全 文 ：⁄vst树脂吸附丹参有效成分的研究
王志平 3 o范晋勇 o刘玉强 o元英进
k天津大学 制药工程系 o天津 vssszul
≈摘要 目的 }考察利用大孔树脂 ⁄vst o富集丹参水提取液中有效成分丹参素及原儿茶醛 o去除杂质 o降低出
膏率 o提高膏中有效成分含量 ∀方法 }以丹参素 o原儿茶醛为指标 o°≤ 检测分离前后有效成分的含量变化 ∀结果 }
⁄vst树脂能够有效的吸附丹参素和原儿茶醛 ∀结论 }采用 ⁄vst树脂可以作为改进分离纯化工艺 o去除杂质 o提高
粗提物中有效成分含量 ∀
≈关键词 大孔树脂 ~丹参素 ~原儿茶醛 ~°≤
≈中图分类号 u{w qu ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusswls|2s{xw2sw
丹参为常用中药 o其味苦 o性微寒 o具有活血去
瘀 !通经止痛 !清热安神的功效 o广泛应用于治疗冠
心病 !中风 !微循环障碍等疾病 ∀现多认为其有效成
分属酚酸性结构≈t2v o分析检测以丹参素kΒ2v ow二羟
基苯基乳酸l和原儿茶醛为指标 ≈w ox ∀丹参水提取
液中 o杂质很多 o成分复杂 o现有的除杂工艺多为水
提醇沉≈y ~亦有采用树脂的相关报道≈z o考察经大孔
树脂处理 o去除杂质 o富集丹参中水溶性有效成分 ∀
笔者在实验中发现 ⁄vst的吸附分离效果较好 o且未
见到有关采用本色谱条件同时检测丹参素和原儿茶
醛考察 ⁄vst树脂纯化丹参有效成分的文献报道 ∀
1 仪器与材料
°≤检测系统 }• ¤·¨µ¶×yss ≤²±·µ²¯¯¨µo• ¤·¨µ¶×
yss °∏°³o{ss色谱工作站 • ¤·¨µ¶× w{y ×∏±¤¥¯¨ ¥2
¶²µ¥¤±¦¨ ⁄¨ ·¨¦·²µ~ ·¨¯ µ¨∞p uws天平k瑞士l ~µ¬²±
²§¨¯酸度计k美国l ~⁄vst }南开大学化工厂产品
k使用前已按要求进行了筛分与预处理l ~玻璃树脂
柱 }自制带阀门玻璃柱 o近阀门端内置砂片k⁄ v
¦°l ~甲醇为色谱纯 ~冰醋酸为分析纯 ~¬¯¬³²µ¨ 超纯
去离子水 ~丹参饮片 }天津中药饮片厂 ~丹参素 }上
海医科大学植化室 o纯度在 |{ h以上 ~原儿茶醛 }中
国药品生物制品检定所 o纯度在 |{ h以上 ∀
2 实验方法与结果
2 q1 对照品溶液的配置
精密称取丹参素 s qsts w ª于 tss °容量瓶 o
≈收稿日期 ussv2sw2us
≈通讯作者 3王志平 oר¯ }ksuuluzwsuxsv o∞2°¤¬¯}ªµ¨ª²µ¼º¤±ª
¼¨²∏q¦²°
以流动相溶解 ∀精密称取原儿茶醛对照品 s qsuu s ª
于 tss °容量瓶中 o以流动相溶解 ∀吸取 | qx °
丹参素溶液于 ts °容量瓶中 o以原儿茶醛溶液稀
释至刻度 ∀以上述 u种溶液配制成丹参素为 |{ q{
Λª#°pt o原儿茶醛为 tt Λª#°pt的对照品溶液 ∀
2 q2 色谱检测条件及方法学验证
2 q2 q1 色谱检测条件 色谱分离不锈钢柱 }²√¤p
³¤®kµl ≤t{kv q| °° ≅ txs °° ox Λ°l ~柱温 }室温 ~检
测波长 u{s ±° ~灵敏度 s qsu ƒ≥ ~流动相甲醇2水2
冰醋酸kxΒ|xΒtl ~流速 t qs °#°¬±pt ~进样量 ts Λ~
在此条件下丹参素和原儿茶醛保留时间分别为 x
°¬±和 { °¬±左右 o与其他峰分开 o达到基线分离 o且
临近的位置无干扰峰 ∀见图 t o图 u ∀
图 t 丹参素和原儿茶醛标准品色谱图
t q丹参素 ~u q原儿茶醛k图 u同l
2 q2 q2 标准工作曲线 !线性范围和检测限 在上述
色谱条件下 o分别吸取丹参素 !原儿茶醛的混合对
照品液进样 o进样体积依次为 u ox oz qx ots otx ous
Λo测其峰面积 ∀分别将其峰面积k Ψ)对丹参素和
原儿茶醛的进样质量k Ξl进行线性回归 ∀丹参素
Ψ t .wy ≅ tsx n t .vu ≅ tsx Ξ , ρ s .||| w o线性范围
#wx{#
第 u|卷第 |期
ussw年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ |
≥¨ ³·¨°¥¨µoussw
图 u 丹参提取液色谱图
s qt|z y ∗ t q|zy Λª~原儿茶醛 Ψ t .sw ≅ tsx n
t .u| ≅ tsx Ξ , ρ s q||| { o线性范围 s qsuu ∗ s quu Λª∀
2 q2 q3 方法精密度 !重复性及加样回收率 精密吸
取丹参素和原儿茶醛的对照品溶液 ts Λo重复进样
x次 o记录峰面积 o得丹参素的 ≥⁄为 s qx h k ν
xl o原儿茶醛的 ≥⁄为 s q| h k ν xl ∀标准品溶液
配置后分别在 s ot ou ow o{ «进样测定 o峰面积的 ≥⁄
均在 t qs h以内 o表明丹参素和原儿茶醛在 { «内稳
定 o精密度符合要求 o方法可靠 ∀
精确吸取丹参水提取上清液 t °于 x °容量
瓶中 o以甲醇定容 o在上述色谱条件下 o进样 ts Λo
测定 o分别计算丹参素和原儿茶醛的重复性 ≥⁄o结
果丹参素 ≥⁄ t qs h k ν {l ~原儿茶醛 ≥⁄
t qx h (ν {l ∀
精确吸取丹参上清液 t °于 x °容量瓶中 o
精确加入对照品溶液 t ou °o以甲醇定容 o在上述
色谱条件下 o进样 ts Λo测定 o计算加样回收率 o结
果显示丹参素为 |z qy h k ≥⁄ t qv h oν xl o原儿
茶醛为 tsw qt h k ≥⁄ t qt h oν xl ∀
2 q3 丹参提取工艺筛选
取丹参饮片 xs ªo水回流提取 o提取 v次 o以所
得提取液中的丹参素k⁄l o原儿茶醛k°l的含量为
指标 o按 |kvwl进行设计 o优选最佳条件 ∀其因素水
平见表 t ∀取丹参水提取上清液 u °o于 ts °容
量瓶中 o加甲醇定容 o以 s qu Λ°微孔滤膜过滤 o吸取
ts Λ进样 o结果见表 u ∀方差分析见表 v o表 w ∀
表 t 正交实验因素水平表
水平 Α
溶媒用量r倍
Β
提取时间r«
Χ
浸泡时间r«
t | t s
u tt u t
v tv u qx u
由表 u o表 v o表 w可见 o以丹参素或原儿茶醛含
量为指标 o进行方差分析 o结果均为 Β因素有非常
表 u 正交实验结果 °ª
试验号 丹参素 原儿茶醛
t uts qz{x uw qv|s
u u|v qtzx v| qyxw
v vwy qtxs w| qvw{
w usw qtz{ uv qtzv
x vtw qu{u wu qvtu
y vws qtyu xs qt{w
z utv qx{w uw qz{u
{ vts q{u| wy qyzy
| vxt qv{w xs q{zu
表 v 影响丹参素提取因素的方差分析
来源 离均差平方和 自由度 方差 Φ Π
Β u| xtu quy u tw zxy qtv uwt q{x s qst
误差k Αn Χn ∆l vyy qsz{ y yt qstv
注 }Φs qst ku oyl ts q|v
表 w 影响原儿茶醛提取因素的方差分析
来源 离均差平方和 自由度 方差 Φ Π
Α tw qv{u w u z qt|t u w qssy v
Β t s{t qz| u xws q{| vst qvw s qst
Χ | qzw u w q{z u qztv t
误差 v qx| u t qz|x
注 }Φs qst ku oul t| qss oΦs qsx ku ouzl || qss
显著的差异 oΑ因素和 Χ因素无显著性差异 ∀最佳
工艺为用 tv倍量水kΑvl ou qx «提取时间k Βvl o浸泡
t «k Χtl ∀通过丹参提取工艺的正交试验及方差分
析 o可以认为 o丹参素与原儿茶醛的提取工艺相似 o
由于二者均小分子属酚酸性成分 o故可认为该工艺
可以有效的提取出丹参药材中的水溶性有效成分 ∀
2 q4 泄露曲线及最大有效吸附量
取经过预处理的树脂k分别经酸 !碱 !醇处理lys
°o蒸馏水湿法装树脂柱 ∀定量吸取丹参水提取上
清液 o控制流速 ov
∂#«pt速度流过树脂柱 o定时收
集流出液 t °于容量瓶中 o甲醇定容 o微孔滤膜过
滤 o检测流出液中丹参素和原儿茶醛的含量变化 o
在接近最大有效吸附浓度时密集取样k取流出液浓
度达到进料浓度的 |x h为最大有效吸附量l o以发
生泄漏过程中丹参上清液体积为横坐标 o以流出液
中丹参素k或原儿茶醛l浓度与原上清液的丹参素
k或原儿茶醛l比值为纵坐标 o作 ⁄vst的泄露曲线 ∀
结果如图 v o图 w ∀达到饱和吸附后 o根据所加的丹
参料液体积 o以及浓度 o计算树脂的最大有效吸附
量 ∀结果丹参素 u sus °o吸附量为 t xvy qu °ª~原
儿茶醛 t yus °o吸附量为 tyz q{ °ª∀
2 q5 解吸曲线
达到最大有效吸附量后 o用 x
∂ 蒸馏水快速置
#xx{#
第 u|卷第 |期
ussw年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ |
≥¨ ³·¨°¥¨µoussw
图 v 丹参素泄漏曲线
图 w 原儿茶醛泄漏曲线
换掉树脂柱中树脂与树脂之间的丹参上清液 o用
{s h乙醇解吸洗脱液 o以 v
∂ #«pt的流速解吸 o定
时收集流出液取样 t °o甲醇定容 o微孔滤膜过滤 o
进样 ts Λo检测丹参素和原儿茶醛的含量变化 o直
至最低检测限 o根据浓度的变化作出解吸曲线 ∀结
果如图 x o图 y所示 ∀
图 x 丹参素洗脱曲线
2 q6 原液与树脂处理工艺的对比
取适量丹参药材 o加 tv 倍量水热回流提取 v
次 o每次 u qx «o离心 o取上清液 t °于 ts °容量
瓶中 o甲醇定容 o经 °≤ 检测含量 ∀取上清液 tss
°o水浴蒸去水分 otsx ε 恒温干燥 v «o测出干膏的
重量 o计算出膏率 ∀定量称取干膏 o甲醇超声溶解 o
取上清液 o经微孔滤膜过滤 o进样 ts Λo°≤测定 o
计算膏中丹参素和原儿茶醛的含量 ∀原液与树脂处
图 y 原儿茶醛洗脱曲线
理工艺的出膏率 o膏中有效成分丹参素和原儿茶醛
的含量及回收率见表 x ∀
表 x 原液与树脂处理工艺的各项指标对比结果
工艺对比
出膏率
r h
丹参素
rª#pt
原儿茶醛
rª#pt
总有效成分
含量r h
回收率
r h
原液 xw qvt s qzy s qts t qwu tss
树脂处理 x qsz | qxx t qzu tt quz z|
3 讨论
3 q1 流动相选择曾采用甲醇2水2冰醋酸kttΒ{{Βt l
等实验 o发现丹参素不能达到基线分离 o经试验甲醇
2水2冰醋酸kxΒ|xΒt l为流动相 o丹参素与原儿茶醛
均达到理想的分离效果 ∀
3 q2 经过 ⁄vst树脂处理后 o使经树脂处理的丹参
水提液出膏率较未经树脂处理的水提取液降低 ts
倍 ~所得的粗提物固体膏中有效成分k丹参素与原儿
茶醛l的百分含量提高 {倍 o由此可见 o⁄vst树脂能
够选择性大幅度富集丹参素和原儿茶醛 ∀该分离工
艺 o可以大大的降低出膏率 o去除杂质 o富集有效成
分 o为进一步的制剂工艺奠定了良好的分离基础 ∀
≈参考文献
≈t 周长新 丹羽正武 q丹参水溶性化学成分的研究 q中国药科大学
学报 ot||| ovskyl }wtt q
≈u 顾杨洪 o张彩英 o黄桂秋 q丹参和丹参素对牛内皮细胞抗凝和纤
溶功能的影响 q上海第二医科大学学报 ot||s otskvl }us{ q
≈v 马兰英 o陈 伟 q中药抗氧化剂丹参的研究和应用前景 q中草
药 ot||| ovskxl }v|t q
≈w 韩桂茹 o赵志军 o刘铁钢 q丹参制剂中原儿茶醛及丹参素的同时
定量分析 q中成药 ousss ouuktul }{zu q
≈x 张文婷 o寿优芳 o陈碧莲 q丹参水溶性制剂中丹参素和原儿茶醛
含量的考察 q中国现代应用药学杂志 ousst ot{kwl }vsv q
≈y 李淑莉 o欧兴长 o丁安荣 q不同浓度乙醇沉淀对丹参素回收率影
响的研究 q基层中药杂志 ot||x o|ktl }ut q
≈z 陈延清 q用七种不同大孔吸附树脂精制乐脉胶囊的研究 q中成
药 ousst ouvk{l }xxv q
#yx{#
第 u|卷第 |期
ussw年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ |
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Στυδψ ον αδσορπτιον οφ ∆ανσηεν ωατερ2σολυβλε χοµ πουνδσ
ωιτη µαχροπορουσ ρεσιν ∆vst
• «¬2³¬±ªoƒ¬±2¼²±ªo ≠∏2 ¬´¤±ªo ≠≠¬±ª2¬±
( ∆επαρτµεντ οφ Πηαρµαχευτιχαλ Ενγινεερινγ , Σχηοολ οφ Χηεµιχαλ Ενγινεερινγ ανδ Τεχηνολογψ, Τιανϕιν Υνιϖερσιτψ, Τιανϕιν vssszu , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¶·∏§¼·«¨ ¤§¶²µ³·¬²± ¤±§ ±¨µ¬¦«° ±¨·²© ©¨©¨¦·¬√¨¦²°³²∏±§¶²©§¤±¶«¨ ±¶∏o¤±§³µ²·²¦¤·¨¦«∏¤¯§¨«¼§¨ ©µ²°
⁄¤±¶«¨ ± º¤·¨µ ¬¨·µ¤¦·¶¥¼ °¤¦µ²³²µ²∏¶µ¨¶¬± ⁄vst q Μετηοδ : ׫¨ ¦«¤±ª¨ ²©¤¦·¬√¨¦²°³²∏±§¶º¤¶²¥¶¨µ√ §¨¥¼ §¨·¨¦·¬±ª·«¨ ¤°²∏±·²©§¤±2
¶«¨ ±¶∏¤±§³µ²·²¦¤·¨¦«∏¤¯§¨«¼§¨ º¬·« °≤ q Ρεσυλτ ανδ Χονχλυσιον : ¤¦µ²³²µ²∏¶µ¨¶¬±¶⁄vst ¦¤± ¥¨ ∏¶¨§¬±·«¨ ³µ²¦¨¶¶²©¤§¶²µ¥¬±ª¤±§
³∏µ¬©¼¬±ª¤¦·¬√¨¦²°³²∏±§¶²©§¤±¶«¨ ±¶∏¤±§³µ²·²¦¤·¨¦«∏¤¯§¨«¼§¨ o¤±§¬±¦µ¨¤¶¨ ·«¨ ¤°²∏±·²©¤¦·¬√¨¦²°³²∏±§¶¬± º¤·¨µ ¬¨·µ¤¦·¶q
[ Κεψ ωορδσ] °¤¦µ²³²µ²∏¶µ¨¶¬±~§¤±¶«¨ ±¶∏~³µ²·²¦¤·¨¦«∏¤¯§¨«¼§¨ ~ °≤
≈责任编辑 袁桂京
超临界 ≤u萃取测定姜黄中姜黄素的实验研究
宿树兰 t 3 o吴启南u o欧阳臻t o吴德康u o陈 钧t
kt q江苏大学 制药工程系 o江苏 镇江 utustv ~
u q南京中医药大学 o江苏 南京 utssu|l
≈摘要 目的 }筛选超临界 ≤u萃取姜黄中姜黄素的最佳工艺条件 ∀方法 }采用正交试验优化超临界流体萃
取姜黄素的工艺条件 o采用 °≤法测定姜黄素含量 ∀结果 }超临界 ≤u萃取姜黄素的最佳条件 }萃取压力 ux °¤o
萃取温度 xx ε o采用无水乙醇作为夹带剂k与超临界 ≤u流体同步泵入萃取器中l o用量为 vs h o静态萃取 w «o动
态萃取 x «o≤u流量 v qx #°¬±p t ∀结论 }超临界 ≤u萃取姜黄素具有操作简便 !无有机溶剂残留的优点 o其方法可
靠 o切实可行 ∀
≈关键词 姜黄 ~姜黄素 ~超临界 ≤u萃取 ~°≤
≈中图分类号 u{w qt ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusswls|2s{xz2sw
姜黄始载于5唐本草6 o为姜科 ¬±ª¬¥¨µ¤¦¨¤¨ 植
物姜黄 Χυρχυµα λονγα q的干燥根茎 o其性燥而温 o
味苦而辛 o具有行气止痛 !通经破血 !祛风疗痹等功
效≈t o是临床上常用的中药之一 ∀现代药理研究表
明姜黄中主要有效成分姜黄素具有利胆 !降血脂 !抗
癌 !抗氧化等多方面药理作用≈u ∀有文献报道≈v2y 对
超临界 ≤u萃取姜黄中姜黄油的工艺条件进行了较
深入的研究 o其中文献≈w ox 还对姜黄中姜黄素的超
临界≤u萃取工艺条件进行了研究 o但只对各单因
≈收稿日期 ussv2st2us
≈通讯作者 3 宿树兰 oר¯ }ksxttl{z|txyw o∞2°¤¬¯ }¯¼«¶¶¯ ∏¶q
§¨∏q¦±
素的影响进行了探讨 o并未系统深入地探讨其最佳
工艺条件 ∀本实验对姜黄素超临界 ≤u萃取法的萃
取工艺条件进行了实验研究 o并采用 °≤ 测定其
含量 o筛选出超临界 ≤u最佳萃取工艺条件 ∀
1 仪器及试剂
1 q1 仪器
高效液相色谱仪k
p ×∞o⁄检测器 o• ⁄
p |x色谱工作站l o台式高速离心机k×p tyl o超
声清洗器k± p xss
l otrts 万电子天平 o超临界
≤u萃取实验台k江苏大学江苏海安应有石油设备
制造厂联合研制 o萃取器容积 t ouss °规格l ∀
1 q2 试剂及药品
甲醇k色谱纯l o水k亚沸重蒸水l o冰醋酸k分析
#zx{#
第 u|卷第 |期
ussw年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ |
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