全 文 ：²ª¨ ±²∏¶¯¨ ∏®¨ °¬¤1 Βλοοδ ot||z o{|kvl }|xz1
Στυδψ οφ Λιανγϕιν µ υσηροοµ πολψσαχχηαριδεινδυχινγ αποπτοσισ οφ Κxyu χελλσ
• „‘Š ≠∏¨2¼¬±ªt oŒ˜ «¨ ±ª2ª∏²t oŒ ÷¬±ª2¼∏u
(t1 Τηε tστ αφφιλιατεδ ηοσπιταλ οφ Λανζηου Μεδιχαλ Χολλεγε , Λανζηου zvssss , Χηινα ;
u1 Τηε ινστιτυδε οφ λιφε ανδ ενϖιρονµεντ σχιενχε οφ Σηανγηαι τεαχηερσ χολλεγε , Σηανγηαι ustw{w , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ ¬¨³¯²µ¨ ·«¨ ©¨©¨¦·²© Λιανγϕιν µυσηροοµ ³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ ²±·«¨ ¤³²³·²¶¬¶²©Žxyu ¦¨¯¯¶1 Μετηοδ : ׫¨ ³µ²¯¬©2
µ¨¤·¬²± ©¨©¨¦·²© Λιανγϕιν µυσηροοµ ³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ ²± Žxyu ¦¨¯¯¶º¤¶²¥¶¨µ√ §¨¥¼ ¦¯²±¨ ©²µ°¤·¬±ª·¨¶·o „³²³·²¶¬¶º¤¶§¨·¨¦·¨§¥¼ ¦¼·²2°²µ2
³«²¯²ª¼ ¤±§⁄‘„ ¤ª¤µ²¶¨ ª¨¯ ¨¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶o ∞¬³µ¨¶¶¬²± ²©¤³²³·²¶¬¶2µ¨ ¤¯·¨§ ª¨ ±¨ ƒ¤¶ °• ‘„ º¤¶¦«¨¦®¨ §¥¼ • ×2°≤• 1 Ρεσυλτ : Λιανγϕιν
µυσηροοµ ³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ ¦²∏¯§¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼¬±«¬¥¬·³µ²¯¬©¨µ¤·¬²± ¤±§³µ²°²·¨ ¤³²³·²¶¬¶²©Žxyu ¦¨¯¯¶1 ׫¨ ¤³²³·²¶¬¶µ¤·¨¬±¦µ¨¤¶¨§¬± ¤§²¶¨2
§¨ ³¨ ±§¨ ±·°¤±±¨ µ1 ׫¨ µ¨ º¤¶¤³²¶¬·¬√¨¦²µµ¨ ¤¯·¬²± ¥¨·º¨¨ ±·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²© ƒ¤¶¤±§¤³²³·²¶¬¶²©Žxyu ¦¨¯¯¶1 Χονχλυσιον : Λιανγϕιν µυση2
ροοµ ³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ ¦¤±¬±«¬¥¬·³µ²¯¬©¨µ¤·¬²± ¤±§¬±§∏¦¨ ¤³²³·²¶¬¶²©Žxyu ¦¨¯¯¶1 ׫¨ ∏³µ¨ª∏¯¤·¬²± ²© ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©ƒ¤¶ª¨ ±¨ °¤¼ ¥¨ ²±¨ ²©·«¨
¤³²³·²·¬¦° ¦¨«¤±¬¶°1
[ Κεψ ωορδσ] ¬¤±ª­¬± °∏¶«µ²²° ³²¯¼¶¤¦¦«¤µ¬§¨ ~¤³²³·²¶¬¶~Žxyu ¦¨¯¯ ~ƒ¤¶ª¨ ±¨
≈责任编辑 方文贤 
≈收稿日期  ussw2sv2s|
≈通讯作者  3池岛乔 oר¯ }ksuwluv{wwwyv o∞2°¤¬¯}¬®¨­¬°¤·ƒ √¬³1¶¬±¤1¦²°
紫草素通过线粒体途径诱导 „vzx2≥u细胞凋亡
吴 振t ou o吴立军t o田代真一v o小野寺敏v o池岛乔u 3
kt1 沈阳药科大学 中药学院 o辽宁 沈阳 ttssty ~
u1 沈阳药科大学 中日医药研究所 o辽宁 沈阳 ttssty ~
v1 昭和药科大学 病态科学教研室 o日本东京 t|w2{xwvl
≈摘要  目的 }研究紫草素诱导人黑色素瘤 „vzx2≥u细胞凋亡的机制 ∀方法 }××法测定紫草素对 „vzx2≥u细
胞的生长抑制实验 o形态学观察分析细胞凋亡的形态学变化 o⁄‘„电泳研究细胞死亡的机制 o免疫印迹实验检测
相关蛋白的表达 ∀结果 }紫草素可明显地抑制 „vzx2≥u细胞的生长 o在 u1x ∗ ws Λ°²¯#pt之间呈明显的量效关系和
时效关系 ∀ts Λ°²¯#pt紫草素可诱导 „vzx2≥u细胞凋亡 o琼脂糖凝胶电泳可见典型的 ⁄‘„ /梯状0条道 ∀¦¤¶³¤¶¨2v
和 ¦¤¶³¤¶¨2|的抑制剂阻止紫草素诱导的凋亡 o紫草素可诱导 „vzx2≥u细胞¦¤¶³¤¶¨2|的活力增加 o免疫印迹结果显示
的上调的 …¤¬和下调的 …¦¯2÷表达证实了紫草素诱导的 „vzx2≥u细胞的凋亡是通过线粒体途径发挥作用的 ∀结
论 }ts Λ°²¯#pt紫草素可明显地诱导 „vzx2≥u细胞凋亡 o并经历了 ¦¤¶³¤¶¨2|激活的线粒体信号转导途径 ∀
≈关键词  紫草素 ~人黑色瘤 „vzx2≥u细胞 ~细胞凋亡 ~¦¤¶³¤¶¨
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswltt2ttzv2sx
紫草素¶«¬®²±¬±是从植物紫草 Λιτηοσπερµυµ ερψ2
τηρορηιζον ≥¬¨¥1 ·¨∏¦¦中提到的一个蒽醌类化合物 ∀
常用于治疗烫伤等疾病 ∀紫草素具有抗真菌 !抗炎
和抗肿瘤等作用≈t2v  ∀文献报道紫草素可诱导多种
肿瘤细胞凋亡≈w2y  o但有关诱导细胞凋亡的分子机制
仍不清楚 ∀作者选择人黑色素瘤 „vzx2≥u细胞 o研
究紫草素体外诱导 „vzx2≥u细胞凋亡的作用机制 ∀
1 材料与方法
#vztt#
第 u|卷第 tu期
ussw年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1u| oŒ¶¶∏¨ tu
⁄¨ ¦¨ °¥¨µoussw
111 药品与试剂
紫草素购于中国药品生物制品检定所 ~半胱氨
酸天冬氨酸蛋白酶 k¦¤¶³¤¶¨ l¦¤¶³¤¶¨2| 抑制剂 k½2
∞‹⁄2©°®l购自 ∞±½¼°¨ ≥¼¶·¨°¶ °µ²§∏¦·¶公司 o¦¤¶2
³¤¶¨2v抑制剂 k½2⁄∞∂∞2©°®l 购于 ≤¤¯¥¬²¦«¨ °公司 o
¦¤¶³¤¶¨2t 抑制剂k„¦2≠∂ „⁄2¦°®l购于 …„≤‹∞ 公
司 o¦¤¶³¤¶¨2|活力测定试剂盒为 ≥¤±·¤ ≤µ∏½ …¬²·¨¦«2
±²¯²ª¼公司产品 ~¦¤¶³¤¶¨ 激活的 ⁄‘„ 酶抑制物k¬±2
«¬¥¬·²µ²©¦¤¶³¤¶¨2 ¤¦·¬√¤·¨§ ⁄‘¤¶¨ oŒ≤„⁄l多克隆抗兔
抗体 !¤±·¬2…¦¯2÷抗体 !¤±·¬2…¤¬抗体 !辣根过氧化物
酶标记的羊抗兔二抗及 ¥µ²¤§µ¤±ª¨ °¤µ®¨µk¶¦2uvytl
均购于 ≥¤±·¤ ≤µ∏½ …¬²·¨¦«±²¯²ª¼ 公司 ~甲基噻唑蓝
k××l o‹²¨ ¦«¶·vvux{ 及 ⁄≥’ 均为 ≥¬ª°¤公司产
品 o胎牛血清为北京元亨圣马生物技术研究所产品 ∀
112 细胞培养
人黑色素瘤k„vzx2≥ul细胞购自美国 „°¨ µ¬¦¤±
×¼³¨ ≤∏¯·∏µ¨ ≤²¯¯¨ ¦·¬²± k„×≤≤l ∀细胞单层接种在含
ts h胎牛血清 !u h 谷氨酰胺的 • °Œ tyws 培养液
kŠ¬¥¦²o˜≥„l中 o在 vz ε ox h二氧化碳培养箱中培
养 ∀
113 方法
11311 细胞生长抑制实验 取处于对数生长期的
‹ ¨¤细胞接种于 |y孔培养板中k细胞数为每孔 x ≅
tsvl o每孔 tss ˏ培养 tu «o加入各种抑制剂培养 t
«后再加入不同浓度的紫草素k用 ⁄≥’溶解 o终浓
度 [ s1sst h l o每个浓度设平行孔 v 个 o于 vz ε o
x h二氧化碳培养箱中继续培养 y otu ouw «o每孔加
入 x ª#pt ×× us ˏo继续培养 w «后 o加入 txs ˏ
⁄≥’溶解 o于酶标仪 w|u ±°处检测 o计算药物的体
外生长抑制率 ∀
11312 细胞形态学观察 将细胞接种于培养瓶中 o
至细胞进入对数生长期后 o加入浓度为 s ots Λ°²¯#
pt的¶«¬®²±¬±作用 uw « o用光学显微镜观察 ∀
11313 ⁄‘„提取和 ⁄‘„/梯状0化分析 收集 t ≅
tsy个以上细胞 ou xss µ#°¬±pt离心 x °¬±o°…≥洗 u
次 o用细胞裂解液kts °°²¯#pt ×µ¬¶2‹≤¯ ³‹ z1w ots
°°²¯#pt ∞⁄ׄ ³‹ {1s os1x h ×µ¬·²± ÷2tsslw ε 裂解
ts °¬±oty sss µ#°¬±pt离心 us °¬±o收集上清液 o加
入 ws ±ª#pt • ‘¤¶¨ ovz ε 温育 t «o再加入 ws ±ª#pt
°µ²·¨¬±¤¶¨ Žovz ε 温育 t «o加入 s1x °²¯#pt‘¤≤¯ 和
xs h异丙醇 op us ε 放置过夜 ∀ty sss µ#°¬±pt离心
tx °¬±o收集沉淀 o加入 ×∞溶解液kts °°²¯#pt×µ¬¶2
‹≤¯ ³‹ z1w ot °°²¯#pt ∞⁄ׄ ³‹ {1sl ∀加入溴酚蓝
染色液 o用 u h琼脂糖凝胶在 tss ∂ 电泳 t «o用 t °ª
#pt的溴化乙啶染色 vs °¬±o再用蒸馏水脱色 vs
°¬±o于紫外透射仪观察 ∀
11314 ≤¤¶³¤¶¨2|活力的测定 将细胞接种于培养
瓶中 o至细胞进入对数生长期后 o加入浓度为 ts
Λ°²¯#pt的¶«¬®²±¬±于 s oy otu ouw «收集细胞 ∀按试
剂盒方法测定 ¦¤¶³¤¶¨2|酶活力 ∀
1 1315 免疫印迹分析 收集t ≅ tsy以上细胞 o
u xss µ#°¬±p t离心 ts °¬±o°…≥洗 u次 o加入 tss ˏ
细胞裂解液kxs °°²¯ #pt ‹∞°∞≥ ot h ×µ¬·²±2tss o
tss °°²¯ #pt ‘¤ƒ ot °°²¯ #pt ∞⁄ׄ ot °°²¯ #pt
∞Š×„ ou °°²¯#pt正钒酸钠 ot °°²¯#pt °≥ƒ ots ª
#pt ³¨ ³¶·¤·¬± „l于冰上裂解 t «oty sss µ#°¬±pt离
心 x °¬±o收集上清 ∀加入 us ˏx ≅上样缓冲液kuxs
°°²¯ pt ×µ¬¶2‹≤¯ ³‹ y1{ ots h ≥⁄≥ oxs h甘油 os1x h
溴酚蓝 ox h二巯基乙醇l o加热变性 ∀用 tu h ≥⁄≥2
聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质 ∀凝胶上的蛋白带
转移到硝酸纤维素膜上 o封闭液封闭膜上的蛋白结
合位点 u «∀加入一抗k羊抗兔 Œ≤„⁄o…¦¯2÷o…¤¬otΒ
xssl及辣根酶标记的二抗ktΒxssl o显色 o扫描 ∀
114 统计学处理
检测数据用 ≥·∏§¨±·χ¶··¨¶·检验 o数据以kcξ ? σl
表示 ∀
2 结果
211 紫草素对 „vzx2≥u细胞的生长抑制作用
图 t 紫草素对 „vzx2≥u细胞的生长抑制作用kcξ ? σ, ν € vl
图 t是不同浓度的紫草素作用于 „vzx2≥u细胞
y otu ouw «生长的抑制曲线 ∀由图中可见 o紫草素对
„vzx2≥u细胞生长有明显地抑制作用 ∀在 u1x ∗ ws
Λ°²¯#pt的浓度范围内呈较强的剂量和时间依赖
性 ∀紫草素作用 „vzx2≥u细胞 uw «时 o其抑制细胞
生长的半数有效抑制浓度kŒ≤xsl为ktt1| ? s1|l Λ°²¯
#pt ∀结果表明 o紫草素对 „vzx2≥u细胞有一定的
#wztt#
第 u|卷第 tu期
ussw年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1u| oŒ¶¶∏¨ tu
⁄¨ ¦¨ °¥¨µoussw
细胞毒活性 ∀
212 紫草素诱导 „vzx2≥u细胞死亡的形态学变化
ts Λ°²¯#pt紫草素作用 „vzx2≥u细胞 uw «后 o
可观察到明显的形态上的变化 o多数细胞发生收缩 o
细胞变圆 o体积缩小 o与对照组有明显的差别 ∀
213 紫草素诱导凋亡性的细胞死
细胞凋亡时一个显著的标志为 ⁄‘„ 被有序断
裂 o形成若干 t{s ∗ uss ¥³或其倍数的寡核苷酸片
段 o在琼脂糖凝胶电泳上可观察到/梯状0条道k⁄‘„
¤¯§§¨µl ∀ts Λ°²¯#pt紫草素作用 „vzx2≥u细胞 tu «
后 o可明显诱导 ⁄‘„的/梯状0化k图 ul ∀结果表明 o
紫草素可诱导核酸内切酶的激活 o从而切断 ⁄‘„链
形成 ⁄‘„片段 o导致细胞凋亡 ∀
图 u 紫草素诱导 „vzx2≥u细胞的 ⁄‘„片段化
214 紫草素诱导 „vzx2≥u细胞 ¦¤¶³¤¶¨ 依赖性的细
胞凋亡
细胞凋亡信号转导途径种 o¦¤¶³¤¶¨ 起着重要的
作用 ∀图 v的结果表明 us Λ°²¯ #pt¦¤¶³¤¶¨2v的抑
制剂k½2⁄∞∂⁄2©°®l和 ¦¤¶³¤¶¨2|的抑制剂 k½2∞‹⁄2
©°®l可明显抑制 ts Λ°²¯#pt紫草素诱导 „vzx2≥u细
胞的凋亡 ∀处于上游的 ¦¤¶³¤¶¨2t 的抑制剂 k„¦2
≠∂ „⁄2¦°®l不能阻止凋亡的发生 ∀这说明在紫草素
诱导的凋亡过程中 o¦¤¶³¤¶¨2v和¦¤¶³¤¶¨2|被激活 o推
测可能与线粒体途径有关 ∀
215 紫草素对 Œ≤„⁄o…¦¯2÷和 …¤¬蛋白表达的影响
为了证实与线粒体途径有关 o用免疫印迹法考
察了 …¦¯2÷和 …¤¬蛋白的表达k图 wl ∀结果表明 ots
Λ°²¯#pt紫草素可使 …¦¯2÷的表达下降 o同时上调
了 …¤¬蛋白的表达 o因此促进 ¦¤¶³¤¶¨2v的活化 o导致
细胞凋亡 ∀¦¤¶³¤¶¨2v的激活同时被 ¦¤¶³¤¶¨ 激活的
⁄‘„酶抑制剂 Œ≤„⁄的表达下降进一步证实k图 xl ∀
为了进一步证实作者的推断 o测定了 ¦¤¶³¤¶¨2|
的活力k图 xl ∀结果表明 o在紫草素诱导凋亡的早
期 o¦¤¶³¤¶¨2|就被显著地激活 ots Λ°²¯#pt紫草素作
用 „vzx2≥u细胞 y «时 o活力上升了 w倍 o然后继续
上升 o到 uw «时达到近 y倍 ∀这表明紫草素首先激
活¦¤¶³¤¶¨2| o后者作用于 ¦¤¶³¤¶¨2v 酶原 o促使 ¦¤¶2
³¤¶¨2v的激活 o导致了细胞的凋亡 ∀
图 v ¦¤¶³¤¶¨ 抑制剂对紫草素诱导 „vzx2≥u
细胞凋亡的影响
„vzx2≥u细胞用抑制剂处理 t «后 o加入紫草素
作用 uw «k ν € v , 3 3 Π s1stl
图 w 紫草素对 Œ≤„⁄!…¦¯2÷和 …¤¬蛋白表达的影响
图 x 紫草素对 ¦¤¶³¤¶¨2|活力的影响kcξ ? σ, ν € vl
3 讨论
细胞凋亡是生物体内一种自主的调控过程 o与
肿瘤的发生密切相关 ∀在细胞凋亡过程中 o起调控
作用的蛋白酶为被称作 ¦¤¶³¤¶¨ 的一类半胱氨酸天
冬氨酸蛋白酶 ∀到目前为止 o这一家族已发现 tw个
成员 o在以 ƒ¤¶oבƒΑ受体信号转导途径中有较多的
论述≈z  ∀本实验表明了紫草素抑制 „vzx2≥u细胞生
长 o并呈量效和时效关系 ∀从形态学观察和 ⁄‘„
#xztt#
第 u|卷第 tu期
ussw年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯1u| oŒ¶¶∏¨ tu
⁄¨ ¦¨ °¥¨µoussw
/梯状0化分析分别证实 ts Λ°²¯ #pt紫草素诱导
„vzx2≥u细胞凋亡 ∀紫草素诱导 „vzx2≥u细胞凋亡
过程中涉及到 ¦¤¶³¤¶¨2| 的激活 ∀¦¤¶³¤¶¨2v 和 ¦¤¶2
³¤¶¨2| 的抑制剂有效地抑制紫草素诱导的细胞凋
亡 o表明这一信号转导途径中这两个蛋白酶激活的
重要性 ∀¦¤¶³¤¶¨2|处在 ¦¤¶³¤¶¨2v的上游 o它的激活
与线粒体上的蛋白 …¦¯2÷和 …¤¬的表达密切相
关≈{  ∀ …¦¯2÷和 …¤¬蛋白是 …¦¯2u家族的两个成员 o
…¤¬为促凋亡蛋白 o…¦¯2÷为抗凋亡蛋白 ∀通常在体
内二者是以复合物的形式存在 o并调节细胞内的平
衡 o两者微小的变化 o对细胞都有较大的影响≈|  ∀
…¤¬的上调会改变线粒体膜的通透性 o促使细胞色
素 ¦的释放 o导致下游的 ¦¤¶³¤¶¨2v的激活≈ts  ∀实验
中 …¤¬r…¦¯2÷的表达比率随着紫草素作用时间的增
加而增高 o促使 ¦¤¶³¤¶¨2|的激活 o继而导致 ¦¤¶³¤¶¨2v
的激活 o引发了细胞凋亡 ∀和 ¦¤¶³¤¶¨2v活力有关的
另一个蛋白 Œ≤„⁄为 ≤„⁄k¦¤¶³¤¶¨2¤¦·¬√¤·¨§ §¨²¬¼µ¬2
¥²±∏¦¯¨ ¤¶¨l的抑制剂 o¦¤¶³¤¶¨2v水解 Œ≤„⁄释放 ≤„⁄
到细胞核 o≤„⁄ 降解 ⁄‘„ 导致细胞解体≈tt  ∀
¶«¬®²±¬±作用 „vzx2≥u细胞明显导致 Œ≤„⁄蛋白表达
的下降 o从而导致细胞凋亡 ∀另外 o本实验使用的
„vzx2≥u细胞为 Œ2t 敏感性细胞 o但 Œ2t 转化酶
k¦¤¶³¤¶¨2tl的抑制剂并没有对紫草素诱导的细胞凋
亡有抑制作用 o推测紫草素诱导细胞凋亡信号途径
的上游与 ¦¤¶³¤¶¨2t可能不相关 o这还有待于进一步
的研究 ∀
目前 o天然药物单体诱导肿瘤细胞凋亡的作用
机制研究较少≈tu  o其信号转导途径与死亡受体途径
的关系仍不清楚 o相应作用靶点的阐明和信号转导
机制的研究对揭示细胞凋亡这一生命现象 !开发新
药 !攻克肿瘤这一顽疾意义重大 ∀
≈参考文献 
≈t  ≥¤±®¤º¤ ˜ o ’·¶∏®¤ ‹ o Ž¤·¤²®¤ ≠ oετ αλ1 „±·¬·∏°²µ¤¦·¬√¬·¼ ²©
¶«¬®²±¬±o¤¯®¤±±¬± ¤±§·«¨¬µ§¨µ¬√¤·¬√ ¶¨1 Χηεµ Πηαρµ Βυλλot|{t ou|
ktl }tty1
≈u  פ±¤®¤≥ oפ­¬°¤  o׶∏®¤§¤  o ετ αλ1 „ ¦²°³¤µ¤·¬√¨ ¶·∏§¼ ²±¤±·¬2
¬±©¯¤°°¤·²µ¼ ¤¦·¬√¬·¬¨¶²©·«¨ ±¨¤±·¬²°¨ µ¶o¶«¬®²±¬± ¤±§ ¤¯®¤±±¬±1 ϑ
Νατ Προδ ot|{y ow|kvl }wyy1
≈v  ≥¤±®¤º¤ ˜ o ∞¥¬½∏®¤ ≠ o ¬¼¤½¤®¬× o ετ αλ1 „±·¬·∏°²µ¤¦·¬√¬·¼ ²©
¶«¬®²±¬± ¤±§¬·¶§¨µ¬√¤·¬√¨ ¶1 Χηεµ Πηαρµ Βυλλ ( Τοκψο) ot|zz oux
k|l }uv|u1
≈w  蒋英丽 o宋今丹 1 新疆紫草素诱导人大肠癌细胞的凋亡 1 癌
症 ousst ousktul }tvxx1
≈x  ‹¤¶«¬°²·² ≥ o÷∏  o ¤¶∏§¤ ≠ o ετ αλ1 ¥¨·¤2«¼§µ²¬¼¬¶²√¤¯ µ¨¼¯¶«¬®²±¬±
¬±«¬¥¬·¶·«¨ ¦¨¯¯ ªµ²º·«²©√¤µ¬²∏¶¦¤±¦¨µ¦¨¯¯ ¬¯±¨ ¶¤±§¬±§∏¦¨¶¤³²³·²2
¶¬¶¬±¯¨ ∏®¨ °¬¤ ‹2ys ¦¨¯¯¶·«µ²∏ª«¤ °¨ ¦«¤±¬¶° §¬©©¨µ¨±·©µ²°·«²¶¨ ²©
ƒ¤¶¤±§ ·¨²³²¶¬§¨1 ϑ Βιοχηεµ ot||| otuxktl }tz1
≈y  林 江 o韩福刚 o王开正 1 新疆紫草素对肿瘤细胞生长抑制作
用的研究 1 泸州医学院学报 oussv ouykul }tsu1
≈z  ≤²«¨ ± Š 1 ≤¤¶³¤¶¨¶}·«¨ ¬¨¨ ¦∏·¬²±¨ µ¶²© ¤³²³·²¶¬¶1 Βιοχηεµ ϑo
t||z ovuy }t1
≈{  ‘¤®¤½¤º¤ ≠ oŽ¤°¬­² × o Ž²¬®¨ Žo ετ αλ1 „• ƒ ·∏°²µ¶∏³³µ¨¶¶²µ¬±2
§∏¦¨¶°¬·²¦«²±§µ¬¤2§¨ ³¨ ±§¨ ±·¤³²³·²¶¬¶¥¼ °²§∏¯¤·¬²± ²© °¬·²¦«²±§µ¬¤¯
…¦¯2u ©¤°¬¯¼ ³µ²·¨¬±¶1 ϑ Βιολ Χηεµ oussv ouz{kvsl }uz{{{1
≈|  ∞µ«¤µ§·° o ≤²²³²¨µŠ 1 „¦·¬√¤·¬²± ²©·«¨ ≤°°vu ¤³²³·²·¬¦³µ²·¨¤¶¨
¥¼ §¬¶·¬±¦·¶¬ª±¤¯¬±ª³¤·«º¤¼¶º¬·«§¬©©¨µ¨±·¬¤¯ ¶¨±¶¬·¬√¬·¼·² …¦¯2÷1 ϑ
Βιο Χηεµ ot||y ouztkvsl }tzyst1
≈ts  Šµ¨ ±¨ ⁄ • o • ¨¨ § ≤1 ¬·²¦«²±§µ¬¤ ¤±§¤³²³·²¶¬¶1 Σχιενχε ot||{ o
u{tkxv{tl }tvs|1
≈tt  ≤«¤µµ¬¨µo¤µµ¼ „ oײ´ ∏¨·≤ o ετ αλ1 Šµ²º·«³«¤¶¨2§¨ ³¨ ±§¨ ±·¨ ¬2
³µ¨¶¶¬²± ²©Œ≤„⁄2r⁄ƒƒwx °²§∏¯¤·¨¶·«¨ ³¤·¨µ± ²©¤³²³·²¶¬¶¬± «∏2
°¤± ¦²¯²±¬¦¦¤±¦¨µ¦¨¯¯¶1 Χανχερ Ρεσεαχη oussu oyu }uty|1
≈tu  张 莹 o吴立军 o田代真一 o等 1 吴茱萸碱诱导人黑色素瘤
„vzx2≥u细胞的两种死亡机制 1 药学学报 oussv ov{k|l }yxs1
Μιτοχηονδρια2δεπενδεντ µεχηανισµισινϖολϖεδ ιν Αvzx2Σu
χελλ αποπτοσισινδυχεδ βψσηικονιν
• ˜ «¨ ±t ou o • ˜ ¬2­∏±t oׄ≥‹Œ• ’ ≥«¬±2¬¦«¬v o ’‘’⁄∞• „ ≥¤·²¶«¬v oŒŽ∞Œ „ פ®¤¶«¬u
(t1 ∆επαρτµεντ οφ Πηψτοχηεµιστρψ Σηεψψανγ Πηαρµαχευτιχαλ Υνιϖερσιτψ, Χηενψανγ ttssty , Χηινα ;
u1 Χηινα2ϑαπαν Ρεσεαρχη Ινστιτυτε οφ Μεδιχαλ ανδ Πηαρµαχευτιχαλ Σχιενχεσ, Σηενψανγ Πηαρµαχευτιχαλ Υνιϖερσιτψ, Σηενψανγ ttssty , Χηινα ;
v1 ∆επαρτµεντ οφ Χλινιχαλ ανδ Βιοµεδιχαλ Σχιενχεσ , Σηοωα Πηαρµαχευτιχαλ Υνιϖερσιτψ, Τοκψο t|2{xwv , ϑαπαν)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¶·∏§¼·«¨ ° ¦¨«¤±¬¶°¶²©¶«¬®²±¬±2¬±§∏¦¨§ „vzx2≥u ¦¨¯¯ ¤³²³·²¶¬¶1 Μετηοδ : ≤¼·²·²¬¬¦¬·¼ ¤¶¶¤¼ ¥¼ ×× o
⁄‘„ ©µ¤ª° ±¨·¤·¬²± ¤¶¶¤¼ ¤±§ • ¶¨·¨µ± ¥¯²·¤±¤¯¼¶¬¶º µ¨¨ ¦¤µµ¬¨§²∏·1 Ρεσυλτ : u1x ∗ ws Λ°²¯#pt ¶«¬®²±¬±¬±«¬¥¬·¨§„vzx2≥u ¦¨¯¯ ªµ²º·«¬± ¤
§²¶¨2¤±§·¬° 2¨§¨ ³¨ ±§¨ ±·°¤±±¨ µ1 ts Λ°²¯#pt ≥«¬®²±¬±¬±§∏¦¨§¤³²³·²·¬¦¦¨¯¯ §¨¤·«¬± „vzx2≥u ¦¨¯¯¶1 ≤¤¶³¤¶¨2v¬±«¬¥¬·²µ¤±§¦¤¶³¤¶¨2|¬±2
«¬¥¬·²µµ¨√ µ¨¶¨§ ¶«¬®²±¬±2¬±§∏¦¨§ „vzx2≥u ¦¨¯¯ ¤³²³·²¶¬¶1 ˜³2µ¨ª∏¯¤·¬²± ²© …¤¬ ¤±§ §²º±2µ¨ª∏¯¤·¬²± ²© …¦¯2÷ ¬¨³¨µ¶¶¬²± ¦²±·µ¬¥∏·¨§·²
#yztt#
第 u|卷第 tu期
ussw年 tu月
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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³¤·«º¤¼1 Χονχλυσιον : ¬·²¦«²±§µ¬¤2§¨ ³¨ ±§¨ ±·³¤·«º¤¼¶¤µ¨ ¬±√²¯√ §¨¬± ¶«¬®²±¬±2¬±§∏¦¨§ „vzx2≥u ¦¨¯¯ ¤³²³·²¶¬¶1
[ Κεψ ωορδσ] ¶«¬®²±¬±~„vzx2≥u ¦¨¯¯¶~¤³²³·²¶¬¶~¦¤¶³¤¶¨ ≈责任编辑 方文贤 
≈收稿日期  ussw2sw2s{
≈通讯作者  3 薛晓鸥 oר¯ }kstsly{z|wwuu2vvts o∞2°¤¬¯}¬¬²tuv
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金雀黄素对离体人子宫肌瘤细胞增殖的影响
薛晓鸥t 3 o曹 爽u o魏丽惠t
kt1 北京大学 人民医院 妇科 o北京 tsssww ~
u1 锦州医学院 o辽宁 锦州 tutsstl
≈摘要  目的 }观察不同浓度金雀黄素对体外培养人子宫肌瘤细胞增殖的影响 ∀方法 }应用 ××比色法研究
金雀黄素对体外培养人子宫肌瘤细胞影响的量效关系和时效关系 ∀结果 }低浓度的金雀黄素对子宫肌瘤细胞无抑
制作用 o达到一定浓度后才表现出抑制作用 o并且呈浓度依赖性和时间依赖性 ∀结论 }金雀黄素对体外培养的子宫
肌瘤细胞具有抑制作用 o可为临床应用金雀黄素提供参考依据 ∀
≈关键词  金雀黄素 ~人子宫肌瘤 ~细胞培养
≈中图分类号  • u{x1x ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswltu2ttzz2sv
子宫肌瘤是女性生殖器官中最常见的良性肿
瘤 o生育期妇女发病率高达 ux h ∗ vs h o而且部分
患者伴有贫血 o甚至是重度贫血 ∀传统治疗子宫肌
瘤多主张手术切除子宫或行肌瘤剥出术 o但影响其
身心健康 ∀子宫肌瘤是激素依赖性肿瘤 o尤其与雌 !
孕激素密切相关 ∀金雀黄素是一类植物雌激素 o其
可来源于葛根 !大豆等植物中 o它发挥雌激素和抗雌
激素双相调节作用取决于其剂量和受试对象本身的
激素代谢状态≈t ou  ∀本研究旨在观察金雀黄素对体
外培养的子宫肌瘤细胞的作用 o为临床治疗子宫肌
瘤提供理论依据 ∀
1 材料和方法
111 主要试剂和仪器设备
金雀黄素k≥¬ª°¤公司产l o⁄∞ 培养基kŠ¬¥¦²
公司产l o胎牛血清k‹¼¦¯²±¨ 公司产l o胶原酶 Œ„ 型
k≥¬ª°¤公司l o胰蛋白酶k购自华美生物公司l o噻唑
蓝k购自华美生物公司l ~鼠抗人 Α2¤¦·¬±抗体k购自
北京中山生物公司l ~Œ÷xs倒置显微镜k日本 ’¯ ¼°2
³∏¶公司产l o≤’u培养箱k德国产l o„× p {x{型自动
酶标分析仪k上海安泰公司产l ∀
112 方法
11211 标本采集 子宫肌瘤来源于锦州医学院附
属第一医院妇科及北京大学人民医院妇科行子宫肌
瘤切除的患者 o年龄 vs ∗ w{岁k平均 ws岁l o术前至
少 v个月未接受激素治疗 o病理学诊断为子宫肌瘤 ∀
无菌操作取子宫肌瘤组织 o冰浴送实验室 ∀
11212 子宫肌瘤细胞的分离培养 将子宫肌瘤组
织置于 ⁄∞ 培养基中清洗 u遍 o剪成细小碎块 o加
入 s1tux h的 Œ„型胶原酶于 vz ε 空气浴中搅拌振
荡消化 vs °¬± ∗ u «≈v  o消化结束后过滤 o离心收集
细胞 o用 s1w h台盼蓝计数 o以 x ≅ tsx#°pt的密度
接种于培养瓶内 ∀待细胞长满瓶底 o用 s1ux h胰蛋
白酶消化 o以同样密度接种进行传代培养 ∀
11213 ××实验 取 v ∗ w代子宫肌瘤细胞 o以 x ≅
tsw# °pt的密度接种于 |y 孔培养板内 o每孔 tss
ˏo每组设 x个平行孔 ouw «后将 ⁄∞ 培养基更换
为含金雀黄素的培养基 os1sss x os1ssx os1sx os1x o
x ots ous oxs oxss °ª#pt o对照组不加药 ∀继续培养
uw ow{ ozu o|y «o于培养终止前 w «o向每孔加入 ××
溶液kx °ª#°ptlts ˏo培养终止后吸去孔内上清
液 o每孔加入 txs ˏ的 ⁄≥’ o振荡 ts °¬±o使结晶
物充分溶解 o用酶标仪于 w|s ±°波长处测定吸光度
kΑl值 ∀分别记录金雀黄素作用于子宫肌瘤细胞的
量效数据和时效数据 ∀用下列公式计算金雀黄素对
#zztt#
第 u|卷第 tu期
ussw年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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