全 文 ：#研究论文 #
拮抗人参根部病原菌木霉的筛选及
其生物学特性初步研究
赵阿娜 o丁万隆 3 o朱殿龙
k中国协和医科大学 中国医学科学院 药用植物研究所 o北京 tsss|wl
≈摘要   目的 }筛选抗人参根部病原菌的优良木霉菌株 ∀方法 }通过不同培养基培养 o对 ts株木霉的生物学
特性进行比较 ~通过平板对峙试验 o对木霉抗人参疫病菌 !人参锈腐病菌和人参立枯病菌能力进行分析 ∀结果和结
论 }绿色木霉 ×√sw2u和哈茨木霉 ׫vs{s不仅在土壤浸液培养基和 °⁄„培养基上生长良好 o而且对 v种病原菌均
表现出较高的抑制率 ∀木霉在不同的光照条件及不同的 ³‹下生长速度存在显著性差异 ∀除 ×√sw2u对菌虫绝霸
不敏感外 o木霉菌株对人参病害防治中大多数常用杀菌剂敏感 ∀
≈关键词   木霉 ~拮抗作用 ~重寄生 ~生长速度 ~人参根部病原菌
≈中图分类号   ≥ xyz ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukussylus2tyzt2sw
≈收稿日期   ussx2sy2uv
≈基金项目   国家科技部攻关计划项目 kusst…„zst„x{l
≈通讯作者   3 丁万隆 oר¯}kstslyu{||zwx
人参病害种类繁多 o在我国有 us多种 o生产上
发生普遍 !危害严重的主要是危害人参根部的立枯
病 !锈腐病和根腐病等 ∀目前主要使用化学杀菌剂
防治 o其药效持续时间短 o残留问题突出 o对人体健
康和生态环境造成很大危害 o不能满足中药材规范
化生产的要求 ≈t  ∀研制药效持久对环境无压力的
微生物农药成为植物病害防治的发展方向 ∀木霉适
应性强 o作用机制多样化 o易于人工大量培养 o能防
治许多真菌病害 ≈u  ∀因此 o筛选对人参主要根部病
害具有强烈拮抗作用的木霉有很大的可行性 ∀
1 材料
111 供试菌株和材料 筛选目标菌包括 }绿色木霉
Τηριχηοδερµ α ϖιριδε ° µ¨¶1 y个菌株 ×√sw2to×√sw2uo
×√sw2vo ×√sw2wo ×√sw2xo ×√sw2y~ 哈 茨 木 霉
Τ1ηαρζιανυµ • ¬©¤¬1 w 个 菌 株 ׫vsx|o ׫vsyxo
׫vs{so׫vs|vo由中国科学院微生物所提供 ∀供
试病原菌 }人参锈腐病菌 Χψλινδροχαρπον δεστρυχτανσ!
人参立枯病菌 Ρηιζοχτονια σολανι由中国农业大学张
国珍教授提供 o人参疫病菌 Πηψτοπητηορα χαχτορυµ由
本所高微微研究员提供 ∀
112 药剂 菌虫绝霸 vsh可湿性粉剂 k山东潍坊
瑞星农药有限公司 lo苗菌敌 xsh可湿性粉剂 k山东
富邦农业科技开发有限公司 lo百菌清 zxh可湿性
粉剂 ≈先正达 k中国 l投资有限公司上海分公司  o代
森锰锌 zsh可湿性粉剂 k天津市施普乐农药技术发
展有限公司 l∀
2 方法
211 土壤浸液培养基 ≈v 和 °⁄„培养基培养试验
从栽参地人参根部附近取土 o晒干后称取 t ®ª加入
t sss °蒸馏水 o煮沸后冷却沉淀 u «o倒出上清
液 o加入 us ª琼脂 o融化后过滤 o定容至 t sss °o
装入三角瓶灭菌 ktut ε ous °¬±lo倒入直径 | ¦°
的培养皿 o制成平板 ∀另制备 °⁄„平板 o在木霉菌
落上打取 s1w ¦°的菌饼分别接入上述 u种培养基
平板上 o每一处理设 v个重复 o放入 ux ε 的光照培
养箱中培养 ∀ u §后记录木霉菌落半径 o计算生长
速度 ∀
212 对峙培养 制备 °⁄„平板 o将 ts株木霉分别
与 Ρ1 σολανι的菌饼成直线对接在平板边缘 o倒置放
入 ux ε 的光照培养箱中培养 ∀ Π1 χαχτορυµ 和 Χ1
δεστρυχτανσ生长缓慢 o先分别接种于 °⁄„培养基中
培养 u §和 x §后 o再在病原菌菌饼过圆心的直线上
分别接入 ts株不同的木霉 o以只接病原菌不接木霉
的平板作对照 o处理与对照均设 v次重复 o倒置放入
ux ε 的光照培养箱中培养 o木霉和病原菌菌落接触
时显微镜下观察重寄生现象和寄生率 ow §后测量
#tzyt#
第 vt卷第 us期
ussy年 ts月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vtoŒ¶¶∏¨ us
’¦·²¥¨ µoussy
病原菌菌落半径 o计算抑菌率 ∀
213 不同光照培养试验 打取直径 s1w ¦°的
×√sw2u及 ׫vs{s菌饼接种于 °⁄„培养基上 o倒置
放入 ux ε 的光照培养箱 k光照度为 tu sss ¬¯l中培
养 o设 uw «光照 !uw «黑暗 !tu «光照 tu «黑暗交替
v种条件 ou §后测量木霉菌落半径 ∀
214 不同 ³‹培养试验 用 t °²¯ # pt盐酸和 t
°²¯# pt氢氧化钠将 °⁄„培养基的 ³‹调至 w1xo
x1sox1xoy1soy1xoz1soz1xo{1so制成平板后分别接
入 ×√sw2u和 ׫vs{so每一处理 v个重复 ∀倒置放入
ux ε 的光照培养箱中培养 ou §后测量 u种木霉的
菌落半径 ∀
215 木霉对杀菌剂的敏感性测定 将不同药剂加入
°⁄„培养基 o使药剂分别为 u1xsot1uxos1yvos1vuos1ty
ª# pt o制成平板后接入 ×√sw2u和 ׫vs{so以不加药剂
的做对照 o处理和对照各重复 v次 o倒置放入 ux ε 的光
照培养箱中培养 u §o测量菌落半径 ∀
3 结果与分析
311 土壤浸液培养基和 °⁄„培养基培养试验 所
得数据用 ≥°≥≥ tt1s软件进行单因素方差分析 o差异
达到显著水平 o新复极差检验表明 ts株木霉中 o
×√sw2vo×√sw2uo׫vs|v的生长速度无显著性差异 o生
长较快 ∀土壤浸液培养基模拟人参地土壤营养条件 o
对筛选出能够适应人参栽培土壤的优良木霉具有重
要参考意义 ∀在 °⁄„培养基上 o׫vs{s生长最快 o其
次是 ×√sw2u∀ ts株木霉虽然在 u种培养基上的生长
速度不尽相同 o但是产生分生孢子的时间没有差别 o
w{ «均开始产生绿色或黄绿色分生孢子 ∀见表 t∀
表 t 木霉菌株在土壤浸液培养基和 °⁄„
培养基上的生长情况
木霉菌株
土壤浸液培养基 °⁄„培养基
生长速度
r¦°# §pt
新复极差
检验 ksqsxl
生长速度
r¦°# §pt
新复极差
检验 ksqsxl
×√sw2v uqss ? sqst ¤ tq{x ? sqst ¦
×√sw2u tq{s ? sqst ¤¥ uqtx ? sqs{ ¥
׫vs|v tq{s ? sqst ¤¥ tqtv ? sqsz ©
׫vs{s tqyv ? sqsu ¥¦ uqwx ? sqst ¤
×√sw2t tqxx ? sqsv ¦§ tqus ? sqst ¨
׫vsyx tqxv ? sqsu § tqt{ ? sqsw ¨
×√sw2y tqu{ ? sqst ¨ sqzt ? sqsv «
×√sw2x tquu ? sqst ¨ tqus ? sqsu ¨
×√sw2w tqt{ ? sqsx ¨ sq|x ? sqst ª
׫vsx| sq{u ? sqsy © tqwv ? sqsw §
312 拮抗作用试验 在对每一种病原菌的拮抗试
验中 o木霉的抑制作用差异显著 o结果见表 u∀ ×√sw2
u对 Ρ1 σολανι, Χ1 δεστρυχτανσ, Π1 χαχτορυµ 抑制率无
显著差异 o分别为 zy1uxh ozv1|wh o||1xwh o均比
其他木霉的抑制率高 ∀ ׫vs{s对 v种病原菌也表
现较好的拮抗作用 ∀在木霉和病原菌菌落刚刚交接
处 o显微镜下观察发现 ots株木霉对 Ρ1 σολανι均可
见重寄生现象 o除 ×√sw2v和 ×√sw2x的寄生率在
|sh左右 o其他 {株木霉均达 tssh ∀对 Χ1 δεστρυχ2
τανσ和 Π1 χαχτορυµ 则均未观察到重寄生现象 ∀试
验过程中发现 ׫vs{so×√sw2xo׫vsyx对 Χ1 δεστρυχ2
τανσ抑制作用有两种外在表现形式 :一种是木霉的
菌丝长过 Χ1 δεστρυχτανσ,逐渐将其菌落覆盖 o另一种
是木霉和 Χ1 δεστρυχτανσ不接触 ou菌之间形成
s1t| ∗ s1uz ¦°的紫黑色弧形抑菌带 o可能是木霉分
泌了某种特殊物质 o使 Χ1 δεστρυχτανσ菌丝生长受抑
制 o最终变成黄褐色死去 ∀这两种表现形式在所有
重复中几乎各占一半 ∀
表 u 不同木霉菌株对 v种病原菌的抑制率 h
木霉菌株 Ρ . σολανι Χ. δεστρυχτανσ Π. χαχτορυµ
×√sw2u zyqux¤ zvq|w¤¥ ||qxw¤
׫vs{s yzqu{¥ z{qxx¤ |yqt|¥
׫vs|v yyqw|¥ zsqyt¥¦ zvquy§
׫vsx| xsqyx¦ x{qzz§ wwqzzª
×√sw2w wtq|w¦ w|qxu¨ ztqv§¨
×√sw2x wsqxw¦§ ysqtt§ {|qsu¦
×√sw2v vwqzy§ ywqyv¦§ yyqwz ©¨
×√sw2t vsquw§¨ yyqw{¥¦§ zuqu|§¨
׫vsyx uzqty¨ y{qu|¥¦ ytqyx ª¨
×√sw2y uxqx|¨ x{qzz§¨ ysqw|©
313 不同光照培养试验 在完全光照 !完全黑暗和
tu «光照 tu «黑暗交替 v种光照条件下 o×√sw2u及
׫vs{s的生长速度分别为 kt1wz ? s1sulokt1yz ?
s1stlokt1xx ? s1sulo kt1v{ ? s1svlo kt1zx ?
s1stlokt1ys ? s1swl ¦° # §pt ∀完全黑暗条件均
能促进 ×√sw2u及 ׫vs{s生长 o而完全光照条件下
×√sw2u及 ׫vs{s生长较慢 o但最早产生分生孢子 o
说明光照可刺激木霉产孢 ∀经过 u §培养后 o×√sw2
u菌落中心大约直径 u1x ¦°的圆形范围内产生绿
色的分生孢子 o׫vs{s的菌落中心大约 t1x ¦°的
圆形区域内产生白色不成熟的分生孢子 ∀
314 不同 ³‹培养试验 °⁄„培养基在 ³‹ [ w1so
³‹∴ {1x时不能凝固 o故培养基的 ³‹ 设定界于
w1x ∗ {1s∀表 v表明随着 ³‹的增加 o׫vs{s的生
长速度逐渐降低 o线性相关分析表明 o׫vs{s与 ³‹
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第 vt卷第 us期
ussy年 ts月
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在 w1x ∗ {1s线性相关 o相关方程 Ψ € p s1vzs zΞ n
w1twv uoΡu € s1|tw t∀ ×√sw2u与 ³‹无线性相关 o
³‹为 x1s时生长速度最大 o之后随 ³‹的增加生长
减慢 ∀
表 v 木霉在不同 ³‹下菌落半径的统计
³‹ ׫vs{s ×√sw2u半径 r¦° Α € sqsx 半径 r¦° Α € sqsx
wqx vq{x ? sqsz ¤ uq|v ? sqsw ¥
xqs vq{u ? sqsy ¤ vqyz ? sqt{ ¤
xqx uq|u ? sqty ¥ uq|s ? sqtv ¥
yqs uqvv ? sqtt ¦ uq|s ? sqtv ¥
yqx tq|x ? sqst § uqwz ? sqsw ¦
zqs tq{s ? squs § uqus ? sqts §
zqx tqyv ? sqtt § tqzu ? sqsu ¨
{qs tqxs ? sqsv § tqzv ? sqsw ¨
315 木霉对杀菌剂的敏感性测定 表 w可以看出
u种木霉对苗菌敌和百菌清 u种杀菌剂高度敏感 o
木霉在 u种杀菌剂的各种浓度下均不能生长 ∀对代
森锰锌也较敏感 o但是随着浓度的降低 o木霉受抑制
的程度也逐渐下降 ∀木霉对菌虫绝霸的敏感性较
低 o׫vs{s在菌虫绝霸降到 vus Λª# °pt时 o完全
不受抑制 o可快速生长 ∀ ×√sw2u对菌虫绝霸完全不
敏感 o该结果意味着 ×√sw2u与菌虫绝霸存在复合使
用的可行性 ∀
4 小结和讨论
411 ׫vs{s与 ×√sw2u在土壤浸液培养基和 °⁄„培养
基上生长快速 o性状稳定 o对 v种人参常见病原菌具有
很好的拮抗作用 o׫vs{s与 ×√sw2u对 Ρ1 σολανι皆有重
寄生作用 o被寄生的病原菌菌丝或是膨大成梭形 o或是
原生质减少 o菌丝变得透明 ∀对其他 u种病原菌的作
用机理还不明确 o需进一步试验加以探讨 ∀
表 w 不同杀菌剂对木霉的抑制率 h
杀菌剂 木霉菌株
杀菌剂 rΛª# °pt
u xss t uxs yvs vus tys
菌虫绝霸 ׫vs{s tyqwv uwqz{ uvqwu sqss sqss
×√sw2u sqss sqss sqss sqss sqss
苗菌敌 ׫vs{s tssqss tssqss tssqss tssqss tssqss
×√sw2u tssqss tssqss tssqss tssqss tssqss
百菌清 ׫vs{s tssqss tssqss tssqss tssqss tssqss
×√sw2u tssqss tssqss tssqss tssqss ||qv{
代森锰锌 ׫vs{s ||qv| z|qsx xvqts utq{{ wtqz{
×√sw2u |yqxw yxqvt wsqvu u{qy| tvqs{
412 光照对 ׫vs{s和 ×√sw2u的影响具有相似性 o
均有利于它们产生分生孢子 o不利于其营养生长 ∀
׫vs{s在 ³‹为 w1x ∗ x1s生长最快 o×√sw2u的最适
宜 ³‹为 x1s∀
413 木霉对人参病害防治中的常用农药大多敏感 o
较低的药剂浓度即可抑制木霉的生长 o田间在已使
用苗菌敌 !百菌清 !代森锰锌的情况下 o应间隔一段
时间后使用木霉 ∀研究同时表明 o×√sw2u对菌虫绝
霸不敏感 o理论上可与该杀菌剂复合使用 o׫vs{s
及 ×√sw2u在田间是否能与室内试验表现一致 o还需
进一步研究证实 ∀
≈参考文献  
≈t  李 淼 o檀根甲 o丁克坚 o等 q木霉菌在植物病原真菌生物防
治上的研究与应用前景 ≈ q植物病理学研究进展 o ussvox}
twq
≈u  朱延恒 o邢小平 o孙顺娣 q木霉 ×|z菌株对几种植物病原真菌的
拮抗作用机制和温室防治试验 ≈ q植物保护学报 ousswovt
kul}tv|q
≈v  方中达 q植病研究方法 ≈   1北京 }中国农业出版社 ot||{}
xsq
Σχρεενινγ στραινσ φορ Τριχηοδερµ α σππ. φορ στρονγ ανταγονισµ αγαινστ γινσενγ
ροοτ πατηογενσανδ στυδψ ον τηειρ βιολογιχαλχηαραχτερσ
‹„’ „ 2±¤o ⁄Œ‘Š • ¤±2¯²±ªo ‹˜ ⁄¬¤±2¯²±ª
(Ινστιτυτε οφΜεδιχιναλΠλαντ, Χηινεσε Αχαδεµ ψΜεδιχαλΣχιενχεσ ανδ Πεκινγ Υνιον Μεδιχαλ
Χολλεγε, Βειϕινγ tsss|w, Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ¶¦µ¨ ±¨ ·«¨ Τριχηοδερµ α ¶³³q ©²µ¶·µ²±ª¤±·¤ª²±¬¶·¤ª¤¬±¶·ª¬±¶¨±ªµ²²·³¤·«²ª¨ ±¶q Μετηοδ : ׫¨ ¥¬²2
²¯ª¬¦¤¯ ¦«¤µ¤¦·¨µ¶²©·¨± Τριχηοδερµ α ¶·µ¤¬±¶º µ¨¨ ¦²°³¤µ¨§¥¼ ¦∏¯·∏µ¬±ª²± §¬©©¨µ¨±·° §¨¬¤q „±§·«¨ ¬µ¤±·¤ª²±¬¶·¬¦¤¦·¬√¬·¼ ¤ª¤¬±¶·Πηψ2
τοπητηορα χαχτορυµ , Χψλινδροχαρπον δεστρυχτανσ ¤±§ Ρηιζοχτονια σολανι º µ¨¨ ° ¤¨¶∏µ¨§ ²± °⁄„q Ρ εσυλτ ανδ Χονχλυσιον: ×√sw2u ¤±§
׫vs{s ¶«²º §¨¤ª²²§ªµ²º·«²± ¶²¬¯¶²¯∏·¬²± ° §¨¬∏° ¤±§°⁄„o¤±§¤¯¶²¶«²º §¨«¬ª«¬±«¬¥¬·²µ¼ ©¨©¬¦¤¦¼ ·²·«¨ ·«µ¨¨³¤·«²ª¨ ±¶q ׫¨
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vtoŒ¶¶∏¨ us
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τωο Τριχηοδερµ α ¶·µ¤¬±¶¶«²º §¨§¬©©¨µ¨±·ªµ²º·«µ¤·¨ ∏±§¨ µ ¬¯ª«·¦²±§¬·¬²±¶¤±§³‹ q Τριχηοδερµ α ¶·µ¤¬±¶º µ¨¨ ¶¨±¶¬·¬√¨·² °²¶·©∏±ª¬2
¦¬§¨ ¶∏¶¨§¬± ª¬±¶¨±ªµ²²·§¬¶¨¤¶¨ ¦²±·µ²¯ ¬¯±ªo«²º √¨ µ¨×√sw2u º¤¶±²·¶¨±¶¬·¬√¨·²·«¨ ©∏±ª¬¦¬§¨ ∏±¦«²±ª∏¨ ¥¤q
[ Κεψ ωορδσ] Τριχηοδερµ α ¶³³q~ ¤±·¤ª²±¬¶°~ ªµ²º·«µ¤·¨~ ª¬±¶¨±ªµ²²·³¤·«²ª¨ ±¶
≈责任编辑 张宁宁  
≈收稿日期   ussx2tt2sw
≈基金项目   国家 / {yv0计划 kussv„„uwysytl
≈通讯作者   3 李召虎 o ר¯} k sts l yuzvvwuzo ƒ¤¬} k sts l
yuzvuxyzo∞2°¤¬¯} ¬¯½«¤²«∏ƒ ¦¤∏q §¨∏q¦±
植物生长物质 ‹Ž2w对甘草叶片活性氧代谢
及 °≥µ光化学效率调控的研究
李 刚 tou o段留生 u o王保民 u o何钟佩 u o李召虎 u3 o周成明 v
kt1吉林农业科技学院 o吉林 吉林 tvuts|~ u1中国农业大学 农学与生物技术学院 o北京 tsss|w~
v1北京大兴时珍中草药技术研究所 o北京 tsuys|l
≈摘要   目的 }研究在大田条件下植物生长物质 ‹Ž2w系统调控对甘草叶片活性氧代谢及 °≥µ光化学效率
影响 ∀方法 }以乌拉尔甘草为材料 o定期测定 ‹Ž2w对甘草叶片的活性氧代谢及 °≥µ光化学效率的影响 ∀结果与
结论 }‹Ž2w提高了叶片中叶绿素的含量 !提高了超氧化物歧化酶 k≥’⁄l!过氧化氢酶 k≤„×l活性 o降低了过氧化
物酶 k°’⁄l活性和膜脂过氧化物产物丙二醛 k ⁄„l的积累 o改善了活性氧代谢 o延缓了叶片的衰老 o提高了叶片的
光化学效率 kΦ√ rΦ° l∀
≈关键词   甘草 ~叶片 ~活性氧代谢 ~光化学效率 ~植物生长物质
≈中图分类号   ≥ xyz ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukussylus2tyzw2sw
植物的干物质 |sh以上来自光合作用 ≈t  o叶片
衰老过早或过晚都会对产量与品质造成不利影响 o
活性氧积累引起膜脂过氧化可能是叶片衰老和活性
下降的重要原因之一 ≈u  ∀超氧化物歧化酶 k≥’⁄l!
过氧化氢酶 k≤„×l和过氧化物酶 k°’⁄l是细胞抵
御活性氧伤害的酶保护系统 o在清除超氧自由基 !过
氧化氢和过氧化物及阻止或减少羟基自由基形成方
面起重要作用 ≈v  o丙二醛 k ⁄„l是脂质化过氧化的
产物 o其含量的高低反映着膜脂过氧化程度 ≈w  ∀因
此 o人们认为 ≥’⁄o≤„×o°’⁄等酶活性及  ⁄„含量
变化作为行量叶片衰老的重要标志 ≈x  ∀
乌拉尔甘草 Γλψχψρρηιζα υραλενσισ ƒ¬¶¦«¨ µqk简称
甘草 l是药典收载的甘草药材的原植物之一 o以干
燥的根及根状茎入药 ≈w  ∀野生甘草资源日趋枯竭 o
有关甘草栽培生理的研究已引起人们的关注 ≈yoz  ∀
李明等 ≈{ 开展了干旱胁迫对甘草幼苗保护酶活性
及脂质过氧化作用的影响研究 o但从活性氧代谢角
度研究植物生长物质对栽培甘草叶片衰老的效应调
控 o国内外尚未见报道 ∀
植物生长物质 ‹Ž2w在促进甘草生长发育方
面有良好的调控效应 ≈z  o本研究以二年生栽培甘草
为材料 o应用 ‹Ž2w处理甘草 o研究甘草叶片的活
性氧代谢 o为探讨植物生长物质对甘草延缓衰老 o提
高光合效率 o增加产量 o改善品质的调控机理 o提供
依据 ∀
1 材料与方法
111 仪器及试剂 紫外可见分光谱 k°«¤µ°¤¦¬¤
Ž… …¬²¦«µ²° w1ysl~ Œ‘’×„ ≥°„⁄ p xsu型叶绿
素计 k日本 l~ƒ ≥u型便携式荧光仪 k英国 ‹¤±¶¤·2
¦¨«公司 l∀
112 材料 ‹Ž2wk主要成分为 {sh二乙氨基乙基
已酸脂 l是中国农业大学作物化学控制中心研制的
环境友好甘草专用型植物生长物质 ≈z  ∀
实验材料为乌拉尔甘草 o种子用新疆野生乌拉
尔甘草 ∀在北京大兴时珍中草药技术研究所实验基
地 oussv年 w月机械等量条播 o正常田间管理 ∀用
#wzyt#
第 vt卷第 us期
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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