全 文 ：¤¦¬§ ¬¯³²¶²°¨¤±§§¨ ·¨µ°¬±¨¬·¶ ±¨·µ¤³° ±¨·¨ ©©¬¦¬¨±¦¼1 Μετηοδ : ⁄¬©©¨µ¨±··¼³¨ ²©°¤¦µ²³²µ²∏¶µ¨¶¬± ¦²∏±·¨µ³²¬¶¨§¥¼ ¥∏©©¨µ¶¼¶·¨° ²©
¤u °v 2¤u °v º¤¶∏¶¨§·² ¶¨³¤µ¤·¨·«¨ ©µ¨¨©¨µ∏¯¬¦¤¦¬§©µ²° ·«¨ ³µ¨³¤µ¤·¬²± ¤±§°≤ º¤¶∏¶¨§·² §¨ ·¨µ°¬±¨·«¨ ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ²©
·«¨ ©¨µ∏¯¬¦¤¦¬§·²¦¤¯¦∏¯¤·¨·«¨ ±¨·µ¤³° ±¨·¨ ©©¬¦¬¨±¦¼1Ρ εσυλτ: ׫¬¶° ·¨«²§«¤§ª²²§ ¬¯± ¤¨µ¬·¼ ¬± ·«¨ µ¤±ª¨ ²©s1xy ∗ u1{ ª# °pt kρ
s1||| yl1׫¨ ³µ¨¦¬¶¬²± ≥⁄ º¤¶¯¨¶¶·«¤± t1th 1׫¨ ¤§¶²µ³·¬²± ©¨©¨¦·²©°¤¦µ²³²µ²∏¶µ¨¶¬± ²± ¬¯³²¶²°¨º¤¶µ¨§∏¦¨§º«¬¯¨ ¬·«¤§±²
©¨©¨¦·²± ·«¨ ¤¥¶²µ³·¬²± ¤¥¬¯¬·¼ ²©°¤¦µ²³²µ²∏¶µ¨¶¬± ²± ·«¨ ©¨µ∏¯¬¦¤¦¬§¥¼ ·«¨ ∏¶¤ª¨ ²©¥∏©©¨µ1 ׫¨ µ¨¦²√ µ¨¼ ²©°⁄wxs µ¨¶¬± ²± ¥¯¤±®
¬¯³²¶²°¨º¤¶¥¨ ·º¨¨ ± |z1uh ∗ tss1{h o º«¬¯¨ ·«¨ ¤√ µ¨¤ª¨ µ¨¦²√ µ¨¼ ¬¶|{1th 1 Χονχλυσιον:
∏©©¨µ¶¼¶·¨° ¦¤± ±¨«¤±¦¨ ·«¨ ¶¨³¤µ¤·¨
¤¥¬¯¬·¼ ²©°¤¦µ²³²µ²∏¶µ¨¶¬± ²± ¬¯³²¶²°¨¤±§©µ¨¨§µ∏ª1
[ Κεψ ωορδσ] ¬¯³²¶²° ~¨ ±¨·µ¤³° ±¨·¨ ©©¬¦¬¨±¦¼~ °¤¦µ²³²µ²∏¶µ¨¶¬±~ ©¨µ∏¯¬¦¤¦¬§ ≈责任编辑 鲍 雷
≈收稿日期 ussx2su2ty
≈通讯作者 3 陈战国 oר¯} ksu|l {xvs{wwuo ∞2°¤¬¯} ¦«½«ª
¶±±∏1 §¨∏1¦±
°2°≤同时测定乌梅中 {种有机酸含量
陈战国 3 o恩伯提 o张志琪
k陕西师范大学 化学与材料科学学院 o陕西 西安 ztssyul
≈摘要 目的 }建立 °2 °≤同时测定乌梅中 {种有机酸成分 }草酸 !酒石酸 !苹果酸 !抗坏血酸 !乳酸 !醋酸 !
柠檬酸和琥珀酸 ∀方法 }在 ≤t{柱上 o用 kw lu °w 2v °w水溶液 k³ u1{l作流动相 o紫外检测器检测 kutw ±°lo
流动相流速为 s1x °# °¬±pt ∀结果 }分别建立了 {种有机酸成分的回归方程 ∀草酸 !酒石酸 !苹果酸 !抗坏血酸 !
乳酸 !醋酸 !柠檬酸和琥珀酸的含量分别为 t1u|h os1vyh ot1{uh ot1{uh ou1s|h ot1yxh oty1sh ov1s|h ∀结论 }
该方法操作简便 o准确 o快速 o一次测定不超过 ts °¬±~不但可以作为中药乌梅有机酸成分的质量分析 o也可用作为
其他植物中有机酸的定量分析 ∀
≈关键词 乌梅 ~有机酸 ~反相高效液相色谱
≈中图分类号 u{w1t ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussylut2tz{v2sw
乌梅是蔷薇科植物梅 Πρυνυσ µ υµ ε k≥¬¨¥1 l
≥¬¨¥1 ·¨∏¦¦1的成熟或近成熟的果实经熏制或烘制
加工而成 ≈t ∀关于乌梅有效成分的定量测定研究 o
我国历版药典中只有乌梅总酸量的测定 ≈u ∀虽然
乌梅中柠檬酸和苹果酸的同时测定已有报道 ≈v o但
乌梅中草酸 !酒石酸 !苹果酸 !乳酸 !醋酸等 {种酸共
存时多种酸同时测定的方法未见报道 ∀为此 o作者
建立了 °2°≤同时分离和定量测定乌梅中的 {
种有机酸 k草酸 !酒石酸 !苹果酸 !抗坏血酸 !乳酸 !
醋酸 !柠檬酸和琥珀酸 l新方法 o用该方法不但可以
测定各有效成分的含量水平 o同时也可确定各有效
成分含量间的量比关系 o从而为完善中药乌梅的质
量标准提供依据 ∀
1 仪器与试药
• ¤·¨µ¶txux高效液相色谱仪 o• ¤·¨µ °¨³²º µ¨
色谱工作站 ~≥≤±uxs超声波清洗器 k上海电波超声
公司 lo ° ∞纯水器 o p tus型天平 k日
本 lo微孔滤膜 ks1wx Λ°o上海市新亚净化器件厂 l∀
抗坏血酸 k中国药品生物制品检定所 o批号 tsswuy2
ussvsto供含量测定用 lo柠檬酸 k中国药品生物制
品检定所 o批号 tssv|y2ussvsto供含量测定用 lo琥
珀酸 k中国药品生物制品检定所 o批号 tts{|x2
ussvsvo供含量测定用 lo草酸 !酒石酸 !醋酸钠 !乳
酸 k经标定为 us|1vx ª# pt l均为 级 oΛ2苹果酸
购自北京化学试剂公司 ow u °w ov °w均为
级 o乌梅 k福建 l购自西安市药材公司 o由陕西师范
大学生命科学学院刘全宏教授鉴定 ∀
2 方法与结果
211 色谱条件 ∞¦¯¬³¶¨ ²µ¥¤¬ ÷⁄
≤t{柱
kv1s °° ≅ uxs °°o x Λ°lo流动相 s1xh w u
°w水溶液 o用 v °w调到 ³ u1{o使用前用超声波
清洗器脱气 o流速 s1x °# °¬±pt o检测波长 utw
±°∀
#v{zt#
第 vt卷第 ut期
ussy年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vto ¶¶∏¨ ut
²√ °¨¥¨ µo ussy
212 标准储备液的配制 准确称量草酸 !酒石酸 !
苹果酸 !抗坏血酸 !乳酸 !醋酸钠 !柠檬酸和琥珀酸各
一定量 o分别溶于 {个 xs °量瓶中 o加流动相至刻
度 o作为各样品的标准液 ∀再分别从上述量瓶中取
草酸 !酒石酸 !苹果酸 !抗坏血酸 !乳酸 !醋酸 !柠檬酸
和琥珀酸各 x1sos1{ow1xot1sov1sox1sos1{ot1s
°于同一个 ux °量瓶中混匀 o加流动相至刻度
得所需储备液 ∀各组分的质量浓度分别为 s1svv wo
s1tsx zo s1ttx uo s1svv to s1us| vos1s{u wo
s1twu yos1t|z u ª# pt k醋酸钠换算成醋酸 l∀
213 标准曲线和线性范围 在上述色谱条件下 o分
别取 uo wo yo {o tso tuo two uso ws Λ储备液 |
份 o注入色谱柱中 o每个平行进样 v次 o以进样量
kΛªl为横坐标 kΞlo以 v次面积平均值为纵坐标
kΨlo进行线性回归 o回归方程 !线性范围见表 t∀标
准储备液 !乌梅提取液的色谱图见图 to其中各成分
分别用保留时间和对照加入法进行了定性鉴定 ∀
表 t {种有效成分的回归方程
成分 回归方程 ρ 线性范围 rΛª
草酸 Ψ t1uz{ ≅ tsy Ξ n|1wyu ≅ tsv s1||| z s1syz ∗ t1v
酒石酸 Ψ t1|zu ≅ tsx Ξ n|1y{s ≅ tsu s1||| { s1ut ∗ w1u
苹果酸 Ψ |1w|v ≅ tsw Ξ nu1{{s ≅ tsu s1||| u s1uv ∗ w1y
抗坏血酸 Ψ t1vwv ≅ tsy Ξ pu1sws ≅ tsu s1||| y s1syy ∗ s1tv
乳酸 Ψ t1vvz ≅ tsx Ξ py1uss ≅ tst s1||| t s1wu ∗ {1w
醋酸 Ψ v1z|t ≅ tsw Ξ nu1tss ≅ tst s1||| x s1tu ∗ v1v
柠檬酸 Ψ t1uzu ≅ tsx Ξ nv1s{t ≅ tsv s1||| { s1u| ∗ x1z
琥珀酸 Ψ y1uwt ≅ tsw Ξ nt1yws ≅ tsu s1||| u s1v| ∗ z1{
图 t 乌梅提取液 °≤图
1标准储备液 ~
1提取液 ~t1草酸 ~ u1酒石酸 ~ v1苹果酸 ~
w1抗坏血酸 ~ x1乳酸 ~ y1醋酸 ~ z1柠檬酸 ~ {1琥珀酸
214 精密度试验 每次取储备液 ts Λk含量同
212lo重复进样 tu次 o草酸 !酒石酸 !苹果酸 !抗坏血
酸 !乳酸 !醋酸 !柠檬酸和琥珀酸各自峰面积的精密
度测定结果为 ≥⁄ u1wh o u1uh o t1uh o t1sh o
t1{h ot1wh ot1sh ot1sh ∀
215 干扰试验和检出限 在上述色谱条件下 o乌梅
提取液的色谱图的各峰间的分辨清晰 ∀经计算相邻
两峰间的分离度 Ρ均大于 t1yo说明本方法测定乌梅
中的 {种有机酸成分时无干扰 o选择性较强 ∀见图 u∀
以噪音的 v倍峰高计算草酸 !酒石酸 !苹果酸 !
抗坏血酸 !乳酸 !醋酸 !柠檬酸和琥珀酸的检出限分
别为 vtotvoy{ow1yovxsowyowuotys ±ª∀
216 稳定性试验 精称乌梅 s1uxs s ª制备供试
液 o按样品测定 218项下操作制备 ∀每隔 t «进样 t
次 o进样量 ts Λow «内进样 x次 o草酸 !酒石酸 !苹
果酸 !抗坏血酸 !乳酸 !醋酸 !柠檬酸和琥珀酸 x次进
样峰面积的 ≥⁄分别为 s1xh o t1zh o u1th o
u1uh o t1uh o s1wh o s1yh o s1{h ∀说明乌梅提
取液在 w «内基本稳定 ∀
217 重复性试验 取同一样品 o称取 x份 k每份精
称 s1uxs s ªlo按样品测定 218项下操作制备供试
液 ∀准确吸取供试液 ts Λo进样 o测定峰面积 ∀ {
种有机酸供试液各酸含量的 ≥⁄分别为 u1sh o
u1vh ou1uh o u1xh o u1sh o t1xh o t1wh o t1th
kν xlo表明重复性良好 ∀
218 样品测定 乌梅去核 o在 xs ε 下烘干 o粉碎 o
过 ws目筛 ∀再在 xs ε 下烘干至恒重 ∀分别精密称
定乌梅粉末 s1uxs s ªv份 o各加超纯水约 tu °o
回流提取 u «∀放冷过滤 o用超纯水分 v次洗涤滤
渣 o合并滤液 o完全转移至 ux °量瓶中 o加超纯水
至刻度 o得 v份溶液作为供试液 ∀使用前用微孔滤
膜滤过 ∀
按照上述操作处理 v批样品 k产地福建 lo每批
平行做 v份 ∀每份供试液取 ts Λ注入色谱柱中 o
连续进样 v次 o面积取平均值 o代入回归方程 o求得
各酸的质量 o结果见表 u∀
219 回收率试验 另准确称量 {种有机酸各一定
量 o按 212项下操作配制 tss °标准混合储备液 o
各组分的质量浓度为 s1wss so s1tss s o s1xss so
s1xss so s1xxs so s1wss so w1xss so s1{ss s ª#
pt ∀分别精称已知含量的乌梅粉末 s1uxs s ªx
份 o每份各加入 ts1s °上述标准混合储备液 o按样
品测定 218项下操作制备 xs °供试液 ∀准确吸取
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表 u 乌梅中 {种有机酸成分测定 kν vl
测定成分 质量分数 rh {种酸质量比
草酸 t1u| t1ss
酒石酸 s1vy s1u{
苹果酸 t1{u t1wt
抗坏血酸 t1{u t1wt
乳酸 u1s| t1yu
醋酸 t1yx t1u{
柠檬酸 ty1s tu1w
琥珀酸 v1s| u1ws
各供试液 ts Λo进样 o在上述色谱条件下测定 o计算回
收率 o结果草酸 !酒石酸 !苹果酸 !抗坏血酸 !乳酸 !醋酸 !
柠檬酸和琥珀酸的 x次回收率测定结果见表 v∀
表 v 乌梅中 {种有机酸加样回收率 kν xl
成分
样品中
含量 r°ª
加入量
r°ª
测得量
r°ª
回收率
rh
平均值
rh
≥⁄
rh
草酸 v1uux w1sss z1vvs tsv1s ||1x w1s
w1sss z1twu |z1|
w1sss z1sty |x1s
w1sss z1wsu tsw1w
w1sss z1tut |z1w
酒石酸 |1sss ts1sss t{1{tu |{1t ||1z u1v
ts1sss t{1|s| ||1t
ts1sss t{1zut |z1u
ts1sss t|1utv tsu1t
ts1sss t|1us{ tsu1t
苹果酸 w1xxs x1sss |1wxv |{1t ||1v s1{
x1sss |1xsx ||1t
x1sss |1xxx tss1t
x1sss |1xxu tss1s
x1sss |1xs{ ||1u
抗坏血酸 w1xxs x1sss |1xsx ||1t ||1w t1{
x1sss |1xys tss1u
x1sss |1xyx tss1v
x1sss |1wxx |{1t
x1sss |1xux ||1x
乳酸 x1uux x1xss ts1zsx ||1y tss1s s1v
x1xss ts1ztx ||1{
x1xss ts1zvx tss1u
x1xss ts1zws tss1v
x1xss ts1zvs tss1t
醋酸 w1tux w1sss {1uts tsu1t tss1v t1{
w1sss {1sxx |{1v
w1sss {1uus tsu1w
w1sss {1s{x ||1s
w1sss {1ttx ||1{
柠檬酸 ws1sss wx1sss {w1|{x ||1| tss1u s1y
wx1sss {x1txx tss1v
wx1sss {x1ytu tst1v
wx1sss {w1{xx ||1z
wx1sss {w1|{x ||1|
琥珀酸 z1zux {1sss tx1zsx ||1{ ||1| s1t
{1sss tx1ztx ||1|
{1sss tx1zts ||1{
{1sss tx1zt{ ||1|
{1sss tx1zus ||1|
3 讨论
311 ³的影响
在进行色谱分析时发现 o在上述其他色谱条件
不变的情况下 o小范围内改变 ³值 o对分离度影响
很大 ∀以草酸 !酒石酸和苹果酸为例 o³值越小 o三
者之间的分离度越小 o³值越大 o三者之间的分离
度越大 o但 ³值大于 v时 o分离度反而变小了 ∀作
者就 ³对分离度的影响进行了多次比较 o最后确
定最佳条件 ³为 u1{∀
312 抗坏血酸的稳定性考察
抗坏血酸每隔 uw «测定一次 o测量变动性很
大 ozu «内 w次测定 o ≥⁄ vxh ∀造成 ≥⁄变化如
此之大的原因是抗坏血酸在放置过程中不断分解所
致 ∀经实验测算 ow{ «后就有 ut1uh的抗坏血酸被
分解掉 ozu «后就有 xy1uh的抗坏血酸被分解掉 ∀
造成这种分解的原因可能是抗坏血酸是一个较强的
还原剂 o在 ³值较小时 k如 ³为 v ∗ w时 lo很快被
空气氧化 ∀但根据考查结果 o在 w «内抗坏血酸的 x
次测定结果 o ≥⁄仅为 u1uh ∀因此在实际测定样
品时 o乌梅的提取液应及时测定 ∀
313 提取条件的考察
本实验曾对乌梅的提取条件进行了考察 o由于
上述 {种有机酸都是极性较强的成分 o根据相似相
溶原理 o主要考察了极性较强的溶剂 ∀曾以 |xh乙
醇 !|xh乙醇 2水 kuΒtl!|xh乙醇 2水 ktΒtl为溶剂与
水作为溶剂进行对比提取试验 o发现用不同浓度乙
醇作溶剂的提取效率与水的提取效率基本相同 o考
虑节约成本 o本实验用水作溶剂提取较为经济 ∀同
时本实验对提取时间也作了考察 o在回流 t «和 t1x
«时取样上机分析 o发现 {种酸的峰面积没有明显
增加 o为了保证提取率 o回流提取时间定为 u «∀
此方法不但可用于对中药乌梅中多种酸的定量
测定 o具有回收率高 o分辨率好 o灵敏度高 o分析速
度快的特点 k由图 u可知 o一次测定不超过 ts
°¬±lo同时也可用于测定蔬菜 !水果 !酒类等试样中
多种有机酸的同时测定 ∀
≈参考文献
≈t 江苏新医学院 1中药大辞典 ≈ 1上册 1上海 }上海人民出版
社 ot||z} wyw1
≈u 中国药典 ≈≥ 1一部 1 usss}x|1
≈v 沈红梅 o乔传卓 o苏中武 o等 1乌梅中主要有机酸的定量动态
分析 ≈ 1中国药学杂志 ot||xovskvl}tvv1
#x{zt#
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Σιµ υλτανεουσ δετερµ ινατιον οφ ειγητ οργανιχ αχιδσ ιν Φρυχτυσ
Μυµ ε βψ Ρ Π2ΗΠΛΧ
≤∞«¤±2ª∏²o ∞
²2·¬o «¬2´ ¬
(Χολλεγε οφ Χηεµ ιστρψ ανδ ΜατεριαλσΣχιενχε, Σηααξι Νορµ αλΥνιϖερσιτψ, Ξι. αν ztssyu, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ §¨ √¨¯²³ ¤± °≤ ° ·¨«²§©²µ·«¨ ¶¬°∏¯·¤± ²¨∏¶¶¨³¤µ¤·¬²± ¤±§ §¨ ·¨µ°¬±¤·¬²± ²©²¬¤¯¬¦¤¦¬§k l o
·¤µ·¤µ¬¦¤¦¬§k×l o °¤¯¬¦¤¦¬§k l o √¬·¤°¬± ≤ k∂ ≤ l o ¤¯¦·¬¦¤¦¬§kl o ¤¦¨·¬¦¤¦¬§k l ¦¬·µ¬¦¤¦¬§k≤ l ¤±§¶∏¦¦¬±¬¦¤¦¬§
k≥l ¬± ƒµ∏¦·∏¶°∏° 1¨ Μετηοδ : ±¤¯¼·¬¦¤¯ ¦²¯∏°± º¤¶²µ¥¤¬∞¦¯¬³¶¨ ÷⁄
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¶²¯∏·¬²± ¤±§§¨ ·¨¦·¬²± º¤√¨¯ ±¨ª·«º¤¶utw ±°1 ׫¨ ©¯²º µ¤·¨ ²©°²¥¬¯¨ ³«¤¶¨ º¤¶s1x °# °¬±pt 1 Ρ εσυλτ: ׫¨ µ¨ªµ¨¶¶¬²± ¨´ ∏¤·¬²±¶
k³ u1{o ¤§∏¶·¨§º¬·« ³«²¶³«²µ¬¦¤¦¬§l ²© ¬¨ª«·¦²±¶·¬·∏¨ ±·¶«¤√¨ ¥¨ ±¨ ¶¨·¤¥¯¬¶«¨ § 1 ρ s1||| zo s1||| {o s1||| uo s1||| yo
s1||| to s1||| xo s1||| {o s1||| u µ¨¶³¨ ¦·¬√¨¯¼1 ¤¨±º«¬¯¨ o ·«¨ ¦²±·¨±·¤±§³µ²³²µ·¬²± µ¨ ¤¯·¬²±¶«¬³²© ¬¨ª«·²µª¤±¬¦¤¦¬§¶¬± ƒµ∏¦2
·∏¶°∏°¨º«¬¦«¼¬¨ §¯¨ §¬± ƒ∏¬¤± k≤«¬±¤l º µ¨¨ ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨§1 Χονχλυσιον: ׫¬¶° ·¨«²§º¤¶¶¬°³¯ o¨ ¤¦¦∏µ¤¦¼ ¤±§ ∏´¬¦®1 ׫¨ ° ·¨«²§
¦¤± ¥¨ ∏¶¨§©²µ·«¨ ³∏µ³²¶¨ ²©µ²∏·¬±¨¤±¤¯¼¶¬¶¤±§·«¨ ∏´¤¯¬·¼ ¦²±·µ²¯ ²©¤¥²·¤±¬¦kƒµ∏¦·∏¶°∏° l¨ ¦²±·¤¬±¬±ª·«¨ ¶¨ ²µª¤±¬¦¤¦¬§¦²°2
³²± ±¨·¶1
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≈责任编辑 鲍 雷
5中国中药杂志 6近况简介
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志 6总被引频次为 u sst~影响因子为 sqxyv~基金论文比例 sqwu∀
5中国中药杂志 6连续第 z年获得中国科协择优支持基础性 !高科技学术期刊经费资助 ∀
5中国中药杂志 6荣获第三届国家期刊奖百种重点期刊 ∀
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