全 文 :Μετηοδ : ׫¨ ¦²±√ ±¨·¬²±¤¯ ¤¦∏·¨·²¬¬¦¬·¼ ¬¨³¨µ¬° ±¨·¶²©°¬¦¨ o·«¨ ×× ≈v2kw ox2§¬° ·¨«¼¯·«¬¤½²¯2u ¼¯ l2u ox2§¬³«¨ ±¼¯·¨µ¤½²¯¬∏° ¥µ²°¬§¨ o ××
¤±§·«¨ ≥
k¶∏¯©²µ«²§¤°¬±
l º µ¨¨ ∏¶¨§·² °¤®¨ ³µ¨ ¬¯°¬±¤µ¼ ¶¨¯¨ ¦·¬²±·² ±¬±ª¯²±ª¼¬¤±§¬·¶¶¨³¤µ¤·¬²±¦²°³²¶¬·¬²±¶qΡεσυλτ : ׫¨ «¤¯©2§¨¤§2
¼¯ §²¶¨ k⁄xs o·«¨ «¤¯©2¯ ·¨«¬©¨µ²∏¶§²¶¨l ²©·«¨ ¦«¯²µ²©²µ° ¶¨³¤µ¤·¬²± ¦²°³²¶¬·¬²±¬± ±¬±ª¯²ª±¼¬º¤¶xzx qv{ °ª#®ªp tk¬ªl o¤±§²©·«¨ ¤¦¨·¬¦
·¨«¨µ¶¨³¤µ¤·¬²± ¦²°³²¶¬·¬²±¶¬± ±¬±ª¯²±ª¼¬º¤¶tvsv qx| °ª#®ªp tk¬ªl q ƒµ²° ·«¨ ²·«¨µ³¤µ·¶²©¶¨³¤µ¤·¬²± ¦²°³²¶¬·¬²±¶¬± ±¬±ª¯²±ª¼¬o·«¨
⁄xs º µ¨¨ °²µ¨ ·«¤± x ª#®ªp t q • «¨ ± ¤¦¨·¬¦ ·¨«¨µ¶¨³¤µ¤·¬²± ¦²°³²¶¬·¬²± ²© ±¬±ª¯²±ª¼¬º¤¶¤·tss Λª#°pt·«¨ ªµ²º·«¬±«¬¥¬·²µ¼µ¤·¨k l
º¤¶ xs h ·²·«¨ ¯¨ ∏®¤¨ °¬¤¦¨¯¯ 2ys ²©«∏°¤±q • «¨ ± ¦«¯²µ²©²µ° ¶¨³¤µ¤·¬²± ¦²°³²¶¬·¬²± ¤±§·«¨ ¤¦¨·¬¦ ·¨«¨µ¶¨³¤µ¤·¬²± ¦²°³²¶¬·¬²±¶²©
±¬±ª¯²±ª¼¬º¤¶¤·tss °ª#°pt o º¤¶xu h ·²·«¨ ¯¨ ∏®¤¨ °¬¤¦¨¯¯ 2ys o·«¨ ª¤¶·µ¬¦¦¤µ¦¬±²°¤¦¨¯¯
≤2{uv ¤±§·«¨ ¦¨µ√¬¦¤¯ ¦¤µ¦¬±²°¤
¦¨¯¯ ¨¯¤²©«∏°¤±qΧονχλυσιον : ׫¨ ¶¨³¤µ¤·¬²± ¦²°³²¶¬·¬²± ²©·«¨ ¦«¯²µ²©²µ° ¤±§·«¨ ¤¦¨·¬¦ ·¨«¨µ©µ²° ±¬±ª¯²±ª¼¬«¤√¨²¥√¬²∏¶o¤±·¬2·∏°²µ
©¨©¨¦·q
[ Κεψ ωορδσ] ±¬±ª¯²±ª¼¬~¤¦∏·¨·²¬¬¦¬·¼~¤±·¬2·∏°²µιν ϖιτρο ·¨¶·~ ×× ° ·¨«²§~≥
° ·¨«²§
≈责任编辑 方文贤
人参皂苷 ªt对 °≥诱导的
×vux
细胞株脑啡肽酶表达的影响
罗焕敏 o邓 惠 o黄 丰 o肖 飞 o李晓光 o章佩芬 o高 勤 o翁 文
k暨南大学 药学院 神经药理研究室 o广东 广州 oxtsyvul
≈摘要 目的 }探讨人参皂苷 ªt对 °≥诱导的
×vux细胞株脑啡肽酶表达的影响 ∀方法 }应用 ××比色法检
测一定剂量 °≥ 和不同浓度人参皂苷 ªt 对
×vux 细胞存活率的影响 o应用 ×2°≤ 观察细胞中脑啡肽酶
k±¨ ³µ¬¯¼¶¬±o∞°l表达的变化 ∀结果 }一定剂量 °≥作用于
×vux细胞株 o
×vux细胞存活率下降 o细胞内 ∞°的表
达降低 ∀人参皂苷 ªt能提高 °≥诱导的
×vux细胞的存活率 o使细胞内 ∞°的表达增高 ∀结论 }一定剂量的 °≥
能造成细胞损伤和细胞内 ∞°表达降低的模型 o人参皂苷 ªt 对 °≥造成的细胞毒性具有一定的保护作用 o并可
以增高细胞内 ∞°的表达 ∀
≈关键词 人参皂苷 ªt ~脂多糖 ~
×vux人胶质瘤细胞 ~脑啡肽酶
≈中图分类号 u{x qx ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusswls|2s{|s2sw
阿尔茨海默病k⁄l即老年性痴呆症 o是一种病
因不明的原发性脑退行性疾病 o是老年人的常见病
和多发病 o占全部痴呆症的 urv o一些科学家预言 ⁄
可能是本世纪最可怕的老年病 ∀老年性痴呆 ts多年
乃至数 ts年的漫长病程一般从 Β淀粉样肽kΒl从脑
中沉着开始 oΒ是一个生理性多肽 o它是淀粉样前体
蛋白k°°l的水解产物 ∀ Β的合成和分解代谢的平
衡决定它在体内有一个稳定的水平 ∀它代谢平衡的
改变不仅能影响 ⁄的病理过程 o而且能影响该疾病
的发病率 ∀脑啡肽酶k∞°l是一种含锌的金属肽酶 o
它有广泛的组织分布和底物特异性 o∞°是脑内 Β
的主要降解酶 o它可能与 ⁄的发生发展有密切
≈收稿日期 ussw2st2sz
≈通讯作者 3罗焕敏 oר¯ }ksusl{xuusuyv o ƒ¤¬}ksusl{xuustys o
∞2°¤¬¯}·¯«° ±∏q¨§∏q¦±
的关系≈t ∀临床实践证明 o人参是防治 ⁄有确切疗
效的中药 o其活性成分人参皂苷具有改善记忆和神
经保护作用≈u ∀本研究探讨了人参皂苷 ªt 对脂多
糖k°≥l诱导的
×vux细胞株中脑啡肽酶表达的影
响 o为进一步寻找治疗阿尔茨海默病的方法和药物
打下基础 ∀
1 材料与方法
1 q1 材料
1 q1 q1 细胞株 人胶质瘤细胞株
×vux购自中国科
学院上海生物细胞所 ∀
1 q1 q2 药物及试剂 人参皂苷 ªt购自中国药品生
物制品检定所k纯度为 || h l ~°≥购自北京鼎国公
司 ~ °2tyws为 ¬¥¦²公司产品 ~新生牛血清为杭州
四季青生物制品公司产品 ~×× 为 ≥¬ª°¤公司产品 ~
×试剂k¬©¨ 产品l ~ ×2°≤ 引物由上海 ≥¤±ª²±
#s|{#
第 u|卷第 |期
ussw年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ |
≥¨ ³·¨°¥¨µoussw
公司合成 ∀
1 q1 q3 仪器 酶标仪k
¬²µ¤§公司 xxs型l ~°≤ 仪
k
¬²°¨ ·µ¤公司l ∀
1 q2 方法
1 q2 q1
×vux 人胶质瘤细胞培养和药物处理
×vux细胞常规培养于含 ts h新生牛血清 o青 !链霉
素各 tsx #pt的 °2tyws培养基中 ovz ε !饱和湿
度 !x h ≤u 条件下常规培养 o每 v天换液传代培养 o
取对数生长期的细胞进行实验 o实验细胞起始接种
浓度为 x ≅ tsz#pt ∀
人参皂苷 ªt和 °≥先用生理盐水稀释 o过滤除
菌保存 o临用时用适量的培养液稀释到实验所需浓
度 ∀
1 q2 q2
×vux人胶质瘤细胞模型制备 收集对数生
长期细胞 o用 °2tywsk含 ts h新生牛血清l细胞培
养液调整细胞浓度为 x ≅ tsz#pt的细胞悬液 o加入
|y孔圆底细胞培养孔内 o每孔 s qu °o置于 vz ε !饱
和湿度 !x h ≤u条件下常规培养 uw «后 o弃培养上
清液 o用 vz ε 预温的 °2tyws冲洗 t次 ∀实验组
分别加入人参皂苷 ªt至终浓度为 u qx ox ots Λ°²¯#
pt o对照组除未加人参皂苷 ªt 外 o其余条件完全
一致 ∀培养 uw «后 o然后加 °≥ktss °ª#ptl处理 o
并在不同的时间点上收集细胞 o作 ×× 测定和提取
检测 ∞°∀
1 q2 q3 细胞存活率测定k×× ¤¶¶¤¼l ×× 溶解于
°
≥中k浓度为 x ª#ptl o过滤除菌 o并去除不溶性小
颗粒 ∀然后在每孔 uss Λ培养基中加入 ts Λ××
储存液kx ª#ptl o培养板在 vz ε 培养箱中培养 w «o
加入和培养基等量的 ⁄≥至每个培养孔中 o彻底混
匀 o室温中放置 t «o待蓝黑色的颗粒完全溶解后 o在
酶标仪上 xzs ±°波长测 Αxzs值 o以 Αxzs间接反映存活
细胞数量 ∀据此可推测各浓度人参皂苷 ªt 对
×vux细胞的存活率的影响 ∀
细胞存活率k h l t p k Α无药组 p Α用药组lr Α无药组 ≅ tss h
1 q2 q4 提取和鉴定 实验组和对照组
×vux
细胞分别用 ×提取 o依照试剂盒操作后得
到白色沉淀 o加入 s qst h ⁄∞°≤ xs Λo于 xy ε 水浴 x
°¬±o至 完全溶解 ∀紫外分光光度法测定
的 Αuys和 Αu{s比值及含量 o用 ⁄∞°≤ 水将各组总
调整至同一浓度 ∀
1 q2 q5 ×2°≤ 半定量检测细胞内 ∞°表达 将调
整至同一浓度的各组总 分别逆转录合成 ¦⁄ o
以 Β2¤¦·¬±为内对照进行半定量 ×2°≤ o基因引物序
列见表 t ∀首次循环先在 |w ε 变性 v °¬±o然后变性 !
退火 !延伸分别为 |w ε t °¬±oys ε t °¬±ozu ε t
°¬±o共 vx个循环 o最后 zu ε 延伸 ts °¬±∀ °≤ 产物
用含 s qx °ª#pt溴化乙锭k∞
l的 u h琼脂糖凝胶电
泳 o凝胶成像分析仪分析结果 ∀
表 t °≤ 引物序列和 °≤ 产物长度
基因 引物序列 °≤ 产物长度r¥³
Β2¤¦·¬± ƒx. 2≤≤×≤≤≤××≤××2v. w|t
x. 2××××≤≤××≤≤≤2v.
∞° ƒx. 2≤≤×≤×≤×≤≤≤≤×2v. uzy
x. 2≤≤×≤×≤××≤××××≤≤×≤≤×2v.
2 结果
2 q1 对
×vux细胞存活率的影响
×vux细胞用 °≥ktss °ª#ptl处理 uw «o然后
作 ××测定 o把 Α值换算成细胞存活率k h l ∀结果
发现 o°≥有促进细胞死亡的作用 o而且随着作用剂
量的增大和作用时间的延长对细胞的毒性作用增
强 ∀人参皂苷 ªt对 °≥引起的细胞毒性有明显的
保护作用k表 ul ∀
表 u ªt对
×vux细胞存活率的影响
组别 剂量rΛ°²¯#pt 细胞存活率r h
≤²±·µ²¯ s tss
°≥ tss w| qx ? v qttl
ªt u qx yv qz ? x qytl
ªt x qs yy q{ ? y qut oul
ªt ts qs zv qw ? z qxt oul
注 }与对照组比 tlΠ s qst ~与 °≥组比 ulΠ s qstk表 v同l
2 q2 °≥及人参皂苷 ªt对 ∞°表达的影响
∞°是脑内 Β的主要降解酶 o它可能与 ⁄的
发生发展有密切的关系 ∀实验结果发现 o°≥对 ∞°
° 转录有明显的抑制作用 o而人参皂苷 ªt对其
有明显的增强作用k表 v o图 tl ∀
表 v ªt对 ∞°表达的影响
组别 剂量rΛ°²¯#pt Α·¤µª¨·ª¨ ±¨ r ΑΒ2¤¦·¬±
≤²±·µ²¯ s t qtv ? s qsw
°≥ tss s qu| ? s qsttl
ªt u qx s qv{ ? s qsut oul
ªt x qs s qx| ? s qsut oul
ªt ts qs s q{z ? s qsyt oul
3 讨论
⁄的许多促发因素如遗传 !年龄 !环境等均可
引起脑组织老年斑与神经原纤维缠结形成 o这些病
理病变可激发炎症反应 o如形成老年斑的 Β不溶性
#t|{#
第 u|卷第 |期
ussw年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ |
≥¨ ³·¨°¥¨µoussw
图 t ªt对 ∞°表达的影响
t q空白对照组 ~u q°≥ tss Λª#°pt ~v q°≥ tss Λª#°pt n ªt
u qx Λ°²¯#pt ~w q°≥ tss Λª#°pt n ªt x qs Λ°²¯#pt ~
x q°≥ tss Λª# °¯ p t n ªt ts qs Λ°²¯#pt ~
大分子极易被吞噬细胞所吞噬 o因而作为慢性刺激
物质 o刺激炎症反应不断加强 o造成 ⁄的慢性炎症
状况≈v o进一步导致神经元死亡 o使痴呆的症状不断
加重 ∀因此 ⁄是由 Β在脑内的沉积 o激活周围小
胶质细胞产生细胞因子和神经系统免疫应答等因素
综合作用的结果 ∀
°≥是革兰阴性菌细胞壁的一个毒性成分 o整体
实验中往往用于刺激内生性的 2t≈w ox 和 °°的增
加≈y ∀而 °°是 Β的前体蛋白 o与 ⁄的发生 !发展
密切相关并起重要作用 ∀2t等多种细胞因子和某
些外源性刺激均可影响 °°的表达 ∀ °°的表达增
加使得 Β产生增多 ∀并且 o¦¨ µ¨等≈z 的研究表明
⁄患者脑内 ∞°表达明显降低 oΒ降解受阻 o过多
Β堆积导致局部高浓度易使 Β沉积下来形成老年
斑 ∀作者将 °≥作为一个慢性致炎物质作用于人胶
质瘤细胞株
×vux o模拟 ⁄发病的炎性过程 o结果发
现 °≥ 同时也降低
×vux 细胞株的存活率并且对
∞°的表达有抑制作用 o遂用 °≥来造模 ∀
现代研究结果证实 o人参具有多种药理效应 o能
调节中枢神经系统兴奋与抑制平衡 o对记忆保留和
再现具有显著的易化作用 o已发现其有效成分人参
皂苷具有中枢拟胆碱活性和拟儿茶酚胺活性 o能增
加乙酰胆碱的合成和释放 o并能显著提高动物脑干 !
纹状体 !海马等部位 x2× 含量≈{ ∀人参皂苷还能提
高培养皮层神经细胞的存活 o有效减轻自由基对细
胞的损伤≈| ∀本实验结果发现 o人参皂苷 ªt在提高
细胞存活率的同时 o对 ∞° ° 转录有明显的增
强作用 o使 ∞°表达水平提高 o该物质有可能成为
∞°的激活剂用于 ⁄治疗 o其更详尽的作用机制有
待进一步研究 ∀
≈参考文献
≈t ¨ º¨¯¯ o≥∏¨ o≥¦²·≥ o ετ αλ. ׫¬²µ³«¤±2¬±§∏¦¨§±¨ ³µ¬¯¼¶¬±¬±2
«¬¥¬·¬²±µ¤¬¶¨¶¤°¼¯²¬§¥¨·¤¯¨ √¨¯¶¬±µ¤¥¥¬·¦²µ·¨¬¤±§¦¨µ¨¥µ²¶³¬±¤¯ ©¯∏2
¬§q Νευροσχι Λεττ oussv ovxskvl }tz{ q
≈u 沈思钰 o干振华 o傅晓东 o等 q人参皂苷对神经系统作用的研究
现状及分析 q安徽中医学院学报 oussw ouvktl }yu q
≈v °¤µ¬¶⁄o ∏°³«µ¨¼ o ±∏¤§µ²¶ o ετ αλ. ∂¤¶²¤¦·¬√¨ ©¨©¨¦·¶²© ¥¨·¤
¬±¬¶²¯¤·¨§ «∏°¤± ¦¨µ¨¥µ²√ ¶¨¶¨ ¶¯¤±§¬± ¤·µ¤±¶ª¨ ±¬¦ °²∏¶¨ °²§¨¯ ²©
¯ ½«¨¬°¨ µ. ¶§¬¶¨¤¶¨ }µ²¯¨²©¬±©¯¤°°¤·¬²±qΝευρολ Ρεσ , ussv ouxkyl }
ywu q
≈w פµ§¬© ∞o ²¶¶ o ²∏¤¥«¬¤ q ¬±ª¬√¤¯ ¤±§§¨µ°¤¯ ©¬¥µ²¥¯¤¶·¶³µ²2
§∏¦¨ ¬±·¨µ¯¨ ∏®¬±2t¥¨·¤¦²±√¨ µ·¬±ª ±¨½¼°¨¤±§¬±·¨µ¯¨ ∏®¬±2t¥¨·¤¥∏·±²·
¬±·¨µ¯¨ ∏®¬±2t{ √¨ ±¨ ¤©·¨µ¶·¬°∏¯¤·¬²± º¬·« ¬¯³²³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ q ϑ Χελλ
Πηψσιολ, ussw ot|{ktl }tux q
≈x ²©©°¤± ≥ o°²¯¤¦® ƒ ° o¤∏¨µ⁄ o ετ αλ. ¤¨¶¯ ¶¨√¬µ∏¶¬±©¨¦·¬²± ²©
µ«¨¶∏¶°¤¦¤´ ∏¨¶¤©©¨¦·¶±¨ ∏·µ²³«¬¯ ¬¨³µ¨¶¶¬²±²©2tu ¤±§2ts q ςιραλ
Ιµ µυνολ, ussv otykvl }vy| q
≈y ≥«¨ ±ª o
²µ¤≥ o ÷∏ o ετ αλ. ¬³²³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨2¬±§∏¦¨§2±¨ ∏2
µ²¬±©¯¤°°¤·¬²±¬±¦µ¨¤¶¨¶¬±·µ¤¦¨¯¯∏¯¤µ¤¦¦∏°∏¯¤·¬²± ²©¤°¼¯²¬§³µ¨¦∏µ¶²µ
³µ²·¨¬± ¤±§¤°¼¯²¬§¥¨·¤³¨ ³·¬§¨ ¬± °°¶º¨·µ¤±¶ª¨ ±¬¦°¬¦¨ qΝευροβιολ
∆ισ ,ussv otwktl }tvv q
≈z ≠¤¶²¬°¤ o ¦¨ µ¨∞ o ¦¨ µ¨° q ¨¯¤·¬²±¶«¬³ ¥¨·º¨¨ ± ¥¨·¤
¤°¼¯²¬§³¨ ³·¬§¨ ª¨ ±¨ µ¤·¬±ª °²¯ ¦¨∏¯ ¶¨¤±§ ±¨ ³µ¬¯¼¶¬± ¬± ¯ ½«¨¬° µ¨§¬¶2
¤¨¶¨ ¤±§±²µ°¤¯ ¥µ¤¬±q Βραιν Ρεσ , usst ~|t|ktl }ttx q
≈{ 朱建民 q人参皂苷促智作用研究进展 q江西中医学院学报 ot||x o
k增刊l }wy q
≈| ¬° ≠ ≤ o¬° ≥ o ¤µ®¨ ²¯±¬¶o ετ αλ. ¬±¶¨±²¶¬§¨¶¥t ¤±§ªv
³µ²·¨¦·¦∏¯·∏µ¨§µ¤·¦²µ·¬¦¤¯ ¦¨¯¯¶©µ²° ª¯∏·¤2°¤·¨¬±§∏¦¨§±¨ ∏µ²§¨ª¨ ±¨ µ2
¤·¬²±q ϑ Νευροσχι Ρεσ t||{ oxv }wuy q
Εφφεχτ οφ γινσενοσιδε Ργt ον τηεινφλυενχε οφ
νεπριλψσιν εξπρεσσιον ινδυχεδ βψ ΛΠΣ ιν ΒΤvux χελλλινε
∏¤±2°¬±o⁄∞ ∏¬o ƒ ±¨ªo ÷ ƒ ¬¨o ÷¬¤²2ª∏¤±ªo °¨ ¬2©¨ ± o ±¬±o • ∞ • ±¨
( Νευροπηαρµαχολογιχαλ Ρεσεαρχη Λαβορατορψ, Χολλεγε οφ Πηαρµαχψ, ϑιναν Υνιϖερσιτψ, Γυανγζηου xtsyvu , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨ ©¨©¨¦·²©ª¬±¶¨±²¶¬§¨ ªt ²±·«¨ ¬±©¯∏¨ ±¦¨ ²© ±¨ ³µ¬¯¼¶¬± ¬¨³µ¨¶¶¬²±¬±§∏¦¨§¥¼ °≥¬±
×vux
¦¨¯¯ ¬¯±¨ q Μετηοδ : ×× º¤¶∏¶¨§·² ° ¤¨¶∏µ¨ ·«¨ ¯¨ √¨¯¶²©·«¨ ¶∏µ√¬√¤¯µ¤·¨ ²©
×vux ¦∏¯·∏µ¨§º¬·«ª¬±¶¨±²¶¬§¨ ªt ¤±§°≥¬± §¬©©¨µ¨±·¦²±¦¨±2
·µ¤·¬²±¶q׫¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©∞° º¤¶° ¤¨¶∏µ¨§¥¼ ×2°≤ q Ρεσυλτ : ׫¨ ¶∏µ√¬√¤¯µ¤·¨ ²©
×vux º¤¶²¥√¬²∏¶¯¼¬±«¬¥¬·¨§¥¼ °≥ o¤±§·«¨ ¬¨2
³µ¨¶¶¬²± ²©∞° º¤¶§¨¦µ¨¤¶¨§q׫¨ ¶∏µ√¬√¤¯µ¤·¨ ²©
×vux º¤¶²¥√¬²∏¶¯¼µ¤¬¶¨§¥¼ ª¬±¶¨±²¶¬§¨ ªt o¤±§·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©∞° º¤¶¬±¦µ¨¤¶¨§q
#u|{#
第 u|卷第 |期
ussw年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ |
≥¨ ³·¨°¥¨µoussw
Χονχλυσιον : °≥ ¦¤± ¦¤∏¶¨ ¦¨¯¯ §¤°¤ª¨ §o¤±§§¨¦µ¨¤¶¨ ·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²© ∞° q ¬±¶¨±²¶¬§¨ ªt ¦¤± ¬¨¨µ·±¨ ∏µ²³µ²·¨¦·¬√¨³µ²³¨µ·¬¨¶º«¬¦«
³µ²·¨¦·¶
×vux ¦¨¯¯ ¬¯±¨ ©µ²°·«¨ ¦¨¯¯ ·²¬¬¦¬·¼ ²©°≥ q
[ Κεψ ωορδσ] ª¬±¶¨±²¶¬§¨ ªt ~°≥ ~
×vux ª¯¬²°¤¦¨¯¯ ~±¨ ³µ¬¯¼¶¬±
≈责任编辑 方文贤
四物汤对放射线致血虚证
小鼠骨髓蛋白质表达的影响
郭 平t ou o马增春t o李鹰飞t o梁乾德t o王继峰u o王升启t 3
kt q军事医学科学院 放射医学研究所 o北京 tss{xs ~u q北京中医药大学 o北京 tsssu|l
≈摘要 目的 }观察四物汤对血虚证小鼠骨髓蛋白质表达的影响 o为阐明四物汤补血作用的分子机理提供理
论和实验依据 ∀方法 }采用 v qx¼ ys≤²Χ射线全身 t次性照射 o制备小鼠血虚证模型 ∀利用双向电泳 !图像分析 !胶内
酶切 !质谱鉴定等蛋白质组学技术 o结合生物信息学 o分离 !分析 !鉴定蛋白质 ∀结果 }四物汤可以逆转放射线致血
虚证小鼠骨髓 ts个上调和 x个下调的蛋白质 ∀其中 {个蛋白质可能分别是淋巴细胞特异性蛋白质2t !蛋白酶体
uy≥ ×°酶亚组分 w !造血细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶 !2µ¤¶ !v2磷酸甘油醛脱氢酶 !生长因子受体结合蛋白2tw及
ª¤¯¶tu ∀结论 }四物汤能调节骨髓蛋白质表达 o并可能由此促进造血细胞的生长和分化 o发挥补血作用 ∀
≈关键词 四物汤 ~辐射 ~血虚证 ~功能蛋白质组学 ~骨髓
≈中图分类号 u{x qx ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusswls|2s{|v2sw
血虚证是血液亏虚 o脏腑百脉失调 o表现全身虚
弱的证候 ∀四物汤是传统的补血方剂 o能促进骨髓
细胞增殖 o提高外周血象≈t ∀近年来对四物汤补血
机理已进行了较为广泛的研究≈u o证实四物汤能明
显促进血虚证小鼠骨髓各类造血祖细胞的增殖 o显
著提高骨髓 ≤⁄vw n细胞比例 ∀但目前尚无深入 !全
面研究四物汤对造血组织蛋白质作用的报道 ∀作者
利用蛋白质组学技术 o研究了四物汤对放射线致血
虚证小鼠骨髓组织蛋白质的影响 o以期从分子水平
较深入地阐明四物汤的补血机理 o并确定其作用的
分子靶标 ∀
1 材料
1 q1 药物
四物汤的四味药熟地 !当归 !白芍和川芎均购自
北京同仁堂中药厂 o由本所九室马白平教授鉴定 o按
≈收稿日期 ussw2sw2tx
≈基金项目 国家自然科学基金项目kvsuztytz ovsszs|tvl ~军
队/十五0重点项目kstst|l ~北京市 / 二四八0重大创新工程项目
kstsutsuusttvl
≈通讯作者 3 王升启 o ר¯ } kstsl yy|vuutt o ƒ¤¬} k stsl
yy|vuutt o∞2°¤¬¯}≥ º´¤±ª ±¬¦q¥°¬q¤¦q¦±
5太平惠民和剂局方6规定的剂量比ktxΒtsΒtsΒyl称
取 ∀按人用药剂量计算≈v 小鼠用药剂量为 ts ª#
®ªpt#§pt ∀经水煎 !过滤 !浓缩 !配制成 tss h 药液
k即每 t °药液含生药 t ªl ∀w ε 保存备用 ∀
1 q2 主要试剂与仪器
丙烯酰胺 !Ν , Νχ2甲叉双丙烯酰胺 !×µ¬¶2¥¤¶¨ !过
硫酸铵 !四甲基乙二胺 !十二烷基磺酸钠 k≥⁄≥l !尿
素 !丙基磺酸盐 !°«¤µ°¤¯¼·¨ v ∗ ts !固定干胶条
k°l !°缓冲液 !低分子量蛋白质 ¤µ®¨µ!甘油 !琼
脂糖 !溴酚蓝等均购自 °¨ µ¶«¤°
¬²¶¦¬¨±¦¨¶公司 ∀
甘氨酸 !考马斯亮蓝 2uxs和 2uxs购自 ∞≥≤
公司 ∀三氟乙酸 !碘乙酰胺购自 ¦µ²¶µª¤±¬¦¶公司 ∀
乙腈购自 ƒ¬¶«¨µ公司 ∀ ¤¶¨ 购自 ≥¬ª°¤公司 o清
蛋白标准购自 °¬¨µ¦¨ 公司 ∀二硫苏糖醇 k⁄××l购自
°µ¨¶¦²公司 o蛋白质酶抑制剂 !胰酶购自
²¨ «µ¬±ª¨µ
¤±±«¨¬°公司 ∀其他试剂均为国产分析纯 ∀
蛋白质双向电泳ku⁄∞l及电泳图谱图像处理采
用 °¨ µ¶«¤°
¬²¶¦¬¨±¦¨¶公司蛋白质组学研究配套仪
器 }∞·¤±×°³«²µ等电聚焦仪 o∞·¤±× ⁄׶¬¬二向
垂直电泳仪 o∏¯·¬× °¨³ ¶ 温控循环水浴 o°µ²¦¨¶¶²µ
°¯∏¶
¤¶¨ ±¬·全自动染色仪 o°¤ª¨ ≥¦¤±±¨ µ扫描仪 o
#v|{#
第 u|卷第 |期
ussw年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ |
≥¨ ³·¨°¥¨µoussw