全 文 ：雷公藤内酯醇对大鼠脑局灶性缺血再灌注后
脑神经细胞凋亡的影响
韦登明t 3 o黄光照u o张益鹄u o饶广勋u
kt1宁波大学 医学院 o浙江 宁波 vtxutt ~
u1华中科技大学 同济医学院 o湖北 武汉 wvssvsl
≈摘要  目的 }探讨雷公藤内酯醇k·µ¬³·²¯¬§¨ o׏l对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织内神经细胞凋亡的影响 ∀
方法 }采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型 ∀观察雷公藤内酯醇ks1u ∗ s1w °ª#®ªp t o¬³l对各组大鼠神经
功能缺失评分的影响 o应用免疫组化染色技术 o观察大鼠大脑中动脉闭塞侧髓过氧化物酶k°’l免疫染色阳性细胞
数 !细胞原位凋亡kט‘∞l染色阳性细胞数的变化 ∀结果 }与损伤模型组比较 o雷公藤内酯醇两治疗组可明显改善
大鼠神经功能的受损程度 o并减少 °’及 ט‘∞染色阳性细胞数 ∀结论 }雷公藤内酯醇具有抑制局灶性脑缺血再
灌注时白细胞浸润 !抗神经细胞凋亡作用 o从而改善受损的神经功能 ∀
≈关键词  雷公藤内酯醇 ~脑缺血再灌注损伤模型 ~凋亡
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswltt2ts{|2sw
≈收稿日期  ussv2sy2sv
≈基金项目  浙江省教育厅高校科研项目kussws||tl
≈通讯作者  3韦登明 oר¯ }ksxzwlyy{tuxtu o∞2°¤¬¯}º ¬¨§¨ ±ª°¬±||
ƒ ¶²«∏1¦²°
目前研究证实 o缺血再灌注后脑损伤不仅出现
神经细胞坏死 o同时出现大量凋亡细胞 ~炎细胞的浸
润与细胞凋亡密切相关≈t  ∀浸润的白细胞可直接损
害神经细胞及诱导凋亡≈u  ∀最近研究发现≈v  o抗细
胞间黏附分子2tkŒ≤„2tl单克隆抗体能选择性减少
神经细胞凋亡 o此作用可能是其脑保护作用的机制
之一 ∀笔者以往的研究表明≈w  o雷公藤内酯醇对缺
血再灌注大鼠脑组织中 Œ≤„2t的表达有明显抑制
作用 o从而抑制白细胞在血管内附壁 !浸润 o并对脑
损伤有明显保护作用 ∀而雷公藤内酯醇与缺血再灌
注大鼠脑神经细胞凋亡之间关系怎样 ‚国内外文献
尚未见报道 o本研究在建立大鼠脑局灶性缺血再灌
注损伤模型基础上 o通过应用不同剂量雷公藤内酯
醇 o观察其对缺血再灌注大鼠脑神经细胞凋亡的影
响 o并探讨其作用机制 ∀
1 材料与方法
111 药品与试剂
雷公藤内酯醇k纯度为 ||1|{ h o批号 ussssutxl
购于福建省医学科学研究所 o溶于 u h丙二醇溶液
中 o经 uss目过滤器过滤除菌后备用 ∀凋亡检测试
剂盒及白细胞髓过氧化物酶免疫组化检测试剂盒均
购于武汉博士德生物工程有限公司 ∀
112 实验动物分组及给药方法
ws只 •¬¶·¤µ大鼠 o雌雄不限 o购自同济医学院
实验动物中心 ∀随机分为假手术组k„ 组l o缺血再
灌注损伤模型组k…组l o低剂量雷公藤内酯醇治疗
组k≤组l o高剂量雷公藤内酯醇治疗组k⁄组l o每组
ts只 ∀实验开始 v §内 o先行给予雷公藤内酯醇预
处理动物 o≤组动物按 s1u °ª#®ªpt o⁄组动物按 s1w
°ª#®ªpt分别给予雷公藤内酯醇腹腔注射 o每天 t
次 o连续 v §∀ „ o…组动物则给予等容积的 u h丙二
醇溶液腹腔注射 o每天 t次 o连续 v §∀实验第 w天
造模 o„组为假手术组 o…o≤及 ⁄组大鼠脑局灶性缺
血 t «o再灌注 uw «o造模后当天仍按上述方法给予
不同剂量雷公藤内酯醇及 u h丙二醇溶液分别处理
≤ o⁄两组治疗组及 „ o…两对照组 ∀
113 动物模型制作及组织标本制备
动物模型参照文献采用 ²¯±ª¤法≈x 进行 ∀大鼠
脑缺血 t «再灌注 uw «时 o用 ts h水合氯醛kv °#
®ªptl腹腔麻醉后开胸 o用 s1| h氯化钠溶液心脏灌
注冲洗大脑 o随后用 w h多聚甲醛k用 s1t °²¯ #pt
°…≥ o³‹ z1w配制l灌注固定大脑 o固定完毕后取脑 ∀
将脑从缺血区的中央分为前后两半 o用 ts h福尔马
林后固定 uw «后 o制成 u块石蜡块 o分别用于神经
#|{st#
第 u|卷第 tt期
ussw年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1u| oŒ¶¶∏¨ tt
‘²√¨ °¥¨µoussw
细胞凋亡免疫组化染色和白细胞髓过氧化物酶免疫
组化染色 ∀
114 观察指标
11411 神经功能缺失评分 参照 ²±ª¤≈x 的方法于
再灌注 uw «后处死动物前进行 x分制评分 ∀s分 }
无神经功能缺损症状 ~t分 }不能完全伸展对侧前
爪 ~u分 }向外侧k右l转圈 ~v分 }向对侧倾倒 ~w分 }
不能自行行走 o意识丧失 ∀
11412 神经细胞凋亡 ט‘∞染色 石蜡切片 o常
规脱蜡至水 ~加新鲜配制 v h ‹u’u室温 ts °¬±o蒸馏
水洗涤 u °¬± ≅ v次 ~加复合消化液k蛋白酶 Žl消化
ts °¬±o蒸馏水洗涤 u °¬± ≅ v次 ~加标记缓冲液 ous
ˏr片 o保持切片湿润 o按每张切片取 ק×和 ⁄ŒŠ2⁄2
˜×°各 t ˏo加入 t{ ˏ标记缓冲液 o混匀后成标记
液 ∀甩去切片上多余缓冲液体后 o加标记液 us ˏr
片 ovz ε ou «∀ °…≥ 洗 u °¬± ≅ v 次 ∀加封闭液 xs
ˏr片 o室温 vs °¬±o甩去封闭液 o不洗 ∀加生物素化
抗地高辛抗体 oxs ˏr片 o置湿盒中 ovz ε ovs °¬±o
°…≥洗 u °¬± ≅ v次 ∀加链霉亲合素生物素过氧化物
酶复合物 ≥„…≤k按 tΒuss比例用 ׅ≥液稀释l ovz
ε ovs °¬±∀°…≥洗 v °¬± ≅ v次 ∀ ⁄„…显色 ts °¬±∀
苏木素复染 ∀常规脱水透明 o封片 ∀光镜下 o脑组织
切片中细胞呈棕色者为阳性细胞 ∀结果采用半定量
分析 o高倍镜下每张切片计数 {个视野中阳性细胞
数 ∀
11413 白细胞髓过氧化物酶k°’l免疫组化染色
石蜡切片 o常规脱蜡至水 ∀按 ≥„…≤ 法进行 ∀滴
加 v h ‹u’u o室温 ots °¬±o灭活内源性过氧化物酶 ~
滴加 ts h正常羊血清 o室温 otx °¬±o勿洗 ~滴加兔抗
鼠 °’单克隆抗体ktΒvssl ow ε ouw «o滴加生物素
化羊抗兔 ŒªŠ二抗ktΒussl ovz ε ot «o滴加 ≥„…≤ vz
ε ot «~随后用 ⁄„…2‹u’u显色 ts °¬±∀阴性对照实
验用 °…≥ 代替一抗 o其余步骤相同 ∀每步之间用
s1t °²¯#pt °…≥k³‹ z1wl洗 v次 o每次 x °¬±∀苏木
素复染 o常规脱水 o透明 o封片 ∀光镜下 o脑组织切片
中胞浆呈棕色的中性粒细胞为阳性细胞 ∀结果采用
半定量分析 o高倍镜下每张片计数 y个视野中阳性
细胞数 ∀
115 统计学处理
所有数据以 cξ ? σ表示 o不同组间比较采用方
差分析 o两样本比较采用 τ检验 ∀
2 结果
211 雷公藤内酯醇对各组大鼠神经功能缺失评分
的影响
„组动物神经功能缺失评分为 s ∀ …组动物有
明显神经功能缺失 ∀经雷公藤内酯醇治疗后 o≤ o⁄u
组动物神经功能缺失程度较 …组明显减轻 o与 …组
比较差异有显著性k见表 tl ∀
212 雷公藤内酯醇对各组大鼠脑组织神经细胞凋
亡的影响
„组动物大脑组织切片未见 ט‘∞染色阳性
细胞 o…组动物大脑组织见大量 ט‘∞染色阳性细
胞 o呈散在分布 o有的区域分布相对较集中 ~高倍镜
下见胞核胞浆呈棕色的阳性细胞 ∀应用雷公藤内酯
醇治疗后 o≤ o⁄u组动物大脑组织 ט‘∞染色阳性
细胞较 …组明显减少 ou组与 …组比较差异有显著
性k见表 tl ∀
213 雷公藤内酯醇对各组大鼠脑组织髓过氧化物
酶k°’l免疫组化染色阳性细胞的影响
„组动物脑组织内未见中性粒细胞浸润 o°’
免疫组化染色未见阳性细胞 ∀ …组动物脑组织见大
量 °’免疫染色阳性的中性粒细胞 ∀经雷公藤内
酯醇治疗后 o≤ o⁄ u组 °’免疫染色阳性的中性粒
细胞数较 …组明显减少 ou组与 …组比较差异有显
著性k见表 tl ∀
表 t 雷公藤内酯醇对大鼠神经功能缺失评分 oט‘∞
染色阳性细胞数及中性粒细胞浸润的影响kcξ ? σ, ν € tsl
组别
剂量
r°ª#®ªpt
神经功能
缺失评分
细胞凋亡数
r个r‹°
中性粒细胞数
r个r‹°
假手术组 p s ? s1ss s ? s1ss s ? s1ss
损伤模型组 p u1x| ? s1tw tt1sx ? t1su tz1ux ? t1tv
低剂量 ׏组 s1u t1|y ? s1tttl {1tv ? s1|{tl tt1tu ? t1sttl
高剂量 ׏组 s1w t1zy ? s1tuul y1tt ? t1svul {1vx ? t1utul
注 }与损伤模型组比较tl Π s1sx oul Π s1st
3 讨论
脑缺血再灌注后出现神经细胞凋亡已被许多实
验证实 o≤«¤µµ¬¤∏·¤µ¯¤±ª∏¨ 等≈y 利用原位标记 ⁄‘„
碎片及核染色kט‘∞染色l法 o观察大鼠大脑中动
脉闭塞k≤„’lt «后再灌注 v oy ot{ «神经细胞的
变化 o证实短暂性局灶性脑缺血后纹状体 !皮质 !海
马等部位出现大量凋亡细胞 ∀有研究表明≈z  o凋亡
细胞在脑缺血后 vs °¬±即出现 ouw ∗ w{ «达高峰 o凋
亡细胞可持续存在 w周左右 ∀本研究结果表明 o„
组动物大脑组织未见 ט‘∞免疫染色阳性细胞 o而
…组脑组织 ט‘∞免疫染色阳性细胞数量明显增
#s|st#
第 u|卷第 tt期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1u| oŒ¶¶∏¨ tt
‘²√¨ °¥¨µoussw
多 o结果提示 o神经细胞凋亡参与脑缺血再灌注损伤
的病理过程 ∀本研究结果进一步显示 o经雷公藤内
酯醇治疗后 o脑神经功能缺失评分明显改善 o≤ o⁄组
分别与 …组比较差异有显著性k Π  s1sx 和 Π 
s1stl ∀提示雷公藤内酯醇对脑损伤有保护作用 o与
笔者以往的研究结果相同≈w  ∀
脑缺血再灌注损害的发生是多种因素及多种机
制参与的复杂病理生理过程 ∀脑缺血区的白细胞浸
润是近几年来才被证实在脑缺血性损害的发生及发
展中起重要作用 ∀本研究发现 o应用雷公藤内酯醇
s1u ∗ s1w °ª#®ªpt后 o与模型损伤组比较 o≤ 组及 ⁄
组大脑组织 °’免疫染色阳性细胞数及 ט‘∞免
疫染色阳性细胞数明显减少 o两组分别与 …组比较
差异有显著性k Π s1sx和 Π s1stl ∀而 °’是中
性粒细胞及单核细胞所特有的 oט‘∞染色阳性细
胞代表凋亡细胞 ∀结果提示 }雷公藤内酯醇具有抑
制缺血再灌注大鼠脑组织白细胞浸润 !抗神经细胞
凋亡作用 ∀
关于雷公藤内酯醇在大鼠局灶性脑缺血再灌注
损伤中抗神经细胞凋亡的作用机制 o笔者认为可能
与下列因素有关 }≠ 雷公藤内酯醇通过抑制血管内
皮细胞 Œ≤„2t表达≈w  o进而抑制白细胞在缺血区脑
组织浸润 o由于浸润的白细胞数量明显减少 o导致白
细胞诱导凋亡作用减弱 o从而明显减少凋亡细胞的
产生 ∀ 由于脑缺血时 בƒ2Α参与 °xv依赖的神经
细胞凋亡≈{ o|  o雷公藤内酯醇能明显抑制脑缺血再
灌注时脑组织 בƒ2Α的表达含量≈ts  o这可能在一定
程度上减轻 בƒ2Α的致凋亡作用 ∀ ≈雷公藤内酯醇
能明显抑制脑缺血再灌注时脑组织自由基引起的脂
质过氧化损伤≈tt  o这一作用可能在很大程度上减轻
白细胞释放自由基对神经细胞的毒性作用 o从而达
到保护神经细胞免受白细胞诱导凋亡的损伤 ∀雷公
藤内酯醇在缺血再灌注中的抗神经细胞凋亡作用的
具体机制有待进一步研究加以明确 ∀
≈参考文献 
≈t  „®²³²√ ≥ ∞oŠµ¬ª²µ¬¤± Š ≥ o’√¤±¨ ¶¶¬¤± Š „1 ⁄¨ ¤¦·¬√¤·¬²± ²© ‘’ ¥¼
³²¯¼°²µ³«²±∏¦¯ ¤¨µ¯ ∏¨®²¦¼·¨¬± ³¤·¬¨±·¶º¬·«¬¶¦«¨ °¬¦¦¨µ¨¥µ¤¯ ¬±©¤µ¦2
·¬²±1 Στροκε ot||y ouz }uvvz1
≈u  ≤«²³³  o¬¬¤±ª ‘1 „±·¬¥²§¬¨¶¤ª¤¬±¶·¤§«¨¶¬²± °²¯ ¦¨∏¯ ¶¨µ¨§∏¦¨
¤³²³·²¶¬¶¤©·¨µ·µ¤±¶¬¨±·°¬§§¯¨¦¨µ¨¥µ¤¯ ¤µ·¨µ¼ ²¦¦¯∏¶¬²±¬±µ¤·¥µ¤¬±1 ϑ
Χερεβ Βλοοδ Φλοω Μεταβ ot||y oty }xz{1
≈v  ≥²µ¬¤±² ≥ Š o • ¤±ª ≠ ƒ o¬³·²± ≥ „ o ετ αλ1 Œ≤„2t §¨ ³¨ ±§¨ ±·³¤·«2
º¤¼¬¶¬±√²¯√¨ §¬±·«¨ §¨ √¨ ²¯³°¨ ±·²©±¨ ∏µ²±¤¯ ¤³²³·²¶¬¶¤©·¨µ·µ¤±¶¬¨±·
©²¦¤¯ ¦¨µ¨¥µ¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¤1 Βραιν Ρεσot||{ oz{s kul }vvz1
≈w  韦登明 o黄光照 o张益鹄 o等 1 雷公藤内酯醇在大鼠局灶性脑缺
血再灌注时抑制白细胞浸润的实验研究 1 中草药 oussv ovw
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≈x  ²±ª¤ ∞  o • ¬¨±¶·¨¬± ° • o≤¤µ¯¶²± ≥ o ετ αλ1 • √¨¨ µ¶¬¥¯¨°¬§§¯¨¦¨µ¨2
¥µ¤¯ ¤µ·¨µ¼}²¦¦¯∏¶¬²± º¬·«²∏·¦µ¤±¬¨¦·²°¼¬±µ¤·¶1 Στροκε ot|{| ous }
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≈y  ≤«¤µµ¬¤∏·2¤µ¯¤±ª∏¨ ≤ o ¤µª¤¬¯¯ Œo • ³¨µ¨¶¤ „ oετ αλ1 „³²³·²¶¬¶¤±§
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Χερεβ Βλοοδ Φλοω Μεταλot||x otx kvl }v{|1
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≈ts  韦登明 o黄光照 o张益鹄 o等 1 雷公藤内酯醇对大鼠脑局灶性
缺血再灌注后脑组织 בƒ2Α含量变化的影响 1 中国药理学与
毒理学杂志 oussw ot{kul }tut1
≈tt  韦登明 o黄光照 o张益鹄 o等 1 雷公藤内酯醇对大鼠脑局灶性
缺血再灌注脂质过氧化损伤影响的实验研究 1 中国药学杂
志 oussw ov|kwl }uyz1
Ινφλυενχε οφ τριπτολιδε ον νευροναλ αποπτοσισ
ιν ρατ ωιτη χερεβραλινϕυρψ αφτερ φοχαλισχηεµια ρεπερφυσιον
• ∞Œ ⁄¨ ±ª2°¬±ªt o ‹˜„‘Š Š∏¤±ª2½«¤²u o‹„‘Š ≠¬2ª∏u o • „’ Š∏¤±ª2¬∏±u
(t1 Μεδιχαλ Σχηοολ οφ Νινγβο Υνιϖερσιτψ, Νινγβο vtxutt , Χηινα ;
u1 Τονγϕι Μεδιχαλ Χολλεγε οφ ΗυαΖηονγ Υνιϖερσιτψ οφ Σχιενχε ανδ Τεχηνολογψ, Ωυηανγ wvssvs , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¶·∏§¼ ©¨©¨¦·²©·µ¬³·²¯¬§¨k׏l ²± ±¨ ∏µ²±¤¯ ¤³²³·²¶¬¶¬± ¦¨µ¨¥µ¤¯ ·¬¶¶∏¨ ²©µ¤·¤©·¨µ¬¶¦«¨ °¬¤2µ¨³¨µ©∏¶¬²±1
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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2 q4 阴性对照试验 精密吸取对照品溶液 !供试样品溶液 !
阴性对照样品溶液各 ts ˏo按照 2 q1 项下的色谱条件 o进
样 o测得 ‹°≤图谱 o见图 t ∀
图 t ‹°≤ 图谱
„1黄芪甲苷对照品 ~…1 三金结肠康胶囊样品 ~≤1 阴性对照样品 ~
¤1 黄芪甲苷
2 q5 线性关系考察 分别精密吸取对照品溶液 w ox oy o{ o
tx ous ˏ注入液相色谱仪 o按上述色谱条件测定峰面积 ∀
以峰面积积分值为横坐标 ! 黄芪甲苷的量 kΛªl 为纵坐标 o
绘制标准曲线 o计算回归方程 o Ψ€ t1xu n s1ss| vys wu Ξ o
ρ€ s1||| t ∀结果表明 }黄芪甲苷在 u qu{{ ∗ tt qww Λª呈良好
的线性关系 ∀
2 q6 精密度试验 取黄芪甲苷对照品溶液 o精密吸取 us ˏ
注入高效液相色谱仪 o连续进样 x次 o所得黄芪甲苷峰面积
的 • ≥⁄为 t q{ h ∀
2 q7 稳定性试验 取供试品溶液 o分别于配制后 s ou ow oy o{
«依法测定 o所得黄芪甲苷峰面积的 • ≥⁄为 t q| h o结果表
明 o供试品溶液于 { «内稳定 ∀
2 q8 重复性试验 取上述同一样品 x份 o各 u qx ªo按/供试
品溶液0的制备方法 o平行制备 x份样品 o按照上述色谱条件
进行测定 o计算黄芪甲苷含量的 • ≥⁄为 t qv h o结果表明 o测
定方法的重复性良好 ∀
2 q9 回收率试验 采取加样回收法 o取已知含量的同一样
品 x份 o各约 t qvs ªo精密称定 o分别精密加入黄芪甲苷 s q
{x{ °ªo按供试品溶液制备方法及色谱条件测定 o计算回收
率 o结果见表 t ∀
试验结果表明 o黄芪甲苷平均加样回收率在 |x h ∗
tsx h o加样回收率良好 ∀
3 样品测定
取三金结肠康胶囊样品 v批 o每批 v份 o各 u qx ªo按 2 q
3 q2 方法制得供试品溶液 ∀精密吸取各样品溶液 ts ˏ及黄
芪甲苷对照品溶液 x ots ˏo进样 o测定样品溶液中黄芪甲苷
峰面积 o用外标两点法计算黄芪甲苷的含量 o结果测得 v批
的平均含量分别为 s qszx h os qszz h os qszu h ~• ≥⁄分别为
u qs h ot qx h os q|w h ∀
表 t 黄芪甲苷回收率试验结果
称样量
rª
样品中含量
r°ª
测定量
r°ª
回收率
r h
平均值
r h
• ≥⁄
r h
t qu|| | s q|u{ t t q{tt u tsu q|
t qu|| z s q|u{ s t qz|t t tss qy
t qu|| z s q|u{ s t qzyy s |z qz tsu qs u q|
t qvv| | s q|xy z t q{xx y tsw q{
t qwt{ s t qstu x t q|sy z tsw qu
注 }加入量均为 s q{x{ s °ª
4 讨论
4 q1 供试品溶液的制备采用 u h 的氢氧化钠甲醇回流处
理 o目的是将黄芪中的其他皂苷类物质水解为黄芪甲苷≈w  ∀
4 q2 水解 u次可以将样品中其他皂苷类物质全部水解为黄
芪甲苷 ou次提取可以将样品中的黄芪甲苷全部提取出来 ∀
4 q3 黄芪甲苷的紫外末端吸收较差kΚ°¤¬ € uss q{ ±°l o如果
用紫外检测 o受试剂影响很大 o检测效果不佳 ∀ ∞≥⁄检测器
为质量型检测器 o不受外部环境干扰 o试剂在检测器中全部
蒸发 o不干扰检测 o灵敏度高 o稳定性和重现性好 o且操作方
便 o是检测黄芪甲苷的一种新型 !有效的分析方法 ∀
4 q4 本研究报告方法预处理简单 o回收率高 o重现性好 o可
作为三金结肠康胶囊的质量控制方法 ∀
≈参考文献 
≈t  陆一心 q黄芪甲苷定量方法的研究 q中成药 ot||y ot{kul }v{ q
≈u  中国药典 q一部 quw| q
≈v  周春玲 o鲁 静 q高效液相色谱2蒸发光散射检测测定黄芪中黄
芪甲甙的含量 q中国中药杂志 ousss ouxkvl }tyy q
≈w  田南卉 o杨国红 o方 颖 o等 q高效液相色谱法蒸发光散射检测
测定黄芪和制剂中黄芪甲甙含量 q药物分析杂志 ousss ouskvl }
t|| q ≈责任编辑 李 禾 
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Μετηοδ : ×µ¬³·²¯¬§¨ ¤·§²¶¨ s1u ²µs1w °ª#®ªpt º¤¶¬±·µ¤³¨µ¬·²±¨ ¤¯ ¼¯ ¬±­¨¦·¨§²±¦¨ ¤ §¤¼ ©²µw §1 ׫¨ ©²¦¤¯ ¦¨µ¨¥µ¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¤2µ¨³¨µ©∏¶¬²±
°²§¨¯ º¤¶ ¶¨·¤¥¯¬¶«¨ §º¬·«·«µ¨¤§ °¨¥²¯¬¶°¬± °¬§§¯¨¤µ·¨µ¼ ¥¨©²µ¨ ·µ¬³·²¯¬§¨ ¬±­¨¦·¬²± ²±·«¨ ©²∏µ·«§¤¼1 ‘¨∏µ²¯²ª¬¦¤¯ §¨©¬¦¬·¶¦²µ¨ ²©µ¤·¶º¤¶
√¨¤¯∏¤·¨§~¤±§¬°°∏±²«¬¶·²¦«¨ °¬¦¤¯ ·¨¦«±¬´∏¨¶º µ¨¨ ∏¶¨§·²¦²∏±·³²¶¬·¬√¨¦¨¯¯¶²© ¬¨³µ¨¶¶²© °’ ¤±§×˜‘∞¬± ¦¨µ¨¥µ¤¯ ·¬¶¶∏¨1 Ρεσυλτ :
≤²°³¤µ¨§º¬·«·«¨ ¦²±·µ²¯ ªµ²∏³o·«¨ §¨©¬¦¬·²©±¨ ∏µ¤¯ ©∏±¦·¬²± º¤¶¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼¬°³µ²√ §¨o¤±§·«¨ ±∏°¥¨µ²©¬±©¬¯·µ¤·¨ ²©±¨ ∏·µ²³«¬¯ ¤±§±¨ ∏2
µ²±¤¯ ¤³²³·²¶¬¶¬± ¦¨µ¨¥µ¤¯ ·¬¶¶∏¨ º¤¶µ¨°¤µ®¤¥¯¼ µ¨§∏¦¨§¬±·º²×2·µ¨¤·¨§ªµ²∏³¶1 Χονχλυσιον : ׫¨ µ¨¶∏¯·¶¶∏ªª¨¶·¨§·«¤·×¦¤±¬±«¬¥¬·¬±©¬¯2
·µ¤·¬²± ²©±¨ ∏·µ²³«¬¯ ¤±§§¨¦µ¨¤¶¨ ·«¨ §¨ªµ¨¨²© ±¨ ∏µ²±¤¯ ¤³²³·²¶¬¶¬± ¦¨µ¨¥µ¤¯ ·¬¶¶∏¨1
[ Κεψ ωορδσ] ·µ¬³·²¯¬§¨ ~¦¨µ¨¥µ¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¤2µ¨³¨µ©∏¶¬²±~ °²§¨¯~¤³²³·²¶¬¶ ≈责任编辑 古云侠 
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第 u|卷第 tt期
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