全 文 :¶¬§¨ ©µ²° ¯¨ ¤√ ¶¨²© Ενγεληαρδτια χηρψσολεπισo¤ ≤«¬±¨ ¶¨ ©²¯® ° §¨¬¦¬±¨ o
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ιστρψot||v ovvkxl }tuvv q
≈x 于德泉 o杨峻山 q分析化学手册 q第七分册 q第二版 q北京 }化学
工业出版社 ot||| qus q
Στυδιεσ ον διηψδροφλαϖονολ γλψχοσιδεσφροµ ρηιζοµε οφ Σµιλαξ γλαβρα
≠¬∏2½«¬t o⁄ ⁄¨ 2 ¬´¤±ªt o ≤∞≠¬±ª2¬¨ t o • ¬¨u o ²¬®¨ u o× ×≥ ¬®¤¬§²u o ≠ ÷¬±2¶«¨ ±ªt
kt . ∆επαρτµεντ οφ Νατυραλ Προδυχτσ Χηεµιστρψ, Σηενψανγ Πηαρµαχευτιχαλ Υνιϖερσιτψ, Σηενψανγ ttssty , Χηινα~
u qΣχηοολ οφ Πηαρµαχευτιχαλ Σχιενχεσ , Τοηο Υνιϖερσιτψ, Χηιβα uzw2{xts , ϑαπανl
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨ ¦«¨ °¬¦¤¯ ¦²±¶·¬·∏¨±·¶©µ²° ·«¨ µ«¬½²° ¶¨²© Σµιλαξ γλαβρα q Μετηοδ : ׫¨ ¦²°³²∏±§¶º µ¨¨
¬¶²¯¤·¨§¥¼ ¦²¯∏°± ¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼ º¬·«¶¬¯¬¦¤ª¨¯o⁄¬¤¬²± °2us ¤±§⁄≥ ¤¶³¤¦®¬±ª°¤·¨µ¬¤¯¶o¤±§°≤ q׫¨¬µ¶·µ∏¦·∏µ¨¶º µ¨¨ §¨·¨µ°¬±¨ §
²±·«¨ ¥¤¶¬¶²©·«¨¬µ¶³¨¦·µ¤¯ √¨¬§¨ ±¦¨ q Ρεσυλτ : x §¬«¼§µ²2©¯¤√²±²¯ ª¯¼¦²¶¬§¨¶º µ¨¨ ¬§¨ ±·¬©¬¨§¤¶}¤¶·¬¯¥¬± ktl o ±¨ ²¤¶·¬¯¥¬± kul o¬¶²¤¶·¬¯¥¬±
kvl o±¨ ²¬¶²¤¶·¬¯¥¬± kwl oku Ρ ov Ρl2·¤¬¬©²¯¬±2vχ2 Ο2Β2 ∆2³¼µ¤±ª¯∏¦²¶¬§¨ kxl q Χονχλυσιον : ≤²°³²∏±§¶u ow ox º µ¨¨ ¬¶²¯¤·¨§©µ²°·«¬¶³¯¤±·
©²µ·«¨ ©¬µ¶··¬°¨q
[ κεψ ωορδσ] Σµιλαξ γλαβρα ~§¬«¼§µ²©¯¤√²±²¯ ~¤¶·¬¯¥¬±~±¨ ²¤¶·¬¯¥¬±~¬¶²¤¶·¬¯¥¬±~±¨ ²¬¶²¤¶·¬¯¥¬± ≈责任编辑 李 禾
高效毛细管电泳法测定中药大黄及
青海野生大黄茶中活性蒽醌类成分的含量
郑文捷t 3 o陈兴国u o贾 伟t
kt q上海交通大学 药学院 o上海 usssvs ~u q兰州大学 化学化工学院 o甘肃 兰州 zvssssl
≈摘要 目的 }首次建立一种简单 !快速且能同时分离测定中药大黄及青海野生大黄茶中 v种主要活性蒽醌成
分含量的胶束毛细管电泳新方法 ∀方法 }熔融石英毛细管柱kzx Λ° ≅ xs qs ¦° o有效长度 wu qw ¦°l ~缓冲体系 tx qs
°°²¯#pt硼砂2vs qs °°²¯#pt ≥⁄≥2ts h乙醇 o³ | qys o分离电压 us ®∂ ~检测波长 uxw ±° ∀结果 }大黄素 !芦荟大黄素
和大黄酸的线性范围分别为 w ∗ tuskρ s q||u tl ots ∗ usskρ s q||z sl ou ∗ tss °ª#ptkρ s q||z tl ∀日内迁移时
间和峰面积的相对标准偏差分别为 s qx| h ∗ s q{s h ot qvs h ∗ v quu h o回收率范围为 |z qy h ∗ tsu qv h ∀结论 }方法
简单 !快速 !准确 !重现性好 o可用于大黄药材和青海野生大黄茶的质量控制 ∀
≈关键词 大黄 ~青海野生大黄茶 ~高效毛细管电泳 ~蒽醌 ~大黄素 ~芦荟大黄素 ~大黄酸
≈中图分类号 u{w qt ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukusswls|2s{zs2sw
大黄为蓼科植物掌叶大黄 Ρηευµ παλµατυµ q!
唐古特大黄 Ρ . τανγυτιχυµ ¤¬¬° q ¬¨
¤¯©q或药用大
黄 Ρ . οφφιχιναλε
¤¬¯¯ 的干燥根及根茎 ∀现代医学证
明 o大黄具有荡涤肠胃 !化瘀止血 !泻火通便 !降脂
减肥 !保肝利胆等作用 o特别是其对广谱抗菌 !抗病
≈收稿日期 ussw2su2ts
≈通讯作者 3郑文捷 oר¯ }ksutlyu|vuu|u o ∞2°¤¬¯}½«¨ ±ªº ¶2
·∏q¨§∏q¦±
毒 !抗肿瘤 !抗衰老的特殊功效≈t o展示出大黄作为
新资源食品的广阔前景 ∀青海野生大黄茶以青藏高
原高海拔 !无污染物的优质唐古特大黄和掌叶大黄
经现代工艺制成冲剂 o以茶代饮 o既保留了大黄的活
性成分和纯天然的特征 o又具有长期保存 !携带饮用
方便的特点 ∀青海野生大黄茶的研制开发 o利用了
中药与食品的同源性 o对发挥青海资源优势 o促进青
海新资源食品经济发展具有重要的意义 ∀
#sz{#
第 u|卷第 |期
ussw年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ |
≥¨ ³·¨°¥¨µoussw
薄层色谱是一种测定中草药有效成分的传统分
析方法 o然而该方法分离效率低 !重现性差≈u ∀高效
液相色谱也是测定中草药有效成分的常用技术之
一 o但是该方法耗时 !耗物 !预处理过程较为复杂 !色
谱柱易污染且不易清洗≈v ow ∀
高效毛细管电泳k°≤∞l是一种先进的新型分
离分析技术 o它具有分析效率高 !分析速度快 !样品
用量小 !运行费用低 !溶剂消耗小 !对环境几乎无污
染等突出优点 o对许多植物药中有效成分的分析十
分有效 k例如黄酮 !生物碱 !酚酸 !奎宁 !香豆素
等l≈x ∀本研究利用硼砂作为缓冲液 o对大黄素 !芦
荟大黄素 !大黄酸的毛细管电泳迁移行为进行了研
究 o并考察了酸度 !缓冲液浓度 !≥⁄≥浓度 !有机添加
物浓度 !电压等因素对待测物质分离的影响 o首次建
立了同时分离测定大黄药材 !青海野生大黄茶的 v
种主要活性蒽醌成分大黄素 !芦荟大黄素 !大黄酸胶
束电动毛细管色谱法k∞≤l新方法 ∀结果表明 o该
方法简便 !快速 !准确 !重现性好 ∀
1 仪器与试药
• ¤·¨µ¶±∏¤±·¤ wsss 型电泳仪k • ¤·¨µ¶公司 o美
国l o使用 ¤¬¬°¤{us ≤«µ²°¤·²ªµ¤³« • ²µ®¶·¤·¬²±进行
数据采集 ~弹性石英毛细管柱k河北永年光导纤维
厂l ~°≥ p ts型酸度计k萧山市科学仪器厂l ∀
大黄素 !芦荟大黄素 !大黄酸标准品 !大黄药材
均购于中国药物生物制品检定所 ∀青海野生大黄茶
购于兰州大药房k青海大地药业有限公司生产l ∀所
用化学试剂均为分析纯 ∀实验用水均为蒸馏水 ∀
2 电泳条件
熔融石英毛细管柱kzx Λ° ≅ xs qs ¦° o有效长度
wu qw ¦°l ~缓冲体系为 tx qs °°²¯ #pt硼砂2vs qs
°°²¯#pt ≥⁄≥2ts h乙醇 o³ | qys o分离电压 us ®∂ ~
检测波长 uxw ±° ~温度kux qs ? s qvl ε ~进样时间为
x qs ¶k高度差为 ts qs ¦°l ∀
毛细管第 t次使用前依次用 t qs °²¯ #pt ≤¯
冲洗 x °¬±o蒸馏水冲洗 v °¬±os qt °²¯#pt¤ 冲
洗 ts °¬±o蒸馏水冲洗 v °¬±o缓冲溶液冲洗 ts °¬±∀
u次运行之间毛细管依次用蒸馏水冲洗 t °¬±os qt
°²¯#pt ¤冲洗 u °¬±o蒸馏水冲洗 t °¬±o缓冲溶
液冲洗 u °¬±∀为了保证重现性 o缓冲溶液每运行 v
次后要进行更新 ∀
3 溶液制备
3 q1 对照品溶液制备 精密称定大黄素 !芦荟大黄
素 !大黄酸适量 o分别以氯仿2乙醇ktΒtl为溶剂 o配
制成标准储备溶液k大黄素 uss °ª#pt o芦荟大黄素
uss °ª#pt o大黄酸 tss °ª#ptl o在冰箱中保存 ∀
在使用前 o按要求稀释为不同浓度的工作溶液 ∀用
s qu °²¯#pt ≤¯ 或 s qu °²¯#pt ¤ 调节 ³ 值 ∀
用乙醇作电渗流标记物 ∀
3 q2 供试品溶液制备 分别将一定量的大黄药材
及青海野生大黄茶研磨成粉末 o然后准确称取大黄
药材 u qsss ª!青海野生大黄茶 x qsss ªo分别以氯仿2
乙醇ktΒtl作溶剂超声提取 us °¬±o然后过滤挥干 ∀
重复 v次 ∀提取物以氯仿与乙醇ktΒtl溶解并定容
至 ts °∀进样前用 s qwx Λ°滤膜过滤 ∀
4 条件优化实验
4 q1 硼砂缓冲液酸度的选择 对于可离解的溶质
分子 o缓冲液酸度影响它们的离解度 o因而酸度可明
显改变其电泳迁移行为 ∀由实验可知 o在 ³ | qts ∗
ts qys o大黄素 !芦荟大黄素 !大黄酸这 v种有效成分
均可获得很好的分离 ∀然而实际中药样品中的成分
非常复杂 o在 ³ | qts时 o大黄素 !芦荟大黄素因有
其他未知成分的干扰而分离不佳 ∀实验表明 o在 ³
| qys时分离效果最好 ov种有效成分各自的峰形对
称且窄而高 o同时亦无其他未知成分的干扰 o因此本
实验最终选择 ³ | qys作为硼砂缓冲液的最佳酸
度 ∀
图 t 缓冲液酸度对分析物迁移时间的影响
t q大黄素 ~u q芦荟大黄素 ~v q大黄酸k图 u ∗ 图 y同l
分离条件 }缓冲液 tx qs °°²¯#pt硼砂2vs qs °°²¯#pt≥⁄≥2ts h乙醇 o
电压 us qs ®∂
4 q2 硼砂浓度的影响 为了优化分离条件 o在
x qs ∗ ux qs °°²¯#pt考察了硼砂浓度对迁移时间的
影响 ∀实验表明大黄素 !芦荟大黄素在硼砂浓度 x qs
°°²¯#pt时不能很好分离 o当硼砂浓度为 ts qs °°²¯
#pt时 o芦荟大黄素的峰形不对称 o所以选择 tx qs
°°²¯#pt作为最佳硼砂浓度 ∀
4 q3 ≥⁄≥的影响 在缓冲溶液组成为tx qs °°²¯#
pt硼砂2ts h乙醇k³ | qysl时 o本研究在us qs ∗
xs qs °°²¯#pt考察了 ≥⁄≥浓度对分离的影响 ∀v
#tz{#
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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图 u 硼砂浓度对分析物迁移时间的影响
分离条件 }缓冲液 vs qs °°²¯#pt≥⁄≥2ts h乙醇 o³ | qys o
电压 us qs ®∂
种有效成分的迁移时间都随着 ≥⁄≥浓度的增大而增
大 o它们的迁移顺序依次为大黄素 !芦荟大黄素 !大
黄酸 o其中大黄素迁移速度最快 o后两者比较 o由于
大黄酸离解程度更大 o其迁移速度最慢 ∀实验表明 o
当 ≥⁄≥浓度为 us qs °°²¯#pt时 o大黄素 !芦荟大黄
素彼此间不能分离 o而当 ≥⁄≥浓度超过 vs qs °°²¯#
pt时 o迁移时间增大 ∀综合考虑上述影响因素 o本
研究选择最佳 ≥⁄≥浓度为 vs qs °°²¯#pt ∀
图 v ≥⁄≥浓度对分析物迁移时间的影响
分离条件 }缓冲液 tx qs °°²¯#pt硼砂2ts h乙醇 o
³ | qys o电压 us qs ®∂
4 q4 乙醇的影响 在缓冲液中添加有机物可改善
°≤∞的分离效率≈y ∀本研究在 s h ∗ us h 的范围
内考察了乙醇浓度对分离的影响 ∀实验表明 o在乙
醇浓度为 s h ∗ x h时 ov种有效成分的分离情况不
佳 o出于对分离和迁移时间的综合考虑 o选择乙醇浓
度为 ts h ∀
图 w 乙醇对迁移时间的影响
分离条件 }缓冲液 tx qs °°²¯#pt硼砂2vs qs °°²¯#pt≥⁄≥ o
³ | qys o电压 us qs ®∂
4 q5 分离电压的影响 在毛细管电泳中 o提高分离
电压可以缩短体系分离时间 o但是在高电压下会由
于焦耳热的影响 o使溶质产生扩散现象 o从而降低毛
细管电泳分离效率 ∀本研究在 tx ∗ ux ®∂ 的范围内
考察了分离电压对分离的影响 ∀选择的最佳分离电
压为 us ®∂ ∀
图 x 电压对迁移时间的影响
分离条件 }缓冲液 tx qs °°²¯#pt硼砂2vs qs °°²¯#pt≥⁄≥2
ts h乙醇 o³ | qys
5 线性关系考察
分别吸取大黄素 !芦荟大黄素 !大黄酸 v种对照
品储备液各 s qt os qv os qx os qz ot qs ou qs ow qs °o置 x
°量瓶中 o加氯仿与乙醇ktΒtl至刻度 o摇匀 o制得
系列对照品溶液 ∀横坐标 Ξ代表浓度k°ª#ptl o纵
坐标 Ψ代表峰面积 o大黄素 !芦荟大黄素和大黄酸 v
种有效成分的峰面积与浓度分别在 w ∗ tus ots ∗
uss ou ∗ tss °ª#pt呈良好的线性关系 ∀v种有效成
分的线性回归方程分别为 }大黄素 oΨ p t yv| n
uz{ q|v Ξkρ s q||u tl ~芦荟大黄素 oΨ p zyu qzx n
yv qvz Ξkρ s q||zsl ~大黄酸 oΨ p zxt qwt n zxz q{s
Ξkρ s q||z tl ∀在 v倍信噪比下 ov种有效成分的
检测限分别为 s qv ot qu os qt °ª#pt ∀
6 精密度实验
精密吸取 v种对照品的混合溶液连续进样测定
y次 o日内迁移时间和峰面积的 ≥⁄分别为 s qx| h
∗ s q{s h ot qvs h ∗ v quu h ∀日间迁移时间和峰面积
的 ≥⁄分别为 s q|t h ∗ t qvz h ou qzs h ∗ w qyx h ∀
7 样品含量测定
表 t 实际样品中大黄素 !芦荟大黄素 !
大黄酸的分析结果k ν yl
样品
大黄素
含量
r°ª#ªpt
≥⁄
r h
芦荟大黄素
含量
r°ª#ªpt
≥⁄
r h
大黄酸
含量
r°ª#ªpt
≥⁄
r h
大黄药材 t qzt v qw u qxz w qz t qvt u qz
青海野生大黄茶 s qtt u qv s q|x u qw s qtz v q{
用本实验所建立的方法 o对大黄及青海野生大
#uz{#
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| o¶¶∏¨ |
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黄茶的 v种活性蒽醌成分进行了分析 o结果列于表
t o样品的电泳谱图如图 y所示 ∀本研究还利用标准
加入法对回收率进行了考察 o回收率范围 |z qy h ∗
tsu qv h ∀
图 y v种药物分子和实际样品的分离谱图
q标准混合物k分析物浓度分别为 tys otys o{s °ª#ptl ~
q大黄药材 ~≤ q青海野生大黄茶
分离条件 }缓冲液 tx qs °°²¯#pt硼砂2vs qs °°²¯#pt≥⁄≥2ts h乙醇 o
³ | qys o电压 us qs ®∂
8 结论
本实验研究了大黄素 !芦荟大黄素 !大黄酸的电
泳迁移行为 o在此基础上首次建立了同时分离和测
定大黄及青海野生大黄茶中大黄素 !芦荟大黄素 !大
黄酸的 ∞≤新方法 o该方法简便 !快速 !准确 !重现
性好 o对于中药大黄及其冲剂中有效成分的分析和
质量监控具有重要的实用价值 ∀
≈参考文献
≈t 中国科学院西北生物研究所 q西宁 }青海人民出版社 ot|{| q{s
≈u ∞ ≠ o ≥ q≥·∏§¬¨¶²±·«¨ ¤±¤¯¼¶¬¶²©¤±·«µ¤´ ∏¬±²±¨ §¨µ¬√¤2
·¬√ ¶¨²© ≤«¬±¨ ¶¨ °¨ §¬¦¬±¤¯ «¨µ¥¶q Αχτα Πηαρµ Σιν ot|{s otx }xxx q
≈v ≤ o ° o ≤ q≤²°³∏·¨µ¤¬§¨§§¨ √¨ ²¯³° ±¨·²©¤«¬ª«2
³¨µ©²µ°¤±¦¨ ¬¯´∏¬§¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦°¨ ·«²§©²µ·«¨ §¨·¨µ°¬±¤·¬²± ²©«¼2
§µ²¬¼¤±·«µ¤´ ∏¬±²±¨ §¨µ¬√¤·¬√¨ ¶¬± ≤«¬±¨ ¶¨ «¨µ¥ °¨ §¬¦¬±¨ µ«∏¥¤µ¥q ϑ
Χηροµατογρ. Αot||| o{xz }tyz q
≈w ≥ ≠ o o • q ⁄¨ ·¨µ°¬±¤·¬²± ²© °¨²§¬±o¦«µ¼¶²³«¤±²¯
¤±§¥¤¬¦¤¯¬± ¬± ·«µ¨¨ ¼¨ ¯¯²º ·¤¥¯ ·¨¶ ¥¼ °≤ q Χηινεσε Τραδιτιοναλ
Πατεντ Μεδιχινε ousst ouv }wwy q
≈x ≥∏±·²µ±¶∏® q ≤¤³¬¯¯¤µ¼ ¨¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶²© ³«¼·²¦«¨ °¬¦¤¯ ¶∏¥¶·¤±¦¨¶q
Πηαρµ Βιοµεδ Αναλoussu ouz }yz| q
≈y • ¬¨±¥¨µª¨µ o²µ¬¨ q ¬¦¨¯¯¤µ¨¯ ¦¨·µ²®¬±¨ ·¬¦¦¤³¬¯¯¤µ¼ ¦«µ²°¤·²ªµ¤2
³«¼ ²©¬¯¯¬¦¬·§µ∏ª¶∏¥¶·¤±¦¨¶q Αναλ Χηεµ ot||t oyv }{uv q
∆ετερµινατιον οφ αχτιϖε αντηραθυινονεσιν Ρηευµ ανδ ιτστεα
πρεπαρατιονσ βψ µιχελλαρ ελεχτροκινετιχ χαπιλλαρψ ελεχτροπηορεσισ
∞ • ±¨2¬¨t o≤∞÷¬±ª2ª∏²u o • ¬¨t
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³µ¨³¤µ¤·¬²±¶o±¬±ª«¤¬• ¬¯§⁄¤«∏¤±ª× ¤¨o¥¼ °¬¦¨¯¯¤µ¨¯ ¦¨·µ²®¬±¨ ·¬¦¦¤³¬¯¯¤µ¼ ¨¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶©²µ·«¨ ©¬µ¶··¬°¨q Μετηοδ : ≥¨ ³¤µ¤·¬²± º¤¶¦¤µ2
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vs qs °°²¯#pt ≥⁄≥ ¤±§ts h ·¨«¤±²¯ k³ | qysl ¤±§¤ ∂ §¨·¨¦·²µ¤·uxw ±° º µ¨¨ ¤§²³·¨§q Ρεσυλτ : ׫¨ ¬¯±¨ ¤µ¦¤¯¬¥µ¤·¬²±µ¤±ªº¤¶w ∗
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¤¨¦«³¨ ¤® º µ¨¨ s qx| h ∗ s q{s h ot qvs h ∗ v quu h oµ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ q׫¨ ¦²±·¨±·¶²©·«¨ ¤±¤¯¼·¨¶º µ¨¨ ¤¨¶¬¯¼ §¨·¨µ°¬±¨ §º¬·«µ¨¦²√ µ¨¬¨¶µ¤±ª¬±ª
©µ²° |z qy h ∗ tsu qv h q Χονχλυσιον : ׫¨ ° ·¨«²§¬¶³µ²√ §¨·² ¥¨ ¶¬°³¯¨oµ¤³¬§¤±§¤¦¦∏µ¤·¨o¤±§¦¤± ¥¨ ∏¶¨§©²µ·«¨ ∏´¤¯¬·¼ ¦²±·µ²¯ ²©
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[ Κεψ ωορδσ] «¨ ∏° ~ ±¬±ª«¤¬ • ¬¯§⁄¤«∏¤±ª× ¤¨~¦¤³¬¯¯¤µ¼ ¨¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶~¤±·«µ¤´ ∏¬±²±¨ ¶~ °¨²§¬±~¤¯²¨ 2 °¨²§¬±~µ«¨¬±q
≈责任编辑 李 禾
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