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Effect of ligustrazine on injury of vascular endothelial cells ECV-304 incluced by hypoxia and lack of glucose

川芎嗪对缺氧缺糖状态下培养的血管内皮细胞ECV-304的影响



全 文 :Προτεχτιϖε εφφεχτσ οφ σαλιδροσιδε
ον ινϕυρψινδυχεδ βψ ηψποξια/ ηψπογλψχεµια ιν χυλτυρεδ νευρονσ
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(t . Χολλεγε οφ Ρεσουρχεσ Σχιενχε & Τεχηνολογψ, Βειϕινγ Νορµαλ Υνιϖερσιτψ, Βειϕινγ tss{zx , Χηινα ;
u . Τηε Κεψ Λαβορατορψ οφ Χηινεσε Ιντερναλ Μεδιχινε οφ Μινιστρψ οφ Εδυχατιον , ∆ονγζηιµεν Ηοσπιταλ,
Βειϕινγ Υνιϖερσιτψ οφ Χηινεσε Μεδιχινε , Βειϕινγ tsszss , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¶·∏§¼·«¨ ³µ²·¨¦·¬√¨ ©¨©¨¦·¶²©¶¤¯¬§µ²¶¬§¨ ²±¬±­∏µ¼¬±§∏¦¨§¥¼ «¼³²¬¬¤r«¼³²ª¯¼¦¨ °¬¤¬± ¦∏¯·∏µ¨§≥‹2≥≠x≠
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≈责任编辑 古云侠 
川芎嗪对缺氧缺糖状态下
培养的血管内皮细胞 ∞≤∂2vsw的影响
林 蓉 3 o刘俊田 o甘伟杰 o王维蓉
k西安交通大学 医学院 药理教研室 o陕西 西安 ztssytl
≈摘要  目的 }观察缺氧缺糖条件下血管内皮细胞k∞≤∂2vswl释放乳酸脱氢酶k⁄‹l !一氧化氮k‘’l !丙二醛
k⁄„l水平和细胞膜流动性的变化及川芎嗪对它们的影响 ∀方法 }缺氧缺糖诱导血管内皮细胞损伤 o自动生化分析仪
测定培养液和细胞层中 ⁄‹活性 ~用比色法测定细胞培养液中 ‘’ 水平 ~用荧光法检测细胞内脂质过氧化产物 ⁄„
以评价脂质过氧化程度 ~荧光偏振法测定内皮细胞膜流动性 ∀结果 }缺氧缺糖引起的血管内皮细胞 ⁄‹ 释放增加 !
⁄„生成增多和膜流动性增高 o‘’水平降低 ∀而川芎嗪可抑制缺氧缺糖引起的血管内皮细胞释放 ⁄‹ o⁄„生成和
降低细胞膜流动性 o提高 ‘’水平 ∀结论 }川芎嗪可保护缺氧缺糖诱导血管内皮细胞的损伤 o其作用机制有待进一步
研究 ∀
≈关键词  川芎嗪 ~血管内皮细胞 ∞≤∂2vsw ~膜流动性 ~缺氧缺糖
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswlsx2swyu2sv
≈收稿日期  ussv2sx2tu
≈通讯作者  3林蓉 oר¯ }ksu|l{uyxxtyx o∞2°¤¬¯ }¯¬±µ²±ªƒ °¤¬¯q¬­·∏q¨§∏q¦±
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第 u|卷第 x期
ussw年 x月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ x
¤¼oussw
血管内皮细胞的结构及功能改变 o在血管性疾
病的发病中具有重要作用 ∀而缺血缺氧后可明显损
害内皮细胞的功能 ∀因此研究保护血管内皮细胞损
伤的药物 o对治疗此类疾病具有重要意义 ∀川芎嗪
k¯¬ª∏¶·µ¤½¬±¨ l是从临床上常用的活血化瘀中药川芎
中提取的有效成分 o主要用于治疗心绞痛和脑血管
等疾病 ∀实验研究发现川芎嗪具有明显改善心血管
功能的作用 o扩张小动脉 !静脉 o抗血小板聚集 o改善
微循环及抑制血管平滑肌增殖的作用≈t ou 等 ∀本实
验利用体外细胞培养的方法 o研究川芎嗪对缺氧缺
糖诱导内皮细胞损伤的作用及与 ⁄‹ o‘’ o⁄„的
水平和膜流动性关系 ∀
1 材料
1 q1 药品及试剂 川芎嗪为常州制药厂生产 o批号
||tsuz ~四甲氧基丙烷和 t oy 二苯基 t oy2已三稀
k⁄°‹l为 ≥¬ª°¤公司 ~⁄∞ 培养基为美国 Š¬¥¦²公
司 ~新生小牛血清为杭州四季青生物工程材料研究
所 ~乳酸脱氢酶k ¤¯¦·¤·¨ §¨«¼§µ²ª¨±¤¶¨ o⁄‹l试剂盒
为南京建成生物工程研究所 ~硫代巴比妥酸k·«¬²¥¤µ2
¥¬·∏µ¬¦¤¦¬§oׅ„l为北京化工厂 ~十二烷基硫酸钠
k¶²§¬∏° §²§¨¦¼¯ ¶∏¯³«¤·¨ o≥⁄≥l为苏州第二化工研究
所 ∀
2 方法
2 q1 内皮细胞培养
人脐静脉内皮细胞系 ∞≤∂2vsw引自美国组织培
养库k„××≤≤ ≤•Œ2t||{l o培养于 ⁄∞ 培养液中 o其
中含超级小牛血清 ts h o青霉素ktss ˜#°ptl和链
霉素ktss °ª#ptl ovz ε 下置于 x h的 ≤’u 培养箱
中 ∀
2 q2 川芎嗪对缺氧缺糖损伤的 ∞≤∂ 释放 ⁄‹ 的
影响
取 ∞≤∂ u ≅ tswr孔 o在含 x h小牛血清的培养液
中培养 uw «o然后分正常对照组k⁄∞ 培养基常规
培养l o缺氧缺糖组和缺氧缺糖加药物组k加入含不
同浓度川芎嗪 s qt os qv os q| °°²¯#ptl o培养基用
预先通以高纯度氮气 t «的 ⁄∞ o培养板置于含
|x h ‘u o≤’u混合气体的培养缸内k缺氧环境l培养
uw «o收集上清液 ∀再加入 xs ˏ的 t h的十二烷基
硫酸钠k≥⁄≥l o然后收集常氧 !缺氧缺糖细胞层 o用
生化自动分析仪测定培养液和细胞层中的 ⁄‹量 o
计算 ⁄‹释放的百分比 ∀
⁄‹释放率k h l € ∂¶rk∂¶n ∂¦l ≅ tss h
∂¶代表培养液中 ⁄‹ 的活性单位 ~ ∂¦代表细胞层的
⁄‹活性单位
2 q3 川芎嗪对缺氧缺糖损伤的 ∞≤∂ 内 ⁄„ 的影

∞≤∂ 在含 x h 小牛血清的培养液中培养 uw «
后 o加入川芎嗪ks qt os qv os q| °°²¯#ptl o然后再培
养 uw «o按上述方法收集常氧 !缺氧培养液 ∀然后每
孔加 t h ≥⁄≥ tss ˏo振荡数分钟 o使细胞完全裂解 o
收集细胞液 o以四甲氧基丙烷为标准品 o用 ׅ„ 法
测定细胞内脂质过氧化代谢产物 ⁄„的含量 ∀
2 q4 川芎嗪对缺氧缺糖损伤的 ∞≤∂ 上清液中 ‘’
的影响
按上述方法给药处理后 o分别收集常氧 !缺氧条
件下每孔细胞上清液 o用比色法测定细胞培养液中
‘’水平 ∀
2 q5 川芎嗪对缺氧缺糖损伤的 ∞≤∂ 膜流动性的影

按上述方法给药处理后 o胰酶消化细胞 o用 °…≥
调成 t ≅ ts|个#pt细胞悬液 o取 v °悬液加入 u ≅
tsp y ⁄°‹ t °ovz ε 水浴 vs °¬±o测定其荧光偏振
度 o由公式≈v 求出 Γ o膜流动性用 Γ表示 oΓ值越小 o
膜流动性越大 ∀
2 q6 统计处理
数据以 ξ ? σ表示 o以 τ检验进行显著性分析 ∀
3 结果
3 q1 川芎嗪对缺氧缺糖损伤的 ∞≤∂ 释放 ⁄‹的影
响k见表 tl
表 t显示 o缺氧缺糖可使细胞释放 ⁄‹ 增加 o
而川芎嗪可减少缺氧缺糖引起的 ⁄‹释放 o且呈剂
量依赖性 ∀当川芎嗪浓度为 s qv °°²¯ #pt时 o其
⁄‹水平已显著下降 k Π s qsxl ∀
3 q2 川芎嗪对缺氧缺糖损伤的 ∞≤∂ 内 ⁄„ 的影

表 t显示 o缺氧缺糖可使 ∞≤∂ 细胞内 ⁄„ 含
量升高 o而川芎嗪可抑制缺氧缺糖引起的 ⁄„ 升
高 o且呈剂量依赖性 ∀当川芎嗪浓度为 s qt °°²¯ #
pt时 o ⁄„ 与模型组比较有显著性差异k Π  s q
sxl ∀
3 q3 川芎嗪对缺氧缺糖损伤的 ∞≤∂ 上清液中 ‘’
的影响 k见表 tl
表 t显示 o缺氧缺糖可使 ∞≤∂ 的 ‘’含量降低 o
而川芎嗪作用 ∞≤∂ 后 o‘’水平剂量依赖性升高 o当
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第 u|卷第 x期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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川芎嗪为 s qv °°²¯#pt时 o与模型组比较存在显著
性差异k Π s qsxl ∀
3 q4 川芎嗪对缺氧缺糖损伤的 ∞≤∂ 膜流动性的影

表 t显示 o缺氧缺糖可使 ∞≤∂ 细胞膜流动性升
高 o而川芎嗪作用于 ∞≤∂ 后 o膜流动性剂量依赖性
降低 o当川芎嗪为 s qt °°²¯#pt时 o与模型组比较
存在显著性差异k Π s qstl ∀
表 t 川芎嗪对缺氧缺糖损伤的 ∞≤∂ 释放 ⁄‹ o⁄„ o‘’ oΓ的影响k ξ ? σ, ν € {l
组别
剂量
r°°²¯#pt
⁄‹ 释放
r h
⁄„
rΛ°²¯#pt
‘’
rΛ°²¯#pt
Γ
空白组 u{ qzz ? z quv t qyz ? s qww u{ qv ? w qz u qvv ? s qts
模型组 ys qst ? | qvuul w q{{ ? s qywul tz qy ? w qtul t qwu ? s qs{ul
川芎嗪 s qt xv q|y ? { qyx w qsv ? s qxtvl t| qs ? x qw t qxz ? s qttwl
s qv wx q{z ? ts qy|vl v qtu ? s qzuwl uu qs ? v q|vl t qzy ? s qtswl
s q| vw qxy ? ts qxwwl u q{z ? s qytwl uw qw ? w qywl u qtu ? s qtwwl
注 }与空白组相比tl Π s qsx oul Π s qst ~与模型组相比 ovl Π s qsx owl Π s qst
4 讨论
大量资料表明≈w  }不同源性的内皮细胞缺氧后
均有活性氧的大量产生 o而自由基 !活性氧 !脂质过
氧化物等均可引起内皮细胞损伤 ∀⁄‹是细胞损伤
的重要标志之一 o当细胞缺血缺氧时细胞浆内氧化
依赖性酶及细胞膜结构受到影响 o细胞通透性明显
增加 o细胞内有氧代谢减少 o无氧代谢增加 o因此细
胞内 ⁄‹产生增加 o细胞内漏出相应增加 ~当缺氧
缺糖进一步加重 o细胞线粒体内呼吸链功能减退 o细
胞能量供应减少甚至缺失 o导致细胞代谢功能减退
直至死亡 ∀本实验结果显示 }缺氧缺糖可使内皮细
胞释放 ⁄‹ 增加 o而当预先加入川芎嗪后 o可减少
缺氧缺糖诱导的 ∂∞≤释放⁄‹ ∀细胞膜为液态双层
膜 o正常的细胞功能活动要求适度的膜流动性 o膜流
动性明显增高和降低都将影响细胞正常的活动 ∀当
细胞缺氧时 „×°减少 o细胞膜上酶活性降低 o严重时
引起细胞膜功能或结构的改变 o从而导致膜流动性
的改变 ∀本实验发现 }缺氧缺糖引起的血管内皮细
胞膜流动性增高 o川芎嗪可抑制此作用 o降低细胞内
膜流动性 ∀当膜通透性增高时 o膜离子通道开放 o细
胞内 ≤¤u n o‘¤n等离子增高 o活化自由基 o使膜脂质
发生过氧化损伤≈x  ∀本实验证实 }缺氧缺糖能增加
⁄„生成 o促进细胞脂质过氧化反应 o川芎嗪可降
低缺氧缺糖诱导的内皮细胞生成 ⁄„ o随着药物浓
度增加 o细胞内脂质过氧化物生成减少 ∀以上结果
表明 o川芎嗪通过稳定细胞膜 o降低细胞通透性 o抗
细胞脂质过氧化反应而保护血管内皮细胞的损伤 o
但是否通过离子通道而降低细胞内 ≤¤u n o‘¤n等 o有
待进一步研究 ∀
此外 o内皮细胞生成 ‘’具有抑制多种血细胞对
内皮的黏附和损伤 o调节血管张力等作用≈y  ∀在病
理条件下 o如高血压 !高血脂 !糖尿病 !„≥ !心力衰竭
等都有内皮细胞受损 o表现是 ‘’ 的储备或基础 ‘’
的减少≈z  ∀本实验研究体外川芎嗪对内皮细胞产生
‘’的影响 o结果发现 o缺氧缺糖使 ‘’ 产生减少 o而
川芎嗪可提高在缺氧缺糖状态下 ‘’水平 o提示川芎
嗪还可通过增加 ‘’释放保护内皮细胞的损伤 ∀
≈参考文献 
≈t  宫伟星 q川芎嗪心血管药理的研究进展 q中国医院药学杂志 o
t||s otskttl }xtt q
≈u  罗红琳 o袁淑兰 o肖 静 q川芎嗪抗离体培养动脉平滑肌细胞作
用的实验研究 q华西药学杂志 ot||z otuktl }y q
≈v  强蕴蕴 o张 阳 o支 周 o等 q应用荧光偏振技术研究缺氧再灌
注培养血管内皮细胞膜流动性 q西安医科大学学报 ousst ouu
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≈x  董建文 o时按云 q内皮细胞在缺血再灌注损伤中的应用 q国外医
学#生理 !病理科学与临床分册 ot||y otykwluzx q
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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Εφφεχτ οφλιγυστραζινε ον ινϕυρψ οφ ϖασχυλαρ ενδοτηελιαλ χελλσ
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k ∆επτ οφ Πηαρµαχολογψ, Μεδιχαλ Σχηοολ οφ Ξι . αν ϑιαοτονγ Υνιϖερσιτψ, Ξι . αν ztssyt , Χηιναl
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·¬²± ¤±§·«¨ ° °¨¥µ¤±¨ ©¯∏¬§¬·¼¬±¦µ¨¤¶¨§¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ ¤±§‘’ ¯¨ √¨¯ º¤¶§¨¦µ¨¤¶¨§q°µ¨¬±¦∏¥¤·¬²± ²©∞≤∂2vsw º¬·« ¬¯ª∏¶·µ¤½¬±¨ ©²µuw «µ¨§∏¦¨§
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Χονχλυσιον : ¬ª∏¶·µ¤½¬±¨ «¤¶³µ²·¨¦·¬√¨ ©¨©¨¦·²±¬±­∏µ¼ ²© ∞≤∂2vsw ¬±§∏¦¨§¥¼ «¼³²¬¬¤¤±§ ¤¯¦®²©ª¯∏¦²¶¨ q
[ Κεψ ωορδσ] ¬¯ª∏¶·µ¤½¬±¨ ~√¤¶¦∏¯¤µ ±¨§²·«¨ ¬¯¤¯ ¦¨¯¯¶∞≤∂2vsw ~ ° °¨¥µ¤±¨ ©¯∏¬§¬·¼~«¼³²¬¬¤¤±§ ¤¯¦®²©ª¯∏¦²¶¨
≈责任编辑 古云侠 
第三届国际传统医药大会k北京 usswl通知
经中华人民共和国国务院批准 o由世界中医药学会联合会主办 !中国中医研究院承办 o世界针灸学会联合会 !中华中医药学会 !中国中西医
结合学会 !中国针灸学会 !中国民族医药学会 !中国中药协会协办 o以/传统医药与人类健康0为主题的第三届国际传统医药大会k北京 usswl定
于 ussw年 tt月 tv日 ∗ tx日在中国北京国际会议中心召开 ∀大会组织委员会主席由中华人民共和国卫生部副部长兼国家中医药管理局局长 !
世界中医药学会联合会主席佘靖教授担任 o大会学术委员会主任由中国工程院院士 !第十届全国人大教科文卫委员会委员 !中国中医研究院名
誉院长王永炎教授担任 ∀大会将进行传统医药学术交流和医药产品及成果展览 ∀大会设基础研究论坛 !教育论坛 !临床研究论坛 !药物研究论
坛 !医药管理论坛 !医药产业论坛 o开展学术交流 ∀展览由医药产品及成果展示和商务活动两部分组成 ∀
一 !大会征文
t q内容 }tl传统医药养生保健理论与实践 ~ul传统医药基本理论与基础研究 ~vl信息技术等现代科学手段在传统医药中的应用 ~wl传统医药教
育模式 !教学内容与方法 ~xl传统医药继续教育与人才培养 ~yl心脑血管疾病 !肿瘤 !艾滋病及其他重大疾病防治 ~zl传统医药在突发性公共卫
生事件中的作用与实践 ~{l传统医药临床评价 ~|l传统医药现代化研究 ~tsl传统医药标准与规范 ~ttl传统医药的可持续发展与资源的合理利
用 ~tul传统医药立法 !管理与知识产权保护 ~tvl传统医药技术 !设备与产品开发 ~twl传统医药市场营销与国际贸易 ~txl传统医药产业发展研
究 ∀
u q要求 }论文务求主题鲜明 !论据充分 !资料翔实 ∀稿件篇幅控制在 v sss字以内 ∀另附 {ss字以内的摘要k中文稿件须附 {ss字英文摘要l ~内
容包括 }目的 !方法 !结果 !结论四部分 o不用图表 ∀并请注明作者姓名 !职称 !工作单位 !联系地址 !邮政编码及电子邮箱 o以便编印大会论文 ∀
论文请用 • ²µ§文档打印 o并附 v qx寸软盘 o或以 ∞2°¤¬¯形式寄来 ∀来稿须缴纳 tss元审稿费 o若请大会翻译 o请另附 txs元翻译费 ∀文责自负
请自留底稿 o恕不退稿 ∀论文截止日期 ussw年 {月 tx日 ∀大会将进行优秀论文评选 o参会代表授予国家级一类继续教育学分 {分 ∀详情请浏
览网址 }• • • q≤„×≤  q¤¦q¦±参会代表可以网上注册 ∀
联系方式 }第三届国际传统医药大会秘书处 o联系地址 }北京东直门内南小街 ty号 中国中医研究院办公楼 t层 tvt室ktsszssl o联系电话 }
{y2ts2ywsvuw|u oywstwwtt转 uv{z或 uv{| o传真 }{y2ts2ywsvuw|u o联系人 }李鄂 o王森林 o唐日晶 o∞2°¤¬¯}Œ≤אussw ƒ °¤¬¯q≤„×≤  q¤¦q¦±∀
二 !大会展览
t q展览内容 }tl传统医药产品 }药品k成方制剂 !配方颗粒及提取物 !饮片 !药材lr医疗器械k诊断仪器 !治疗器械 !康复保健器材lr健康相关产品
k保健食品 !特殊营养食品 !功能化妆品 !消毒用品lr医药生产加工机械 !检测仪器r医药包装材料 ~ul传统医药成果与技术 }基础研究成果r应用
研究成果r诊疗技术r产品生产技术r产品检测技术 ~vl传统医药服务 }医疗与保健服务r教育与培训r技术与研发服务r营销与贸易服务r管理服
务r金融服务r信息服务 ~wl传统医药文化 }医药历史文物及其仿制品或图片r与传统医药相关的书法字画与工艺品r传统医药图书音像制品 ∀
u q商务活动 }医疗产业投融资洽谈会r制药与健康相关产业投融资洽谈会r科技成果转让与合作洽谈会r项目推介会r新闻发布会r招商会r出口
产品供需洽谈会r进口产品供需洽谈会 ∀
联系方式 }第三届国际传统医药大会展览部 o地址 }北京东直门内南小街 ty号 北京中研国际医药公司ktsszssl o电话 }{y2ts2ywswwzyx o传
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第 u|卷第 x期
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中 国 中 药 杂 志
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