免费文献传递   相关文献

Effect of ginsenoside Rg1 on the influence of neprilysin exp ression induced by LPS in BT325 cell line

人参皂苷Rg1对LPS诱导的BT325细胞株脑啡肽酶表达的影响



全 文 :Μετηοδ : ׫¨ ¦²±√ ±¨·¬²±¤¯ ¤¦∏·¨·²¬¬¦¬·¼ ¬¨³¨µ¬° ±¨·¶²©°¬¦¨ o·«¨ ×× ≈v2kw ox2§¬° ·¨«¼¯·«¬¤½²¯2u ¼¯ l2u ox2§¬³«¨ ±¼¯·¨µ¤½²¯¬∏° ¥µ²°¬§¨ o ×× 
¤±§·«¨ ≥• … k¶∏¯©²µ«²§¤°¬± …l º µ¨¨ ∏¶¨§·² °¤®¨ ³µ¨ ¬¯°¬±¤µ¼ ¶¨¯¨ ¦·¬²±·² ±¬±ª¯²±ª¼¬¤±§¬·¶¶¨³¤µ¤·¬²±¦²°³²¶¬·¬²±¶qΡεσυλτ : ׫¨ «¤¯©2§¨¤§2
¼¯ §²¶¨ k⁄xs o·«¨ «¤¯©2¯ ·¨«¬©¨µ²∏¶§²¶¨l ²©·«¨ ¦«¯²µ²©²µ° ¶¨³¤µ¤·¬²± ¦²°³²¶¬·¬²±¬± ±¬±ª¯²ª±¼¬º¤¶xzx qv{ °ª#®ªp tk¬ªl o¤±§²©·«¨ ¤¦¨·¬¦
·¨«¨µ¶¨³¤µ¤·¬²± ¦²°³²¶¬·¬²±¶¬± ±¬±ª¯²±ª¼¬º¤¶tvsv qx| °ª#®ªp tk¬ªl q ƒµ²° ·«¨ ²·«¨µ³¤µ·¶²©¶¨³¤µ¤·¬²± ¦²°³²¶¬·¬²±¶¬± ±¬±ª¯²±ª¼¬o·«¨
⁄xs º µ¨¨ °²µ¨ ·«¤± x ª#®ªp t q • «¨ ± ¤¦¨·¬¦ ·¨«¨µ¶¨³¤µ¤·¬²± ¦²°³²¶¬·¬²± ²© ±¬±ª¯²±ª¼¬º¤¶¤·tss Λª#°pt·«¨ ªµ²º·«¬±«¬¥¬·²µ¼µ¤·¨kŠŒ• l
º¤¶  xs h ·²·«¨ ¯¨ ∏®¤¨ °¬¤¦¨¯¯ ‹2ys ²©«∏°¤±q • «¨ ± ¦«¯²µ²©²µ° ¶¨³¤µ¤·¬²± ¦²°³²¶¬·¬²± ¤±§·«¨ ¤¦¨·¬¦ ·¨«¨µ¶¨³¤µ¤·¬²± ¦²°³²¶¬·¬²±¶²©
±¬±ª¯²±ª¼¬º¤¶¤·tss °ª#°pt oŠŒ• º¤¶xu h ·²·«¨ ¯¨ ∏®¤¨ °¬¤¦¨¯¯ ‹2ys o·«¨ ª¤¶·µ¬¦¦¤µ¦¬±²°¤¦¨¯¯ …Š≤2{uv ¤±§·«¨ ¦¨µ√¬¦¤¯ ¦¤µ¦¬±²°¤
¦¨¯¯ ‹¨¯¤²©«∏°¤±qΧονχλυσιον : ׫¨ ¶¨³¤µ¤·¬²± ¦²°³²¶¬·¬²± ²©·«¨ ¦«¯²µ²©²µ° ¤±§·«¨ ¤¦¨·¬¦ ·¨«¨µ©µ²° ±¬±ª¯²±ª¼¬«¤√¨²¥√¬²∏¶o¤±·¬2·∏°²µ
©¨©¨¦·q
[ Κεψ ωορδσ] ±¬±ª¯²±ª¼¬~¤¦∏·¨·²¬¬¦¬·¼~¤±·¬2·∏°²µιν ϖιτρο ·¨¶·~ ×× ° ·¨«²§~≥• … ° ·¨«²§
≈责任编辑 方文贤 
人参皂苷 •ªt对 °≥诱导的 …×vux
细胞株脑啡肽酶表达的影响
罗焕敏 o邓 惠 o黄 丰 o肖 飞 o李晓光 o章佩芬 o高 勤 o翁 文
k暨南大学 药学院 神经药理研究室 o广东 广州 oxtsyvul
≈摘要  目的 }探讨人参皂苷 •ªt对 °≥诱导的 …×vux细胞株脑啡肽酶表达的影响 ∀方法 }应用 ××比色法检
测一定剂量 °≥ 和不同浓度人参皂苷 •ªt 对 …×vux 细胞存活率的影响 o应用 • ×2°≤• 观察细胞中脑啡肽酶
k±¨ ³µ¬¯¼¶¬±o‘∞°l表达的变化 ∀结果 }一定剂量 °≥作用于 …×vux细胞株 o…×vux细胞存活率下降 o细胞内 ‘∞°的表
达降低 ∀人参皂苷 •ªt能提高 °≥诱导的 …×vux细胞的存活率 o使细胞内 ‘∞°的表达增高 ∀结论 }一定剂量的 °≥
能造成细胞损伤和细胞内 ‘∞°表达降低的模型 o人参皂苷 •ªt 对 °≥造成的细胞毒性具有一定的保护作用 o并可
以增高细胞内 ‘∞°的表达 ∀
≈关键词  人参皂苷 •ªt ~脂多糖 ~…×vux人胶质瘤细胞 ~脑啡肽酶
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswls|2s{|s2sw
阿尔茨海默病k„⁄l即老年性痴呆症 o是一种病
因不明的原发性脑退行性疾病 o是老年人的常见病
和多发病 o占全部痴呆症的 urv o一些科学家预言 „⁄
可能是本世纪最可怕的老年病 ∀老年性痴呆 ts多年
乃至数 ts年的漫长病程一般从 Β淀粉样肽k„Βl从脑
中沉着开始 o„Β是一个生理性多肽 o它是淀粉样前体
蛋白k„°°l的水解产物 ∀ „Β的合成和分解代谢的平
衡决定它在体内有一个稳定的水平 ∀它代谢平衡的
改变不仅能影响 „⁄的病理过程 o而且能影响该疾病
的发病率 ∀脑啡肽酶k‘∞°l是一种含锌的金属肽酶 o
它有广泛的组织分布和底物特异性 o‘∞°是脑内 „Β
的主要降解酶 o它可能与 „⁄的发生发展有密切
≈收稿日期  ussw2st2sz
≈通讯作者  3罗焕敏 oר¯ }ksusl{xuusuyv o ƒ¤¬}ksusl{xuustys o
∞2°¤¬¯}·¯«° ƒ­±∏q¨§∏q¦±
的关系≈t  ∀临床实践证明 o人参是防治 „⁄有确切疗
效的中药 o其活性成分人参皂苷具有改善记忆和神
经保护作用≈u  ∀本研究探讨了人参皂苷 •ªt 对脂多
糖k°≥l诱导的 …×vux细胞株中脑啡肽酶表达的影
响 o为进一步寻找治疗阿尔茨海默病的方法和药物
打下基础 ∀
1 材料与方法
1 q1 材料
1 q1 q1 细胞株 人胶质瘤细胞株 …×vux购自中国科
学院上海生物细胞所 ∀
1 q1 q2 药物及试剂 人参皂苷 •ªt购自中国药品生
物制品检定所k纯度为 || h l ~°≥购自北京鼎国公
司 ~• °Œ2tyws为 Š¬¥¦²公司产品 ~新生牛血清为杭州
四季青生物制品公司产品 ~×× 为 ≥¬ª°¤公司产品 ~
וŒ’试剂k¬©¨ 产品l ~• ×2°≤• 引物由上海 ≥¤±ª²±
#s|{#
第 u|卷第 |期
ussw年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ |
≥¨ ³·¨°¥¨µoussw
公司合成 ∀
1 q1 q3 仪器 酶标仪k…¬²µ¤§公司 xxs型l ~°≤• 仪
k…¬²°¨ ·µ¤公司l ∀
1 q2 方法
1 q2 q1 …×vux 人胶质瘤细胞培养和药物处理
…×vux细胞常规培养于含 ts h新生牛血清 o青 !链霉
素各 tsx ˜#pt的 • °Œ2tyws培养基中 ovz ε !饱和湿
度 !x h ≤’u 条件下常规培养 o每 v天换液传代培养 o
取对数生长期的细胞进行实验 o实验细胞起始接种
浓度为 x ≅ tsz#pt ∀
人参皂苷 •ªt和 °≥先用生理盐水稀释 o过滤除
菌保存 o临用时用适量的培养液稀释到实验所需浓
度 ∀
1 q2 q2 …×vux人胶质瘤细胞模型制备 收集对数生
长期细胞 o用 • °Œ2tywsk含 ts h新生牛血清l细胞培
养液调整细胞浓度为 x ≅ tsz#pt的细胞悬液 o加入
|y孔圆底细胞培养孔内 o每孔 s qu °o置于 vz ε !饱
和湿度 !x h ≤’u条件下常规培养 uw «后 o弃培养上
清液 o用 vz ε 预温的 • °Œ2tyws冲洗 t次 ∀实验组
分别加入人参皂苷 •ªt至终浓度为 u qx ox ots Λ°²¯#
pt o对照组除未加人参皂苷 •ªt 外 o其余条件完全
一致 ∀培养 uw «后 o然后加 °≥ktss °ª#ptl处理 o
并在不同的时间点上收集细胞 o作 ×× 测定和提取
• ‘„检测 ‘∞°∀
1 q2 q3 细胞存活率测定k×× ¤¶¶¤¼l ×× 溶解于
°…≥中k浓度为 x ª#ptl o过滤除菌 o并去除不溶性小
颗粒 ∀然后在每孔 uss ˏ培养基中加入 ts ˏ××
储存液kx ª#ptl o培养板在 vz ε 培养箱中培养 w «o
加入和培养基等量的 ⁄≥’至每个培养孔中 o彻底混
匀 o室温中放置 t «o待蓝黑色的颗粒完全溶解后 o在
酶标仪上 xzs ±°波长测 Αxzs值 o以 Αxzs间接反映存活
细胞数量 ∀据此可推测各浓度人参皂苷 •ªt 对
…×vux细胞的存活率的影响 ∀
细胞存活率k h l € t p k Α无药组 p Α用药组lr Α无药组 ≅ tss h
1 q2 q4 • ‘„ 提取和鉴定 实验组和对照组 …×vux
细胞分别用 וŒ’提取 • ‘„ o依照试剂盒操作后得
到白色沉淀 o加入 s qst h ⁄∞°≤ xs ˏo于 xy ε 水浴 x
°¬±o至 • ‘„ 完全溶解 ∀紫外分光光度法测定 • ‘„
的 Αuys和 Αu{s比值及含量 o用 ⁄∞°≤ 水将各组总 • ‘„
调整至同一浓度 ∀
1 q2 q5 • ×2°≤• 半定量检测细胞内 ‘∞°表达 将调
整至同一浓度的各组总 • ‘„分别逆转录合成 ¦⁄‘„ o
以 Β2¤¦·¬±为内对照进行半定量 • ×2°≤• o基因引物序
列见表 t ∀首次循环先在 |w ε 变性 v °¬±o然后变性 !
退火 !延伸分别为 |w ε t °¬±oys ε t °¬±ozu ε t
°¬±o共 vx个循环 o最后 zu ε 延伸 ts °¬±∀ °≤• 产物
用含 s qx °ª#pt溴化乙锭k∞…l的 u h琼脂糖凝胶电
泳 o凝胶成像分析仪分析结果 ∀
表 t °≤• 引物序列和 °≤• 产物长度
基因 引物序列 °≤• 产物长度r¥³
Β2¤¦·¬± ƒx. 2≤„≤Š×≤„≤„≤××≤„׊„׊Š2v. w|t
• x. 2„׊××׊„Š„≤≤××≤„„≤„≤2v.
‘∞° ƒx. 2„≤„Š≤Š×≤׊≤×≤≤„≤≤×2v. uzy
• x. 2≤≤×≤„×≤××≤×׊××≤≤×≤≤×2v.
2 结果
2 q1 对 …×vux细胞存活率的影响
…×vux细胞用 °≥ktss °ª#ptl处理 uw «o然后
作 ××测定 o把 Α值换算成细胞存活率k h l ∀结果
发现 o°≥有促进细胞死亡的作用 o而且随着作用剂
量的增大和作用时间的延长对细胞的毒性作用增
强 ∀人参皂苷 •ªt对 °≥引起的细胞毒性有明显的
保护作用k表 ul ∀
表 u •ªt对 …×vux细胞存活率的影响
组别 剂量rΛ°²¯#pt 细胞存活率r h
≤²±·µ²¯ s tss
°≥ tss w| qx ? v qttl
•ªt u qx yv qz ? x qytl
•ªt x qs yy q{ ? y qut oul
•ªt ts qs zv qw ? z qxt oul
注 }与对照组比 tlΠ s qst ~与 °≥组比 ulΠ s qstk表 v同l
2 q2 °≥及人参皂苷 •ªt对 ‘∞°表达的影响
‘∞°是脑内 „Β的主要降解酶 o它可能与 „⁄的
发生发展有密切的关系 ∀实验结果发现 o°≥对 ‘∞°
°• ‘„转录有明显的抑制作用 o而人参皂苷 •ªt对其
有明显的增强作用k表 v o图 tl ∀
表 v •ªt对 ‘∞°表达的影响
组别 剂量rΛ°²¯#pt Α·¤µª¨·ª¨ ±¨ r ΑΒ2¤¦·¬±
≤²±·µ²¯ s t qtv ? s qsw
°≥ tss s qu| ? s qsttl
•ªt u qx s qv{ ? s qsut oul
•ªt x qs s qx| ? s qsut oul
•ªt ts qs s q{z ? s qsyt oul
3 讨论
„⁄的许多促发因素如遗传 !年龄 !环境等均可
引起脑组织老年斑与神经原纤维缠结形成 o这些病
理病变可激发炎症反应 o如形成老年斑的 „Β不溶性
#t|{#
第 u|卷第 |期
ussw年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ |
≥¨ ³·¨°¥¨µoussw
图 t •ªt对 ‘∞°表达的影响
t q空白对照组 ~u q°≥ tss Λª#°pt ~v q°≥ tss Λª#°pt n •ªt
u qx Λ°²¯#pt ~w q°≥ tss Λª#°pt n •ªt x qs Λ°²¯#pt ~
x q°≥ tss Λª# °¯ p t n •ªt ts qs Λ°²¯#pt ~
大分子极易被吞噬细胞所吞噬 o因而作为慢性刺激
物质 o刺激炎症反应不断加强 o造成 „⁄的慢性炎症
状况≈v  o进一步导致神经元死亡 o使痴呆的症状不断
加重 ∀因此 „⁄是由 „Β在脑内的沉积 o激活周围小
胶质细胞产生细胞因子和神经系统免疫应答等因素
综合作用的结果 ∀
°≥是革兰阴性菌细胞壁的一个毒性成分 o整体
实验中往往用于刺激内生性的 Œ2t≈w ox 和 „°°的增
加≈y  ∀而 „°°是 „Β的前体蛋白 o与 „⁄的发生 !发展
密切相关并起重要作用 ∀Œ2t等多种细胞因子和某
些外源性刺激均可影响 „°°的表达 ∀ „°°的表达增
加使得 „Β产生增多 ∀并且 o¦Š¨ µ¨等≈z 的研究表明
„⁄患者脑内 ‘∞°表达明显降低 o„Β降解受阻 o过多
„Β堆积导致局部高浓度易使 „Β沉积下来形成老年
斑 ∀作者将 °≥作为一个慢性致炎物质作用于人胶
质瘤细胞株 …×vux o模拟 „⁄发病的炎性过程 o结果发
现 °≥ 同时也降低 …×vux 细胞株的存活率并且对
‘∞°的表达有抑制作用 o遂用 °≥来造模 ∀
现代研究结果证实 o人参具有多种药理效应 o能
调节中枢神经系统兴奋与抑制平衡 o对记忆保留和
再现具有显著的易化作用 o已发现其有效成分人参
皂苷具有中枢拟胆碱活性和拟儿茶酚胺活性 o能增
加乙酰胆碱的合成和释放 o并能显著提高动物脑干 !
纹状体 !海马等部位 x2‹× 含量≈{  ∀人参皂苷还能提
高培养皮层神经细胞的存活 o有效减轻自由基对细
胞的损伤≈|  ∀本实验结果发现 o人参皂苷 •ªt在提高
细胞存活率的同时 o对 ‘∞° °• ‘„ 转录有明显的增
强作用 o使 ‘∞°表达水平提高 o该物质有可能成为
‘∞°的激活剂用于 „⁄治疗 o其更详尽的作用机制有
待进一步研究 ∀
≈参考文献 
≈t  ‘¨ º¨¯¯ „ o≥∏¨ Œo≥¦²·≥ o ετ αλ. ׫¬²µ³«¤±2¬±§∏¦¨§±¨ ³µ¬¯¼¶¬±¬±2
«¬¥¬·¬²±µ¤¬¶¨¶¤°¼¯²¬§¥¨·¤¯¨ √¨¯¶¬±µ¤¥¥¬·¦²µ·¨¬¤±§¦¨µ¨¥µ²¶³¬±¤¯ ©¯∏2
¬§q Νευροσχι Λεττ oussv ovxskvl }tz{ q
≈u  沈思钰 o干振华 o傅晓东 o等 q人参皂苷对神经系统作用的研究
现状及分析 q安徽中医学院学报 oussw ouvktl }yu q
≈v  °¤µ¬¶⁄o ‹∏°³«µ¨¼ o ±∏¤§µ²¶„ o ετ αλ. ∂¤¶²¤¦·¬√¨ ©¨©¨¦·¶²© „ ¥¨·¤
¬±¬¶²¯¤·¨§ «∏°¤± ¦¨µ¨¥µ²√ ¶¨¶¨ ¶¯¤±§¬± ¤·µ¤±¶ª¨ ±¬¦ °²∏¶¨ °²§¨¯ ²©
„¯ ½«¨¬°¨ µ. ¶§¬¶¨¤¶¨ }µ²¯¨²©¬±©¯¤°°¤·¬²±qΝευρολ Ρεσ , ussv ouxkyl }
ywu q
≈w  פµ§¬© ∞o •²¶¶Š o •²∏¤¥«¬¤  q Š¬±ª¬√¤¯ ¤±§§¨µ°¤¯ ©¬¥µ²¥¯¤¶·¶³µ²2
§∏¦¨ ¬±·¨µ¯¨ ∏®¬±2t¥¨·¤¦²±√¨ µ·¬±ª ±¨½¼°¨¤±§¬±·¨µ¯¨ ∏®¬±2t¥¨·¤¥∏·±²·
¬±·¨µ¯¨ ∏®¬±2t{ √¨ ±¨ ¤©·¨µ¶·¬°∏¯¤·¬²± º¬·« ¬¯³²³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ q ϑ Χελλ
Πηψσιολ, ussw ot|{ktl }tux q
≈x  ‹²©©°¤± ≥ o°²¯¤¦® ƒ ° o‹¤∏¨µ⁄„ o ετ αλ.  ¤¨¶¯ ¶¨√¬µ∏¶¬±©¨¦·¬²± ²©
µ«¨¶∏¶°¤¦¤´ ∏¨¶¤©©¨¦·¶±¨ ∏·µ²³«¬¯ ¬¨³µ¨¶¶¬²±²©Œ2tu ¤±§Œ2ts q ςιραλ
Ιµ µυνολ, ussv otykvl }vy| q
≈y  ≥«¨ ±ªŠ o…²µ¤≥ ‹ o ÷∏Š o ετ αλ. ¬³²³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨2¬±§∏¦¨§2±¨ ∏2
µ²¬±©¯¤°°¤·¬²±¬±¦µ¨¤¶¨¶¬±·µ¤¦¨¯¯∏¯¤µ¤¦¦∏°∏¯¤·¬²± ²©¤°¼¯²¬§³µ¨¦∏µ¶²µ
³µ²·¨¬± ¤±§¤°¼¯²¬§¥¨·¤³¨ ³·¬§¨ ¬± „°°¶º¨·µ¤±¶ª¨ ±¬¦°¬¦¨ qΝευροβιολ
∆ισ ,ussv otwktl }tvv q
≈z  ≠¤¶²­¬°¤ Žo ¦Š¨ µ¨∞ Š o ¦Š¨ µ¨° q • ¨¯¤·¬²±¶«¬³ ¥¨·º¨¨ ± ¥¨·¤
¤°¼¯²¬§³¨ ³·¬§¨ ª¨ ±¨ µ¤·¬±ª °²¯ ¦¨∏¯ ¶¨¤±§ ±¨ ³µ¬¯¼¶¬± ¬± „¯ ½«¨¬° µ¨§¬¶2
¤¨¶¨ ¤±§±²µ°¤¯ ¥µ¤¬±q Βραιν Ρεσ , usst ~|t|ktl }ttx q
≈{  朱建民 q人参皂苷促智作用研究进展 q江西中医学院学报 ot||x o
k增刊l }wy q
≈|  Ž¬° ≠ ≤ oŽ¬° ≥ • o ¤µ®¨ ²¯±¬¶Šo ετ αλ. Š¬±¶¨±²¶¬§¨¶•¥t ¤±§•ªv
³µ²·¨¦·¦∏¯·∏µ¨§µ¤·¦²µ·¬¦¤¯ ¦¨¯¯¶©µ²° ª¯∏·¤2°¤·¨¬±§∏¦¨§±¨ ∏µ²§¨ª¨ ±¨ µ2
¤·¬²±q ϑ Νευροσχι Ρεσ t||{ oxv }wuy q
Εφφεχτ οφ γινσενοσιδε Ργt ον τηεινφλυενχε οφ
νεπριλψσιν εξπρεσσιον ινδυχεδ βψ ΛΠΣ ιν ΒΤvux χελλλινε
˜’ ‹∏¤±2°¬±o⁄∞‘Š ‹∏¬o ‹˜„‘Š ƒ ±¨ªo ÷Œ„’ ƒ ¬¨oŒ ÷¬¤²2ª∏¤±ªo‹„‘Š °¨ ¬2©¨ ± oŠ„’ ±¬±o • ∞‘Š • ±¨
( Νευροπηαρµαχολογιχαλ Ρεσεαρχη Λαβορατορψ, Χολλεγε οφ Πηαρµαχψ, ϑιναν Υνιϖερσιτψ, Γυανγζηου xtsyvu , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨ ©¨©¨¦·²©ª¬±¶¨±²¶¬§¨ •ªt ²±·«¨ ¬±©¯∏¨ ±¦¨ ²© ±¨ ³µ¬¯¼¶¬± ¬¨³µ¨¶¶¬²±¬±§∏¦¨§¥¼ °≥¬± …×vux
¦¨¯¯ ¬¯±¨ q Μετηοδ : ×× º¤¶∏¶¨§·² ° ¤¨¶∏µ¨ ·«¨ ¯¨ √¨¯¶²©·«¨ ¶∏µ√¬√¤¯µ¤·¨ ²©…×vux ¦∏¯·∏µ¨§º¬·«ª¬±¶¨±²¶¬§¨ •ªt ¤±§°≥¬± §¬©©¨µ¨±·¦²±¦¨±2
·µ¤·¬²±¶q׫¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©‘∞° º¤¶° ¤¨¶∏µ¨§¥¼ • ×2°≤• q Ρεσυλτ : ׫¨ ¶∏µ√¬√¤¯µ¤·¨ ²© …×vux º¤¶²¥√¬²∏¶¯¼¬±«¬¥¬·¨§¥¼ °≥ o¤±§·«¨ ¬¨2
³µ¨¶¶¬²± ²©‘∞° º¤¶§¨¦µ¨¤¶¨§q׫¨ ¶∏µ√¬√¤¯µ¤·¨ ²©…×vux º¤¶²¥√¬²∏¶¯¼µ¤¬¶¨§¥¼ ª¬±¶¨±²¶¬§¨ •ªt o¤±§·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©‘∞° º¤¶¬±¦µ¨¤¶¨§q
#u|{#
第 u|卷第 |期
ussw年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ |
≥¨ ³·¨°¥¨µoussw
Χονχλυσιον : °≥ ¦¤± ¦¤∏¶¨ ¦¨¯¯ §¤°¤ª¨ §o¤±§§¨¦µ¨¤¶¨ ·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²© ‘∞° q Š¬±¶¨±²¶¬§¨ •ªt ¦¤± ¬¨¨µ·±¨ ∏µ²³µ²·¨¦·¬√¨³µ²³¨µ·¬¨¶º«¬¦«
³µ²·¨¦·¶…×vux ¦¨¯¯ ¬¯±¨ ©µ²°·«¨ ¦¨¯¯ ·²¬¬¦¬·¼ ²©°≥ q
[ Κεψ ωορδσ] ª¬±¶¨±²¶¬§¨ •ªt ~°≥ ~…×vux ª¯¬²°¤¦¨¯¯ ~±¨ ³µ¬¯¼¶¬±
≈责任编辑 方文贤 
四物汤对放射线致血虚证
小鼠骨髓蛋白质表达的影响
郭 平t ou o马增春t o李鹰飞t o梁乾德t o王继峰u o王升启t 3
kt q军事医学科学院 放射医学研究所 o北京 tss{xs ~u q北京中医药大学 o北京 tsssu|l
≈摘要  目的 }观察四物汤对血虚证小鼠骨髓蛋白质表达的影响 o为阐明四物汤补血作用的分子机理提供理
论和实验依据 ∀方法 }采用 v qxŠ¼ ys≤²Χ射线全身 t次性照射 o制备小鼠血虚证模型 ∀利用双向电泳 !图像分析 !胶内
酶切 !质谱鉴定等蛋白质组学技术 o结合生物信息学 o分离 !分析 !鉴定蛋白质 ∀结果 }四物汤可以逆转放射线致血
虚证小鼠骨髓 ts个上调和 x个下调的蛋白质 ∀其中 {个蛋白质可能分别是淋巴细胞特异性蛋白质2t !蛋白酶体
uy≥ „×°酶亚组分 w !造血细胞蛋白质酪氨酸磷酸酶 !‹2µ¤¶ !v2磷酸甘油醛脱氢酶 !生长因子受体结合蛋白2tw及
ª¤¯¶tu ∀结论 }四物汤能调节骨髓蛋白质表达 o并可能由此促进造血细胞的生长和分化 o发挥补血作用 ∀
≈关键词  四物汤 ~辐射 ~血虚证 ~功能蛋白质组学 ~骨髓
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswls|2s{|v2sw
血虚证是血液亏虚 o脏腑百脉失调 o表现全身虚
弱的证候 ∀四物汤是传统的补血方剂 o能促进骨髓
细胞增殖 o提高外周血象≈t  ∀近年来对四物汤补血
机理已进行了较为广泛的研究≈u  o证实四物汤能明
显促进血虚证小鼠骨髓各类造血祖细胞的增殖 o显
著提高骨髓 ≤⁄vw n细胞比例 ∀但目前尚无深入 !全
面研究四物汤对造血组织蛋白质作用的报道 ∀作者
利用蛋白质组学技术 o研究了四物汤对放射线致血
虚证小鼠骨髓组织蛋白质的影响 o以期从分子水平
较深入地阐明四物汤的补血机理 o并确定其作用的
分子靶标 ∀
1 材料
1 q1 药物
四物汤的四味药熟地 !当归 !白芍和川芎均购自
北京同仁堂中药厂 o由本所九室马白平教授鉴定 o按
≈收稿日期  ussw2sw2tx
≈基金项目  国家自然科学基金项目kvsuztytz ovsszs|tvl ~军
队/十五0重点项目kstst|l ~北京市 / 二四八0重大创新工程项目
k‹stsutsuusttvl
≈通讯作者  3 王升启 o ר¯ } kstsl yy|vuutt o ƒ¤¬} k stsl
yy|vuutt o∞2°¤¬¯}≥ º´¤±ªƒ ±¬¦q¥°¬q¤¦q¦±
5太平惠民和剂局方6规定的剂量比ktxΒtsΒtsΒyl称
取 ∀按人用药剂量计算≈v 小鼠用药剂量为 ts ª#
®ªpt#§pt ∀经水煎 !过滤 !浓缩 !配制成 tss h 药液
k即每 t °药液含生药 t ªl ∀w ε 保存备用 ∀
1 q2 主要试剂与仪器
丙烯酰胺 !Ν , Νχ2甲叉双丙烯酰胺 !×µ¬¶2¥¤¶¨ !过
硫酸铵 !四甲基乙二胺 !十二烷基磺酸钠 k≥⁄≥l !尿
素 !丙基磺酸盐 !°«¤µ°¤¯¼·¨ v ∗ ts !固定干胶条
kŒ°Šl !Œ°Š缓冲液 !低分子量蛋白质 ¤µ®¨µ!甘油 !琼
脂糖 !溴酚蓝等均购自 „°¨ µ¶«¤° …¬²¶¦¬¨±¦¨¶公司 ∀
甘氨酸 !考马斯亮蓝 •2uxs和 Š2uxs购自 „ • ∞≥≤’
公司 ∀三氟乙酸 !碘乙酰胺购自 „¦µ²¶’µª¤±¬¦¶公司 ∀
乙腈购自 ƒ¬¶«¨µ公司 ∀ • ‘¤¶¨ „ 购自 ≥¬ª°¤公司 o清
蛋白标准购自 °¬¨µ¦¨ 公司 ∀二硫苏糖醇 k⁄××l购自
„°µ¨¶¦²公司 o蛋白质酶抑制剂 !胰酶购自 …²¨ «µ¬±ª¨µ
¤±±«¨¬°公司 ∀其他试剂均为国产分析纯 ∀
蛋白质双向电泳ku⁄∞l及电泳图谱图像处理采
用 „°¨ µ¶«¤° …¬²¶¦¬¨±¦¨¶公司蛋白质组学研究配套仪
器 }∞·¤±×Œ°Š³«²µ等电聚焦仪 o∞·¤±× ⁄„×¶¬¬二向
垂直电泳仪 o∏¯·¬× °¨³ ¶ 温控循环水浴 o°µ²¦¨¶¶²µ
°¯∏¶…¤¶¨ ˜±¬·全自动染色仪 oŒ°¤ª¨ ≥¦¤±±¨ µ扫描仪 o
#v|{#
第 u|卷第 |期
ussw年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ |
≥¨ ³·¨°¥¨µoussw