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Determination of active anthraquinones in Rheum and its tea preparations by micellar electrokinetic capillary electrophoresis

高效毛细管电泳法测定中药大黄及青海野生大黄茶中活性蒽醌类成分的含量



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≈x  于德泉 o杨峻山 q分析化学手册 q第七分册 q第二版 q北京 }化学
工业出版社 ot||| qus q
Στυδιεσ ον διηψδροφλαϖονολ γλψχοσιδεσφροµ ρηιζοµε οφ Σµιλαξ γλαβρα
≠˜„‘¬∏2½«¬t o⁄’˜ ⁄¨ 2 ¬´¤±ªt o ≤‹∞‘≠¬±ª2­¬¨ t oŒ • ¬¨u oŽ„˜’ Ž²¬®¨ u oׄ ’×≥˜ ‘¬®¤¬§²u o ≠„’ ÷¬±2¶«¨ ±ªt
kt . ∆επαρτµεντ οφ Νατυραλ Προδυχτσ Χηεµιστρψ, Σηενψανγ Πηαρµαχευτιχαλ Υνιϖερσιτψ, Σηενψανγ ttssty , Χηινα~
u qΣχηοολ οφ Πηαρµαχευτιχαλ Σχιενχεσ , Τοηο Υνιϖερσιτψ, Χηιβα uzw2{xts , ϑαπανl
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε : ײ¬±√ ¶¨·¬ª¤·¨·«¨ ¦«¨ °¬¦¤¯ ¦²±¶·¬·∏¨±·¶©µ²° ·«¨ µ«¬½²° ¶¨²© Σµιλαξ γλαβρα q Μετηοδ : ׫¨ ¦²°³²∏±§¶º µ¨¨
¬¶²¯¤·¨§¥¼ ¦²¯∏°± ¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼ º¬·«¶¬¯¬¦¤ª¨¯o⁄¬¤¬²± ‹°2us ¤±§’⁄≥ ¤¶³¤¦®¬±ª°¤·¨µ¬¤¯¶o¤±§‹°≤ q׫¨¬µ¶·µ∏¦·∏µ¨¶º µ¨¨ §¨·¨µ°¬±¨ §
²±·«¨ ¥¤¶¬¶²©·«¨¬µ¶³¨¦·µ¤¯ √¨¬§¨ ±¦¨ q Ρεσυλτ : x §¬«¼§µ²2©¯¤√²±²¯ ª¯¼¦²¶¬§¨¶º µ¨¨ ¬§¨ ±·¬©¬¨§¤¶}¤¶·¬¯¥¬± ktl o ±¨ ²¤¶·¬¯¥¬± kul o¬¶²¤¶·¬¯¥¬±
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[ κεψ ωορδσ] Σµιλαξ γλαβρα ~§¬«¼§µ²©¯¤√²±²¯ ~¤¶·¬¯¥¬±~±¨ ²¤¶·¬¯¥¬±~¬¶²¤¶·¬¯¥¬±~±¨ ²¬¶²¤¶·¬¯¥¬± ≈责任编辑 李 禾 
高效毛细管电泳法测定中药大黄及
青海野生大黄茶中活性蒽醌类成分的含量
郑文捷t 3 o陈兴国u o贾 伟t
kt q上海交通大学 药学院 o上海 usssvs ~u q兰州大学 化学化工学院 o甘肃 兰州 zvssssl
≈摘要 目的 }首次建立一种简单 !快速且能同时分离测定中药大黄及青海野生大黄茶中 v种主要活性蒽醌成
分含量的胶束毛细管电泳新方法 ∀方法 }熔融石英毛细管柱kzx Λ° ≅ xs qs ¦° o有效长度 wu qw ¦°l ~缓冲体系 tx qs
°°²¯#pt硼砂2vs qs °°²¯#pt ≥⁄≥2ts h乙醇 o³‹ | qys o分离电压 us ®∂ ~检测波长 uxw ±° ∀结果 }大黄素 !芦荟大黄素
和大黄酸的线性范围分别为 w ∗ tuskρ€ s q||u tl ots ∗ usskρ€ s q||z sl ou ∗ tss °ª#ptkρ€ s q||z tl ∀日内迁移时
间和峰面积的相对标准偏差分别为 s qx| h ∗ s q{s h ot qvs h ∗ v quu h o回收率范围为 |z qy h ∗ tsu qv h ∀结论 }方法
简单 !快速 !准确 !重现性好 o可用于大黄药材和青海野生大黄茶的质量控制 ∀
≈关键词  大黄 ~青海野生大黄茶 ~高效毛细管电泳 ~蒽醌 ~大黄素 ~芦荟大黄素 ~大黄酸
≈中图分类号  • u{w qt ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukusswls|2s{zs2sw
大黄为蓼科植物掌叶大黄 Ρηευµ παλµατυµ q!
唐古特大黄 Ρ . τανγυτιχυµ ¤¬¬° q ¬¨ …¤¯©q或药用大
黄 Ρ . οφφιχιναλε …¤¬¯¯ 的干燥根及根茎 ∀现代医学证
明 o大黄具有荡涤肠胃 !化瘀止血 !泻火通便 !降脂
减肥 !保肝利胆等作用 o特别是其对广谱抗菌 !抗病
≈收稿日期  ussw2su2ts
≈通讯作者  3郑文捷 oר¯ }ksutlyu|vuu|u o ∞2°¤¬¯}½«¨ ±ªº­ƒ ¶­2
·∏q¨§∏q¦±
毒 !抗肿瘤 !抗衰老的特殊功效≈t  o展示出大黄作为
新资源食品的广阔前景 ∀青海野生大黄茶以青藏高
原高海拔 !无污染物的优质唐古特大黄和掌叶大黄
经现代工艺制成冲剂 o以茶代饮 o既保留了大黄的活
性成分和纯天然的特征 o又具有长期保存 !携带饮用
方便的特点 ∀青海野生大黄茶的研制开发 o利用了
中药与食品的同源性 o对发挥青海资源优势 o促进青
海新资源食品经济发展具有重要的意义 ∀
#sz{#
第 u|卷第 |期
ussw年 |月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂²¯ qu| oŒ¶¶∏¨ |
≥¨ ³·¨°¥¨µoussw
薄层色谱是一种测定中草药有效成分的传统分
析方法 o然而该方法分离效率低 !重现性差≈u  ∀高效
液相色谱也是测定中草药有效成分的常用技术之
一 o但是该方法耗时 !耗物 !预处理过程较为复杂 !色
谱柱易污染且不易清洗≈v ow  ∀
高效毛细管电泳k‹°≤∞l是一种先进的新型分
离分析技术 o它具有分析效率高 !分析速度快 !样品
用量小 !运行费用低 !溶剂消耗小 !对环境几乎无污
染等突出优点 o对许多植物药中有效成分的分析十
分有效 k例如黄酮 !生物碱 !酚酸 !奎宁 !香豆素
等l≈x  ∀本研究利用硼砂作为缓冲液 o对大黄素 !芦
荟大黄素 !大黄酸的毛细管电泳迁移行为进行了研
究 o并考察了酸度 !缓冲液浓度 !≥⁄≥浓度 !有机添加
物浓度 !电压等因素对待测物质分离的影响 o首次建
立了同时分离测定大黄药材 !青海野生大黄茶的 v
种主要活性蒽醌成分大黄素 !芦荟大黄素 !大黄酸胶
束电动毛细管色谱法k∞Ž≤l新方法 ∀结果表明 o该
方法简便 !快速 !准确 !重现性好 ∀
1 仪器与试药
• ¤·¨µ¶±∏¤±·¤ wsss 型电泳仪k • ¤·¨µ¶公司 o美
国l o使用 ¤¬¬°¤{us ≤«µ²°¤·²ªµ¤³« • ²µ®¶·¤·¬²±进行
数据采集 ~弹性石英毛细管柱k河北永年光导纤维
厂l ~°‹≥ p ts„型酸度计k萧山市科学仪器厂l ∀
大黄素 !芦荟大黄素 !大黄酸标准品 !大黄药材
均购于中国药物生物制品检定所 ∀青海野生大黄茶
购于兰州大药房k青海大地药业有限公司生产l ∀所
用化学试剂均为分析纯 ∀实验用水均为蒸馏水 ∀
2 电泳条件
熔融石英毛细管柱kzx Λ° ≅ xs qs ¦° o有效长度
wu qw ¦°l ~缓冲体系为 tx qs °°²¯ #pt硼砂2vs qs
°°²¯#pt ≥⁄≥2ts h乙醇 o³‹ | qys o分离电压 us ®∂ ~
检测波长 uxw ±° ~温度kux qs ? s qvl ε ~进样时间为
x qs ¶k高度差为 ts qs ¦°l ∀
毛细管第 t次使用前依次用 t qs °²¯ #pt ‹≤¯
冲洗 x °¬±o蒸馏水冲洗 v °¬±os qt °²¯#pt‘¤’‹ 冲
洗 ts °¬±o蒸馏水冲洗 v °¬±o缓冲溶液冲洗 ts °¬±∀
u次运行之间毛细管依次用蒸馏水冲洗 t °¬±os qt
°²¯#pt ‘¤’‹冲洗 u °¬±o蒸馏水冲洗 t °¬±o缓冲溶
液冲洗 u °¬±∀为了保证重现性 o缓冲溶液每运行 v
次后要进行更新 ∀
3 溶液制备
3 q1 对照品溶液制备 精密称定大黄素 !芦荟大黄
素 !大黄酸适量 o分别以氯仿2乙醇ktΒtl为溶剂 o配
制成标准储备溶液k大黄素 uss °ª#pt o芦荟大黄素
uss °ª#pt o大黄酸 tss °ª#ptl o在冰箱中保存 ∀
在使用前 o按要求稀释为不同浓度的工作溶液 ∀用
s qu °²¯#pt ‹≤¯ 或 s qu °²¯#pt ‘¤’‹ 调节 ³‹ 值 ∀
用乙醇作电渗流标记物 ∀
3 q2 供试品溶液制备 分别将一定量的大黄药材
及青海野生大黄茶研磨成粉末 o然后准确称取大黄
药材 u qsss ª!青海野生大黄茶 x qsss ªo分别以氯仿2
乙醇ktΒtl作溶剂超声提取 us °¬±o然后过滤挥干 ∀
重复 v次 ∀提取物以氯仿与乙醇ktΒtl溶解并定容
至 ts °∀进样前用 s qwx Λ°滤膜过滤 ∀
4 条件优化实验
4 q1 硼砂缓冲液酸度的选择 对于可离解的溶质
分子 o缓冲液酸度影响它们的离解度 o因而酸度可明
显改变其电泳迁移行为 ∀由实验可知 o在 ³‹ | qts ∗
ts qys o大黄素 !芦荟大黄素 !大黄酸这 v种有效成分
均可获得很好的分离 ∀然而实际中药样品中的成分
非常复杂 o在 ³‹ | qts时 o大黄素 !芦荟大黄素因有
其他未知成分的干扰而分离不佳 ∀实验表明 o在 ³‹
| qys时分离效果最好 ov种有效成分各自的峰形对
称且窄而高 o同时亦无其他未知成分的干扰 o因此本
实验最终选择 ³‹ | qys作为硼砂缓冲液的最佳酸
度 ∀
图 t 缓冲液酸度对分析物迁移时间的影响
t q大黄素 ~u q芦荟大黄素 ~v q大黄酸k图 u ∗ 图 y同l
分离条件 }缓冲液 tx qs °°²¯#pt硼砂2vs qs °°²¯#pt≥⁄≥2ts h乙醇 o
电压 us qs ®∂
4 q2 硼砂浓度的影响 为了优化分离条件 o在
x qs ∗ ux qs °°²¯#pt考察了硼砂浓度对迁移时间的
影响 ∀实验表明大黄素 !芦荟大黄素在硼砂浓度 x qs
°°²¯#pt时不能很好分离 o当硼砂浓度为 ts qs °°²¯
#pt时 o芦荟大黄素的峰形不对称 o所以选择 tx qs
°°²¯#pt作为最佳硼砂浓度 ∀
4 q3 ≥⁄≥的影响 在缓冲溶液组成为tx qs °°²¯#
pt硼砂2ts h乙醇k³‹ | qysl时 o本研究在us qs ∗
xs qs °°²¯#pt考察了 ≥⁄≥浓度对分离的影响 ∀v
#tz{#
第 u|卷第 |期
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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≥¨ ³·¨°¥¨µoussw
图 u 硼砂浓度对分析物迁移时间的影响
分离条件 }缓冲液 vs qs °°²¯#pt≥⁄≥2ts h乙醇 o³‹ | qys o
电压 us qs ®∂
种有效成分的迁移时间都随着 ≥⁄≥浓度的增大而增
大 o它们的迁移顺序依次为大黄素 !芦荟大黄素 !大
黄酸 o其中大黄素迁移速度最快 o后两者比较 o由于
大黄酸离解程度更大 o其迁移速度最慢 ∀实验表明 o
当 ≥⁄≥浓度为 us qs °°²¯#pt时 o大黄素 !芦荟大黄
素彼此间不能分离 o而当 ≥⁄≥浓度超过 vs qs °°²¯#
pt时 o迁移时间增大 ∀综合考虑上述影响因素 o本
研究选择最佳 ≥⁄≥浓度为 vs qs °°²¯#pt ∀
图 v ≥⁄≥浓度对分析物迁移时间的影响
分离条件 }缓冲液 tx qs °°²¯#pt硼砂2ts h乙醇 o
³‹ | qys o电压 us qs ®∂
4 q4 乙醇的影响 在缓冲液中添加有机物可改善
‹°≤∞的分离效率≈y  ∀本研究在 s h ∗ us h 的范围
内考察了乙醇浓度对分离的影响 ∀实验表明 o在乙
醇浓度为 s h ∗ x h时 ov种有效成分的分离情况不
佳 o出于对分离和迁移时间的综合考虑 o选择乙醇浓
度为 ts h ∀
图 w 乙醇对迁移时间的影响
分离条件 }缓冲液 tx qs °°²¯#pt硼砂2vs qs °°²¯#pt≥⁄≥ o
³‹ | qys o电压 us qs ®∂
4 q5 分离电压的影响 在毛细管电泳中 o提高分离
电压可以缩短体系分离时间 o但是在高电压下会由
于焦耳热的影响 o使溶质产生扩散现象 o从而降低毛
细管电泳分离效率 ∀本研究在 tx ∗ ux ®∂ 的范围内
考察了分离电压对分离的影响 ∀选择的最佳分离电
压为 us ®∂ ∀
图 x 电压对迁移时间的影响
分离条件 }缓冲液 tx qs °°²¯#pt硼砂2vs qs °°²¯#pt≥⁄≥2
ts h乙醇 o³‹ | qys
5 线性关系考察
分别吸取大黄素 !芦荟大黄素 !大黄酸 v种对照
品储备液各 s qt os qv os qx os qz ot qs ou qs ow qs °o置 x
°量瓶中 o加氯仿与乙醇ktΒtl至刻度 o摇匀 o制得
系列对照品溶液 ∀横坐标 Ξ代表浓度k°ª#ptl o纵
坐标 Ψ代表峰面积 o大黄素 !芦荟大黄素和大黄酸 v
种有效成分的峰面积与浓度分别在 w ∗ tus ots ∗
uss ou ∗ tss °ª#pt呈良好的线性关系 ∀v种有效成
分的线性回归方程分别为 }大黄素 oΨ € p t yv| n
uz{ q|v Ξkρ€ s q||u tl ~芦荟大黄素 oΨ€ p zyu qzx n
yv qvz Ξkρ€ s q||zsl ~大黄酸 oΨ€ p zxt qwt n zxz q{s
Ξkρ€ s q||z tl ∀在 v倍信噪比下 ov种有效成分的
检测限分别为 s qv ot qu os qt °ª#pt ∀
6 精密度实验
精密吸取 v种对照品的混合溶液连续进样测定
y次 o日内迁移时间和峰面积的 • ≥⁄分别为 s qx| h
∗ s q{s h ot qvs h ∗ v quu h ∀日间迁移时间和峰面积
的 • ≥⁄分别为 s q|t h ∗ t qvz h ou qzs h ∗ w qyx h ∀
7 样品含量测定
表 t 实际样品中大黄素 !芦荟大黄素 !
大黄酸的分析结果k ν € yl
样品
大黄素
含量
r°ª#ªpt
• ≥⁄
r h
芦荟大黄素
含量
r°ª#ªpt
• ≥⁄
r h
大黄酸
含量
r°ª#ªpt
• ≥⁄
r h
大黄药材 t qzt v qw u qxz w qz t qvt u qz
青海野生大黄茶 s qtt u qv s q|x u qw s qtz v q{
用本实验所建立的方法 o对大黄及青海野生大
#uz{#
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中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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黄茶的 v种活性蒽醌成分进行了分析 o结果列于表
t o样品的电泳谱图如图 y所示 ∀本研究还利用标准
加入法对回收率进行了考察 o回收率范围 |z qy h ∗
tsu qv h ∀
图 y v种药物分子和实际样品的分离谱图
„ q标准混合物k分析物浓度分别为 tys otys o{s °ª#ptl ~
…q大黄药材 ~≤ q青海野生大黄茶
分离条件 }缓冲液 tx qs °°²¯#pt硼砂2vs qs °°²¯#pt≥⁄≥2ts h乙醇 o
³‹ | qys o电压 us qs ®∂
8 结论
本实验研究了大黄素 !芦荟大黄素 !大黄酸的电
泳迁移行为 o在此基础上首次建立了同时分离和测
定大黄及青海野生大黄茶中大黄素 !芦荟大黄素 !大
黄酸的 ∞Ž≤新方法 o该方法简便 !快速 !准确 !重现
性好 o对于中药大黄及其冲剂中有效成分的分析和
质量监控具有重要的实用价值 ∀
≈参考文献 
≈t  中国科学院西北生物研究所 q西宁 }青海人民出版社 ot|{| q{s
≈u  ‹∞ ≠ o˜’ ≥ • q≥·∏§¬¨¶²±·«¨ ¤±¤¯¼¶¬¶²©¤±·«µ¤´ ∏¬±²±¨ §¨µ¬√¤2
·¬√ ¶¨²© ≤«¬±¨ ¶¨ °¨ §¬¦¬±¤¯ «¨µ¥¶q Αχτα Πηαρµ Σιν ot|{s otx }xxx q
≈v  Œ˜ ≤ o‹˜ ° oŒ˜  ≤ q≤²°³∏·¨µ¤¬§¨§§¨ √¨ ²¯³° ±¨·²©¤«¬ª«2
³¨µ©²µ°¤±¦¨ ¬¯´∏¬§¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¦°¨ ·«²§©²µ·«¨ §¨·¨µ°¬±¤·¬²± ²©«¼2
§µ²¬¼¤±·«µ¤´ ∏¬±²±¨ §¨µ¬√¤·¬√¨ ¶¬± ≤«¬±¨ ¶¨ «¨µ¥ °¨ §¬¦¬±¨ µ«∏¥¤µ¥q ϑ
Χηροµατογρ. Αot||| o{xz }tyz q
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¤±§¥¤¬¦¤¯¬± ¬± ·«µ¨¨ ¼¨ ¯¯²º ·¤¥¯ ·¨¶ ¥¼ ‹°≤ q Χηινεσε Τραδιτιοναλ
Πατεντ Μεδιχινε ousst ouv }wwy q
≈x  ≥∏±·²µ±¶∏® q ≤¤³¬¯¯¤µ¼ ¨¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶²© ³«¼·²¦«¨ °¬¦¤¯ ¶∏¥¶·¤±¦¨¶q
Πηαρµ Βιοµεδ Αναλoussu ouz }yz| q
≈y  • ¬¨±¥¨µª¨µ• o²µ¬¨ Œq ¬¦¨¯¯¤µ¨¯ ¦¨·µ²®¬±¨ ·¬¦¦¤³¬¯¯¤µ¼ ¦«µ²°¤·²ªµ¤2
³«¼ ²©¬¯¯¬¦¬·§µ∏ª¶∏¥¶·¤±¦¨¶q Αναλ Χηεµ ot||t oyv }{uv q
∆ετερµινατιον οφ αχτιϖε αντηραθυινονεσιν Ρηευµ ανδ ιτστεα
πρεπαρατιονσ βψ µιχελλαρ ελεχτροκινετιχ χαπιλλαρψ ελεχτροπηορεσισ
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kt qΣχηοολ οφ Πηαρµαχψ, Σηανγηαι ϑιαο Τονγ Υνιϖερσιτψ, Σηανγηαι usssvs , Χηινα~
u q∆επαρτµεντ οφ Χηεµιστρψ, Λανζηου Υνιϖερσιτψ, Λανζηου zvssss , Χηιναl
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¶¨·¤¥¯¬¶«¤±¬±¶·¤±·§¨·¨µ°¬±¤·¬²± ° ·¨«²§²© °¨²§¬±o¤¯²¨ 2 °¨²§¬± ¤±§µ«¨¬±o©µ²° • «¨ ∏° o¤±§²±¨ ²©·«¨¬µ
³µ¨³¤µ¤·¬²±¶o±¬±ª«¤¬• ¬¯§⁄¤«∏¤±ª× ¤¨o¥¼ °¬¦¨¯¯¤µ¨¯ ¦¨·µ²®¬±¨ ·¬¦¦¤³¬¯¯¤µ¼ ¨¯ ¦¨·µ²³«²µ¨¶¬¶©²µ·«¨ ©¬µ¶··¬°¨q Μετηοδ : ≥¨ ³¤µ¤·¬²± º¤¶¦¤µ2
µ¬¨§²∏·¬± ¤± ∏±¦²¤·¨§©∏¶¨§¶¬¯¬¦¤¦¤³¬¯¯¤µ¼ kzx Λ° ≅ xs qs ¦°l q  ¤¨±º«¬¯¨ o¤µ∏±±¬±ª√²¯·¤ª¨ us ®∂ otx qs °°²¯#pt ¥²µ¤¬ ¥∏©©¨µº¬·«
vs qs °°²¯#pt ≥⁄≥ ¤±§ts h ·¨«¤±²¯ k³‹ | qysl ¤±§¤ ˜∂ §¨·¨¦·²µ¤·uxw ±° º µ¨¨ ¤§²³·¨§q Ρεσυλτ : ׫¨ ¬¯±¨ ¤µ¦¤¯¬¥µ¤·¬²±µ¤±ªº¤¶w ∗
tus °ª#ptkρ€ s q||u tl ©²µ °¨²§¬±ots ∗ uss °ª#ptkρ€ s q||z sl ©²µ¤¯²¨ 2 °¨²§¬±o¤±§u ∗ tss °ª#ptkρ€ s q||z tl ©²µµ«¨¬±oµ¨2
¶³¨¦·¬√¨¯¼ q˜±§¨µ·«¨ ²³·¬°∏° ¦²±§¬·¬²±¶o·«¨ µ¨ ¤¯·¬√¨¶·¤±§¤µ§§¨√¬¤·¬²± k• ≥⁄l √¤¯∏¨¶k ν € yl ©²µ·«¨ °¬ªµ¤·¬²±·¬°¨¤±§·«¨ ³¨ ¤® ¤µ¨¤²©
¤¨¦«³¨ ¤® º µ¨¨ s qx| h ∗ s q{s h ot qvs h ∗ v quu h oµ¨¶³¨¦·¬√¨¯¼ q׫¨ ¦²±·¨±·¶²©·«¨ ¤±¤¯¼·¨¶º µ¨¨ ¤¨¶¬¯¼ §¨·¨µ°¬±¨ §º¬·«µ¨¦²√ µ¨¬¨¶µ¤±ª¬±ª
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≈责任编辑 李 禾 
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