全 文 ：抑制作用 ,具有显著性差异 ( P < 0105、0101) ,且呈
现出一定剂量依赖关系 ;加入 L2NAM E 抑制酶活
性后 ,气管的收缩明显升高 ,收缩率从 ( 9513 ±
1317) % 升高到 (12413 ±2215) % ,且有显著性差
异。加入 L2NAM E 后 ,贝母辛组 3 个剂量均未能
抑制气管平滑肌的收缩 ,与 L2NAM E + DMSO 组
比较无显著性差异。结果见表 7。
表 7 　L2NAME 对贝母辛舒张豚鼠气管平滑肌的影响
( x ±s , n = 6)
Table 7 　Effect of L2NAME on relaxtion of peimisine
on tracheal smooth muscle of guinea pig
( x ±s , n = 6)
组　别 C/ (mmol ·L - 1) 收缩率/ %
DMSO - 951 3 ±1317
L2NAME + DMSO 01 1 1271 9 ± 611 3 3 3
贝母辛 01 023 901 5 ±1012
01 046 701 8 ±2016 3
01 092 441 7 ±2914 3 3
L2NAME + 贝母辛 01 1 + 01023 1241 3 ±2215 3
01 1 + 01046 1121 2 ±2218
01 1 + 01092 1101 8 ±2414
　　与 DMSO 组比较 : 3 P < 0105 　3 3 P < 0101 　3 3 3 P < 01 001
　　3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 　3 3 3 P < 01001 vs DMSO group
4 　讨论
　　彭泽贝母已经被确定为国产贝母属植物在江西
的新分布 ,彭泽贝母中贝母辛的量远高于市售川贝
母和浙贝母 ,目前已经建立了贝母的定量测定方
法[3 ] ,可作为彭泽贝母的特征化学成分之一 ,为建立
可靠的彭泽贝母质量标准提供了指标选择。
　　贝母的平喘作用机制一般认为与其松弛支气管
平滑肌 ,减轻气管、支气管痉挛 ,改善通气状况有关。
支配气道平滑肌的神经主要有肾上腺素能神经和胆
碱能神经 ,以及非肾上腺素能非胆碱能神经。兴奋
支气管肾上腺素能受体 ,抑制胆碱能神经或阻断 M
受体均可引起支气管平滑肌舒张。因此本实验从兴
奋或抑制受体的角度出发 ,研究贝母辛在舒张气管
平滑肌上的作用 ,从而进一步揭示贝母辛的作用靶
受体和机制。从结果可知 ,贝母辛通过作用于 M 受
体、兴奋β受体和拮抗内钙释放 ,促进生成和释放
NO 从而达到舒张气管平滑肌 ,实现平喘的作用。
离体气管法是筛选平喘药常用的实验方法。豚
鼠气管对药物的反应较其他动物气管的反应更敏
感 ,且更接近于人的气管 ,因此豚鼠的气管是离体实
验常用的标本。由于离体实验脱离了正常的生理环
境 ,所得出的结论也有一定的局限性 ,所以在以后的
研究中 ,本课题组将从整体实验出发 ,更全面充分地
考察贝母辛的作用机制。
致谢 :军事医学科学院放射与辐射医学研究所
吕秋军教授对本实验的大力支持。
参考文献 :
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正常人外周血单个核细胞对雷公藤内酯醇的耐药特征和机制的研究
张文娟 ,涂胜豪 3 ,胡永红 ,方 　赫
(华中科技大学同济医学院附属同济医院 中西医结合科 ,湖北 武汉 　430030)
摘 　要 :目的 　探讨正常人外周血单个核细胞 (peripheral blood mononuclear cells , PBMC) 对雷公藤内酯醇 (t rip2
tolide , TP) 的耐药特征和机制。方法 　采用递增 TP 剂量的浓度梯度诱导法使 PBMC 产生耐药。M TT 比色法
测定细胞对药物的敏感性及耐药指数 (resistance index , RI) ,逆转录2聚合酶链反应 (RT2PCR) 法分别检测正常对
照组和耐药组 PBMC 中多药耐药相关基因 (multidrug resistance gene , MDR1) 、多药耐药相关蛋白 ( multidrug
resistance2associated protein , MRP) 和肺耐药蛋白 (lung resistance2related protein , L RP) 的表达。酶联免疫吸附
试验 ( EL ISA) 检测上清液中 IL21β的量。结果 　和正常细胞组相比 ,耐药组细胞的群体倍增时间延长 217 h ,RI
是 1199 ,并且 MDR1 mRNA、MRP mRNA、L RP mRNA 表达量明显增加 ( P < 0101) 。TP 能显著抑制正常组 PB2
MC 分泌 IL21β ( P < 0105) ,但对耐药组的抑制作用不明显 ( P > 0105) 。结论 　TP 体外持续诱导可使正常人 PB2
MC 产生耐药 ,其耐药性的产生涉及多个相关基因的表达 ,这可能是导致类风湿关节炎 (RA) 病人临床服用雷公藤
·106·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 4 期 2009 年 4 月
3 收稿日期 :2008208207　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :张文娟 (1982 —) ,女 ,湖北省武汉市人 ,硕士 ,主要从事风湿病方面的研究。Tel : 13720161213 　E2mail : zwj221 @163. com3 通讯作者　涂胜豪　Tel : (027) 83663379 　E2mail : shtu @tjh. tjmu. edu. cn
一段时间后产生耐受的原因之一。
关键词 :雷公藤内酯醇 ; 外周血单个核细胞 ( PBMC) ; 白细胞介素21 ( IL21) ; 耐药性
中图分类号 :R28515 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0420601205
　　长久以来 ,雷公藤一直作为治疗类风湿性关节
炎 ( rheumatoid art hritis , RA) 的有效药物之一。
然而临床发现 ,在 RA 的治疗过程中 ,部分患者在
服用雷公藤一段时间后会出现对药物敏感性降低的
现象。除了患者的个体差异、疾病本身特点等因素
外 ,导致抗风湿药物失效的根本原因尚未完全清楚 ,
但细胞的耐药性可能是一个重要原因。本实验以雷
公藤的主要活性成分之一的雷公藤内酯醇为研究对
象 ,尝试用浓度梯度递增法[1～4 ] 建立正常人外周血
单个核细胞 ( PBMC) 对雷公藤内酯醇 ( triptolide ,
TP) 的耐药模型 ,旨在研究 PBMC 的耐药特性及耐
药机制 ,试图探讨雷公藤治疗 RA 疗效下降的原因。
1 　材料
111 　研究对象 :随机选取 21 名汉族健康成人志愿
者 (面向本院公开招募) ,男性 9 名 ,女性 12 名 ,年龄
21～30 岁 ,平均 2611 岁。均无自身免疫性疾病病
史和家族患病史。所有志愿者参加实验时未发现各
种急、慢性疾病。每名志愿者抽取肘静脉血 10 mL ,
用来进行细胞培养。
112 　试剂 :淋巴细胞分离液 (天津 TBD) , RPMI2
1640 培养基 ( Hyclone) 、胎牛血清 ( Hyclone) ,植物
血凝集素 ( p hytohemagglutinin , P HA ) L21668
(Sigma) , 人重组白介素22 ( interleukin22 , IL22 )
(Sigma) ,脂多糖 ( lipopolysaccharide , L PS) ( Sig2
ma) 。雷公藤内酯醇 ( t rip tolide , TP , 又名雷公藤
甲素 ) (福建省医学科学研究所 , 质量分数为
9815 % 以上) ,以二甲基亚砜 (DMSO) ( Sigma) 助
溶 ,磷酸盐缓冲液 ( PBS) 稀释 ,配制成 10μg/ mL
的贮存液。人 IL21βEL ISA 预包被试剂盒 (达科为
公司) ,R T2PCR 试剂为 Formentas、TO YOBO 公司
产品 ,逆转录2聚合酶链反应 ( R T2PCR) 引物由上
海生物工程技术有限公司合成。
113 　仪器 :UV1101 核酸分析仪 (德国 ,Biomet ra) ,
Eppendorf 梯度 PCR 仪 ,北京市六一仪器厂电泳
仪 ,凝胶成像分析系统 (英国 ,UV P 公司) ,超净工
作台 (苏州安泰空气技术有限公司) , CO2 培养箱
(美国 , SH EL2L AB) , EL X800 全自动酶标测试仪
(美国 ,Bio2Tek Inst rument s) ,L G16 —W 型高速离
心机 (北京医用离心机厂) , Sigma 低温高速离心
机 ,Olymp us 倒置显微镜等。
2 　方法
211 　PBMC 的分离和培养 :取健康志愿者肝素抗
凝血 10 mL ,加入等体积室温 PBS ,吸取淋巴细胞
分离液 10 mL 分置于 4 个试管中 ,试管倾斜约 45°,
将稀释血液各约 5 mL 在距液面上 1 cm 处缓慢注
入 ,以 2 000 r/ min 离心 20 min ,液体分为 4 层 ,用
毛细吸管轻吸出灰白色的 PBMC 悬液 ,将悬液用 5
倍体积的 RPMI21640 洗涤 2 次 ,依次以 2 000、1
500 r/ min 离心 10 min ,用含 10 % 灭活胎牛血清的
RPMI21640 完全培养基 10 mL (含 100 U/ mL 的
IL22、20μg/ mL 的 P HA ,只在前 3 d 加 P HA 刺激
增殖 ,始终加 IL22 维持培养) 定容细胞 ,加入培养
瓶 ,调整细胞终浓度为 1 ×106 / mL ,放入 37 ℃、5 %
CO2细胞培养箱中培养。
212 　建立耐药细胞 :采用浓度梯度倍增法诱导建立
耐药细胞。首先分别向生长有 PBMC 的培养瓶内
加入不同浓度的 TP ,培养 1 周后观察细胞死亡情
况。选择可将 80 % 的细胞杀死的药物浓度 ( ID80 )
作为耐药细胞培养的起始浓度 ;然后将 PBMC 置于
含有 ID80药物的完全培养基 (含 100 U/ mL 的 IL2
2、20μg/ mL 的 P HA) 中培养 ,48 h 后更换含药物
的培养液继续培养 ,药物浓度 10 倍递增 ;依此类推 ,
共经过 7 个质量浓度 (01000 1、01001、0101、011、1、
10、100 ng/ mL) 、约 15 d 的培养 ,终止药物培养后
更换为无药培养基继续培养 1 周后备用。
213 　细胞生长曲线的绘制及倍增时间的测定 :分别
取生长状态良好的 PBMC、耐药的 PBMC ,记为
PBMC 组和 PBMC/ TP 组 , 制备成单细胞悬液
(1 ×105 / mL ) , 接种至 24 孔板中 , 每孔 1 mL ,
37 ℃、5 % CO2 培养箱中培养。每天取 3 个复孔 ,
M T T 法检测各孔吸光度值 ( A 490 ) ,连续观察 7 d。
以培养时间为横坐标 ,细胞的 A 490 为纵坐标绘制生
长曲线。根据 Pat terson 公式计算细胞倍增时间
[ Td = T ×lg2/ lg ( N t / N 0 ) ,其中 Td 为细胞倍增时
间 , T 为细胞由 N 0增至 N t所需时间 , N 为细胞数 ]。
214 　MTT 药敏实验 :用 MTT 法检测 PBMC、PB2
MC/ TP 对 TP 的敏感性。分别取对数生长期的细胞
制成单细胞悬液 (5 ×104 / mL) ,接种至 96 孔板中 ,每
孔体积为 200μL ,即细胞终浓度为 1 ×104 / mL ,分别
加入质量浓度为 0101、011、1、10、100 ng/ mL 的 TP ,
·206· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 4 期 2009 年 4 月
每个药物质量浓度设 6 个复孔 ,放入 CO2 培养箱 ,
在 37 ℃、5 % CO2及饱和湿度条件下 ,培养 24 h 后 ,
加入 M T T 20μL/ 孔 ,继续孵育 4 h ,离心 (1 000 r/
min , 5 min) ,吸弃孔内培养液 ,加入 DMSO 100
μL/ 孔 ,振荡 10 min ,于全自动酶标仪测波长 490
nm 处 A 490 。以不含胎牛血清的 RPMI21640 作为空
白对照。计算细胞存活率 (存活率 = 实验孔 A 490 /
对照孔 A 490 ×100 %) 。以药物质量浓度的对数为横
坐标 , 存活率为纵坐标绘制浓度效应曲线。用
SPSS 软件进行曲线拟合 ,计算抑制 50 % 细胞生长
的浓度 ( IC50 ) 及耐药指数 ( RI , RI = 耐药细胞
IC50 / 亲本细胞 IC50 ) 。
215 　R T2PCR 检测细胞耐药相关基因 MDR1、
MRP、L RP mRNA 的表达 :分别取生长状态良好的
PBMC 和 PBMC/ TP , 参照说明书提取细胞总
RNA ,用核酸分析仪检测 RNA 的浓度和纯度 ,取
A 260 / A 280值在 118～210 的 RNA 进行实验 ,引物由
上海生物工程技术有限公司合成 ,引物设计见表 1。
在 25μL 反应体系中取 5μg 的 RNA 逆转录合成
cDNA 单链进行 PCR 扩增 ,扩增条件为 :94 ℃预
变性 5 min ;MDR1 :94 ℃变性 50 s ,56 ℃退火 50
s ,72 ℃延伸 1 min ,72 ℃、10 min ; MRP :94 ℃变
性 50 s ,54 ℃退火 50 s ,72 ℃延伸 1 min ,72 ℃、
10 min ;L RP :94 ℃变性 1 min ,60 ℃退火 1 min ,
72 ℃延伸 1 min ;β2actin1 (北京奥科生物技术有限
责任公司) : 94 ℃变性 1 min ,59 ℃退火 1 min ,
72 ℃延伸 1 min ,72 ℃、7 min ;β2actin2 :94 ℃变性
50 s ,56 ℃退火 50 s ,72 ℃延伸 1 min ,72 ℃、10
min ;扩增的循环数分别为 33、32、31、33、32 个循
环。扩增产物经 115 % 琼脂糖凝胶电泳 ,于凝胶成
像分析仪上进行吸光度扫描 ,进行电泳条带分析 ,以
目的条带与β2actin 的相对积分吸光度值表示结果。
216 　EL ISA 检测细胞因子 :分别取生长状态良好
的 PBMC 和 PBMC/ TP ,每份标本分 2 组 ,分别加
表 1 　PCR 引物序列和产物长度
Table 1 　Primer sequence and product length of PCR
引物名称 引物序列 引物长度/ bp
MDR 上游25′2CCA TCA TTGCAA TA GCA23′ 157
下游25′2GTTCAAACTTCTGCTCCTGA23′
MRP 上游25′2GGGAA TTCTGGGACTGGAA TGTCACG23′ 276
下游25′2CGGGA TCCA GGAA TA TGCCCCGACTTC23′
L RP 上游25′2GTCTTCGGCCTGA GCTGGTGTCG23′ 240
下游25′2CTTGGCCGTCTCTTGGGGGTCCTT23′
β2actin1 上游25′2AACTGGGACGACA TGGA GAA23′ 288
下游25′2A TACCCCTCGTA GA TGGGCA23′
β2actin2 上游25′2ACACTGTGCCCA TCTACGA GGGG23′ 366
下游25′2A TGA TGGA GTTGAA GGTA GTTTCGTGGA T23′
L PS (终质量浓度 1μg/ mL) 和 L PS + TP (终质量
浓度 514 ng/ mL) 进行处理 ,继续培养 48 h 后离心
收集培养上清液 ,保存于 - 70 ℃冰箱待检。用人
IL21β EL ISA 试剂盒检测上清液中 IL21β的量 ,采
用以下步骤操作。加样本和 Cytokine standard :加
100μL 稀释后的 Cytokine standard 入标准品孔 ,
加 100μL 样品入样品孔 ,加 100μL Standard dilu2
ent buffer 入空白对照孔。每孔加入 50μL 稀释后
的 Biotinylated antibody。盖上封板模 ,室温 (18～
25 ℃) 孵育 3 h。洗板 :扣去孔内液体 ,每孔加 300
μL 1 ×冲洗缓冲液 ,停留 1 min ,弃去孔内液体 ,重
复 3 次 ,最后 1 次在滤纸上扣干。加酶 :每孔加 100
μL St reptavidin2HRP ,室温避光孵育 20 min。重复
洗板步骤加底物 :每孔加入 100μL TMB ,盖上封板
膜 ,室温避光孵育 10～30 min。终止反应 :迅速每
孔加入 100μL Stop solution 终止反应。读板 : 10
min 内在 450 nm 波长处读值。
217 　统计学处理 :所有数据均采用 SPSS 1115 统
计软件进行分析 ,用 x ±s 表示 ,组间比较采用配对
t 检验。
3 　结果
311 　生长曲线和倍增时间 :绘制细胞生长曲线 ,按
公式计算 ,得到 PBMC 和 PBMC/ TP 的群体倍增
时间分别为 (17132 ±3118) h 和 (20102 ±2177) h ,
耐药细胞倍增时间延长 217 h ,两者差异有统计学
意义 ( P < 0105) ,耐药细胞的生长速度比亲本细胞
缓慢。细胞生长曲线见图 1。
图 1 　PBMC 和 PBMC/ TP 生长曲线 ( x ±s , n = 6)
Fig. 1 　Growth curve of PBMC and PBMC / TP
( x ±s , n = 6)
312 　细胞对 TP 的敏感性 :根据 MTT 的结果绘制浓
度效应曲线 ,用 SPSS 软件求出回归方程 ,计算得到 TP
对 PBMC、PBMC/ TP 的 IC50 值分别为 ( 18167 ±
0135) 、( 37117 ±1138) ng/ mL ,两组间差异显著
( n = 6 , P < 0105) , RI 为 1199 倍 , PBMC/ TP 对
·306·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 4 期 2009 年 4 月
TP 产生了较明显的耐药。
313 　TP 对耐药相关基因表达的影响 :图 2 分别为各
组 MDR1、MRP、LRP mRNA RT2PCR 电泳图 ;表 2
为凝胶成像分析 MDR1、MRP、LRP mRNA 相对表达
量的比较。与 PBMC 正常细胞相比 ,耐药细胞中 ,
MDR1 mRNA、MRP mRNA、LRP mRNA 表达量明
显增加 ,与正常 PBMC 细胞相比有显著性差异 ( P <
0101) 。
a2PMBC 　b2PBMC/ TP
图 2 　MDR1 ( A) 、MRP ( B) 及 L RP ( C) mRNA RT2PCR 电泳图
Fig. 2 　mRNA RT2PCR Electrophoregram of MDR1 ( A) , MRP ( B) , and L RP ( C)
表 2 　PBMC 和 PBMC / TP 耐药相关基因 mRNA
相对表达量的比较 ( x ±s , n = 18)
Table 2 　Comparison between relative expression of mRNA
in PBMC and PBMC / TP ( x ±s , n = 18)
细　胞 MDR1 MRP L RP
PBMC 0130 ±01 14 01 59 ±01 02 2188 ±0119
PBMC/ TP 0141 ±01 16 3 3 01 65 ±01 03 3 3 16112 ±3149 3 3
　　与 PBMC 组比较 : 3 3 P < 0101
　　3 3 P < 0101 vs PBMC group
314 　TP 对 PBMC、PBMC/ TP 分泌 IL21β的影响 :
如表 3 所示 , TP、L PS 同时作用时正常组 PBMC 分
泌 IL21β的量较单用 L PS 刺激时明显下降 ,两者间
差异有统计学意义 ( P < 0105) 。而耐药组细胞 TP
处理组与无 TP 处理组间 IL21β分泌量差异无统计
学意义 ( P > 0105) 。从 TP 所致的 IL21β的下降幅
度看 ,正常组 PBMC 降幅为 29167 % ,耐药组降幅
为 8186 % ,提示耐药组 TP 对 PBMC 分泌 IL21β的
抑制作用要弱于正常组。
表 3 　TP 对 PBMC、PBMC / TP 分泌 IL21β的影响
( x ±s , n = 18)
Table 3 　Effect of TP on IL21βsecreted by PBMC
and PBMC / TP ( x ±s , n = 18)
组别
IL21β/ (pg ·mL - 1)
L PS L PS + TP
降幅/
%
PBMC 221 28 ± 26191 151 67 ±19135 3 291 67
PBMC/ TP 481 67 ±102145 441 36 ±97152 81 86
　　与相应 L PS 组比较 : 3 P < 0105
　　3 P < 01 05 vs L PS group
4 　讨论
　　多药耐药发生的机制比较复杂 ,根据细胞内药
物的作用靶点大致将多药耐药归为以下几类 : (1)多
药耐药基因 (MDR1) 的过度表达 ,该基因编码的 P2
gp ,是一种相对分子质量为 117 ×108 的胞膜糖蛋
白 ,具有能量依赖的跨膜药物外排泵功能 ,它可以把
进入细胞内的药物泵出胞外 ,使细胞内药物聚积下
降 ,使细胞毒作用减弱或消失 ,从而能够在降低了的
药物环境中得以生存 ,而产生耐药性[ 5～10 ] 。人类
MDR 家族是由 MDR1 和 MDR3 组成的 ,并相应的
编码了各自的 P2gp 。MDR1 和 MDR3 同源性较
高[11 ] ,但两者的作用并不相同。转基因实验证明 ,
MDR3 与细胞的耐药性没有明显相关 ,是 MDR1 在
起主要作用 ,它能交叉抵抗若干在结构和功能上并
不相关的亲脂类药物[12 ] 。(2)非 P2gp 的多药耐药 ,
耐药性由多药耐药性相关蛋白 ( MRP) 介导。
MRP 基因是由 Cole 等从一株人小细胞肺癌 MDR
细胞 H69AR 克隆出来的一种耐药基因[13 ] 。(3) 肺
耐药蛋白的多药耐药 ,耐药性由肺耐药蛋白介导。
L RP 引起 MDR 的机制为 :通过穹隆介导使以细胞
核为靶目标的化疗药物不能经核孔进入胞核 ,或把
已经进入细胞核的药物转运至胞浆 ;另一方面将胞
浆中的药物转运至囊泡 ,降低胞核内的药物浓度使
其不能发挥细胞毒效应 ,再经胞吐机制排至细胞
外[14 ] 。(4)非典型的多药耐药 ,耐药性由拓扑异构
酶 Ⅱ的表达改变而引起。另外 ,最近研究发现 ,大部
分化疗药物杀伤肿瘤是通过诱导细胞凋亡 ,因此凋
亡耐受是一种新型的耐药机制。
目前 ,作为治疗失败的原因之一 ,耐药在肿瘤和
抗感染的治疗中已得到足够重视 ,研究非常多 ,但
RA 的治疗中却刚刚被认识。研究发现 ,RA 患者经
常伴有获得性激素耐药。且 RA 患者与健康者的
·406· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 4 期 2009 年 4 月
淋巴细胞对激素敏感性相似[15 ] 。如果对用于 RA
治疗的缓解病情抗风湿药 (甲氨蝶呤 ,DMA RD) 存
在耐药 ,可导致治疗效果不佳或治疗失败[16 ] 。
本实验结果显示 ,用浓度梯度递增法[1～4 ] 建立
PBMC 对 TP 的耐药模型 ,RI 为 1199。PBMC/ TP
组细胞生长速度减慢 ,倍增时间延长 ,同时 ,通过
R T2PCR 的方法检测得到 PBMC/ TP 组 MDR1、
MRP 和 L RP 的平均表达水平明显高于 PBMC 组。
说明耐药与 MDR1、MRP 和 L RP 表达水平相关 ,
提示 MDR1、MRP 和 L RP 的过度表达可能是导致
耐药的机制之一。研究发现 ,多药耐药发生机制中
细胞内药物浓度减低的主要机制是细胞能主动将进
入细胞内的药物排出细胞外、改变药物在细胞内的
分布和改变细胞核和细胞浆之间的转运 , 与
MDR1、MRP 和 L RP 等表达增强有关[1 ,2 ] ,这与本
实验的结果是一致的。
同时 ,用 EL ISA 试剂盒检测相应细胞上清液
中 IL21β的量。IL21β是 RA 中的促炎性细胞因子 ,
在关节局部的炎症、滑膜的增生、血管翳的形成、骨
与软骨的侵蚀破坏中发挥着重要作用。目前 , IL21
受体拮抗剂 ( IL21Ra) 治疗 RA 已取得了可喜的疗
效[17 ] 。传统中药雷公藤作为能改善 RA 病情的药
物 ,其药理作用的分子机制之一即是能下调 IL21β
等促炎性细胞因子的表达[18 ] ,调节细胞因子网络失
衡状态。本实验结果显示 , TP 能显著抑制正常组
PBMC 分泌 IL21β,但对耐药组的抑制作用不明显 ,
提示耐药组 TP 下调促炎性细胞因子 IL21β表达的
能力明显减弱 ,耐药组 PBMC 对 TP 的敏感性显著
下降 ,这可能是由于 PBMC 对 TP 产生了耐药性
所致。
原发性或继发性耐药是炎性疾病和肿瘤治疗失
败的重要原因 ,但在 RA 的治疗过程中却少有人注
意到抗风湿药物耐药的问题 ,深入研究药物耐药与
风湿性疾病之间的关系 ,对治疗方案的选择、提高临
床疗效具有重要意义。本研究从分子机制角度揭示
了耐药性与抗风湿药物之间的关系 ,但这一结论是
通过对健康人 PBMC 的体外实验获得 ,不能完全模
拟 RA 患者的体内过程 ,还有待大规模的临床研究
来验证。
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·506·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 4 期 2009 年 4 月