全 文 ：大孔吸附树脂分离富集土贝母总皂苷的研究
马挺军t ou o屠鹏飞t 3 o吕飞杰v
kt1 北京大学 药学院 o北京 tsss{v ~
u1 中国农业大学 食品科学与营养工程学院 o北京 tsss{v ~
v1 中国农业科学院 o北京 tsss{tl
≈摘要 目的 }优化大孔吸附树脂分离纯化土贝母总皂苷的工艺条件 ∀方法 }以土贝母总皂苷的吸附量和解
吸率为指标 o大范围筛选树脂 o并通过单因素试验 !正交试验及方差分析确定了土贝母总苷分离富集的优选操作条
件 ∀结果 }树脂具有较好的吸附性能和解吸效果 ~优选吸附条件为上样含生药量 vs °ª#°p t o树脂色谱柱的
径高比 tΒz o药材Β树脂为 tΒw ~吸附完全后 o先以水洗脱 o除去杂质 o再以 {s h乙醇洗脱 o可以得到纯度较好的土贝
母总苷 ∀结论 }树脂对土贝母总苷的吸附量大 o解吸容易 o确定的吸附与洗脱条件简单可行 o所得产品的色泽
好 !纯度高 o此工艺具有良好的产业化前景 ∀
≈关键词 土贝母 ~土贝母总苷 ~生产工艺 ~ ~大孔吸附树脂
≈中图分类号 u{v ~ u{w1u ≈文献标识码 ≈文章编号 tsst2xvsukussxlts2szww2sv
≈收稿日期 ussw2tu2sy
≈通讯作者 3屠鹏飞 oר¯ }kstsl{u{suzxs o∞2°¤¬¯}³¨ ±ª©¨¬·∏
¥°∏1 §¨∏1¦±
土贝母为葫芦科植物土贝母 Βολβοστε µ µ α παν2
ιχυλατυ µk ¤¬¬°1lƒµ¤± ∏´¨·干燥的块茎 o有清热解
毒 o消肿散结之功效 o主治乳痈 o瘰疬痰核 o疮疡肿
毒 o疣赘 o蛇虫咬伤 ∀其主要成分为甾醇 !三萜皂苷
等≈t ∀土贝母皂苷主要组分为土贝母苷甲 !乙 !丙
k·∏¥¨¬°²¶¬§¨ ´ oµ o¶l o苷甲含量达 t1| h o具有抗
肿瘤 !抗病毒等多种药理活性≈u ∀
为了更好地开发和应用土贝母资源 o对土贝母
总苷的提纯工艺进行了研究 ∀结果表明 o利用
型大孔吸附树脂纯化土贝母总苷具有工艺简单 o操
作方便 o总苷纯度高等优点 ∀
1 药材 !试剂与仪器
土贝母采自山西省绛县 o经北京大学药学院屠鹏
飞教授鉴定为葫芦科植物土贝母 Β1 πανιχυλατυµ 的
干燥块茎 ∀紫外分光光度计k ∂ p uwst °≤ o≥«¬2
°¤§½∏l ~大孔树脂k o
2{ o⁄vxus o南开大学化工
厂 ~°⁄tss o°⁄xss o°⁄yss o沧州宝恩化工有限公
司 ~⁄tst o⁄ust o⁄vst o天津农药总厂l∀土贝母苷甲
对照品k自制 o光谱鉴定结构为苷甲 o°≤检测纯度
大于 |{ h l ∀香草醛 !冰醋酸 !高氯酸和甲醇均为分析
纯 ∀
2 方法与结果
211 含量测定
21111 标准曲线考察 精密称取土贝母苷甲对照
品 {1vw °ªo置 ux °量瓶中 o加甲醇超声溶解并定
容至刻度 o备用 ~分别吸取对照品溶液 s os1t os1u o
s1v os1w os1x os1y °置 ts °具塞试管中 o|s ε
水浴蒸干 o然后放入 tsx ε 烘箱中烘 us °¬±∀待冷
却后分别加入 x h的香草醛2冰醋酸溶液 s1u °o
振摇溶解后加入浓硫酸 s1y °o摇匀后置于 |s ε
水浴中加热 us °¬±o然后冰水冷却 o再各加入冰醋
酸 w °o冰水冷却 ts °¬±后于 xwt ±° 测定吸光
度 o得到回归方程 }Χ p s1vzx us n uuu1uwy Α oΡu
s1||| o在 vv1vy ∗ uss1ty Λª时 o线性关系良好 ∀
21112 样品含量 精密量取供试液 t °放入 ts
°具塞试管中 o|s ε 水浴蒸干 o然后放入 tsx ε
烘箱中烘 us °¬±∀待冷却后按标准曲线制备项下
的方法测定吸光度 o并计算总皂苷的含量 ∀
21113 上样溶液制备 称取粉碎的土贝母药材
uss ªo加入 zs h 乙醇 t uss °o加热回流提取 v
次 o每次 u «o减压蒸干得浸膏 ys ª∀上样时加入适
量水 o配制不同含量备用 ∀
212 大孔吸附树脂选择
21211 静态吸附量考察 分别精密称取预处理过
的大孔吸附树脂 o°⁄yss o°⁄xss o⁄ust o
⁄vst o
2{ o⁄vxus o⁄tst o°⁄tss 各 t ª置于 xs
#wwz#
第 vs卷第 ts期
ussx年 x月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vs o¶¶∏¨ ts
¤¼ oussx
°量瓶中 o分别加入 us °土贝母药材提取溶液
k含生药量为 vs °ª#°ptl o放置过夜 o滤过 o分别测
定原液和滤液中土贝母总苷的含量 ~测定 |种树脂的
含水量 o计算各干树脂的静态净吸附量 o结果见图 t∀
图 t 不同树脂对土贝母总皂苷的静态最大吸附率
从图中可以看出 o不同类型的大孔吸附树脂对
土贝母总苷的静态吸附效果有较大的差异 o|种树
脂中吸附效果最好的为 o其次为 °⁄yss o
⁄tst和 °⁄xss o⁄vst的吸附容量最小 ∀因此 o选
择吸附效果较好的 w种树脂 o°⁄yss o⁄tst o
°⁄xss进行进一步考察 ∀
21212 大孔吸附树脂洗脱度考察 称取预处理过
的 w种大孔树脂 o°⁄yss o°⁄xss o⁄tst各
ts ªk干重l装柱 o分别取 xs °土贝母水提液k每毫
升 vs °ª生药l上样 o然后分别依次用去离子水 o
x h ots h ous h ows h oys h o{s h o|x h 乙醇各 tss
°洗脱 o收集洗脱液 o测定总皂苷的含量 o计算不
同含量乙醇的洗脱量 o结果见图 u ∀
图 u 不同大孔树脂对土贝母总苷的解吸曲线
可以看出 ow种大孔树脂吸附土贝母总苷后均
能由不同含量的乙醇解吸出总皂苷 o在 us h ∗ {s h
乙醇含量区间内 o随着乙醇含量的增大 o洗脱量也随
之增大 o且 {s h乙醇洗脱效果最好 ∀此外 o可以看
出 o 树脂的洗脱量整体上均超过其他 v 种树
脂 ∀综合以上试验 o表明 w种树脂中 大孔树
脂对土贝母总苷吸附量最大 o解吸率最高 o其最佳
的洗脱溶剂为 {s h乙醇 ∀因此以 大孔树脂为
吸附填料进行进一步的考察 ∀
21213 最大动态吸附量考察 精密称取 树
脂 x ªk干重l o装柱 o柱体积约 ts °∀徐徐注入含
量为每毫升 x °ª生药的土贝母水提溶液 o上柱流速
调节为 u
∂ #«p t o收集流出液 o每份 ts °o×≤ 检
识直至出现苷甲斑点 ∀以流出液体积为横坐标 o总
皂苷含量为纵坐标 o作图 o即得 树脂对土贝母
总苷的动态吸附曲线图 o结果见图 v ∀
图 v 树脂对土贝母总苷的动态吸附曲线
从上图可以看出 o树脂对土贝母总苷具有
良好的动态吸附性能 o泄漏时间较长 o{
∂ 才开始
出现泄漏 o并较长时间保持低浓度泄漏 ∀直到流出
液达到 tu
∂ 时 o流出液中总皂苷的含量才达到
s1tx °ª# °p t左右 ∀当流出液的体积到达 ty
∂
时已达到吸附平衡 o此时大孔吸附树脂的饱和动态
吸附量约为每克干树脂 vu °ª总皂苷k相当于 s1x ª
生药l o与静态吸附特征基本一致 ∀
213 大孔树脂吸附条件的优化
为考察上样时样品溶液的浓度 !树脂柱的径高
比和生药与树脂的比例 v个条件对 树脂吸附
土贝母总苷的影响 o采用表 t的正交设计分别装柱 !
上样 o并计算各柱子对应的树脂的吸附量 o实验结果
及方差分析分别见表 u ov ∀
表 t |kvwl正交试验因素水平
水平
Α
上样含量r
°ª#°p t
Β
树脂色谱柱
径高比
Χ
药材Β树脂
t uw tΒv tΒu
u vs tΒx tΒv
v vy tΒz tΒw
表 u 正交试验结果
²1 动态吸附量r°ª
t vs1{
u vu1w
v vu1{
w vu1w
x vu1x
y vt1|
z vt1{
{ vt1w
| vu1x
#xwz#
第 vs卷第 ts期
ussx年 x月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vs o¶¶∏¨ ts
¤¼ oussx
表 v 正交试验方差分析
方差来源 离均差平方和 自由度 均方 Φ Π
Α s1tt u s1sx u1xu
Β t1uw u s1yu u|1zy s1sx
Χ t1{s u s1|s wv1uy s1sx
误差 s1sw u s1su
注 }Φs1sxku oul t|1ss
由表 v可知 o因素 Α无显著性差异 o说明了上
样含量在 uw ∗ vy °ª#°p t内对 吸附土贝母
总苷的效率无显著性影响 o水平 u对应的动态吸附
率相对高些 o因此选择 vs °ª#°p t的样品含量上
样 ~因素 Β和因素 Χ均有显著性差异 o说明在正交
设计的 v个水平内 ou因素的变化对总皂苷的吸附
率有较大的影响 o根据试验数据并结合实际生产考
虑 o最后确定最佳吸附条件为 Αu Βv Χt o即上样含量
为 vs °ª#°p t o色谱柱的径高比确定为 tΒz o药材Β
树脂比例为 tΒu ∀
214 乙醇含量对洗脱效果的影响
取 ts ° 大孔吸附树脂依法上柱 o按上
述实验确定的吸附条件进行吸附 o吸附完全后 o以梯
度乙醇洗脱 o收集洗脱液 o浓缩至干后称重并测定总
皂苷的含量 o计算杂质累积洗脱率和总皂苷累积洗
脱率 o以乙醇含量为横坐标 o以洗脱率为纵坐标作
图 o结果见图 w ∀
从图 w 可以看出 o吸附后用水洗脱可以除去
图 w 乙醇含量对洗脱效果的影响
zs h的杂质成份 ous h乙醇可以除去 {s h以上的杂
质 o但是有少量的皂苷损失 o在要求终产品的纯度较
高时 o可以忽略不计 o因此 o吸附后可以用水或者
ts h ous h乙醇洗脱除杂 ∀随着醇浓度的增加 o总皂
苷的洗脱率也得以提高 o当乙醇含量达到 {s h时 o
|x h以上的总皂苷都被洗脱下来 o此后再增加乙醇
浓度解吸率虽有提高 o但变化不明显 ∀而且乙醇浓
度过高 o生产成本增加 o而且存在安全隐患 o因此采
用 {s h乙醇为最终的洗脱浓度 ∀
3 讨论
树脂对土贝母总皂苷的吸附量大 o解吸容
易 o大孔树脂的饱和动态吸附量约为每克干树脂 vu
°ª总皂苷 o与静态吸附特征相符 ∀确定的吸附与洗
脱条件简单易行 o可作为土贝母总皂苷的纯化方法 ∀
≈参考文献
≈t 中国药典 1 一部 1usss1tw1
≈u 于立坚 o马润娣 o于廷曦 1 土贝母苷甲和苷乙的抗肿瘤作用 1
中国新药杂志 oussu ottk|l }y|u1
Ισολατιον ανδ πυριφιχατιον οφ τοταλτυβειµ οσιδεσφροµ
Βολβοστεµ µα πανιχυλατυµ βψ µ αχροπορουσρεσιν
׬±ª2∏±t ou o × ° ±¨ª2©¨¬t o∂ ƒ ¬¨2¬¨v
(t1 Σχηοολ οφ Πηαρµ αχευτιχαλ Σχιενχεσ , Πεκινγ Υνιϖερσιτψ Ηεαλτη Σχιενχε Χεντερ , Βειϕινγ tsss{v , Χηινα ;
u1 Χολλεγε οφ Φοοδ Σχιενχε ανδ Νυτριτιοναλ Ενγινεερινγ , Χηινα Αγριχυλτυραλ Υνιϖερσιτψ, Βειϕινγ tsss{v , Χηινα ;
v1 Χηινεσε Αχαδε µ ψ οφ Αγριχυλτυραλ Σχιενχεσ , Βειϕινγ tsss{t , Χηινα)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¶¨¯¨¦··«¨ ²³·¬°∏° ³∏µ¬©¬¦¤·¬²± ³µ²¦¨¶¶²©¤¯¯ ·∏¥¨¬°²¬¶¬§¨¶©µ²° Βολβοστε µ µα πανιχυλατυµ ¥¼ °¤¦µ²³²µ²∏¶
µ¨¶¬±1 Μετηοδ : ≥·¤·¬¦¤¥¶²µ³·¬²±·¨¶·¤±§§¨¤¥¶²µ³·¬²±·¨¶·º µ¨¨ ¦¤µµ¬¨§²∏··²¶¦µ¨ ±¨·«¨ ¥¨¶·°¤¦µ²³²µ²∏¶µ¨¶¬±©²µ¤¯¯ ·∏¥¨¬°²¶¬§¨¶1 ׫¨ ¶¬±2
ª¯¨©¤¦·²µ·¨¶·o²µ·«²ª²±¤¯ ¬¨³¨µ¬° ±¨·¤¯ §¨¶¬ª±¶¤±§√¤µ¬¤±¦¨ ¤±¤¯¼¶¬¶ º µ¨¨ ¤³³¯¬¨§·² ²³·¬°¬½¨ ·«¨ °¤±¬³∏¯¤·¬²± ³¤µ¤° ·¨¨µ¶²© °¤¦µ²³²µ²∏¶
µ¨¶¬±1 Ρεσυλτ : ׫¨ °¤¦µ²³²µ²∏¶µ¨¶¬± ³²¶¶¨¶¶¨§·«¨ ¶·µ²±ª¨¶·¤¥¶²µ³·¬²± ¤¥¬¯¬·¼·²¤¯¯ ·∏¥¨¬°²¶¬§¨¶¤°²±ª·«¨ | µ¨¶¬±¶¶·∏§¬¨§o¬± ¤§§¬2
·¬²±·²¤± ¤¨¶¼ §¨2¤¥¶²µ³·¬²± ³µ²³¨µ·¼1 ׫¨ ²³·¬°∏° ¤¥¶²µ³·¬²±¦²±§¬·²±¶º µ¨¨ Αu Βv Χt o±¤°¨¯¼¦²±¦¨±·µ¤·¬²±²©©¨ §¨¨ vs °ª#°p t o§¬¤°2
·¨¨µ}«¨¬ª«·²©·«¨ ¦«µ²°¤·²ªµ¤³«¼¦²¯∏°± tΒz1 ·«¨ º ¬¨ª«·µ¤·¬²²©µ¤º °¤·¨µ¬¤¯ ¤±§µ¨¶¬±¶tΒu1 Χονχλυσιον : ׫¨ ¤¥²√¨ ¬¨³¨µ¬° ±¨·¤¯ µ¨¶∏¯·¶
¦¤± ³µ²√¬§¨ ¬¨³¨µ¬° ±¨·¤¯ ¥¤¶¬¶©²µ¯¤µª¨2¶¦¤¯¨³∏µ¬©¬¦¤·¬²± ³µ²¦¨¶¶²©¤¯¯ ·∏¥¨¬°²¶¬§¨¶1
[ Κεψ ωορδσ] Βολβοστε µ µ α πανισαλατυ µ ~·∏¥¨¬°²¶¬§¨¶~ °¤¦µ²³²µ²∏¶µ¨¶¬±~ ≈责任编辑 刘
#ywz#
第 vs卷第 ts期
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