全 文 ：青藤碱抗炎机理 ) ) ) 青藤碱对人外周血单个核细胞
环氧化酶活性及其基因表达的影响
王文君 o王培训 o李晓娟
k广州中医药大学 免疫研究室 o广东 广州 xtswsxl
≈摘要  目的 }研究青藤碱对人环氧化酶k≤ ’ ÷l活性及其基因表达的影响 o深入探讨青藤碱的抗炎药理机制 ∀
方法 }应用细胞培养 o放射免疫测定 o• ×2°≤ • 等方法 o观察青藤碱等药物对 °≥ 刺激和非 °≥ 刺激的体外培养的
人外周血单个核细胞k°… ≤l产生前列腺素 ∞u≤ °Š∞u≤ 的影响 o并深入研究其对 ≤ ’ ÷2t 和 ≤ ’ ÷2u 基因表达的作
用 ∀结果 }青藤碱对 °≥ 刺激状态下正常人外周血单个核细胞 °Š∞u合成的抑制作用明显高于不加 °≥ 的状态 o
间接反映青藤碱对 ≤ ’ ÷2u的抑制作用较强 ∀ • ×2°≤ • 结果表明青藤碱对人 ≤ ’ ÷2t及 ≤ ’ ÷2u的基因表达无明显影
响 ∀结论 }青藤碱对 ≤ ’ ÷2u 活性具有一定的选择性抑制作用 o并可能主要是通过对 ≤ ’ ÷ 酶活性的直接作用来实
现 ∀
≈关键词  青藤碱 ~°… ≤ ~°Š∞u ~ ≤ ’ ÷2t ~ ≤ ’ ÷2u ~基因表达
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvlsw2svxu2sw
青藤碱是从中药青风藤中提取的一种单体生物
碱 o临床治疗类风湿性关节炎k• „l等自身免疫性疾
病疗效较好且副作用小 ∀ • „ 特征之一表现为关节
持续的炎症 o在该病病因仍不明的情况下 o非甾体类
抗炎药通过抑制前列腺素 ∞uk°Š∞ul等炎症介质的
产生迅速缓解 • „ 病人关节疼痛 !肿胀等症状 o成为
• „ 患者的常用药之一 ~但其临床副作用 o尤其是胃
肠道副作用太大 o因而影响治疗 o严重的甚至发生胃
溃疡 !出血及消化道穿孔≈t  ∀在临床研究中发现 o青
藤碱作为治疗 • „ 的具有抗炎活性的药物 o胃肠道
副反应仅占 w h o主要表现为厌食 o且停药后可自行
消失≈u  ∀进一步的药理学研究发现 o青藤碱对 °≥
刺激状态下的 zzw 细胞的 °Š∞u合成的抑制作用较
强 o提示该药选择性抑制 ≤ ’ ÷2u 的活性≈u  o因而我
们采用人的外周血单个核细胞k°… ≤l培养进行了
以下实验 ∀
1 材料和方法
1 q1 主要试剂
• ° Œ tyws 培养基 o美国 ŠŒ…≤ ’ ∀ °≥ o≥¬ª°¤
公司 ∀淋巴细胞分离液为天津血液研究所产品 ∀青
藤碱纯品由湖南正清制药公司提供 ∀消炎痛kŒ±2
≈收稿日期  ussu2st2ty
≈基金项目  国家中医药管理局课题基金k|zttyl
≈通讯作者  ר¯ }ksuslvyx{xwz|
§²° ·¨«¤¦¬±l o美国 ≤¤¼°¤± 公司 ∀胎牛血清为杭州
四季青产品 ∀ °Š∞u放免检测试剂盒 o天津四方有限
公司 ∀总 • ‘„ 提取试剂盒和 „¦¦¨¶¶• ×2°≤ • 试剂
盒 o°µ²° ª¨¤公司 ∀
1 q2 人外周血单个核细胞k°… ≤l 的分离和培养
广州市中心血站提供 w 个健康人献血各 xs
°∀按常规方法分离人外周血单个核细胞 o台盼蓝
染色计数 o活细胞数大于 |x h ∀uw 孔细胞培养板 o
细胞终浓度为每孔每 s qx °tsy个 o培养于 x h 胎
牛血清 tyws 培养液k含青 !链霉素各 tss ®˜#p tl
中过夜后 o加入含不同浓度的青藤碱或消炎痛的
x h 胎牛血清 tyws培养液 s qx °o并加入终浓度为
x °ª#pt的 °≥ o均设复孔和对照 ∀vz ε ox h ≤ ’u
培养 uw «o离心收集培养上清 o贮于 p ws ε 备测 ∀
方法参照文献≈v  ∀
1 q3 培养上清的 °Š∞u放免检测
采用tuxŒ2°Š∞u放免检测试剂盒 ∀
1 q4 细胞总 • ‘„ 的提取
人 °… ≤ 细胞培养于 uw 孔细胞培养板k方法
同 1 q2l o细胞终浓度为每孔每 t °u ≅ tsy o加入终
浓度为 x °ª#pt的 °≥ 和不同浓度的青藤碱或消
炎痛 o并设相应对照 ∀vz ε ox h ≤ ’u培养 y otu ouw
«后 ot sss µ#°¬±p t离心 ts °¬±收集细胞 o用预冷的
°…≥ 洗细胞 t 次 o提取细胞总 • ‘„ k操作按试剂盒
#uxv#
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ussv年 w月
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ o‘²qw
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说明进行l ∀
1 q5 ≤ ’ ÷2t 和 ≤ ’ ÷2u 基因表达的检测
采用 • ×2°≤ • 法≈w ox  o引物由上海生工生物工
程公司合成 o≤ ’ ÷2t 的引物为 }xχ2× Š≤≤≤ „Š≤ × ≤2
≤ × ŠŠ≤≤≤ Š≤≤ Š≤ × ×2vχk¶¨±¶¨ l oxχ2Š× Š≤ „× ≤ „„2
≤ „≤ „ŠŠ≤Š≤≤ × ≤ × × Š2vχk¤±·¬¶¨±¶¨ l ~≤ ’ ÷2u 的引
物为 }xχ2× × ≤ „„„× Š„Š„× × Š× ŠŠŠ„„„„× × Š≤ ×2
vχk¶¨±¶¨l oxχ2„Š„× ≤ „× ≤ × ≤ × Š≤≤ × Š„Š× „× ≤ × × ×
2vχk¤±·¬¶¨±¶¨l o以 Β2„¦·¬±作为内参 ∀
2 实验结果
2 q1 青藤碱对人 °… ≤ 合成 °Š∞u的影响k间接反
映对 ≤ ’ ÷2t 和 ≤ ’ ÷2u 酶活性的作用l
图 t 青藤碱对人 °… ≤k°≥ 刺激和非 °≥ 刺激l
合成 °Š∞u的抑制作用k ξ % ? σ% ν € wl
数据分别来自 u 次独立的细胞培养实验 ≥Œ‘q青藤碱 °≥
的终浓度为 x °ª#p t 3 与对照组比较 Π s qsx
结果如图 t 所示 o青藤碱对 °≥ 刺激状态下的
人 °… ≤ 合成 °Š∞u的抑制作用明显增强 o在非
°≥ 刺激的情况下 o青藤碱对 °Š∞u合成的抑制作用
轻微 o低浓度kux Λ°²¯#ptl甚至表现为促进作用 ∀
由此可见 o青藤碱对 ≤ ’ ÷2t 酶活性抑制作用轻微 o
低浓度时甚至轻微促进 ≤ ’ ÷2t 酶活性 ∀相对而言 o
青藤碱对 ≤ ’ ÷2u 酶活性抑制作用较强 ∀
2 q2 消炎痛对人 °… ≤ 合成 °Š∞u的影响k间接反
映对 ≤ ’ ÷2t 和 ≤ ’ ÷2u 酶活性的作用l
图 u 消炎痛对人 °… ≤k°≥ 刺激和非 °≥ 刺激l
合成 °Š∞u的抑制作用k ξ % ? σ% , ν € wl
数据分别来自 u 次独立的细胞培养实验 Œ±§²q消炎痛 °≥
的终浓度为 x °ª#p t
如图 u 所示 o阳性对照药消炎痛对人 °… ≤ 在
°≥ 和非 °≥ 刺激 u 种状态下的 °Š∞u合成均表现
出很强的抑制作用 o且其抑制强度没有明显差异 ∀
可见消炎痛对 ≤ ’ ÷2t 和 ≤ ’ ÷2u 酶活性表现出同等
的抑制作用 ∀
2 q3 青藤碱和消炎痛对 °≥ 诱导的 °Š∞u的合成
的抑制作用
图 v 消炎痛和青藤碱对 °≥ 诱导的 °Š∞u
合成的抑制作用k ξ ? σ, ν € xl
数据分别来自 u 次独立的实验 n Œ±§²q°≥ n消炎痛 n
≥¬±q°≥ n青藤碱 xss Λ°²¯#p t 3 与 °≥组比较 Π s qsx 3
3 与对照比较 Π s qsst
°≥刺激可显著促进人 °… ≤ 的 °Š∞u合成 o
而青藤碱对 °≥ 刺激引起的 °Š∞u合成有明显的抑
制作用k Π s qsxl o但与消炎痛比较 o其抑制作用显
然弱很多 o结果如图 v 所示 ∀
2 q4 青藤碱对 ≤ ’ ÷2t 和 ≤ ’ ÷2u 基因表达的影响
• ×2°≤ • 的结果显示 o青藤碱ks qt ∗ t °°²¯ #
ptl和消炎痛ks qst ∗ s qu °°²¯#ptl作用时间 y ∗
uw «对 ≤ ’ ÷2t 基因表达无明显影响 ∀ °≥ 显著促
进 °Š∞u的合成与诱导 ≤ ’ ÷2u 的高表达直接相关 ∀
t °°²¯#pt青藤碱k作用 y «l对 ≤ ’ ÷2u基因表达无
明显抑制作用 ∀而 s qx °°²¯ #pt青藤碱和 s qst
°°²¯#p t消炎痛k作用 uw «l对 ≤ ’ ÷2u 基因表达也
无明显影响k电泳图像另文发表l ∀
3 讨论
前列腺素k°Š∞ul是重要的炎症介质 o具有广泛
的生理及病理作用 o包括强烈的扩血管作用 !敏化痛
觉神经末梢 o可显著增强疼痛的强度与持续时间 o还
可引起炎症性发热 ∀环氧化酶k≤ ’ ÷l是前列腺素合
成过程中一个重要的限速酶 o它有两种异构形式 }
≤ ’ ÷2t 和 ≤ ’ ÷2u ∀ ≤ ’ ÷2t 结构性表达于大多数细
胞内 o参与维持正常的生理功能 }如调节外周血管张
力 o维持肾血流 o保护胃黏膜等 ∀ ≤ ’ ÷2u几乎存在于
#vxv#
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ussv年 w月
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ o‘²qw
„³µqoussv
所有细胞 o但在静止细胞中表达极少≈y  ∀当受到
°≥ !炎症细胞因子等刺激时 o≤ ’ ÷2u 会诱导性地高
表达 o是炎症过程中一个重要的诱导酶 ∀传统的非
甾体类抗炎药k‘≥„Œ⁄¶l如布洛芬 o消炎痛等由于对
≤ ’ ÷2t 和 ≤ ’ ÷2u 的选择性抑制作用较差 o抑制了
≤ ’ ÷2t 因而副作用大 ∀尼美舒利 !美洛昔康等新一
代的 ‘≥„Œ⁄¶主要作用于 ≤ ’ ÷2u o而对胃肠粘膜中
起保护作用的前列腺素合成无影响因而副作用小 ∀
这促使人们开发具有抗炎活性而无损害胃和肾副作
用的新一代 ‘≥„Œ⁄¶o故研究选择性作用于 ≤ ’ ÷2u
的 ‘≥„Œ⁄¶已成为抗炎药的研究发展方向之一≈t  ∀
本研究结果发现 o≤ ’ ÷2t基因确为结构性表达 o
°≥ 刺激对其表达影响不大 ∀而 ≤ ’ ÷2u 基因只有
在 °≥刺激的情形下才产生高表达 o与 °≥促进人
外周血淋巴细胞 °Š∞u的合成直接相关 ∀消炎痛强
烈抑制 °Š∞u合成k°  s qsstl o在所用浓度ks qx ∗ ts
Λ°²¯#ptl内对 ≤ ’ ÷2t 和 ≤ ’ ÷2u 酶活性的抑制均
超过了半数抑制 o但对 ≤ ’ ÷2t 和 ≤ ’ ÷2u 基因表达
无明显影响 o与文献≈z 报道一致 ∀青藤碱 xss Λ°²¯
#p t明显抑制 ≤ ’ ÷2u 酶活性 o但对 ≤ ’ ÷2t 和 ≤ ’ ÷2
u 基因表达也无明显的影响 ∀
由于青藤碱在所用浓度范围内 o对 ≤ ’ ÷2t 酶活
性作用较弱k且未表现出明显的量效关系l o而对
≤ ’ ÷2u 酶活性的抑制作用较强 o达到半数抑制的药
物浓度  xss Λ°²¯#p t o因而表现出一定的选择性 o
与前期研究的结果吻合≈u  ∀青藤碱对 ≤ ’ ÷2u 酶活
性的选择性抑制可能是其治疗类风湿性关节炎取得
了较好的疗效 o而副作用小的部分原因 ∀由于青藤
碱对 ≤ ’ ÷2t 和 ≤ ’ ÷2u 基因表达的作用不明显 o考
虑其作用的靶点可能主要不是在对基因的调控 o而
是在其他一些作用环节上≈{  ∀
比较 zzw 细胞的相关实验与本实验 o发现 °≥
刺激引起人 °… ≤ 的 °Š∞u合成大幅增加k达 t ∗ u
倍以上l o而小鼠的zzw细胞经 °≥刺激后 °Š∞u的
合成反而有所下降 o说明同一种药物对不同种的生
物细胞的作用有相当大的差异 ∀而且在用小鼠的脾
淋巴细胞所进行的相似的实验中也出现同样的现
象 ∀相对而言 o消炎痛 !阿司匹林等药物对人的细胞
的作用显然较强 o反映人的细胞对这些药物有更大
的敏感性 ∀所以在进行 ≤ ’ ÷ 酶活性的相关研究 o尤
其在筛选药物时 o最优先考虑的应是采用人的相关
细胞和细胞株或已经证实可用于相关药物筛选的其
他细胞株 ∀从目前的研究进展来看 o人外周血淋巴
细胞应是首选≈|  ∀
≤ ’ ÷2u 在各种炎症中诱导性地高表达 o因此
≤ ’ ÷2u 可能是炎症治疗的一个靶 ∀ ‘≥„Œ⁄¶对
≤ ’ ÷2t 和 ≤ ’ ÷2u 酶作用的选择性可用其抑制 xs h
酶活性的药物浓度kŒ≤xsl的比值来表示 o然而 oŒ≤xs
k≤ ’ ÷2ulrŒ≤xsk≤ ’ ÷2tl 的最佳比值仍待确定 ∀进
一步弄清 ≤ ’ ÷2u 的基因调控机制 o深入揭示 ≤ ’ ÷2u
在不同组织器官中的生理病理作用 o进一步探讨与
之相关的因素对于开发新的 ‘≥„Œ⁄¶并应用于临床
具有现实的重要意义≈ts  ∀
≈参考文献 
≈t  陈望忠 q两种新的选择性环氧化酶2u 抑制剂 q国外医学#药学
分册 ot||z ouwkvl }ty{ q
≈u  王培训 o刘 良 o王文君 o等 q青藤碱对巨噬细胞 zzw 产生
°Š∞u的影响 q中国免疫学杂志 ot||| otxk专刊l }utu q
≈v  Œ „ פ√¤µ¨¶o°  …¬¶«¤¬o „ …¨ ±±¨ ··q „¦·¬√¬·¼ ²© ‘¬° ¶¨∏¯¬§¨ ²±
≤²±¶·¬·∏·¬√¨ ¤±§ Œ±§∏¦¬¥¯¨ ≤¼¦¯²²¬¼ª¨ ±¤¶¨¶q ⁄µ∏ª • ¶¨¨¤µ¦«o
t||x owxk µl oktsl }ts|v q
≈w  • ‘¨ º·²± o  Ž∏¬·¨µ·o⁄  ≥¯ ¤·¨µo ·¨¤¯ q ≤¼·²®¬±¨ Œ±§∏¦·¬²±
²© ≤¼·²¶²¯¬¦ °«²¶³«²¯¬³¤¶¨ „u ¤±§ ≤¼¦¯²²¬¼ª¨ ±¤¶¨2u °• ‘„ ¬¶
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≤²±¶·¬·∏·¬√¨¤±§Œ±§∏¦¬¥¯¨ ≤¼¦¯²²¬¼ª¨ ±¤¶¨ q °µ²¦‘¤·¯ „¦¤§ ≥¦¬o
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
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Τηε Εφφεχτ οφ Σινοµενινε ον Χψχλοοξψγενασε Αχτιϖιτψ ανδ
τηε Εξπρεσσιον οφ ΧΟΞ2t ανδ ΧΟΞ2u µ Ρ ΝΑ ιν Ηυµ αν Περιπηεραλ Μονοχψτεσ
• „‘Š • ±¨2­∏±o • „‘Š ° ¬¨2¬∏±oŒ ÷¬¤²2­∏¤±
k¤¥²µ¤·²µ¼ ²©Œ°°∏±²¯²ª¼ o Š∏¤±ª½«²∏ ˜±¬√ µ¨¶¬·¼ ²© ×µ¤§¬·¬²±¤¯ ≤«¬±¨ ¶¨  §¨¬¦¬±¨ o Š∏¤±ª½«²∏ xtswsx o Š∏¤±ª§²±ªo≤«¬±¤l
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ²¥¶¨µ√¨ ιν ϖιτρο·«¨ ©¨©¨ ¦·²© ≥¬±²° ±¨¬±¨ o¤³∏µ¨ ¤¯®¤¯²¬§ ¬¨·µ¤¦·¨§©µ²° ·«¨ ¦«¬±¨ ¶¨ ° §¨¬¦¤¯ ³¯¤±·
≥¬±²° ±¨¬∏° ¤¦∏·∏° ²± ·«¨ ¤¦·¬√¬·¼ ²© ¦¼¦¯²²¬¼ª¨ ±¤¶¨ k ≤ ’ ÷2t ¤±§ ≤ ’ ÷2ul ¤±§·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²© ≤ ’ ÷2t ¤±§ ≤ ’ ÷2u °• ‘„ q
Μετηοδ :  ²±²±∏¦¯ ¤¨µ¯ ∏¨®²¦¼·¨¶ º µ¨¨ ²¥·¤¬±¨ §©µ²° «¨ ¤¯·«¼ ¤§∏¯·¶qŒ¶²¯¤·¨§ °²±²±∏¦¯ ¤¨µ¯¨ ∏¦²¦¼·¨¶©µ²° «∏°¤± ³¨µ¬³«¨µ¤¯ ¥¯²²§
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°… ≤ ¬±¦µ¨¤¶¬±ª º¬·««¬ª« ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²© ≤ ’ ÷2u °• ‘„ ~¶¬±²° ±¨¬±¨ µ¨§∏¦¨§°Š∞u ³µ²§∏¦·¬²±¬± °≥ ¶·¬°∏¯¤·¨§«∏°¤± °²±²¦¼·¨¶
°²µ¨ ·«¤±¬± ±²±2¶·¬°∏¯¤·¨§«∏°¤± °²±²¦¼·¨¶qŒ± ¦²°³¤µ¤·¬√¨ ¬¨³¨µ¬° ±¨·¶o¬±§²° ·¨«¤¦¬± o¤ ±²± ¶¨¯¨ ¦·¬√¨ ≤ ’ ÷ ¬±«¬¥¬·²µoµ¨§∏¦¨§
·«¨ ³µ²§∏¦·¬²± ²©°Š∞u ¨´ ∏¤¯ ¼¯¬± ¥²·«¶·¤·¨¶q  ¤¨±º«¬¯¨ o±¨ ¬·«¨µ¶¬±²° ±¨¬±¨ ks qt ∗ t °°²¯#p tl ±²µ¬±§²° ·¨«¤¦¬±ks qx ∗ ts Λ°²¯
#p tl ¬±«¬¥¬·¨§·«¨ ¬¨³µ¨¶¶¬²± ²© ¥²·« ≤ ’ ÷2t ¤±§ ≤ ’ ÷2u °• ‘„¶¥¼ • ×2°≤ • º¬·« Β2¤¦·¬± ¤¶µ¨©¨ µ¨±¦¨ qΧονχλυσιον : Œ± ¦²±·µ¤¶·
º¬·«¬±§²° ·¨«¤¦¬±o≥¬±²° ±¨¬±¨ ¶«²º¶¤³µ¨©¨ µ¨±·¬¤¯ ¬±«¬¥¬·²µ¼ ©¨©¨ ¦·²± ≤ ’ ÷2u ²√ µ¨≤ ’ ÷2t o × «¨ ¶¨ µ¨¶∏¯·¶¶∏ªª¨¶··«¤·≥¬±²° ±¨¬±¨
¬¶¤¶¨¯¨ ¦·¬√¨ ≤ ’ ÷2u ¬±«¬¥¬·²µo º«¬¦« °¤¼ ¥¨ §¬µ¨¦·¯¼ µ¨ ¤¯·¨§·²¶∏³³µ¨¶¶¬±ª¦¼¦¯²²¬¼ª¨ ±¤¶¨ ¤¦·¬√¬·¼ q
[ Κεψ ωορδσ] ¶¬±²° ±¨¬±¨ ~°… ≤ ~°Š∞u ~ ≤ ’ ÷2t ~≤ ’ ÷2u ~ • ×2°≤ • ≈责任编辑 方文贤 
益肾活血方对家兔血瘀模型 °选择素表达及
对氧自由基清除作用的实验研究
詹小萍t o方 青u o楼建国t o徐锡鸿v o金晓莹t o秦光明t o鲍 军t
kt q浙江大学 医学院 附属二院 o浙江 杭州 vtsss| ~
u q浙江大学 医学院 附属邵逸夫医院 o浙江 杭州 vtssty ~v q浙江中医研究院 o浙江 杭州 vsstyvl
≈摘要  目的 }评价益肾活血方对家兔血瘀模型 ° 选择素表达的影响以及清除氧自由基的作用 ∀方法 }兔 vs
只 o随机分为健康组 !血瘀模型组 !益肾活血方大剂量组和小剂量组 !血栓心脉宁组 o各组相应处理后分别取静脉血
检测 °选择素kŠ  °2twsl o红细胞超氧化物歧化酶k∞2≥’⁄l o红细胞过氧化脂质k∞2°’l o血浆过氧化脂质k°2
°’l ∀结果 } Š  °2tws o∞2≥’⁄o∞2°’ o°2°’ o健康组与血瘀模型组比 Π s qst o血瘀模型组与益肾活血方大 !
小剂量组比 Π s qst o与血栓心脉宁组比 Π s qsx ~益肾活血方大 !小剂量组与血栓心脉宁组比 Π s qsx ~益肾活
血方大剂量组与小剂量组比 Ё s qsx ∀结论 }造模成功 o益肾活血方大 !小剂量组及血栓心脉宁组均有抑制对家兔
血瘀模型 ° 选择素表达 o增加 ≥’⁄活性 o降低 °’ 含量的作用 ∀益肾活血方大 !小剂量组均优于血栓心脉宁组 ∀
≈关键词  益肾活血方 ~血瘀模型 ~° 选择素 ~氧自由基
≈中图分类号  • u{x qx ≈文献标识码  „ ≈文章编号  tsst2xvsukussvlsw2svxx2sw
≈收稿日期  ussu2tu2ty
≈基金项目  浙江省中医管理立项课题k|ysvyl
≈通讯作者  ר¯ }ksxztl{zz{vzzw ∞2°¤¬¯}ª∏² «¤± «¨ ±ªƒ tyv q
¦²°
根据中医学的整体观念和 / 心之合脉 o其荣色
也 o其主肾也0的理论 o近来国内中西医结合学者应
用不同的益肾活血中药复方有效地治疗血栓性疾病
的研究报告屡见不鲜≈t ou  ∀观察益肾活血的中药复
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第 u{卷第 w期
ussv年 w月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qu{ o‘²qw
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