µ·¶±²·¤¥¯¨¤±·¬·∏°²µ ©¨©¨¦·¶²±
¦¤±¦¨µ¦¨¯¯¶¤±§³µ²·¨¦·¬√¨ ©¨©¨¦·¶²± §¤°¤ª¨ §±²µ°¤¯ ¦¨ ¯¯¶¬±§∏¦¨§¥¼ µ¤§¬²·«¨ µ¤³¼ ¤±§¦«¨ °²·«¨ µ¤³¼1
[ Κεψ ωορδσ] Γανοδερµ α λυχιδυµ ~ ¤±·¬·∏°²µ~ ¬µµ¤§¬¤·¬²±~ µ¤§¬²·«¨ µ¤³¼~ ¦«¨ °²·«¨ µ¤³¼
≈责任编辑 古云侠  
≈收稿日期   ussy2su2t|
≈基金项目   河北省卫生厅 ussw年医学科学研究重点项目计
划课题 kswsysl
≈通讯作者   3 刘福英 oר¯} ksvttl{yuyxxz|o ∞2°¤¬¯} ©¯¼ƒ
«¨ ¥°∏1 §¨∏1¦±
复肝春 y号对小鼠肝癌的抑制作用及
对荷瘤小鼠免疫功能的影响
李秀娟 t o毛宇湘 u o张焕铃 t o王俊霞 t o刘福英 t3
kt1河北医科大学 实验动物学部 分子生物学研究室 o河北 石家庄 sxsstz~
u1河北省中医院 肝胆科 o河北 石家庄 sxssttl
≈摘要   目的 }研究复肝春 y号 kƒŠ≤ 2yl的抗肝癌作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响 ∀方法 }将接种 ‹uu肝
癌细胞的小鼠分为模型组 !x2氟尿嘧啶组 kx2ƒ∏组 l!ƒŠ≤ 2y高 !中 !低剂量组 k含生药量 zsovxotx ª# ®ªpt lo另设正
常对照组 o连续给药 ts §∀观察小鼠瘤重 !体重 !‘Ž细胞杀靶活性 !淋巴细胞增殖活性及脾细胞白细胞介素 ukŒ2
ul分泌量的变化 ∀制备 ƒŠ≤ 2y含药血清 o以  ××法和生长曲线法观察该含药血清对体外培养 ‹uu细胞的增殖抑
制作用 ∀结果 }ƒŠ≤ 2y高剂量可明显抑制荷瘤小鼠移植瘤的生长 o且 ƒŠ≤ 2y含药血清对 ‹uu细胞增殖有明显的抑
制作用 o呈时间和浓度依赖性 ∀模型组荷瘤小鼠的 ‘Ž细胞杀靶活性和脾细胞 Œ2u分泌量均明显低于正常对照组
kΠ  s1sxl~而 ƒŠ≤ 2y高剂量组荷瘤小鼠的 ‘Ž细胞杀靶活性 !脾细胞 Œ2u分泌量和淋巴细胞增殖活性均得到明
显改善 oƒŠ≤ 2y中剂量治疗使荷瘤小鼠的脾细胞 Œ2u分泌能力增强 o与模型组比较差异显著 kΠ  s1sxl∀结论 }
ƒŠ≤ 2y可明显抑制 ‹uu细胞的生长 o改善荷瘤小鼠的免疫功能 ∀
≈关键词   复肝春 y号 ~抗肿瘤 ~免疫调节
≈中图分类号   • u{x1x ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukussylt|2tyuu2sw
复肝春 y号 kƒŠ≤ 2yl方剂是由河北省中医院毛
宇湘主任医师根据多年临床经验拟定 o在临床治疗
中观察到该方药可明显延长患者生存期 !减轻病人
痛苦 !改善患者生存质量 o这些作用可能与 ƒŠ≤ 2y
抑制肿瘤细胞增殖及提高患者的免疫功能有关 ∀为
了证实该方药的抗肝肿瘤作用及初步研究其抗肿瘤
机制 o本实验观察了 ƒŠ≤ 2y对 ‹uu小鼠肝癌的抑瘤
作用及其对荷瘤小鼠免疫功能的影响 ∀
1 材料
111 实验用药
ƒŠ≤ 2y方中各单味中药 k黄芪 !女贞子 !白花蛇
舌草 !半枝莲 !薏苡仁 !鳖甲 !牡蛎 !桔梗 !莪术 !露蜂
房 !葶苈子等 l均购自乐仁堂大药房 o配伍后 o冷水
浸泡 t «o水煎 u次后混匀 o过滤并浓缩 o制成含生药
为 v1x ª# °pt的液体 ow ε 冰箱储存备用 ∀ x2氟尿
嘧啶注射液 kx2ƒ∏l}上海旭东海普药业有限公司生
产 o批号 svttsw∀
112 动物与瘤株
Ž小鼠 o清洁级 o体重 t{ ∗ uu ªo雄性 o由本校
实验动物学部提供 k合格证号 ⁄Žswtu2stvxl∀小鼠
肝癌 ‹uu细胞株和 ≠¤¦2t细胞株均由本校实验动物
学部实验动物研究室保存 ∀
113 试剂
刀豆蛋白 „k≤²±„lo噻唑蓝 k ××l}美国 ≥¬ª°¤
公司产品 ~小鼠 Œ2u ∞Œ≥„检测试剂盒 }上海森雄
科技实业公司产品 ∀ th ‘°2ws液按常规配制 ≈t  ∀
2 方法
211 荷瘤小鼠模型的建立
#uuyt#
第 vt卷第 t|期
ussy年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vtoŒ¶¶∏¨ t|
’¦·²¥¨ µoussy
无菌条件下取传代 y ∗ z §的 ‹uu肝癌小鼠腹
水 o用生理盐水 k‘≥l稀释成含量为 v ≅ tsy个 r°的
细胞悬液 o于每只小鼠右侧腋窝皮下接种 s1u °∀
212 分组及给药
将接种 ‹uu细胞 uw «后的小鼠随即分为 x组 o
模型组 !x2ƒ∏组 !ƒŠ≤ 2y高 !中 !低剂量组 o另设正常
对照组 k小鼠右侧腋窝皮下接种 ‘≥ s1u °l∀模型
组和正常对照组均给予蒸馏水 s1w °灌胃 o每天 u
次 ~x2ƒ∏组给予 x2ƒ∏us °ª# ®ªpt腹腔注射 o每天 t
次 ~ƒŠ≤ 2y高 !中 !低剂量组分别给予 ƒŠ≤ 2y zsovxo
tx ª# ®ªpt # §pt k按生药量计算 ls1w °灌胃 o每
天 u次 o连续给药 ts §∀
213 ƒŠ≤ 2y抗肿瘤作用
21311 ƒŠ≤ 2y体内抑瘤率的测定
末次给药 uw «后处死小鼠称重 o剖取肿瘤组织
称重并计算抑瘤率 ∀
抑瘤率 kh l € k模型组瘤重 p治疗组瘤重 l r模型组瘤
重 ≅ tssh
21312 ƒŠ≤ 2y含药血清对体外培养 ‹uu细胞的作

2131211 含药血清的制备 将 xs只小鼠随机分为
x组 }正常对照组 otsousovsoxs倍 ƒŠ≤ 2y剂量组 ∀
分别给予蒸馏水和不同剂量的 ƒŠ≤ 2yktwou{owuozs
ª# ®ªpt o分别相当于成人日用量的 tsousovsoxs
倍 l灌胃 o每次 s1w °o每天 u次 o连续给药 v §o末
次给药 t «后取血 o分离血清并过滤除菌 oxy ε ovs
°¬±灭活后 o pzs ε 冰箱保存备用 o即为实验用含药
血清 ∀
2131212 含药血清对 ‹uu细胞的细胞毒作用 将
含量为 x ≅ tsw个 r°的 ‹uu细胞悬液以每孔 tys
ˏ接种于 |y孔板中 o培养 uw «后分别加入各组小
鼠血清 ws ˏ∀  ××法测定含药血清对 ‹uu细胞的
细胞毒作用并按下式计算细胞生长抑制率 ∀
细胞生长抑制率 kh l € k正常对照组 Α p加中药组 Α) /
正常对照组 Α ≅ tssh
2131213 含药血清对 ‹ uu细胞生长曲线的影响
于 |y孔板中每孔加入含量为 t ≅ tsw个 r°的 ‹uu
细胞悬液 tys ˏo各组小鼠血清 ws ˏo连续培养 x
§o每天各取 v孔细胞培养物 o以台盼蓝染色法计数
活细胞数 o取平均值 o以每 t °拒染的活细胞数与
培养时间作图绘制生长曲线 ∀
214 ƒŠ≤ 2y对荷瘤小鼠免疫功能的影响
21411 荷瘤小鼠淋巴细胞增殖活性的测定
常规制备荷瘤小鼠脾细胞并制成含量为 x ≅
tsy个 r°的细胞悬液 o以每孔 uss ˏ加入 |y孔板
中 o每样本设 ≤²±„ 刺激组 k终含量为 ts Λª#
°pt l和无 ≤²±„刺激对照组 o各设 v个重复孔 o以
 ××法 kxzs ±°l测定各孔 Α值 o以刺激指数 k≥Œl作
为判断脾淋巴细胞增殖的程度 ∀
≥Œ€实验孔 Αxzs r对照组 Αxzs
21412 荷瘤小鼠 ‘Ž细胞活性的测定
以乳酸脱氢酶法测定 ‘Ž细胞活性 ∀将脾细胞
悬液 kx ≅ tsy个 r°ltss ˏ加于 |y孔板中作为效
应细胞 o再加入对数生长期 ≠¤¦2t细胞 kt ≅ tsx个 r
°ltss ˏ作为靶细胞 k效靶比值为 xsrtlo另设靶
细胞自然释放组和最大释放对照组 k≠¤¦2t细胞 tss
ˏ nth ‘°2ws tss ˏl∀每样本设 v个重复孔 o
培养 ty «∀吸取上清 tss ˏ加于另一培养板中 o置
vz ε 孵育 ts °¬±o每孔加入新鲜配制的底物液 tss
ˏo室温 !避光反应 ts ∗ tx °¬±后 o加入终止液 vs
ˏoxzs ±°波长测定 Α值 o按下式计算 ‘Ž细胞活
性 ∀
‘Ž细胞活性 kh l € k实验组 Αxzs p自然释放组 Αxzs l r
k最大释放组 Αxzs p自然释放组 Αxzs l ≅ tssh
21413 荷瘤小鼠脾细胞 Œ2u分泌能力的检测
于 uw孔板中每孔加入含量为 x ≅ tsy个 r°的各
组小鼠脾淋巴细胞悬液 t °与 ≤²±„k终含量为 x Λª
# °pt lo培养 w{ «后收集上清液 o上清液中 Œ2u的
含量采用 ∞Œ≥„法测定 o按试剂盒说明操作 ∀
215 统计方法
检测结果的两两比较采用 ≥‘Ž2´ 检验 ∀数据
以 cξ ? σ表示 ∀
3 结果
311 ƒŠ≤ 2y的抑瘤作用
31111 对荷瘤小鼠体重增长的影响
各组荷瘤小鼠体重均有不同程度的增加 o但
ƒŠ≤ 2y高剂量治疗组小鼠体重增加量明显高于 x2ƒ∏
组 o差异显著 kΠ s1sxlo结果见表 t∀
31112 对荷瘤小鼠瘤重的影响
ƒŠ≤ 2y高剂量组及 x2ƒ∏组小鼠的瘤重明显小
于模型组 kΠ  s1sxlo抑瘤率分别为 v{1wzh o
wu1szh ∀给予 ƒŠ≤ 2y中 !小剂量治疗后 o抑瘤率仅
为 tx1u|h oy1s{h o与模型组比较差异无显著性 o
结果见表 u∀
#vuyt#
第 vt卷第 t|期
ussy年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vtoŒ¶¶∏¨ t|
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表 t ƒŠ≤ 2y对荷瘤小鼠体重增长的影响 kcξ ? σ, ν € tsl
组别
剂量 rª#
®ªpt # §pt
体重 rª
始 末
体重变化

模型 p usqvu ? tqzt uwqyu ? vq{w wqvs ? vqw{
x2ĸ sqsu t|qut ? tquv utqyx ? wqst uqww ? uqvu
ƒŠ≤ 2y zs usqwz ? tq|v uxqz| ? vqwx xqvu ? vqwztl
vx usqus ? tq{x uxqtv ? uqyz wq|v ? uqws
tx t|q|z ? uqvs uwqws ? uq|z wqwv ? vqus
正常对照 p usqtu ? uqst uvq{t ? tq|| vqy| ? uq|s
注 }与 x2ƒ∏组比较 tl Π  sqsx
表 u ƒŠ≤ 2y对荷瘤小鼠的抑瘤作用 kcξ ? σ, ν € tsl
组别 剂量 rª# ®ªpt # §pt 瘤重 rª 抑瘤率 rh
模型 p uqtz ? sq{w p
x2ĸ s1su tquy ? sqvz wuqsztl
ƒŠ≤ 2y zs tqvw ? sqvs v{qwztl
vx tq{w ? sqxw txqu|
tx uqsv ? sqzx yqs{
注 }与模型组比较 tl Π  sqsx
31113 ƒŠ≤ 2y含药血清对体外培养 ‹ uu细胞的作

3111311 对 ‹ uu细胞的细胞毒作用 随着 ƒŠ≤ 2y
给药量的增加 o所制备含药血清对体外培养 ‹uu细
胞的生长抑制率也升高 o即该含药血清对 ‹uu细胞
生长抑制作用呈浓度依赖性 o结果见表 v∀
表 v ƒŠ≤ 2y含药血清对 ‹uu细胞的细胞
毒作用 kcξ ? σ, ν € {l
组别
剂量
rª# ®ªpt # §pt
Α 生长抑制率rh
正常血清 p sqwvu x ? sqsus w s
ts倍血清 tw sqvxv y ? sqsvx t t{quwtl
us倍血清 u{ sqvvw x ? sqszz w uuqyytl
vs倍血清 wu sqvsy { ? sqsw| t u|qsytl
xs倍血清 zs squyv | ? sqsuz t v{q|{tl
注 }与正常血清组比较 tl Π  s1sx
3111312 对 ‹uu细胞生长曲线的影响 随着 ƒŠ≤ 2
y给药量的增加 o含药血清与 ‹uu细胞作用时间的
延长 oƒŠ≤ 2y含药血清对 ‹uu细胞生长抑制现象就
愈明显 o结果见图 t∀
图 t ƒŠ≤ 2y含药血清对 ‹ uu细胞生长曲线的影响
312 对小鼠 ‘Ž细胞杀靶活性 !淋巴细胞增殖及分
泌 Œ2u能力的影响
模型组荷瘤小鼠的 ‘Ž细胞杀靶活性和脾细胞
Œ2u分泌量明显降低 o与正常对照组比较差异显著
kΠ s1sxlo其淋巴细胞增殖活性亦低于正常对照
组 o但无统计学差异 ~与模型组比较 ox2ƒ∏治疗组荷
瘤小鼠的 ‘Ž细胞杀靶活性和脾细胞 Œ2u分泌量明
显降低 kΠ s1sxlo淋巴细胞增殖活性亦降低 o但差
异不显著 ~给予 ƒŠ≤ 2y高剂量治疗可使荷瘤小鼠的
如上 v指标均明显提高 kΠ  s1sxl~ƒŠ≤ 2y中剂量
治疗 ts §后 o荷瘤小鼠的脾细胞 Œ2u分泌能力亦显
著增强 o与模型组比较差异显著 kΠ  s1sxlo但对
‘Ž细胞杀靶活性和淋巴细胞增殖活性无明显增强
作用 o结果见表 w∀
表 w ƒŠ≤ 2y对小鼠 ‘Ž细胞杀靶活性 !淋巴细胞增殖活性
及脾细胞 Œ2u分泌量的影响 kcξ ? σ, ν € tsl
组别
剂量
rª# ®ªpt
‘Ž细胞
rh ≥Œ
Œ2u
r³ª# °pt
模型 p uxqs{ ? uqys vqts ? sqtz wsxqzt ? zvq{u
x2ĸ s1su txqu| ? tq|vtl uq|z ? squz uszq{y ? wsqv|tl
ƒŠ≤ 2y zs vuq{{ ? uqvstl vqww ? sqwutl t wuvqvv ? t{vqtwtl
vx uyqwz ? uq|s vqtz ? sqxw {wzqxx ? {vqyztl
tx uwqs| ? vqus vqsz ? sqv{ xv{qu| ? z|qvy
正常对照 p vsqyu ? uq|utl vqvs ? squz t uxzqtw ? ussquwtl
注 }与模型组比较 tl Π  sqsx
4 讨论
中医学认为原发性肝癌是由于湿热毒邪侵犯人
体 o正虚邪恋 o日久致气滞血瘀 !阴阳失调 !肝郁脾
虚 o瘀血阻络而成癥积结于胁下所致 o该病以脏腑气
血亏虚 o阴阳失调为本 o气 !血 !湿 !热 !瘀 !毒互结交
固为患为标 o治疗当标本兼顾 !整体调控 o方能阻遏
疾病的发展 ∀ ƒŠ≤ 2y方中黄芪 !女贞子补气养阴 !扶
正固本 ~白花蛇舌草 !半枝莲 !薏苡仁清热解毒 !健脾
利湿 ~鳖甲 !牡蛎滋阴潜阳 !软坚散结 ~莪术 !桔梗理
气活血 !消肿散积 ~诸药合用 o可共奏益气养阴 !清热
解毒 !健脾利湿 !软坚散结之功 ∀现代药理研究发
现 o黄芪 !白花蛇舌草 !女贞子 ≈u2w 可增强机体免疫功
能 o莪术的提取物榄香烯 o薏苡仁的有效成分康莱特
均有明显的抗肿瘤作用 ≈xoy  o已广泛应用于肿瘤的
临床治疗 ∀
本研究显示 o给予 ‹uu荷瘤小鼠 ƒŠ≤ 2y高治疗
剂量对小鼠移植实体瘤生长有明显的抑制作用 ~
ƒŠ≤ 2y含药血清亦对体外培养的 ‹uu细胞增殖有
明显抑制作用 o且随着药物浓度的增加及作用时间
的延长 o这种抑制作用更加明显 o呈时间和浓度的依
#wuyt#
第 vt卷第 t|期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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赖性 ∀研究同时发现 o荷瘤小鼠的 ‘Ž细胞杀靶活
性及 Œ2u分泌能力降低 o说明此时荷瘤使小鼠的免
疫功能受到了不同程度的抑制 ∀ x2ƒ∏使荷瘤机体
整体免疫功能更加低下 o而 ƒŠ≤ 2y高剂量治疗可明
显改善荷瘤小鼠的 ‘Ž细胞杀靶活性及 Œ2u分泌能
力 o并且可提高淋巴细胞增殖活性 o使得荷瘤机体免
疫功能增强 o达到控制和杀灭肿瘤细胞的目的 ∀但
实验亦发现 oƒŠ≤ 2y中 !低剂量给药对荷瘤小鼠移植
瘤的抑制作用不明显 o且对荷瘤小鼠机体免疫功能
无明显增强作用 o可能是由于给药剂量太低 o药中有
效成分不能达到一定的血药浓度所致 o提示在临床
治疗中 o要注意根据患者体重适当调整给药剂量 o使
方中各有效成分能充分发挥其治疗作用 ∀
≈参考文献  
≈t  薛 彬 q免疫毒理学实验技术 ≈   q北京 }北京医科大学 中
国协和医科大学联合出版社 o t||x}w|q
≈u  李  o丁安伟 o孟 丽 q女贞子多糖的免疫调节作用研究
≈ q中药药理与临床 o usstotzkul}ttq
≈v  王润田 o单保恩 o李巧霞 o等 q黄芪提取物免疫调节活性的体
外实验研究 ≈ q中国中西医结合杂志 o ussuo uukyl}wxvq
≈w  单保恩 o张金艳 o杜肖娜 o等 q白花蛇舌草的免疫学调节活性
和抗肿瘤的活性 ≈ q中国中西医结合杂志 o ussto uskxl}
vzsq
≈x  周洪语 o候菊生 o罗其中 o等 q榄香烯抗肿瘤作用机制的研究
进展 ≈ q中国肿瘤临床 o ussso uzkxl}v|uq
≈y  李 瑛 o石廷章 q康莱特诱导肿瘤细胞凋亡的实验研究 ≈ q
中国肿瘤临床 o ussuo u|ktul}{y|q
Στυδψ ον εφφεχτσ οφ αντιχανχερ ανδ ιµ µ υνορεγυλατιον οφ
Φυγανχηυν y ον ηεπατοµ α οφ µ ουσε
Œ÷¬∏2­∏¤±t o  „’ ≠∏2¬¬¤±ªu o ‹ „‘Š ‹∏¤±2¯¬±ªt o • „‘Š ∏±2¬¬¤t o Œ˜ ƒ∏2¼¬±ªt
(t. ∆επαρτµ εντ οφ Λαβορατορψ Ανιµ αλΣχιενχε οφ Ηεβει ΜεδιχαλΥνιϖερσιτψ, Σηιϕιαζηυανγ sxsstz, Χηινα;
u. Ηεβει Προϖινχε ΗοσπιταλφορΤραδιτιοναλΧηινεσε Μεδιχινε, Σηιϕιαζηυανγ sxsstt, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¶·∏§¼ ·«¨ ¤±·¬¦¤±¦¨µ²∏¶ ©¨©¨¦·²©ƒ∏ª¤±¦«∏± y kƒŠ≤ 2yl ¤±§¬·¶¬°°∏±²µ¨ª∏¯¤·²µ¼ ©¨©¨¦·²± ·∏°²µ2
¥¨ ¤µ¬±ª°¬¦¨q Μετηοδ : ׫¨ °¬¦¨ ¬±²¦∏¯¤·¨§¥¼ ‹uu ¦¨¯¯¶º µ¨¨ §¬√¬§¨ §¬±·²x ªµ²∏³¶} °²§¨ ¯ªµ²∏³o x2ƒ∏ªµ²∏³ ¤±§ ƒŠ≤ 2y ¬± «¬ª«
§²¶¨o ° §¨¬∏° §²¶¨o ¤±§ ²¯º §²¶¨ ªµ²∏³¶q ׫¨ ±²µ°¤¯ °¬¦¨ º µ¨¨ ¤¯¶² ²¥¶¨µ√ §¨q ׫¨ ¶¨ °¬¦¨ º µ¨¨ ·µ¨¤·¨§©²µts §¤¼¶q ׫¨ º ¬¨ª«·²©
·∏°²µ°¤¶¶¤±§°²∏¶¨ º µ¨¨ ¬¨¤°¬± §¨1׫¨ ·¤µª¨·2¦¨ ¯¯2®¬¯¯¬±ª¤¦·¬√¬·¼ ²©‘Ž¦¨¯¯¶1׫¨ ³µ²¯¬©¨µ¤·¬²± ¤¦·¬√¬·¼ ²© ¼¯°³«²¦¼·¨ ¤±§·«¨ ³µ²2
§∏¦·¬²± ²©Œ2u ²©°∏µ¬±¨¶³¯ ±¨²¦¼·¨¶º µ¨¨ §¨ ·¨¦·¨§µ¨¶³¨ ¦·¬√¨¯¼q ׫¨ ¶¨µ∏° ¦²±·¤¬±¬±ªƒŠ≤ 2y º¤¶³µ¨³¤µ¨§¤±§¬·¶¬±«¬¥¬·¬²± ©¨©¨¦·²±
‹uu ¦¨¯¯¶º¤¶ ¬¨¤°¬± §¨¥¼  ×× ¤¶¶¤¼ ¤±§ªµ²º·«¦∏µ√¨ιν ϖιτροq Ρ εσυλτ: Šµ²º·«²©·∏°²µº¤¶¬±«¬¥¬·¨§°¤µ®¨ §¯¼ ¥¼ ƒŠ≤ 2y «¬ª«§²¶¨q
׫¨ ¬±«¬¥¬·¬²± ²©¶¨µ∏° ¦²±·¤¬±¬±ªƒŠ≤ 2y ²± ·«¨ ³µ²¯¬©¨µ¤·¬²± ²©‹uu ¦¨¯¯¶ιν ϖιτρο º¤¶²¥¶¨µ√ µ¨§¬± ¤§²¶¨ ¤±§·¬° 2¨§¨ ³¨ ±§¨ ±·°¤±± µ¨q
׫¨ ·¤µª¨·2¦¨ ¯¯2®¬¯¯¬±ª¤¦·¬√¬·¼ ²©‘Ž¦¨¯¯¶¤±§·«¨ ³µ²§∏¦·¬²± ²©Œ2u ²©°∏µ¬±¨¶³¯ ±¨²¦¼·¨¶²©°²§¨ ¯ªµ²∏³º µ¨¨ ²¯º µ¨·«¤± ·«²¶¨ ²©±²µ2
°¤¯ ªµ²∏³kΠ  s1sxlq • «¨ ± ¦²°³¤µ¨§º¬·«°²§¨ ¯ªµ²∏³o ƒŠ≤ 2y ¬± «¬ª«§²¶¨ ¨¯ √¨¤·¨§·«¨ ·º²¬±§¨ ¬¨ ¶¤¥²√ 2¨° ±¨·¬²± §¨o ¤±§¤¯¶² ±¨2
«¤±¦¨§·«¨ ³µ²¯¬©¨µ¤·¬²± ¤¦·¬√¬·¼ ²© ¼¯°³«²¦¼·¨ °¤µ®¨ §¯¼ kΠ  s1sxl1׫¨ ³µ²§∏¦·¬²± ²©Œ2u ²©°∏µ¬±¨¶³¯ ±¨²¦¼·¨¶º¤¶¤¯¶² ¬°³µ²√ §¨
º«¨ ± ·µ¨¤·¨§¥¼ ƒŠ≤ 2y ¬± ° §¨¬∏° §²¶¨kΠ  s1sxlq Χονχλυσιον: ƒŠ≤ 2y ¦¤± ¬±«¬¥¬·¨·«¨ ªµ²º·«²©‹uu ¦¨ ¯¯¶°¤µ®¨ §¯¼ ¤±§ ¤¯¶² ¦¤±
¶·µ¨±ª·«¨ ± ·«¨ ¬°°∏±¬·¼ ²©‹uu ·µ¤±¶³¯¤±·¨§°²∏¶¨q
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≈责任编辑 古云侠  
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