全 文 ：白头翁组织培养研究
张子学t 3 o丁为群t o唐 勇t o时维静t o叶文才u
kt q安徽技术师范学院 o安徽 凤阳 uvvtss ~
u q中国药科大学 o江苏 南京 utsss|l
≈摘要 目的 }为加快白头翁种苗生产速度及其生产的现代化 ∀方法 }利用组织培养的方法 o在添加不同种类
植物激素处理组合的培养基上 o对不同的外植体进行初代培养 !丛生芽继代培养及其生根培养进行研究 ∀结果 }适
宜于白头翁的初代培养基 } ≥ n y2
t qs ∗ vs °ª#pt n s ∗ s qsx °ª#pt n蔗糖 vs ª#pt ~增殖培养基 }≥ n y2
s qu °ª#pt n s qsu °ª#pt n
s qsss st °ª#pt n 蔗糖 vs ª#pt ~生根培养基 }tru ≥ n s qw °ª#pt
n蔗糖 us ª#pt ∀结论 }采用白头翁的茎尖和花蕾作为外植体 o利用组织培养的方法能够实现种苗的工厂化快速
繁殖 ∀
≈关键词 白头翁 ~组织培养 ~快速繁殖
≈中图分类号 ≥ xyz ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusswlsv2sutx2sw
白头翁 Πυλσατιλλα χηινενσισ k
ª¨ ql ª¨¨¯是毛茛
科白头翁属多年生草本植物 o原产于中国 ∀主要分
布于东北 !西北 !华北和华东等地 ∀其全草含三萜皂
苷 o具有清热解毒 !凉血止痢的功能≈t ou ∀现代医学
研究证明 o其乙醇提取物具有镇静和抑制肿瘤细胞
的作用≈v ow ∀并含有一种核糖体失活蛋白 o能够抑
制蛋白质的合成 o它与单克隆抗体 !激素 !生长因子
等交联 o可专一性地杀死靶细胞 o具有治疗肿瘤 !艾
滋病等的功能≈x ∀近年来 o白头翁除作为中草药外 o
也被人们作为观赏花卉≈y ∀由于白头翁具有药用和
观赏的双重功效 o国内外市场需求量大 o研发前景广
阔 ∀白头翁主要依靠种子繁殖 o但种子成熟后 o若不
及时播种 o很快就会丧失活力 ∀目前 o白头翁仍处于
野生状态 o人工播种栽培量极少 o为了拓宽白头翁资
源的利用 o避免乱挖滥采 o保护植被 o防止水土流失 o
优化美化环境 ∀作者试图通过白头翁的组织培养进
行快速繁殖 o为白头翁大规模人工栽培及其生产现
代化提供参考依据 ∀
1 材料与方法
1 q1 材料
试验材料为安徽省凤阳县凤阳山的野生白头
翁 ∀试验于 ussu年 t月 ∗ ussv年 x月在安徽技术
≈收稿日期 ussv2sz2tz
≈基金项目 安徽省教育厅资助项目kussvsyyl
≈通讯作者 3 张子学 oר¯ }ksxxslyzu{wx| o∞2°¤¬¯}½½¬∏¨ussv
¼¤«²²q¦²° q¦±
师范学院生物技术中心组培室进行 ∀
1 q2 方法
本试验中所有培养基均添加卡拉胶 x qx ª#pt
作凝固剂 ∀培养温度kuv ? ul ε o光周期 tu «o光照
强度 w sss ¬¯o³ x q{ ∀
1 q2 q1 外植体的选择与处理 外植体为 ussu年 t
月直接采挖的野生白头翁的茎尖 !根段 !花薹及花
蕾 ∀用自来水冲洗 us °¬±o滤纸吸干 ∀在超净工作
台上进行表面灭菌处理 }zx h酒精漂洗vs¶o转入
s qt h ª≤¯ u消毒液中浸泡 tu °¬±o再用无菌水漂洗
x ∗ y次备用 ∀
1 q2 q2 初代培养 接种前用解剖刀取出茎尖 !花
薹 !花蕾和根段 o并将茎尖 !根段和花薹切成长约
s qx ¦°o分别接种到初代培养基上 ∀初代培养共设
置 t|种不同的激素处理组合 o其中 y2
单独处理 z
个 o处理浓度分别为 }s qx ot qs ot qx ou qs ou qx ov qs ow qs
°ª#pt ~y2
与 二因素全实施的复合处理 tu
个 o其中 y2
设置 u水平 o即 t qs和 u qs °ª#pt o
设置 y水平 o即 s qst os qsx os qt os qu os qw os q{
°ª#pt ∀每个处理接种外植体 tu瓶 o每瓶接种 u个
外植体 o基本培养基为 ≥ n蔗糖 vs ª#pt ∀并定期
观察各种外植体在不同的培养基中愈伤组织形成及
芽的诱导情况 ∀
1 q2 q3 增殖培养 增殖培养基设置 {个处理k见表
tl o每处理接种 x瓶 o每瓶接种 v 个 u ¦°长左右的
单芽k带芽基部分似愈伤的组织团l o培养 vs §后统
#xtu#
第 u|卷第 v期
ussw年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ v
¤µ¦«oussw
计芽的增殖情况 ∀基本培养基为 ≥ n蔗糖 vs ª#
pt ∀
表 t 白头翁增殖培养的处理组合
序号
激素
y2
t s qsx s qsu
u s qts s qsu
v s qus s qsu
w s qws s qsu
x s qus s qsu s qsss ssx
y s qus s qsu s qsss sts
z s qus s qsu s qsss sus
{ s qus s qsu s qsss sws
1 q2 q4 生根培养 生根培养以不添加任何激素为
对照k≤l o分别单独采用
或 进行生根处
理 o二者均设置 s qt os qu os qw os q{ ot qs °ª#ptx种不
同的处理浓度 o共计 tt 个处理 ∀每个处理接种 x
瓶 o每瓶接种 v个 v ¦°长左右的壮芽 o培养 vs §o观
测结果 o基本培养基为 tru ≥ n蔗糖 us ª#pt ∀
2 结果与分析
2 q1 不同培养基对白头翁不同外植体初代培养的
影响
2 q1 q1 不同培养基对不同外植体的诱导效果 试
验结果表明 }不同的外植体培养 vs §后 o在不同的
培养基中的表现不同 ∀总体来看 o初代培养的所有
处理中 o根段既不能诱导分化丛芽 o也不能脱分化形
成愈伤组织 o最终全部褐化死亡 ∀而茎尖和花蕾既
可以分化出芽 o又可以诱导出愈伤组织k见图 tl ∀
花薹只能脱分化形成愈伤组织k见图 tl ∀因此 o在
白头翁快速繁殖中 o适宜的外植体为茎尖和花蕾 ∀
图 t 不同
浓度对白头翁初代培养的影响
2 q1 q2 不同激素种类及不同激素组合对外植体的
诱导效果 从图 u可以看出 o无论是茎尖还是花蕾 o
当在培养基中单独添加一定量的
可以促进白头
翁芽的分化 ∀
在 t qs ∗ v qs °ª#pt的浓度均能产
生不定芽 o但当
浓度大于 v qs °ª#pt或小于 t qs
°ª#pt时 o既无外植体脱分化形成愈伤组织 o也无
芽的分化 ∀
从图 u !图 v可以看出 }当
分别在 t qs或 u qs
°ª#pt时 o在试验区间范围内 o随着 浓度的提
高 o不同外植体出愈率均逐渐增加 o且其出愈率 }花
薹 茎尖 花蕾 ~茎尖和花蕾外植体的分化率逐渐
提高ks ∗ s qsx °ª#ptl o随后则逐渐下降 ∀当添加
s q{ °ª#pt时 o仅能形成愈伤组织 o而无芽的分
化 ∀同时可以看出 o一方面
与低浓度的
ks qst ∗ s qsx °ª#ptl组合有利于芽的分化 o说明
和 在一定范围内存在协同作用≈z ∀另一方
面虽然同样处理 o由于外植体的不同 o接种茎尖比接
种花蕾的出愈率和分化率均高 o说明外植体的分化
程度 o影响其脱分化和再分化的能力 ∀
图 u
与 组合对白头翁外植体分化的影响
t q
t °ª#pt时 o外植体的分化率
u q
u °ª#pt时 o外植体的分化率k图 v同l
图 v
与 不同浓度组合对白头翁出愈率的影响
2 q2 不同激素组合对白头翁继代增殖的影响
2 q2 q1 y2
与 组合对白头翁增殖的影响 在
植物初代培养过程中 o一般采用较高浓度的 y2
来
#ytu#
第 u|卷第 v期
ussw年 v月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ v
¤µ¦«oussw
诱导芽的分化 o而增殖培养中 o由于在初代培养过程
中 o外植体内激素水平的逐渐累积 o在继代时 o常降
低培养基中激素水平 o以利于不定芽的较长时期分
化和生长 ∀不同浓度的 y2
与 的组合对白头
翁增殖效果不同k见表 ul ∀
表 u y2
与 不同组合对白头翁增殖的影响
序号
激素r°ª#pt
y2
增殖芽数增殖倍数
差异显著性
s qsx s qst
v s qu s qsu vt u qsz ¤
w s qw s qsu ut t qws ¥
u s qt s qsu ut t qws ¥
t s qsx s qsu ty t qsz ¥
由表 u可以看出 }t ou ov ow w种培养基都可
以促进不定芽的增殖 o其中 v增殖芽数达到了显著
水平 o但总体芽的增殖倍数不高 o培养 vs §后仅增
殖 u倍左右 ∀
2 q2 q2 y2
o与
组合的增殖效果 油菜素
内酯简称云大2tus 或
2tus o是一种新型植物激
素 ∀它既具有促进外植体生长和延长绿叶功能的双
重作用 o同时也具有促进愈伤组织增生的功效≈{ ∀
以 v号培养基为对照 o不同浓度的云大2tus对外植
体的继代增殖效果有所不同k见表 vl ∀
试验结果表明 o云大2tus与 y2
和 配合
使用可以极显著地提高白头翁的增殖倍数 ∀以 y
k云大2tus s qsss st °ª#ptl极显著地高于其他各处
理 ∀ x oz o{之间差异不显著 o但与对照 v相比都
达到了显著水平 ∀这显示了云大2tus在调节植物分
化方面具有独特生理活性≈| ∀从试管苗的长势看 o
添加云大2tus后分化苗高 u ∗ v ¦° o大小适中 o叶色
浓绿 o形态正常 o玻璃化苗极少 o生长情况明显优于
对照 ∀
表 v y2
和 与
组合对白头翁继代增殖的影响
序号
激素r°ª#pt
y2
增殖芽数 增殖倍数
差异显著性
s qsx s qst
y s qu s qsu s qsss st x| v q|v ¤
x s qu s qsu s qsss ssx wv u q{z ¥
z s qu s qsu s qsss su wu u q{s ¥
{ s qu s qsu s qsss sw v| u qys ¥¦
≤ s qu s qsu s vt u qsz ¦
2 q3 不同培养基对试管苗生根的影响
结果表明 o将长至 v ¦°左右长的壮芽k基部带
有 u ∗ v个腋芽l转入 tru≥添加不同激素的生根培
养基中 otx §左右开始出现根原基 o培养 vs §o最好
的处理根长可达 t qt ¦°k见表 w o图略l ∀
表 w 不同培养基对白头翁生根的影响
序号
激素r°ª#pt
生根率
r h
平均
每株根数
平均根长
r¦° 试管苗长势
¦® s s s s s n
ªt s qt s s s s n
ªu s qu s ut t qu s q{ n n
ªv s qw s vy u qv s q| n n
ªw s q{ s t{ t q{ s qv n n
ªx t qs s s s s n
ªy s s qt s s s n
ªz s s qu yu v qy t qs n n n
ª{ s s qw {x x qt t qt n n n n
ª| s s q{ {| w qu s qw n n n
ªts s t qs zy v qy s qu n n
从表 w可以看出 o 对白头翁根的诱导效果
明显好于
∀无论是
o还是 o低浓度都不
能诱导生根 o而高浓度时愈伤组织过大 o根生长缓
慢 o并且从愈伤组织上诱导的根 o其输导组织与茎的
输导组织不直接相连 o移栽难以成活 ∀因此 o从生根
率 o平均每株根数 o平均根长及试管苗长势等综合因
素来看 o白头翁较优的生根培养基为 tru ≥ n
s qw °ª#pt n 蔗糖 us ª#pt ∀
3 讨论
白头翁的组织培养国内外尚未见报道 ∀本试验
研究表明 o白头翁可以通过组织培养丛生芽方法进
行快速繁殖 ∀
白头翁快速繁殖的技术操作与大多数植物略有
不同 ∀不定芽在增殖或生根过程中 o最好切成小芽
丛或单芽带上芽基部分似愈伤的组织团 o否则常常
会出现叶片枯褐而死亡 ∀这可能与白头翁的茎是根
状茎有关≈u ∀其芽基部似愈伤的组织团类似于根状
茎 o可能是白头翁进行无性繁殖的器官 o在组织培养
的过程中 o它有利于芽和根的分化与生长 ∀对这团
类似愈伤的组织团有待进行细胞学和解剖学研究 ∀
在植物组织培养中 o植物激素对器官分化的调
节起非常重要的作用 o尤其细胞分裂素与生长素的
#ztu#
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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比值对组织的发育方向起决定作用≈z ots ∀在白头翁
的初代和继代增殖培养过程中 o有少量不定芽出现
玻璃化现象 o是由于激素处理组合调控不当 o还是环
境条件的影响 o尚待进一步研究 ∀
白头翁的生根后 o有关其移栽成苗 !壮苗技术和
环境条件优化 o以及白头翁由野生到工厂化生产成
苗 o是否会造成遗传上的改变及其药用成分和含量
的变化 o尚待进一步研究 ∀
≈参考文献
≈t 黄泰康 o尤启冬 o史美瑶 o等 q常用中药成分与药理手册 q北京 }
中国医药科技出版社 ot||w qzwv q
≈u 宋立人 o胡烈 o章国镇 o等 q中华本草k第 z卷l q上海 }上海科学
技术出版社 ot||| quv| q
≈v ≠¨ • ≤ o «¤² ≥ ÷ o ≤¤¬ o ετ αλq ≥·∏§¬¨¶²± ·«¨ ¦«¨ °¬¦¤¯ ¦²±2
¶·¬·∏¨±·¶²© Πυλσατιλλα χηινενσισk µl q Χηινεσε ΧηεµιχαλΛεττερσot||t o
ukxl }vzx q
≈w 庄贤韩 o耿宝琴 o雍定国 q白头翁抗肿瘤作用实验 q实用肿瘤杂
志 ot||| otwkul }|w q
≈x 唐根源 o张椿梅 o吴红京 q植物白头翁毒蛋白的分离 !纯化及其
组分测定 q色谱 ot||{ otykxl }wtw q
≈y 赵 渤 o鲁新海 q药用花卉栽培和利用 q北京 }中国农业出版
社 oussu ovtt q
≈z 熊 丽 o吴丽芳 o屈云慧 o等 q观赏花卉的组织培养与大规模生
产 q北京 }化学工业出版社 oussv qtx q
≈{ 王 武 o李秀兰 o张献龙 o等 q油菜素内脂在棉花组织培养中的
应用研究 q棉花学报 ot||w oykul }{v q
≈| 何若韫 o王光法 o陈玉凤 q油菜素内脂研究简介 q沈阳农业大学
学报 ot|{{ ot|kwl }|s q
≈ts 曹孜义 o刘国民 q实用组织培养教程 q兰州 }甘肃科学技术出
版社 ot||y qus q
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(t . Ανηυι Τεχηνιχαλ Τεαχηερ Χολλεγε , Φενγψανγ uvvtss Ανηυι , Χηινα ;
u . Χηινα Πηαρµαχευτιχαλ Υνιϖερσιτψ, Νανϕινγ utsss| , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¶³¨ §¨∏³¶¨ §¨¯¬±ª³µ²§∏¦·¬²± ²©³¤¶´ ∏¨©¯²º µ¨k Πυλσατιλλα χηινενσεσl¤±§·«¨¬µ°²§¨µ±¬½¤·¬²±¬± ³¤¶´ ∏¨©¯²º µ¨q
Μετηοδ : •¬·«·¬¶¶∏¨ ¦∏¯·∏µ¨ ° ·¨«²§o³µ¬°¤µ¼ ¦∏¯·∏µ¨ ²©§¬©©¨µ¨±·¨ ¬³¯¤±·¶ o¦∏¯·∏µ¨ ²©¦¯∏¶·¨µ¥∏§¶¤±§·«¨¬µµ²²·¬±ª¦∏¯·∏µ¨ º µ¨¨ ¦²±§∏¦·¨§²±
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s qsss st °ª#pt n ≥∏¦µ²¶¨ vs ª#pt¬± §¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²± ¤±§¶∏¥¦∏¯·∏µ¨ ²©¦¯∏¶·¨µ¥∏§¶otru ≥ n s qw °ª#pt n ≥∏¦µ²¶¨ us ª#pt¬±
µ²²·¬±ªqΧονχλυσιον : ³³¯¼¬±ª¶·¨°·¬³¤±§©¯²º µ¨¥∏§¶¤¶ ¬¨³¯¤±·¶ o«¬ª«©µ¨ ∏´¨ ±¦¼ ³µ²³¤ª¤·¬²± ²©¶¨ §¨¯¬±ª¶¦¤± ¥¨ ¤¦«¬¨√ §¨º¬·«³¯¤±··¬¶¶∏¨
¦∏¯·∏µ¨ ¬± °¤¶´ ∏¨©¯²º µ¨q
[ Κεψ ωορδσ] ³¤¶´ ∏¨©¯²º µ¨~·¬¶¶∏¨ ¦∏¯·∏µ¨ ~«¬ª«©µ¨ ∏´¨ ±¦¼ ³µ²³¤ª¤·¬²±
≈责任编辑 王康正
5新编中药志6第 w卷简介
5新编中药志6是著名中药学专家 !中国工程院院士肖培根研究员主编 o化学工业出版社出版的一部全面介绍我国中药资源与现代研究的
大型工具书 ∀全书共 w卷 o其内容丰富 !翔实 o保持了与 usss年版5中华人民共和国药典6一部的一致性 o可以作为是5药典6的注释 ∀
本书第 t ∗ v卷全部为植物药 o已于 ussu年初面世并受到广大中医药界专家的高度评价 o现在第 w卷也出版了 ∀
5新编中药志6第 w卷内容分为 u部分 o第 t部分 收载常用动物与矿物药 zs余种 o第 u部分为全书总索引 ∀
第 t部分 o收载的常用动物与矿物药涵盖了5药典6一部中的全部动 !矿物药 ∀对每个中药品种 o均就其历史 !原动k矿l物 !采制 !药材及产
销 !化学成分 !药材鉴定 !性味及功效 !药理作用及临床应用 o以及地方代用品 !伪品等情况作了全面介绍 o并附了参考文献 ∀同时为适应中药质
量评价和现代化 !国际化的需要 o加强了化学成分与中药成分的定性鉴定 o中药特征性成分或有效成分的定量分析等方面的内容 ~对一些重要
的常用中药 o还加强了药材的宏观与微观鉴别的内容 ~文献追踪至 usst年 o个别到 ussu年上半年 ∀
第 u部分 o包含全书总索引 z种 }中药功能索引 !药理作用索引 !化学成分中文名索引 !化学成分英文名索引 !药材与原植k动l物拉丁学名
索引 !药材与原植k动 !矿l物名称汉语拼音索引 !药材与原植k动 !矿l物名称中文笔画索引 ∀这些索引是根据不同读者的多种需求而编制 o可满
足在中药现代化研究 !新药研发 !药品检验管理 !药材经销等各种部门工作的专业人员使用 ∀
本卷正文前还附有本卷所收载药材 !原动物与原矿物的彩色插图 |u幅 ∀
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