全 文 :脑脉通对老龄大鼠脑缺血再灌注炎症
级联反应变化的影响
李建生 3 o高剑峰 o周友龙 o刘 轲
k河南中医学院 老年医学研究所 o河南 郑州 wxsss{l
≈摘要 目的 }从肿瘤坏死因子 2Αk׃2Αl!黏附分子 k≤ 2to∂ ≤ 2tl表达变化揭示脑脉通抗老年脑缺血
再灌注损伤的保护机制 ∀方法 }采用 ≤方法复制脑缺血动物模型 o观察缺血 v «和 r tovoyotu §神经症状积
分 !脑组织含水量 !病理变化 ! ׃2Αo∂ ≤ 2to≤ 2t和 ≤ 2t° 表达变化 o׃2Α以灰度值为表达单位 o
∂ ≤ 2to≤ 2t以阳性反应血管数目为表达单位 ∀结果 }模型组脑组织含水量 kr tovoy §l!神经症状积分 k各
时间点 l和 ׃2Αo∂ ≤ 2tkv «or tovoy §lo≤ 2tkv «or tovoy §l及其 ° k各时间点 l均高于假手术
组 ~脑脉通组神经症状积分 o脑组织含水量 kr voyotu §lo׃2Αo∂ ≤ 2tkv «or tov §l和 ≤ 2t及其 ° 2
kv «or tov §l表达均低于模型组 ~脑脉通组神经症状积分 kr yotu §lo׃2Αkr t §lo≤ 2tkr t §l
及其 ° kr tov §l表达低于尼莫地平组 ∀结论 }脑脉通抗老年脑缺血再灌注损伤的机制与其抑制 ׃2Αo
∂ ≤ 2to≤ 2t等表达有关 ∀
≈关键词 脑脉通 ~老年 ~脑缺血再灌注 ~肿瘤坏死因子 ~黏附分子
≈中图分类号 u{x1x ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussylut2t{sw2sw
≈收稿日期 ussy2st2su
≈基金项目 国家自然科学基金资助项目 kvsvzt{tul~河南省
高校创新人才基金项目 kusst2tsl~河南省杰出青年科学基金项目
ksytussszssl
≈通讯作者 3 李建生 o ksvztl yxyzyxy{o ∞2°¤¬¯} ¯¶{
vzt1± ·¨
中药脑脉通治疗老年脑梗死具有明显效果 ≈t o
机制可能与其抑制细胞因子及细胞凋亡有关 ≈uov ∀
本研究以老龄大鼠为研究对象 o从脑组织 ׃2Α!黏
附分子的表达变化等方面揭示脑脉通抗老年脑缺血
再灌注损伤机制 ∀
1 材料与方法
111 动物
≥⁄雄性老龄大鼠 kus ∗ ut月龄 ltts只 owxs ∗
yss ªo动物合格证医动字第 wtsttz号 o由河南省实
验动物中心提供 ∀兔抗大鼠 ׃2Αo ≤ 2to
∂ ≤ 2to≤ 2t ≥ ⁄ ·¨¨¦·¬²± ¬·k博士德生物工
程有限公司 l~尼莫地平片 k批号 svtusz|o规格 us
°ªr片 o山东新华制药股份有限公司 lo脑脉通颗粒
k大黄 !人参 !葛根 !川芎 o等 o批号 stvwyo规格 x ªr
袋 o河南中医学院制药厂 l∀
112 分组及模型制备
采用改良的 ²±ª¤等 ≈w 法制备大鼠大脑中动脉
栓塞模型 ∀设假手术组 !模型组 k根据缺血及再灌
注时间不同分为缺血 v «o再灌注 tovoyotu §l!尼
莫地平组 ky °ª# ®ªpt # §pt l!脑脉通组 ks1| ª#
®ªpt # §pt lo每组每个时间点 y只 o造模前 x §开始
灌胃给药 o造模前 u «加灌 t次 o假手术组和模型组
灌生理盐水 ∀
113 观察指标及方法
11311 神经功能障碍评分 参考吴俊芳 ≈x 提出的
{个等级评分标准 o进行神经功能障碍评分 ∀
11312 脑组织含水量 待测含水量的组织标本用
分析天平分别测定其湿重及在电热恒温干燥箱中
tss ε 干燥 w{ «后的干重 o以计算含水量 ∀含水量
kh l k湿重 p干重 l r湿重 ≅ tssh ∀
11313 病理观察 常规 ∞染色 o光镜下进行病理
观察 ∀ u1xh戊二醛溶液 !th锇酸固定 ∀常规制作
超薄切片 o经醋酸铀及柠檬酸铅双染色后 o透射电镜
下观察神经细胞 !胶质细胞和毛细血管等超微结构 ∀
11314 ׃2Αo∂ ≤ 2to≤ 2t表达采用免疫组
化方法测定 ~≤ 2t° 采用原位杂交方法测
定 ∀全自动彩色图像处理系统进行图像分析 o测定
阳性反应的灰度值 k׃2Αl或阳性反应血管数目
k∂ ≤ 2to≤ 2tlo计算出平均值 o以表示表达的
#ws{t#
第 vt卷第 ut期
ussy年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vto ¶¶∏¨ ut
²√ °¨¥¨ µo ussy
相对强度 ∀灰度值与物质表达呈反向关系 o即灰度
值越高 o免疫组化染色越浅 o表达越低 ∀
114 统计学处理
应用 ≥°≥≥ ts1s软件包进行统计分析 o采用方
差分析统计处理 ~数据均以 cξ ? σ表示 ∀
2 结果
211 病理观察
老龄模型组 kr t §or v §l可见神经元 !神
经胶质细胞肿胀 o排列紊乱 o出现典型的梗死灶 o神
经元数目减少 ∀血管周高度水肿 !结构欠清晰 o炎性
细胞浸润明显 o形成 /血管套 0 ∀药物组可见神经
元 !神经胶质细胞排列轻度紊乱 o部分细胞出现细胞
核固缩 !深染及肿胀 ∀血管轻度扩张水肿 o部分血管
受压变形 o管周有炎性细胞浸润 o细胞间隙轻度水
肿 ∀与同时间点模型组比较病理损伤均减轻 o药物
可以明显减轻脑缺血再灌注损伤 ∀
212 电镜观察
模型组 v «后神经元 !胶质细胞胞质出现水肿 o
线粒体水肿 o嵴和膜消失 o内质网脱颗粒 o染色质浓
缩及边缘聚集 ∀ v §超微结构破坏达到最严重 o胞
质 !胞核高度水肿 o线粒体水肿 o嵴模糊 !消失 ∀ y ∗
tu §细胞超微结构破坏略减轻 ∀尼莫地平组 tu §
神经元 !胶质细胞 !血管内皮细胞超微结构较模型组
病理变化明显减轻 o仅见线粒体轻度嵴排列紊乱 o粗
面内质网轻度脱颗粒 o可见大量线粒体 o线粒体周围
轻度水肿 ∀脑脉通组 v §以后脑细胞的超微结构病
理变化明显减轻 o胞质中可见脂褐素 o线粒体仅有轻
度水肿 o嵴绝部分消失 o膜部分消失 o粗面内质网正
常 o其余细胞器正常 otu §观察细胞质 !胞核 !细胞
器基本正常 ∀
213 脑脉通对脑组织含水量和神经症状积分变化
的影响 k表 tl
214 脑脉通对 ∂ ≤ 2t和 ׃2Α表达水平的影响
k表 ul
215 脑脉通对 ≤ 2t和 ≤ 2t° 表达水平
的影响 k表 vl
3 讨论
脑脉通颗粒具有降浊解毒 !益气活血作用 o治疗
老年脑梗死效果明显 o能够明显改善生活质量 o对脑
缺血再灌注损伤有明显保护作用 ≈toy ∀以往的缺血
性脑血管疾病的实验研究多忽视了脑血管疾病中增
龄因素的重要性 o致使青年动物的实验研究结果与
表 t 脑脉通对老龄大鼠脑组织含水量和
神经症状积分影响比较 kcξ ? σ, ν yl
组别 时间点 神经功能评分 脑组织含水量 rh
假手术 p s zy1tz ? u1ww
模型 v « w1xz ? s1{utl z|1yz ? v1vy
r t § w1yz ? t1svtl {y1{t ? w1||tl
r v § x1xs ? s1xxtl {x1yz ? v1sttl
r y § x1vv ? t1uttl {w1uu ? v1{|tl
r tu § v1yz ? s1xutl {s1tt ? u1uz
尼莫地平 v « v1xs ? t1xv z{1wy ? u1zt
r t § w1tz ? t1wz {u1xt ? u1ztul
r v § w1vv ? t1sv {t1uz ? v1uul
r y § v1xs ? t1wvvl {s1vs ? t1ztul
r tu § u1vv ? t1sz z|1uz ? w1{{
脑脉通 v « v1zt ? t1tt zz1zy ? u1ww
r t § w1sv ? s1xz {t1yt ? u1yvvl
r v § v1xs ? s1xuvl {s1sv ? u1|{vl
r y § u1st ? s1wzvowl zz1xz ? t1w{vl
r tu § s1yz ? s1{wvowl zz1sz ? t1|u
注 }与假手术组比较 tl Π s1st;与模型组比较 u) Π s1sx,
v) Π s1st;与尼莫地平组比较 w) Π s1sx
表 u 脑脉通对老龄大鼠 ∂ ≤ 2t和 ׃2Α的
表达水平影响的比较 kcξ ? σl
组别 时间点 ∂ ≤ 2tr个 ׃2Αr灰度值
假手术 p t1tz ? s1wt t|t1s{ ? x1u|
模型 v « w1xs ? t1v{ul t{v1zt ? v1{wtl
r t § z1{v ? t1wzul tzw1uv ? v1|{ul
r v § tu1vv ? u1vwul tzy1{v ? x1w{tl
r y § |1tz ? t1zuul t{w1x{ ? x1tytl
r tu § z1xs ? t1ywtl t{y1zx ? v1zt
尼莫地平 v « w1tz ? t1wz t{x1ws ? t1zy
r t § x1yz ? t1vzvl t{s1zu ? v1wtvl
r v § |1{v ? u1swvl t{y1vs ? w1wzwl
r y § {1vv ? t1xt t{x1y{ ? x1st
r tu § y1yz ? t1vz t{{1{w ? w1vw
脑脉通 v « w1ss ? s1yv t{|1vs ? w1vuvl
r t § x1{v ? t1tzvl t{y1yz ? w1y|woxl
r v § |1tz ? u1twwl t{w1s| ? w1stvl
r y § z1{v ? t1wz t{y1zt ? w1yu
r tu § y1{v ? t1tz t{{1xt ? w1{v
注 }与假手术组比较 tl Π s1sx, u) Π s1st;与模型组比较
v) Π s1sx, w) Π s1st;与尼莫地平组比较 x) Π s1sx
临床有较大差距 ∀因此 o本研究以老龄大鼠为研究
对象 o进一步研究脑脉通治疗脑梗塞的作用 o为临床
应用提供科学依据 ∀结果表明 o脑脉通能改善脑水
肿 !神经功能障碍 o并对老龄大鼠脑缺血再灌注脑组
织神经细胞病理损伤具有明显保护作用 ∀
脑缺血再灌注后脑内 ׃2Α水平升高 o为炎症
反应的始发细胞因子 o与其他炎性细胞因子相互作
用 o诱导脑缺血再灌注时内皮细胞黏附分子的表达
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第 vt卷第 ut期
ussy年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vto ¶¶∏¨ ut
²√ °¨¥¨ µo ussy
表 v 脑脉通对老龄大鼠 ≤ 2t° 表达
水平影响的比较 kcξ ? σl
组别 时间点 ≤ 2tr个 ≤ 2t° r个
假手术 p |1vv ? u1ux ts1yz ? t1ut
模型 v « uu1tz ? u1vuul us1{v ? t1vvul
r t § vu1yz ? w1uzul vv1tz ? v1{zul
r v § ux1ss ? v1tyul uy1vv ? v1vvul
r y § tz1yz ? v1stul tz1vv ? u1xsul
r tu § tt1tz ? u1vu tv1ss ? t1|stl
尼莫地平 v « tz1tz ? t1zuwl tw1vv ? u1{{wl
r t § uy1vv ? u1{{wl u{1ss ? u1y{wl
r v § ut1xs ? u1{{vl ux1{v ? u1|v
r y § tv1ss ? u1ytwl tx1ss ? t1|s
r tu § ts1tz ? t1zu tu1vv ? u1x{
脑脉通 v « tx1yz ? u1|wwl tv1yz ? t1vzwl
r t § ut1tz ? u1w{woxl uv1tz ? v1t|woxl
r v § t{1yz ? u1xswl us1ss ? u1tswoxl
r y § tx1{v ? u1w{ ty1{v ? u1z
r tu § ts1xs ? t1{z tt1vv ? u1ty
促进炎症反应及血栓形成 o加重脑缺血再灌注损
伤 ≈z ∀本研究发现 o脑缺血再灌注老龄大鼠脑组织
׃2Α表达明显增强 o因此 o抑制 ׃2Α合成及拮
抗其活性均可减轻缺血性脑损伤 ∀ • ¬¯¯¬¤°¤≈{ 等研
究蛋白激酶抑制剂 xt|对脑缺血再灌注大鼠神
经保护时间窗的影响 o发现 xt|可降低脑组织
再灌注 uw «的 ׃2Α蛋白及 ° 等的表达 o抑制
炎性细胞浸润及神经元变性 o改善神经功能障碍 o缩
小脑梗死体积 ∀本实验结果显示 o脑脉通可明显降
低脑缺血再灌注老龄大鼠脑组织 ׃2Α表达 o从而
阻抑脑缺血再灌注后 ׃2Α介导的炎性损伤 o发挥
神经保护作用 ∀
脑缺血再灌注时 o白细胞过度的黏附滚动和牢
固黏附进而向血管外游走 o释放蛋白酶及毒性氧化
物 o促进炎症反应 o导致脑组织缺血再灌注损伤 ∀其
间涉及多种黏附分子 o较重要的是 ≤ 2t和
∂ ≤ 2tk免疫球蛋白超家族 l∀本组资料显示 o脑
缺血再灌注老龄大鼠脑组织 ∂ ≤ 2to≤ 2t和
≤ 2t° 表达明显增强 ∀因此 o抑制脑组织黏
附分子表达 o可减轻缺血性脑损伤 ∀ ƒµ¬¬±¶≈| 等利
用 ≤ 2t基因敲除 kl小鼠复制 ≤模型进
行研究 o结果 鼠脑梗死体积较对照组明显缩小
v1z倍 o梗死区血流是对照组的 v倍 o神经功能缺损
较对照组减轻 o存活率提高 vxh o且中性粒细胞耗
竭后更能明显缩小 鼠的脑梗死面积 ∀ «¤±ª≈ts
研究发现 o 2tsz{k白三烯受体阻断剂 l可下调缺
血再灌注引起的脑皮质及海马区血管内皮细胞
∂ ≤ 2t的表达 o抑制血管内皮细胞与炎性细胞黏
附 o减少炎性细胞浸润 o从而减轻脑缺血后炎症反
应 o改善神经功能障碍 !缩小脑梗死体积 o发挥脑保
护作用 ∀本研究表明 o脑脉通可明显降低脑缺血再
灌注老龄大鼠脑组织黏附分子表达 o有效抑制炎性
细胞的黏附 !聚集合激活 o拮抗缺血性脑损伤 ∀
研究表明 o老龄大鼠脑缺血再灌注损伤中 o脑组
织 ׃2Αo∂ ≤ 2to≤ 2t及其 ° 表达有不同
程度的增强 o合理有效调其表达 !抑制炎症级联反
应 o无疑将成为缺血性脑病治疗中潜在的治疗靶点 ∀
脑脉通具有解毒降浊 !益气活血通络之功效 o可在一
定程度上抑制脑缺血再灌注有促炎作用的 ׃2Αo
∂ ≤ 2to≤ 2t及其 ° 的表达 o发挥拮抗老
年脑缺血再灌注损伤作用 ∀
≈参考文献
≈t 李建生 o郭明冬 1脑脉通颗粒治疗急性脑梗塞的临床评价
≈ 1中华中医药杂志 o ussxo usk|l}xyv1
≈u 李建生 o邓西方 o任小巧 1脑脉通对老龄大鼠脑缺血再灌注
细胞因子的影响 ≈ 1中国医药学报 o usswo t|k{l}wzt1
≈v 任小巧 o李建生 o刘 轲 1脑脉通对老龄大鼠脑缺血再灌注
细胞凋亡的影响 ≈ 1中国老年医学杂志 o ussxo uxk|l}
tsyz1
≈w
§¨¨ µ¶²±
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t||yo tzkyl}tsvw1
≈x 吴俊芳 1小檗碱对小鼠和大鼠脑缺血的保护作用 ≈ 1中国
药理学与毒理学杂志 o t||xo |kul}txy1
≈y 任小巧 o李建生 o封银曼 o等 1脑脉通对老龄大鼠脑缺血再
灌注损伤脑保护作用 ≈ 1中国中药杂志 o usswo u|ktl}yy1
≈z ≠¬± o «·¤®¬ o ¤®¤°¤¦«¬×o ·¨¤¯1 ∞¬³µ¨¶¶¬²± ²©·∏°²µ± ¦¨2
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第 vt卷第 ut期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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Νευρο2προτεχτιϖε εφφεχτ οφ Ναοµ αιτονγ το ινφλαµ µ ατορψ χασχαδε ρεσπονσε
αφτερ φοχαλχερεβραλισχηεµ ια ρεπερφυσιον ιν αγεδ ρατσ
¬¤±2¶«¨ ±ªo ¬¤±2©¨±ªo ≠ ²∏2¯²±ªo ¨
(Γεριατριχσ ∆επαρτµ εντ οφ Ηεναν Χολλεγε οφ ΤραδιτιοναλΧηινεσε Μεδιχινε, Ζηενγζηου wxsss{, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¶·∏§¼·«¨ ³µ²·¨¦·¬√¨ ©¨©¨¦·²©¤²°¤¬·²±ª²± ¬±©¯¤°°¤·²µ¼ ¦¤¶¦¤§¨ µ¨¶³²±¶¨ ¤©·¨µ©²¦¤¯ ¦¨µ¨¥µ¤¯ ¬¶¦«¨ 2
°¬¤µ¨³¨ µ©∏¶¬²± ¬± ¤ª¨ §µ¤·¶1 Μετηοδ : • ¨§∏³¯¬¦¤·¨§©²¦¤¯ ¦¨µ¨¥µ¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¤°²§¨ ¯º¬·« ≤o º¬·«¬¶¦«¨ °¬¤v «¤±§r tovo yo
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׃2Αo ∂ ≤ 2to ≤ 2t ¤±§¬·¶° º µ¨¨ ²¥¶¨µ√ §¨o ¤±§·«¨ ªµ²∏³º¬·«±¬°²§¬³¬±¨º¤¶¤¶¦²±·µ²¯1Ρ εσυλτ: ׫¨ ± µ¨√²∏¶§¼¶©∏±¦2
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¬± ¤²°¤¬·²±ªªµ²∏³º µ¨¨ «¬ª«¨ µ·«¤± ·«¤·²©¬°²§¬³¬±¨ªµ²∏³1Χονχλυσιον: ¤²°¤¬·²±ª¦²∏¯§³µ²·¨¦·¥µ¤¬± ¦¨¯¯ ©µ²° §¤°¤ª¨ ¤©·¨µ©²2
¦¤¯ ¦¨µ¨¥µ¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¤µ¨³¨ µ©∏¶¬²± ¬±∏µ¼ ¥¼ ¬±«¬¥¬·¬±ª·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²©×ƒ2Αo ¤§«¨ ¶¬²± °²¯ ¦¨∏¯ 1¨
[ Κεψ ωορδσ] ¤²°¤¬·²±ª~ ¤ª¨ §~ ¦¨µ¨¥µ¤¯ ¬¶¦«¨ °¬¤µ¨³¨ µ©∏¶¬²±~ ׃2Α~ ≤ 2t~ ∂ ≤ 2t
≈责任编辑 刘
≈收稿日期 ussy2su2s|
≈基金项目 国家 / {yv0资助项目 kussuuvuvxl
≈通讯作者 3 魏伟 o ר¯} ksxxtlxtytus{o∞2°¤¬¯} ºº ¬¨ ¤«2
°∏1 §¨∏1 ¦±
芍芪多苷对小鼠急性化学性肝损伤的保护作用
吴 丽 to u o魏 伟 t3 o桂双英 to v o孙妩弋 t
kt1安徽医科大学 临床药理研究所 o安徽 合肥 uvssvu~
u1南京中医药大学 药学院 临床药学教研室 o江苏 南京 utsswy~
v1安徽中医学院 药学院 药剂教研室 o安徽 合肥 uvssv{l
≈摘要 目的 }探讨芍芪多苷 k≥± ⁄l对 ≤≤ w¯致小鼠急性化学性肝损伤模型的保护作用及可能机制 o并对
≥±⁄与白芍总苷 !黄芪总皂苷单独用药的特点进行比较 ∀方法 }建立 ≤≤ w¯致化学性小鼠急性肝损伤模型 o分光光
度法检测血清中丙氨酸氨基转移酶 k×l!天门冬氨酸氨基转移酶 k≥×l和肝匀浆中丙二醛 k ⁄l!超氧化物歧
化酶 k≥⁄l!谷胱甘肽过氧化物酶 k≥ 2°¬l含量 o∞染色法对肝脏作病理检查 ∀结果 } ≥±⁄能显著降低小鼠血
清 ×o≥×o ⁄水平 o升高 ≥⁄和 ≥ 2°¬酶活性 o减轻肝细胞损伤 ∀ ≥±⁄中剂量与白芍总苷 !黄芪总皂苷单
独用药比较 o具有较好的肝脏保护作用和抗氧化作用 ∀结论 }≥±⁄对 ≤≤ w¯致小鼠急性化学性肝损伤模型具有保护
作用 ∀
≈关键词 芍芪多苷 ~白芍总苷 ~黄芪总皂苷 ~化学性肝损伤
≈中图分类号 u{x1x ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussylut2t{sz2sw
白芍为毛茛科植物芍药的干燥根 o具有养血柔
肝 !缓中止痛之功效 ∀白芍总苷 k×°l是从白芍根
中提取的有效部位 o具有明显的抗炎免疫调节作用
#zs{t#
第 vt卷第 ut期
ussy年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vto ¶¶∏¨ ut
²√ °¨¥¨ µo ussy