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≈责任编辑 古云霞
茶多酚对大鼠系膜细胞
摄取氧化型低密度脂蛋白的影响
张 岩 o甘 华
k重庆医科大学 附属第一医院 o重庆 wssstyl
≈摘要 目的 }探讨茶多酚抑制大鼠肾小球系膜细胞摄取氧化型低密度脂蛋白k ÷2⁄l的作用 ∀方法 }以 ÷2
⁄刺激体外培养的大鼠系膜细胞 o同时用不同浓度茶多酚干预 o测系膜细胞内总胆固醇k× ≤l含量 o油红2 染色 o光
镜及电镜观察细胞形态 ∀结果 } ÷2⁄刺激下系膜细胞 × ≤ 含量及油红2 染色阳性细胞比例均较无脂蛋白刺激的
≈收稿日期 ussu2sz2vs
≈基金项目 重庆市卫生局资助项目kss2zsstl
≈通讯作者 ר¯ }tvtyyv{|xtu
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第 u{卷第 {期
ussv年 {月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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照系膜细胞增高 o电镜下见泡沫细胞 ∀随培养液茶多酚浓度由 ws ±ª#p t ∗ ws °ª#p t递增 o脂蛋白刺激的系膜细胞
× ≤ 含量及油红2 染色阳性细胞比例递减 o呈剂量依赖性关系 o系膜细胞内脂滴数量减少 ∀结论 }ws ±ª#p t ∗ ws °ª#
p t茶多酚可呈剂量依赖性抑制大鼠系膜细胞摄取 ÷2⁄∀
≈关键词 茶多酚 ~氧化型低密度脂蛋白 ~系膜细胞
≈中图分类号 u{x qx ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussvls{2szyu2sw
自 t|{u年 ²²µ¨¤§≈t 确定了脂质的肾毒性作
用以来 o人们对脂质性肾损害的病理学及病理生理
学改变 !诊疗措施等进行了大量的动物实验及临床
研究 ∀许多动物实验发现 o肾小球系膜细胞类似于
血管平滑肌细胞 o在高脂环境下 o它能吞噬和氧化脂
蛋白 o并向泡沫细胞转化 o同时释放多种细胞因子 o
泡沫细胞吞噬过多脂质最终死亡 o导致肾小球硬
化≈u ov ∀目前认为脂质引起的肾小球硬化的发生机
制类似于毛细血管水平上的动脉粥样硬化≈w ∀同
时 o因氧化型低密度脂蛋白 k²¬¬§¬½¨ § ²¯º §¨ ±¶¬·¼
¬¯³²³µ²·¨¬±o÷2⁄l对肾小球毛细血管内皮细胞 !
系膜细胞较强的毒性 !对单核巨噬细胞有趋化作用
并能引起系膜基质成分堆积 o且较低密度脂蛋白
k⁄l易被细胞摄取但不易被降解 o故其在脂质性
肾损害发生中的作用也倍受关注 ∀茶多酚是茶叶的
主要活性成分 o有抗氧化 !抗凝 !降血脂等作用≈x o已
在动物及临床实验中用于治疗动脉粥样硬化 !高脂
血症 !糖尿病肾病≈y 及药物性肾损伤≈z 等 ∀本实验
分别用不同浓度茶多酚溶液干预 ÷2⁄刺激下的
系膜细胞 o通过分析系膜细胞内脂质含量 o探讨茶多
酚抑制大鼠肾小球系膜细胞摄取 ÷2⁄的作用 ∀
1 材料和方法
1 q1 材料 雄性 • ¬¶·¤µ大鼠 o体重约 t{s ªo购自重
庆医科大学实验动物中心 ∀新鲜人血 s qu o购于重
庆市中心血站 ∀茶多酚由浙江农业大学茶学系提
供 o含多酚类物质 | | qw h o其中儿茶素类占
zv qwx h ∀
1 q2 人血浆脂蛋白提取 新鲜人血 s .u o超速离
心法提取血浆 ⁄o氧化酶法测定所提 ⁄中总胆
固醇k× ≤l含量为 u qys °°²¯ #pt o⁄2¦为 u qsv
°°²¯#pt o⁄2¦占 × ≤ 的 z{ qs{ h k
¨ ¦®°¤± ≤ ÷2z
自动生化分析仪l ∀双缩脲法做⁄蛋白定量为
t qzx{u ª#pt ∀
1 q3 ÷2⁄制备 用 ≤∏u n介导法≈{ ∀所提 ⁄
置透析袋中 ows倍体积的 ts Λ°²¯ #p t硫酸铜透析
液 ovz ε o透析氧化 tu «o然后置 xs倍体积的 s qt h
乙二胺四乙酸二钠磷酸盐缓冲液中 ow ε o透析 uw
«o用硫代巴比妥酸法测氧化前后丙二醛k ⁄l含
量以鉴定 ⁄的修饰程度 o²ºµ¼≈| 法测定 ÷2
⁄蛋白含量 ∀测得 ÷2⁄的 ⁄ 为 uv qst
±°²¯#°ªp t ∀
1 q4 系膜细胞培养 !鉴定及分组 健康雄性 • ¬¶·¤µ
大鼠 y只 o乙醚麻醉后取双肾 o重叠筛网法≈ts 分离
肾小球 o胶原酶k≥¬ª°¤公司l溶液适度消化后 o种于
y孔板和底部放有载玻片的 uw孔板 o种植密度为 ts
个r视野k ≅ tssl ∀vz ε ox h ≤ u 孵箱中培养 ox §
首次换液 o以后每 u ∗ v §换液 t次 o约 t周后肾小球
周围长满贴壁细胞层 o免疫组化法做抗波形蛋白抗
体和抗结蛋白抗体染色阳性 !抗细胞角蛋白抗体染
色阴性k武汉博士德公司试剂盒l鉴定所培养细胞为
系膜细胞 ∀
长满贴壁单层系膜细胞的 y 孔板及 uw 孔板 o
°
≥洗 v次 o洗时轻轻吹打以洗去肾小球 ∀加入无
血清 ° 2tyws液 o其中含 ÷2⁄终浓度 {s°ª#
pt o茶多酚终浓度依次为 }s os qssw os qw ows owsss
k ≅ tsw ±ª#ptl ~设无 ÷2⁄刺激及茶多酚干预
的正常系膜细胞对照孔 o其中 y孔板上每种条件设 x
个复孔 ouw孔板上每种条件设 w个复孔 ovz ε ox h
≤ u ots «∀
1 q5 细胞内 × ≤ 含量测定 y孔板上每种条件培养
的系膜细胞取 w个复孔 o分别收集细胞 o以 s qt °²¯#
pt¤ 溶液裂解细胞 o氧化酶法≈tt 测定裂解液
× ≤ 浓度k上海科华2东菱诊断用品有限公司 × ≤ 试
剂盒l o双缩脲法做裂解液蛋白定量 o计算细胞内 × ≤
含量 }
每克蛋白的细胞 × ≤ 含量 裂解液 × ≤ 浓度r裂解液蛋
白浓度k°°²¯#ªp tl
每种干预条件下系膜细胞内 × ≤ 含量值取相同
条件的 w个复孔测得值的平均值 ∀
1 q6 油红2染色光镜形态学观察 uw孔板中取出
载玻片 ots h甲醛溶液固定 o油红2 染色 owss倍光
镜下每片取 w个视野照相 o每种条件 w个复孔 oty张
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第 u{卷第 {期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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照片 o肉眼计数照片上油红2 染色阳性k含脂滴l系
膜细胞数及系膜细胞总数 o计算含脂滴系膜细胞所
占百分比 ∀
1 q7 系膜细胞超微形态学观察 y孔板每种培养
条件取 u个复孔收集细胞 ou qx h戊二醛固定 o送重
庆医科大学电镜室做透射电镜观察 ∀
1 q8 统计分析 计量资料用 ξ ? σ表示 ~各种培养
条件间细胞内 × ≤ 含量比较用成组资料的方差分
析 o油红2 染色阳性细胞比例比较用 ςu 检验 o≥≥
系统处理数据 ∀
2 结果
2 q1 细胞内 × ≤ 含量 ÷2⁄刺激下的 s ±ª#
pt茶多酚干预孔细胞内 × ≤ 含量高于正常对照孔
系膜细胞k Π s qsxl o ÷2⁄刺激下的系膜细胞
× ≤ 含量随茶多酚干预浓度由 ws ±ª#p t ∗ ws °ª#
pt递增而递减k图 tl ∀
图 t 不同浓度的茶多酚对 ÷2⁄
刺激下的系膜细胞内 × ≤ 含量的影响
正常对照组 }正常对照孔系膜细胞 ¤q与正常对照孔比较 Π
s qsx ¥q与 s ±ª#p t茶多酚干预孔比较 Π s qsx ¦q与 ws ±ª#p t
茶多酚干预孔比较 Π s qsx §q与 w Λª#p t茶多酚干预孔比较 Π
s qsx ¨q与 wss Λª#p t茶多酚干预孔比较 Π s qsx k图 u同l
2 q2 系膜细胞油红2染色阳性细胞数比例 油红2
染色阳性系膜细胞胞浆中脂类物质呈橘红色 o细
胞核呈蓝色 ∀ ÷2⁄刺激下的 s ±ª#pt茶多酚干
预孔油红2 染色阳性细胞比例显著高于正常对照
孔系膜细胞k Π s qsstl ~随茶多酚干预浓度由 ws
±ª#pt ∗ ws °ª#pt递增 o ÷2⁄刺激下的系膜
细胞油红2染色阳性细胞比例递减k图 ul ∀
ws °ª#pt茶多酚干预孔均可见数量不等的坏
图 u 不同浓度茶多酚对 ÷2⁄刺激下的
系膜细胞中油红2 阳性细胞比例的影响
死系膜细胞 ∀
2 q3 系膜细胞超微形态学改变 系膜细胞在 ÷2
⁄刺激下胞浆内出现多个透亮脂滴 o有泡沫细胞
形成 o经茶多酚干预后胞浆内脂滴减少 owss Λª#p t
∗ ws °ª#p t茶多酚干预的系膜细胞内脂滴减少较
明显k图 vl ∀
3 讨论
实验观察到 o体外高脂环境中培养的大鼠系膜
细胞 o可吞噬大量 ÷2⁄o并向泡沫细胞转化 ∀肾
小球系膜细胞与血管平滑肌细胞有很多相似之处 o
其膜表面有 / 清道夫0受体介导 ÷2⁄的摄取 ∀
÷2⁄刺激下 o系膜细胞还可合成和分泌转化生
长因子2Βk·µ¤±¶©²µ°¬±ª ªµ²º·«©¤¦·²µ2¥¨·¤o× ƒ2Βl !
血小板源性生长因子k³¯¤·¨¯ ·¨2§¨µ¬√ §¨ªµ²º·«©¤¦·²µo
°⁄ƒl !肿瘤坏死因子2Αk·∏°²µ±¨ ¦µ²¶¬¶©¤¦·²µ2¤¯2
³«¤o× ƒ2Αl等细胞因子 o促进自身脂蛋白受体基因
表达上调≈w otu o摄入脂蛋白增多 ∀
最近 o人们发现脂蛋白脂酶k ¬¯³²³µ²·¨¬± ¬¯³¤¶¨ o
°l及肝脂酶k«¨ ³¤·¬¦ ¬¯³¤¶¨ o l能通过与配体 !
受体及硫酸肝素等相互作用促进脂蛋白与其受体的
结合≈tv otw o≥·¨√ ±¨¶²±≈tv 发现结合于系膜细胞表面
无活性的 °能使 ∂ ⁄与体外培养的系膜细胞
结合能力增强 uss 倍 ∀已知肾组织能合成 °o
÷2⁄是否可能刺激系膜细胞 °基因表达增
强及合成增多加强系膜细胞受体介导的脂蛋白摄
取 o值得进一步探讨 ∀
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第 u{卷第 {期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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图 v 不同浓度茶多酚对 ÷2⁄刺激下系膜细胞超微形态学变化
¤q正常对照孔系膜细胞k ≅ ts sssl ¥qs ±ªmp t茶多酚干预孔系膜细胞胞浆内多个脂滴k ≅ tx sssl ¦qwss Λª#p t
茶多酚干预孔系膜细胞胞浆内脂滴明显减少k ≅ ts sssl
用茶多酚干预 ÷2⁄刺激的系膜细胞 o可见
其油红2染色阳性k含脂滴l细胞比例及 × ≤ 含量降
低 o胞浆中脂滴数量减少 o随培养液中茶多酚浓度由
ws ±ª#pt ∗ ws °ª#pt递增 o ÷2⁄刺激的系膜
细胞 × ≤ 含量及油红2 染色阳性细胞比例递减 o呈
剂量依赖性关系 o提示茶多酚除降脂作用外 o也能直
接抑制培养的大鼠系膜细胞摄取脂蛋白 o阻止其向
泡沫细胞转化 o干预浓度在 ws ±ª#p t ∗ ws °ª#pt
间其作用呈剂量依赖关系 ∀
光镜观察见 ws °ª#pt茶多酚干预下 ÷2⁄
刺激的系膜细胞部分发生坏死 ∀文献报道 o ÷2⁄
浓度超过 uss °ª#pt可诱导系膜细胞坏死≈tx o我
们的实验中所用 ÷2⁄的刺激浓度k{s °ª#p tl
远小于该浓度 o且 s ±ª#pt ∗ wss Λª#pt茶多酚干
预孔内未见此现象 o推测可能与 ws °ª#p t茶多酚
对系膜细胞产生毒性作用有关 ∀
综上所述 o茶多酚可直接抑制系膜细胞摄取
÷2⁄o在 ws ±ª#pt ∗ ws °ª#pt o其作用呈剂量
依赖关系 ∀
≈参考文献
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≈y 鲁 盈 o杨汝春 o胡云琴 o等 q茶多酚对链脲菌素诱导糖尿病
大鼠肾损伤的防治作用 q中国中医基础医学杂志 o usss o y
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≈z 姚 林 o刘桂香 o李清钊 o等 q茶多酚对顺铂所致肾损伤的保
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≈{ 张均田 q现代药理实验方法 q下册 q北京 }北京医科大学 中国
协和医科大学联合出版社 ot||{ qtuux q
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≈tt 施济人 o贾守约 q临床检验手册 q济南 }山东科学技术出版社 o
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ΤηεΙνηιβιτιϖε Εφφεχτ οφ Τεα Πολψπηενολσ ον
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[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¶·∏§¼ ·«¨ ¬±«¬¥¬·¬√¨ ©¨©¨ ¦·²©·¨¤³²¯¼³«¨ ±²¯¶k×°l ²± ²¬¬§¬½¨ § ²¯º §¨ ±¶¬·¼ ¬¯³²³µ²·¨¬± k ÷2⁄l
¬±·¤®¨ ¬± ¦∏¯·∏µ¨§µ¤·° ¶¨¤±ª¬¤¯ ¦¨¯¯¶q Μετηοδ : ¤·° ¶¨¤±ª¬¤¯ ¦¨¯¯¶¬±¦∏¥¤·¨§¬± {s °ª#p t ÷2⁄º µ¨¨ ·µ¨¤·¨§ º¬·« ×° ¤·§¬©©¨µ2
±¨·¦²±¦¨±·µ¤·¬²±¶q ײ·¤¯ ¦«²¯ ¶¨·¨µ²¯ k× ≤l ¦²±·¨±·²©·«¨ ° ¶¨¤±ª¬¤¯ ¦¨¯¯¶¤±§³µ²³²µ·¬²± ²© ° ¶¨¤±ª¬¤¯ ¦¨¯¯¶¦²±·¤¬±¬±ª ¬¯³¬§§µ²³¯ ·¨¶
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·∏µ¨§¬± ¬¯³¬§©µ¨¨¦²±§¬·¬²±¶q × «¨ µ¨ º µ¨¨ ¦²±¦¨±·µ¤·¬²±2§¨ ³¨ ±§¨ ±·§¨¦µ¨¤¶¨¶¥²·«¬± × ≤ ¦²±·¨±·¤±§ ¬¯³¬§2§µ²³¯ ·¨2¦²±·¤¬±¬±ª¦¨¯¯ ³µ²2
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≈责任编辑 古云霞
佛手和枸杞提取物对小鼠
皮肤胶原蛋白 !≥⁄含量及毛发生长的影响
邵邻相
k浙江师范大学 生命与环境科学学院 o浙江 金华 vutsswl
≈摘要 目的 }研究佛手和枸杞提取物对小鼠皮肤和毛发生长的作用 ∀方法 }将佛手和枸杞提取液涂抹于小鼠脱
毛皮肤部位 o观察涂抹部位毛发生长情况 owu §后取涂抹部位皮肤 o测定超氧化物歧化酶 ≥⁄活性 !胶原蛋白和丙二
醛的含量 ∀结果 }与空白对照组比较 o佛手和枸杞提取液都能显著提高小鼠皮肤中 ≥⁄的活性k Π s qsxl o增加皮肤
中胶原蛋白的含量k Π s qsstl o明显减少脂质过氧化产物丙二醛的含量k Π s qsxl o促进毛发的生长k Π s qsstl ∀
结论 }佛手和枸杞提取物具有良好营养皮肤和促进毛发生长的作用 ∀
≈关键词 佛手 ~枸杞 ~皮肤 ~毛发 ~超氧化物歧化酶
≈中图分类号 u{x qx ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussvls{2szyy2sv
佛手又名五指柑 o为芸香科植物佛手柑的果实 ∀
佛手具有理气化痰 !止呕消胀 !舒肝健脾 !和胃等多
种药用功能 ∀佛手的近代药理学研究多侧重于胃
肠 !呼吸系统和心血管系统的研究≈t ou ∀枸杞为茄
科枸杞属植物枸杞或宁夏枸杞的成熟果实 o具有补
≈收稿日期 ussu2sz2vs
≈基金项目 浙江金华市科委资助项目kusst2t2tuxl
≈通讯作者 ר¯ }ksxz|luu{vwss ∞°¤¬¯}¶«¤²¯¬±¬¬¤±ª ¶¬±¤q
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肾益精 !润肺养肝之功效 o具有抗衰老延寿的作
用≈v ow ∀但有关佛手和枸杞对皮肤组织和毛发生长
的影响鲜见报道 ∀本文着重探讨佛手营养皮肤 !促
进毛发生长的作用 o为佛手在外用药和化妆品方面
的开发利用提供参考 ∀
1 材料和方法
1 q1 材料 佛手购自浙江森禾种业有限公司 ~枸杞
购自金华市医药公司 ∀经本校植物学教研室陈建华
博士分别鉴定为金华佛手 Χιτρυσ µεδιχα q√¤µqσαρ2
χοδαχτψλισ k²²·ql≥º¬±ª¯¨和枸杞 Λψχιυ µ χηινενσε
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第 u{卷第 {期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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