全 文 ：⁄„的影响 q中草药 ousss ovtkwl }u{s1
≈x  卜淑敏 o张海淼 o卜淑彦 o等 q五灵脂对小鼠组织 ≥’⁄活性的影
响 q山西大学学报k自然科学版l ousss ouvkul }txy1
≈y  饶曼人 o孙 兰 o张晓文 q前胡丙素对 „±ªµ致离体血管平滑肌
细胞肥厚及胞内钙 !‘’ 含量和信号转导的影响 q药学学报 o
ussu ovzktl }x1
≈z  陈小野 1 实用中医证候动物模型学 1 北京 }中国协和医科大学
北京医科大学联合出版社 ot||v1tzw1
Τηε εξπεριµενταλ ρεσεαρχη οφ Ατραχτψλοδεσ µαχροχεπηαλα
ανδ Πορια χοχοσ ον τηε µεριδιαν τροπισµ τηεορψιν ανιµαλσ
• „‘Š ≥«∏2µ²±ªt o • „‘Š ÷¬±t o ‹˜ ≥«∏¤±ªu
(t1 ∆επαρτµεντ οφ Πηαρµαχολογψ, Σηανδονγ Υνιϖερσιτψ οφ Τραδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινε , ϑιναν uxsstw , Χηινα ;
u1 ∆επαρτµεντ οφ Πσψχηολογψ, Σηανδονγ Υνιϖερσιτψ οφ Τραδιτιοναλ Χηινεσε Μεδιχινε , ϑιναν uxsstw , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ׫¨ µ¨¶¨¤µ¦«º¤¶§¨¶¬ª±¨ §·²¶·∏§¼·«¨ ° µ¨¬§¬¤±·µ²³¬¶°·«¨ ²µ¼ ²©·µ¤§¬·¬²±¤¯ ≤«¬±¨ ¶¨ §µ∏ª·«µ²∏ª« ¬¨³¨µ¬° ±¨·¶
¬± ¤±¬°¤¯¶1 Μετηοδ : • ¨∏¶¨§·«¨ °²∏¶¨ °²§¨¯²©§¨©¬¦¬¨±·¶³¯¨¨ ± ¤¶·«¨ ²¥­¨¦·1 „©·¨µ¤§°¬±¬¶·¨µ¬±ª Ατραχτψλοδεσ µαχροχεπηαλα ¤±§ Πορια χο2
χοσ µ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ oº¨ ° ¤¨¶∏µ¨§·«¨ ¬±§¨ ¬¨ ¶²© ⁄„ o≥’⁄o‘’ ·²²¥¶¨µ√¨·«¨ ©¨©¨¦·¶²©·«¨ §µ∏ª¶²± √¤µ¬²∏¶²µª¤±¶¤±§¦²°³¤µ¨§·«¨ µ¨¶∏¯·¶
º¬·«·«¨ ·µ¤§¬·¬²±¤¯ ° µ¨¬§¬¤±·µ²³¬¶°·«¨ ²µ¼1 Ρεσυλτ : ׫¨ ·º²§µ∏ª¶«¤§¶¨¯¨ ¦·¬√¨ ©¨©¨¦·¶²±·«¨ ∏´¤±·¬·¼ ²µ¤¦·¬√¬·¼ ²© ⁄„ o≥’⁄o‘’ ¬±·«¨
²µª¤±¶©²µ·«¨ ±²µ°¤¯ ªµ²∏³¤±§·«¨ °²§¨¯ªµ²∏³1 Χονχλυσιον : ׫¨ ¶¨¯¨ ¦·¬√¨¬±©¯∏¨ ±¦¨ ²©·«¨ ·º²§µ∏ª¶«¤¶¦¯²¶¨ µ¨ ¤¯·¬√¬·¼ º¬·«·«¨ ·µ¤§¬·¬²±¤¯
° µ¨¬§¬¤±·µ²³¬¶°·«¨ ²µ¼1
[ Κεψ ωορδσ] ·«¨ ° µ¨¬§¬¤±·µ²³¬¶°·«¨ ²µ¼~ Ατραχτψλοδεσ µαχροχεπηαλα ~ Πορια χοχοσ
≈责任编辑 方文贤 
≈收稿日期  ussw2sw2u|
≈通讯作者  3范青 oר¯ }kswttl{wyzsvsw oƒ¤¬kswttl{wyzsvsw o∞2
°¤¬¯}ƒ±zvt ƒ ¶¬±¤1¦²°1¦±
丹参酮微乳逆转肿瘤细胞多药耐药的研究
范 青t 3 o范广俊t o杨佩满u o赵瑾瑶u
kt1大连医科大学 附属二院 o辽宁 大连 ttysuz ~u1大连医科大学 o辽宁 大连 ttysuzl
≈摘要  目的 }研究药物新剂型 ) 丹参酮微乳kפ±2l在体外对人白血病细胞株 Žxyu的细胞毒作用和对多药
耐药k⁄• l的逆转作用 ∀方法 }××法检测 פ±2 对人白血病细胞株 Žxyur„⁄ 的细胞毒性和 ⁄• 逆转作用 o设
空白微乳k∞2l为对照组 ∀结果 }פ±2 非细胞毒性剂量k生长率 ∴|x h l为 s1u Λª#°pt ~低毒剂量k生长率 {x h ∗
|s h l为 s1z Λª#°pt ∀ ∞2 无毒剂量相当于 s1z Λª#°pt פ±2 同等稀释度 ~低毒剂量相当于 t1u Λª#°ptפ±2 同
等稀释度 ∀无毒性剂量的 פ±2 可显著降低 „⁄ 对 Žxyur„⁄ 细胞的 Œ≤xsk Π s1stl o抗药性逆转为 v1{{倍 ~低
毒剂量的 פ±2 逆转倍数为 v1|z ∀s1u Λª#°pt的 ∞2 逆转倍数为 u1yu ∀结论 }פ±2 体外对人白血病细胞 Žxyur
„⁄ 有明显的细胞毒作用和 ⁄• 逆转作用 ∀
≈关键词  丹参酮 ~微乳 ~多药耐药 ~逆转作用
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswltt2tsz|2sv
微乳剂k°¬¦µ²¨ °∏¯¬¶²±ol作为药物载体方面的
应用 o尤其是抗肿瘤方面的应用已引起学术界关注 ∀
可以认为 o微乳是抗肿瘤药物的一种新型载体 o具有
靶向释药的特性≈t  ∀与一般乳剂不同 o微乳的粒径
小kts ∗ tss ±°l o生物利用度高 o外观透明 o黏度接
近水 o注射时无痛 o热力学稳定 o久置不分层 !不破
乳 o是难溶性药物理想的载体 o适合做成注射剂型 ∀
#|zst#
第 u|卷第 tt期
ussw年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1u| oŒ¶¶∏¨ tt
‘²√¨ °¥¨µoussw
多药耐药k°∏¯·¬§µ∏ªµ¨¶¬¶·¤±¦¨ o⁄• l是导致肿瘤
化疗失败的主要原因 o逆转 ⁄• 成为肿瘤治疗急待
解决的问题 ∀研究表明部分钙离子拮抗剂和免疫抑
制剂如维拉帕米和环孢素 „ 等具有逆转肿瘤细胞
⁄• 作用 o但因毒性较大临床实际应用受到限制 ∀
国外有研究证实将抗癌药制成靶向制剂 o借助载体
运载体系可起到逆转 ⁄• 的作用≈u  ∀作者制成了
丹参酮微乳kפ±2l并进行体外细胞毒及逆转 ⁄•
研究 o为该领域进一步的研究提供实验基础和理论
依据 ∀
1 材料
111 药品及试剂
丹参酮原料k正大青春宝药业 o批号 ussts|usl ~
注射用豆磷脂k≥°≤ o上海油脂一厂 o批号 sus|uwl ~
注射用油k抚顺油脂一厂 o批号 susvt|l ~°¯ ∏µ²±¬¦ƒy{
kƒy{l o山梨醇k沈阳试剂厂 o分析纯l ~注射用水k本
院制剂室 o批号 sutttyl ~乙醇为分析纯 o• °Œtyws
培养液kŠŒ…≤’…•公司l o小牛血清k杭州四季青生
物制品厂l o阿霉素k„§µ¬¤°¼¦¬± „⁄ o意大利法玛西
亚普强公司l o噻唑兰k×× o华美生物工程公司l o二
甲基亚砜k⁄≥’ o北京化工厂l ∀
112 细胞
人红白血病细胞株 Žxyu 及其耐药细胞株
Žxyur„⁄ 均购自中国医学科学院天津血液学研究
所 oŽxyur„⁄ 在含 t1s Λª#°pt „⁄ 的 • °Œtyws
培养基中连续传代培养 ∀
113 仪器
 p tts∞‹ 型高压乳匀机k日本 ¬½∏«²公司l ~
电子分析天平k∞×׏∞• ג∞⁄’ „Šuwxl o透射电
子显 微 镜 k∞ p uss∞÷ l o ≤’u 细 胞 培 养 箱
k≥‹∞1„…o„⁄∞ Œ‘˜≥„l o台式低温高速离心机
k„⁄∞Œ‘„∞•Œ≤„l o∞¬¬p {ss酶标仪k „⁄∞ Œ‘
„∞•Œ≤„l ∀
2 方法
211 פ±2 制备工艺
处方比例 }פ± s1x h o注射用油 ts1s h o≥°≤
u1s h oƒy{ v1x h o山梨醇 w1s h o甘油 t1x h注射水
至 tss °∀
按处方比例称取 ≥°≤ oƒy{ o山梨醇 o甘油 o溶于
适量的注射用水中 ∀另称取处方量的 פ±混于注射
用油中 o超声使溶解 ∀将油相逐滴加入水相中 o边加
边搅拌 o用注射用水调至全量后过 s1{ Λ°滤膜 o高
压乳匀处理 otss °°¤处理 v 次 o即得淡红色透明
פ±2 o同法制备空白微乳k∞2l ∀
212 细胞培养
敏感细胞株 Žxyu于含 ts h小牛血清 !庆大霉
素k{s Λ1°ptl的 • °Œtyws培养液中 o在 vz ε !饱
和湿度及 x h ≤’u的细胞培养箱内传代培养 ∀相应
耐药株 Žxyur„⁄ 连续培养在含 t1s Λª#°pt阿霉
素k„⁄l的上述培养液中 o培养条件相同 ∀实验前
u周将耐药细胞置于无 „⁄ 的培养液中培养 ∀
213 ××法检测丹参酮微乳的细胞毒性
取对数生长期细胞kt1w ≅ tsxl接种于 |y孔培
养板内 ∀实验组由高至低浓度加入 |个浓度倍比稀
释的 פ±2kvu1ss ∗ s1tv Λª#°ptl ~对照组由高至
低浓度分别加入 |个与 פ±2 同比稀释的 ∞2 ∀空
白组只加培养基和细胞不加药物 ∀每组各设 v个平
行孔 o常规培养 w{ «o测定前 w «加入 ××液kx °ª#
°pt溶于 s1st °²¯#pt o³‹ z1u的 °…≥ o过滤除菌 o
w ε 避光保存 o保存时间不宜超过 u周lts ˏr孔 ovz
ε ox h ≤’u培养 w «o离心ku sss µ#°¬±pt ots °¬±l o
沉淀中加入二甲基亚砜 tss ˏr孔 o待结晶充分溶解
后 o于全自动酶标仪测定每孔吸光度 Αw|s ±°值 o计算
相应的细胞生长率 ν 和分别计算细胞生长 |x h o
{x h相应的药物浓度 Œ≤|x oŒ≤{x ∀ νk h l €实验组或
对照组 Α值r空白对照组 Α值 ≅ tss h ~Œ≤ ν € Χt n
kΑt p Αs ≅ νlrkΑt p Αul ≅ k Χu p Χtl ∀Œ≤ ν p生长率
是 ν 时的药物浓度 ~Αs p 空白对照品的平均吸光
度 ~Χt p ν 落在区间较小的浓度值 ~Χu p ν 落在区
间较大的浓度值 ~Αt p Χt 对应的吸光度值 ~Αu p Χu
对应的吸光度值 ∀
214 ××法检测细胞抗药性逆转
取对数生长期细胞kt1w ≅ tsxl接种于 |y孔培
养板内 o每孔均加入 tss ˏ的 tyws培养液 o每组由
高浓度至低浓度加入倍比稀释的 „⁄kxs ∗ s1u Λª#
°ptl ∀实验组 ´每孔加入无毒剂量 פ±2 ~实验组
µ每孔加入低毒剂量 פ±2 ∀对照组加入与实验组
´同比稀释的 ∞2 ∀设阴性对照 o余操作方法同 213
项下 o计算 Œ≤xs及逆转倍数 ∀逆转倍数 €耐药细胞
逆转前 Œ≤xsr耐药细胞逆转后 Œ≤xs ∀
3 结果
311 细胞毒性
根据实验结果计算实验组和对照组细胞生长
率 o见表 t ∀以药物浓度作横坐标 o细胞生长率作纵
#s{st#
第 u|卷第 tt期
ussw年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1u| oŒ¶¶∏¨ tt
‘²√¨ °¥¨µoussw
坐标绘制生长曲线 ∀细胞生长率 ∴|x h的药物浓度
为无毒剂量 ~细胞生长率 {x h ∗ |s h为低毒剂量 ∀
פ±2 的无毒剂量为 s1u Λª#°pt o低毒剂量为 s1z
Λª#°pt ~∞2 的无毒剂量为 s1z Λª#°pt ∀
表 t 实验组和对照组细胞生长率
药物浓度rΛª#°pt פ±2 组r h ∞2 组r h
vu1ss vt1z zw1{
ty1ss vt1y zx1t
{1ss vu1s zz1t
w1ss vx1s z{1v
u1ss yv1y {y1x
t1ss {t1y |t1|
s1xs {y1y |v1t
s1ux |t1{ tss1x
s1tv tsv1x
312 细胞药敏性及逆转抗药性
将各组实验数据分别代入公式计算出 Œ≤xs和逆
转倍数 o见表 u ∀
表 u 实验组和对照组对 Žxyur„⁄ 的抗药性逆转作用
实验分组 剂量rΛª#°pt Œ≤xsrΛª#°pt 逆转倍数
阴性对照 tx1ut
´  s1u s1u w1{{tl v1tt
µ  s1z s1z v1{vtl v1|z
对照组 x1z| u1yu
注 }与对照组比tl Π s1st
4 讨论
411 研究表明丹参的抗肿瘤作用主要表现在以下
几个方面 }细胞毒作用≈v  ~对肿瘤细胞的诱导分化作
用≈w  ~诱导细胞凋亡≈x  ~逆转肿瘤细胞多药耐药 ∀与
抗肿瘤药物合用可减少剂量 o增加治疗作用 ∀但目
前丹参酮的应用主要是治疗冠心病 !痤疮 !痛经 !失
眠及抗菌消炎等非肿瘤领域 o抗肿瘤方面的临床应
用尚未见报道 ∀
412 本文进行的 פ±2 对 Žxyu细胞杀伤作用研究
结果表明 oפ±2 对 Žxyur„⁄ 有细胞毒性作用 o在
s ∗ { Λª#°pt该毒性作用具有明显的剂量依赖性 ∀
其非细胞毒性剂量 s1u Λª#°pt ~低毒剂量 s1z Λª#
°pt ∀空白微乳在上述剂量下无毒性 ∀故在逆转
试验中 פ±微乳的剂量选择 s1u Λª#°pt ∀
413 פ±2ks1u Λª#°ptl与 „⁄ 合用可显著降低
„⁄ 对 Žxyur„⁄ 细胞的 Œ≤xs o其抗药性逆转倍数
为 v1tt倍 ∀试验表明空白微乳也有明显的 ⁄• 逆
转作用 o逆转倍数为 u1yu ∀前者的逆转倍数大于后
者 o说明该剂型对 ⁄• 逆转有增效作用 ∀低毒剂量
的 פ±2 逆转倍数为 v1|z o说明逆转作用有一定的
剂量依赖性 ∀
≈参考文献 
≈t  王红喜 1微乳制剂的研究进展 1 国外医学#药学分册 ot||y ouv
kwl }uts1
≈u  徐 希 o张钧寿 1 新型多药耐药逆转剂 ) 载体给药系统 1 国外
医学#肿瘤学分册 ot||| ouyktl }ts1
≈v  梁 勇 o羊裔明 o袁淑兰 1 丹参酮药理作用及临床应用研究进
展 1 中草药 ousss ovtkwl }vsw1
≈w  袁淑兰 o黄光琦 o黄韧敏 o等 1 丹参酮体外诱导分化作用及其机
制的研究 1癌症 ot||y otxkyl }ws{1
≈x  黄韧敏 o袁淑兰 o宋 毅 o等 1 丹参酮诱导 ‹2ys细胞分化及凋
亡的流式细胞术分析 1 中国肿瘤临床 ot||z ouwkzl }xss1
Εφφεχτ οφ τανσηινονε µιχροεµ υλσιον ον ρεϖερσινγ Μ∆Ρ ιν ηυµαν τυµ ορ χελλσ
ƒ„‘±¬±ªt oƒ„‘Š∏¤±ª2­∏±t o ≠„‘Š °¨ ¬2°¤±u o‹„’ ¬±2¼¤²u
(t1 Σεχονδ Αφφιλιατεδ Ηοσπιταλ οφ ∆αλιαν Μεδιχαλ Υνιϖερσιτψ, ∆αλιαν ttysuz , Χηινα ;
u1 ∆αλιαν Μεδιχαλ Υνιϖερσιτψ, ∆αλιαν ttysuz , Χηινα)
[ Αβστραχτ] οβϕεχτιϖε : ײ¶·∏§¼·«¨ ©¨©¨¦·²©·¤±¶«¬±²±¨ °¬¦µ²¨ °∏¯¶¬²±kפ±2l ²±·«¨ ¦¼·²·²¬¬¦¬·¼·²«∏°¤±¯¨ ∏®¨ °¬¤2¦¨¯¯2¯¬±¨ kŽxyur
„⁄l ¤±§·«¨ µ¨√ µ¨¶¬²± ²© ⁄• ιν ϖιτρο1 Μετηοδ : ¬¦µ²¨ °∏¯¶¬²± ¥¨¬±ª¶∏³³²¶¨§¤¶·«¨ ¦²±·µ²¯ ªµ²∏³o×× ° ·¨«²§¬¶¤§²³·¨§·²·¨¶·¦¼·²·²¬2
¬¦¬·¼ ¤±§·«¨ µ¨√ µ¨¶¨ ²© ⁄• 1 Ρεσυλτ : ’¥√¬²∏¶¦¼·²·²¬¬¦¬·¼·² Žxyur„⁄ º¤¶²¥¶¨µ√ §¨©²µ·¤±21 ≤¨¯¯ ±²±2·²¬¬¦§²¶¤ª¨ kªµ²º·« ∏´²·¬¨·¼ 
|x h l ²©×¤±2 ¬¶s1u Λª#°pt1 ²º·²¬¬¦§²¶¤ª¨ kªµ²º·« ∏´²·¬¨·¼ {x ∗ |s h lº¤¶s1z Λª#°pt1 ≤¨¯¯ ±²±2·²¬¬¦§²¶¤ª¨ ²© º¤¶s1z Λª#
°pt ¤±§ ²¯º·²¬¬¦§²¶¤ª¨ º¤¶t1u Λª#°pt1 ≤¨¯¯±²±2·²¬¬¦§²¶¤ª¨ ²©×¤±2 ks1u Λª#°ptl¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ ²¯º µ¨¨§·«¨ Œ≤xs ²©Žxyur„⁄ ¥¼
„⁄k Π s1stl o¤±§µ¨√ µ¨¶¨§ ⁄• º¤¶v1{{·¬° ¶¨1 ²º·²¬¬¦§²¶¤ª¨ ²©×¤±2 µ¨√ µ¨¶¨§ ⁄• º¤¶v1|z·¬° ¶¨1 ∞2 ks1u Λª#°ptl µ¨2
√ µ¨¶¨§ ⁄• º¤¶u1yu·¬° ¶¨1 Χονχλυσιον : ׫¨ µ¨¶∏¯·¬±§¬¦¤·¨¶·«¤··¤±¶«¬±²±¨ °¬¦µ²¨ °∏¯¶¬²± ³²¶¶¨¶¶¨¶¦¨¯¯2·²¬¬¦ ©¨©¨¦·¶²± «∏°¤± ¯¨ ∏®¨ °¬¤
¦¨¯¯2¯¬±¨ ¤±§ °¤¼ µ¨√ µ¨¶¨ ⁄• ²©·∏°²µ¦¨¯¯¶1
[ Κεψ ωορδσ] ·¤±¶«¬±²±¨ ~ °¬¦µ²¨ °∏¯¬¶²±~ ⁄• ~µ¨√ µ¨¶¬±ª©∏±¦·¬²± ≈责任编辑 方文贤 
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第 u|卷第 tt期
ussw年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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