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RP-HPLC测定地骨皮中肉桂酸的含量



全 文 :[8] LabelPH,SotaB,MinginiacEEndogenouslevelsofABAand
IAAduringinvitrorootingofwildcheryexplantsproducedbymicro
propagationPlantGrowthRegul,1989,8:325
[9] JarvisBC,ShannonPRM,YasminSInfluenceIBAandcordy
eepinonrootingandRNAsynthesisinstemcutingofPhaseolus
arureusRoxbPlantCelPhysiol,1983,24:139
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[责任编辑 王康正]
RPHPLC测定地骨皮中肉桂酸的含量
李 康,袁昕蓉,韩 洁,毕开顺
(沈阳药科大学 药学院,辽宁 沈阳 110016)
[收稿日期] 20031218
[通讯作者] 李康,Tel:(024)238437113363
地骨皮为茄科植物枸杞 LyciumchinenseMil或
宁夏枸杞 LbarbarumL的干燥根皮。性味甘、
寒。具有凉血除蒸,清肺降火的功效。主治阴虚潮
热,骨蒸盗汗,肺热咳嗽,咯血,衄血,内热消
渴[1]。地骨皮中含生物碱、有机酸等多种化学成
分[2]。但关于地骨皮药材中成分分离与测定的报道
不多[3]。本研究用反相高效液相色谱法首次分离并
测定了不同产地地骨皮药材中肉桂酸的含量,方法
简便快速,灵敏准确,为该药材的质量评价提供参
考依据。
1 仪器和试药
2010A型高效液相色谱仪 (Shimadz);ClassVP
色谱数据处理系统。肉桂酸对照品 (购自中国药品
生物制品检定所);乙腈、甲醇为色谱纯;水为二
次蒸馏水;其他试剂为分析纯;地骨皮药材购于各
地药店,所有药材均由沈阳药科大学孙启时教授鉴
定。
2 方法和结果
21 色谱条件 DiomonsilC18色谱柱(46mm×200
mm,5μm);流动相甲醇乙腈1%冰醋酸水溶液
(15∶15∶70)pH30;流速09mL·min-1,柱温25℃。
检测波长272nm。肉桂酸在此条件下有较好分离,
理论塔板数按肉桂酸计不低于5000。
22 对照品溶液的制备 精密称取肉桂酸 100
mg,用甲醇溶解于10mL量瓶中,再吸取上述溶液1
mL于10mL量瓶中,用甲醇稀释至刻度,配制为01
mg·mL-1的对照品溶液。
23 供试品溶液的制备 精密称取各地药材 1g,
置索氏提取器中,用95%乙醇100mL提取15h,提
取液经减压回收溶剂,残渣用甲醇溶解至10mL量
瓶中,稀释至刻度,即得。各产地均做一平行样。
24 标准曲线的制定 精密吸取对照品溶液005,
010,020,040,060,080mL,分别置 10mL量
瓶中,用甲醇稀释至刻度,进样 10μL,测定峰面积。
分别重复3次操作,以峰面积平均值(Y)为纵坐标,
其对应成分进样量(X)为横坐标,进行回归计算,得
回归方程为 Y=9×106X+66205,r=09999,在
00050~00800μg线性关系良好。
25 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液
(0002mg·mL-1)10μL,进样,连续测定6次,求
得峰面积值的 RSD为 10%,表明仪器精密度良
好。
26 稳定性试验 精密吸取对照品溶液10μL,进
样,分别于1,2,3,5,8,12,24,36h重复上述操作,计
算峰面积值的 RSD为08%,表明对照品溶液在36
h内基本稳定。
27 回收率试验 精密称取已知含量的同产地药
材约1g,按高中低 3个浓度加入一定量对照品溶
液,按23项方法制备供试品,采用上述色谱条件进
样测定,肉桂酸回收率大于981%(见表1)。
28 含量测定 分别精密吸取各地药材供试品溶
液10μL,进样,各产地进样2次,以外标法计算供试
品溶液中的肉桂酸含量(见图1)。各产地地骨皮中
肉桂酸含量测定结果见表2。
3 讨论
·003·
第30卷第4期
2005年2月
中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
Vol.30,Issue 4
February,2005
表1 肉桂酸加样回收率试验
加入量
/μg·mL-1
测得量
/μg·mL-1
回收率
/%
平均回收率
/%
RSD
/%
2000 1981 991 991 04
1975 988
1992 995
6000 5960 996 1002 23
5893 982
6160 1027
8000 7850 981 988 17
7796 975
8060 1007
图1 对照品和样品的HPLC图
A对照品;B样品;1肉桂酸
表2 各产地地骨皮中肉桂酸含量测定结果 μg·g
-1
产地 含量 产地 含量
河南濮阳 3476 内蒙古五原 2430
河北石家庄 3294 甘肃兰州 2206
宁夏中宁 1056 北京 6902
宁夏银川 3169 江苏杭州 6915
河北唐山 1773 河北辛集 1371
辽宁朝阳 2650 吉林四平 4863
四川成都 1012 贵州贵阳 1695
上海 3550 新疆乌鲁木齐 1370
广东广州 5199 内蒙古通辽 4615
山东济南 4303 云南昆明 1010
四川资中 1143 重庆 1828
辽宁兴县 1212 四川雅安 2429
青海西宁 9980 - -
31 地骨皮中脂溶性成分很少。先后用水,甲醇,
50%,70%,95%乙醇和无水乙醇提取,然后分别用
甲醇溶解进样;将上述溶剂提取后的提取物,分别用
水混悬,醋酸乙酯萃取,挥干醋酸乙酯后,再用甲醇
溶解进样;还采用上述溶剂提取后的提取物再碱提
酸沉纯化后甲醇溶解进样和直接生药材碱提酸沉之
后甲醇溶解进样,分别进行实验。结果表明,用
95%的乙醇提取效果好,杂质干扰少,肉桂酸含量
高。
32 提取药材时,采用水浴回流提取、超声提取、索
氏提取,最后证明索氏提取方便、提取完全。作者还
考察了索氏提取的时间,试验结果表明 15h可提
取完全。
33 经紫外扫描,肉桂酸在 272nm有最大吸收,
选择272nm为测定波长。
34 分析结果表明,各产地的地骨皮中肉桂酸的含
量有差别。其中广东、吉林产地的地骨皮中肉桂酸
的含量较大,甘肃产地的地骨皮中肉桂酸的含量较
小,有的产地的地骨皮中甚至不含有肉桂酸。地骨
皮的质量有待正确评价。
[参考文献]
[1] 中国药典 一部 200093
[2] 郑虎占 中药现代研究与应用 第二卷 北京:学苑出版社,
19981789
[3] 周兴旺,徐国钧,王 强 双波长薄层扫描法测定地骨皮中莨
菪亭的含量 药物分析杂志,199616(5):311
[责任编辑 王康正]
高效液相色谱法测定不同产地桂枝中原儿茶酸的含量
杨 松1,张会丽2
(1沈阳军区 联勤部 药品仪器检验所,辽宁 沈阳 110026;
2辽宁大学,辽宁 沈阳 110036)
[收稿日期] 20031116
[通讯作者] 杨松,Tel:(024)23069582,Email:syyangsong@
163.com
桂枝主产于广东、广西,为樟科植物肉桂 Cin
namomumcasiaPresl的干燥嫩枝,始载于《神农本草
经》,属辛温解表药,具有发汗解肌、温通经脉、助阳
化气、平冲降气之功效。用于风寒感冒、脘腹冷痛、
血寒经闭、关节痹痛、痰饮、水肿、心悸等。桂枝的主
要有效成分为桂皮醛、桂皮酸、桂皮醇、香豆素及原
儿茶酸等。文献报道对原儿茶酸的含量测定方法主
要有高效液相色谱法[1]和薄层色谱法[2],但对不同
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第30卷第4期
2005年2月
中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
Vol.30,Issue 4
February,2005