全 文 ：高效液相色谱法测定九味獐牙菜胶囊中小檗碱的含量
杜树山 3 o林宏英 o吴 明 o倪雪梅
k北京师范大学 资源学院 教育部资源药物工程研究中心 o北京 tss{zxl
≈收稿日期  ussv2su2tx
≈通讯作者  3杜树山 oר¯ }kstslyuusxu{u
九味獐牙菜胶囊是由獐牙菜 !金腰草 !榜嘎 !木香 !兔耳
草 !苦荬菜 !小檗皮 !波棱瓜子药物组成 o具有清热 !消炎 !止
痛功效 ∀用于治疗胆囊炎 !初期黄疸型肝炎等疾病 ∀
小檗皮为本品方中的臣药 o小檗碱是该药的主要有效成
分≈t  o故以盐酸小檗碱为指标进行含量测定 o控制成品的质
量 ∀小檗碱的含量测定方法有薄层扫描法≈u  o高效液相色谱
法≈v ow  o高效液相色谱法方法简便 o稳定 o重现性好 o故本标准
采用其测定小檗碱的含量 ∀
1 试剂和仪器
• ¤·¨µ¶uy|x高效液相色谱仪 o• ¤·¨µ¶uy|x 联盟系统 o• ¤2
·¨µ¶u||y二极管矩阵检测器 o¨¯¯¨ ±±¬∏°vu色谱工作站 ~九味獐
牙菜胶囊 k青海省互助中藏药业有限责任公司 o批号
ussttust oussttusu oussttusv ~规格 }每粒重 s1v ªl ~盐酸小檗
碱对照品k中国药品生物制品检定所提供 o批号 sztv2||sy o供
含量测定用l ~乙腈为色谱纯 o水为纯净水 o其他试剂均为分
析纯 ∀
2 色谱条件与系统适用性试验
• ¤·¨µ¶≤t{色谱柱kv1| °° ≅ txs °° ox Λ°l ~流动相乙腈2
s1sx °²¯#pt磷酸二氢钠溶液k用磷酸调节 ³‹ 值至 vlkuuΒ
z{l o流速 t1s °#°¬±p t o检测波长 vwz ±° o柱温 vs ε ∀理论
板数按小檗碱峰计算不低于 u yss ∀
3 溶液的配制
311 供试品溶液的制备 取本品 ts 粒的内容物 k批号
ussttustl o研细 o取约 s1x ªo精密称定 o置 tss °的具塞锥形
瓶中 o精密加入甲醇 xs °o称定重量 o超声处理 xs °¬±o放
冷 o再称定重量 o用甲醇补足重量 o摇匀 o滤过 o即得 ∀
312 对照品溶液的制备 精密称取盐酸小檗碱对照品适
量 o加甲醇溶解并稀释 o制成每 t °含小檗碱 s1sux °ª的溶
液 o作为对照品溶液 ∀
313 阴性供试品溶液的制备 按成品制剂方法制得缺小檗
皮药材的阴性样品制剂 ∀取阴性样品制剂 o研细 o取约 s1x
ªo精密称定 o按 311 方法制得阴性供试品溶液 ∀
4 线性关系的考察
称取在五氧化二磷干燥器中干燥至恒重的盐酸小檗碱
对照品约 y1vx °ªo精密称定 o置 ux °量瓶中 o加甲醇溶解并
稀释至刻度 o摇匀 o精密量取 t °o置 ts °量瓶中 o用甲醇
稀释至刻度 o摇匀 o即得 ∀再分别精密吸取此溶液 t ov ox oz o|
ˏ对照品溶液 o注入液相色谱仪 o按上述色谱条件测定色谱
峰面积 o以对照品的进样量 ΞkΛªl对峰面积的积分值 Ψ进行
线性回归 o结果表明 o小檗碱进样量在 s1suz ∗ s1uu Λª线性关
系良好 o线性回归方程 Ψ€ v |xy xt| Ξ p u| uyv oρ€ s1||| w ∀
5 阴性对照实验
本处方有小檗皮单味药材 o因而依法制备了缺小檗皮的
阴性对照品 ∀按前法分别测定 o结果表明 o小檗碱对照品与
小檗皮药材中小檗碱的保留时间基本一致 o阴性供试品溶液
在小檗碱色谱峰位置处无相应的峰出现 o说明产品中小檗碱
来自于小檗皮药材 ∀
6 精密度试验考察
取同一供试品溶液k批号 ussttustl o同法连续测定 x次 o
测定小檗碱的色谱峰峰面积 o计算其 • ≥⁄为 s1xz h ∀
7 稳定性试验考察
取同一供试品溶液k批号 ussttustl o于 s ou ow oy o{ «o分
别测定峰面积 o试验结果表明 o供试品溶液制备后 { «内测
定 o色谱峰面积无明显变化 o• ≥⁄为 s1vw h o表明在此时间内
供试品溶液中小檗碱的化学性质稳定 ∀
8 重复性试验
取 y份样品k批号 ussttustl o平行操作 o测定小檗碱的含
量 o计算其 • ≥⁄为 t1x h ∀
9 加样回收试验
取已知含量的样品k批号 ussttustls1ux ªo精密称定 o置
tss °具塞锥形瓶中 ∀精密加入小檗碱对照品溶液ks1yvx
°ªl o按供试品溶液制备方法操作并测定 o计算其回收率均值
为 ||1v h o• ≥⁄为 t1u h ∀
10 样品含量测定
实验色谱条件 o分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液
ts ˏ注入液相色谱仪 o依法测定 v 批样品 kussttust o
ussttusu oussttusvl中每粒小檗碱的含量 o分别为 s1{|z o
s1{{s os1|su °ª∀
11 讨论
1111 在供试品溶液制备条件选择上 o对甲醇浓度和超声提
取时间进行了试验 ∀选用不同浓度甲醇kvs h oxs h ozs h o
tss h l做溶剂 o采取超声波提取不同时间kus ovs ows oxs oys
°¬±l做为样品制备的方法 o试验结果表明样品用甲醇为溶
剂 o提取时间为 xs °¬±o提取比较完全 ∀
1112 本实验用二极管阵列检测器 o在 uss ∗ wss ±°进行光
#ttst#
第 u|卷第 ts期
ussw年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1u| oŒ¶¶∏¨ ts
’¦·²¥¨µoussw
谱扫描 o提取小檗碱色谱峰的光谱图 o在 vwz ±°处有最大吸
收 o因此选择 vwz ±°作为检测波长 o以提高检测的灵敏度 o并
对色谱峰的纯度进行检测 o提高了分析方法的准确性和可靠
性 ∀
≈参考文献 
≈t  严永清 o余传隆 o黄泰康 o等 1 中药辞海 1 第一卷 1 北京 }中国医
药科技出版社 ot|||1wyt1
≈u  伍丕娥 1 薄层荧光扫描法测定万应胶囊中小檗碱的含量 1 药
物分析杂志 ot||{ ot{kwl }uwv1
≈v  中国药典 1 一部 1usss1yu|1
≈w  吕光华 o陈建民 o肖培根 1改变检测波长 ‹°≤法测定小檗碱属
植物根中的生物碱 1 药学学报 ot||x ovskwl }u{s1
≈责任编辑 袁桂京 
反相高效液相色谱法测定三肾丸中淫羊藿苷的含量
赵东升t 3 o王冰艳u o李 银v
kt1 解放军第 usu医院药剂科 o辽宁 沈阳 ttsssv ~
u1 达兴药业股份有限公司化验室 o吉林 长春 tvssxt ~
v1 中药科学研究所 o北京 tsssttl
≈收稿日期  ussv2st2us
≈通讯作者  3赵东升 oר¯ }ksuwluvsxv{zu oƒ¤¬}ksuwluv{zvxzx o
∞2°¤¬¯}½«¤²§¶y{ ƒ ¶²«∏1¦²°
三肾丸为部颁标准收载的品种 o系由鹿肾 !狗肾 !驴肾 !
附子 !淫羊藿等 v|味中药组成的复方制剂 o药味繁多 o组成
较为复杂 o而且定量测定组分的单味药材占整个处方的比例
较小 o难于提取和分离 ∀其中主药及贵重药材鹿茸 !海马 !蛤
蚧等没有定量测定的已知成分 o故对方中主药淫羊藿中的有
效成分淫羊藿苷进行了定量测定 ∀有关淫羊藿中药及其制
剂中淫羊藿苷的含量测定已有较多报道≈t2w  ∀本实验用反相
高效液相色谱法测定三肾丸中淫羊藿苷的含量 o该法快捷 o
灵敏 o准确 ∀
本品含有大量的挥发性成分 o如 }小茴香≈x  o白术≈y  o肉
桂≈z  o牡丹皮≈{  o陈皮≈|  o当归≈ts 等 ∀为使其待测组分得到
很好的分离 o本实验对样品的前处理作了大量的试验工作 ∀
现将试验结果报告如下 }
1 仪器与试药
111 仪器 日本岛津 ≤ p ts „×高效液相色谱仪 o紫外检测
器 o≤¯ ¤¶¶p ≤ 色谱工作站 o× ¦¨«³¶«¨µ¨ ’⁄≥色谱柱kw1y °° ≅
uxs °° ox Λ°l ∀
112 试药 淫羊藿苷对照品 中国药品生物制品检定所提
供 ∀所用甲醇为优级纯 ∀
2 试验方法与结果
211 色谱条件 × ¦¨««¨ µ¨ ’⁄≥ 色谱柱kw1y °° ≅ uxs °° ox
Λ°l o流动相为甲醇2水kxyΒwwl o流速 s1| °#°¬±p t ∀柱温 ux
ε o检测波长为 uzs ±° ∀
212 提取方法的选择 曾试验比较了乙醚脱脂 !甲醇提取 !
正丁醇萃取及用乙醚脱脂 !氯仿2醋酸乙酯 u次脱脂 !正丁醇
萃取 !氨试液洗涤 !再用 ⁄tst大孔吸附树脂洗脱的分离效
果 o结果示出后者为佳 ∀故采用后者为本实验的提取方法 ∀
213 溶液的制备
对照品溶液的制备 取淫羊藿苷对照品 o加甲醇精密制
成每 t °含 s1t °ª的溶液 o即得 ∀
供试品溶液的制备 精密称取本品粉末 x1s ªo置索氏
提取器中 o加乙醚 ws °o回流提取 t «o弃去乙醚液 o药渣挥
干溶剂 o加甲醇 ws °o回流提取 w «o甲醇液蒸干 o残渣加水
us °使溶解 o加氯仿2醋酸乙酯ktΒtl萃取 t次 o弃去有机溶
剂 o加水饱和的正丁醇萃取 x次 o每次 us °o合并正丁醇萃
取液 o浓缩至 vs °o加氨试液 ws °萃洗 t次 o弃去氨试液 o
正丁醇液蒸干 o残渣加水 us °使溶解 o上已处理好的 ⁄tst
大孔吸附树脂柱k内径 t1x ¦° o填充高度 ts ¦°l o按每分钟 u
°的流速 o依次用水 !us h乙醇各 {s °洗脱 o并弃去 ∀继用
{s h乙醇 tss °洗脱 o收集洗脱液 |s °o在水浴上蒸干 o残
渣加甲醇使溶解 o并定量转移至 x °量瓶中 o加甲醇稀释至
刻度 o摇匀 o即得 ∀
214 样品的测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液
各 ts ˏ注入液相色谱仪 o测定 o计算含量 ∀测定 v批三肾丸
样品 o批号 ||sxst o||sxsu o||sxsv中淫羊藿苷的含量分别为
s1stt x h os1stt x h os1ss| z h ∀
3 方法学考察
311 方法精密度的考察 依法对同一样品溶液连续进样 x
次 o测定淫羊藿苷的峰面积 ∀其相对标准差 • ≥⁄为 t1v h o表
明本法精密度较好 ∀
312 线性关系的考察 取对照品溶液 o分别精密吸取 u ow o
y o{ ots ˏo注入液相色谱仪测试 o以进样量对峰面积作图 o得
#utst#
第 u|卷第 ts期
ussw年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1u| oŒ¶¶∏¨ ts
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