全 文 ：‹°≤测定新清宁片中大黄蒽醌类成分的含量
刘 颖 t3 o韩曼雪 u o张小茜 t
kt1北京市药品检验所 o北京 tsssvx~ u1中国中医科学院 试验药厂 o北京 tsszssl
≈收稿日期   ussw2tu2uy
≈通讯作者   3 刘颖 oר¯}kstslyytuwwuu
新清宁片收载于 5中国药典 6usss年版 ≈t 是由
熟大黄经加工制成原质量标准中含量测定方法为分
光光度法测定大黄总蒽醌衍生物的含量 o专属性不
强 ∀大黄中含有大黄酚 !大黄素 !大黄素甲醚 !芦荟
大黄素 !大黄酸 o关于这 x种成分的含量测定 o文献
报道有比色法 ≈u  !重量法 !极谱法 !容量法 !光密度
法 !薄层扫描法 !高效液相色谱法 ≈v  ∀为了有效地
控制新清宁片质量 o作者采用高效液相色谱法对新
清宁片中芦荟大黄素 !大黄酸 !大黄素 !大黄酚 !大黄
素甲醚进行了含量测定 ∀
1 仪器 !试剂与样品
岛津 ts„ p ¦¯¤¶¶∂ °高效液相色谱仪 ~乙腈 k色
谱纯 lo甲醇 k色谱纯 lo磷酸 k优级纯 lo其他试剂均
为分析纯 ~芦荟大黄素 !大黄酸 !大黄素 !大黄酚 !大
黄素甲醚 k中国药品生物制品检定所 o批号分别为
z|x2|vstozxz2|wsuoz|y2usstszoszxy2ussss|ozx{2
|vstl~新清宁片 k中国中医科学院实验药厂 o批号
为 sustvsosusvszosusytvosusztwosus|tyosutst|o
suttusosuttutosutusyosutuuuosvstst~辽宁营口
中药厂 o批号 ussus|u|oussutstzl∀
2 含量测定
211 色谱条件 °«¨ ±²° ±¨ ¬¨ ≤t{ ’⁄≥u色谱柱 kw1y
°° ≅ uxs °°ox Λ°l~流动相乙腈 2甲醇 2th磷酸溶
液 kwwΒwyΒvvl~紫外检测波长 uxw ±°~柱温 us ε ~
流速 s1x °# °¬±pt ~理论板数按大黄素峰计算不
低于 v sss∀见图 t∀
212 对照品溶液的制备 精密称取芦荟大黄素 !大
黄酸 !大黄素 !大黄酚对照品各 ts °ªo加甲醇稀释 o
摇匀 o得芦荟大黄素 ktu Λª# °pt l!大黄酸 kus Λª
# °pt l!大黄素 kus Λª# °pt l!大黄酚 kws Λª#
°pt l!大黄素甲醚 kts Λª# °pt l∀
213 供试品溶液的制备 取新清宁片 us片 o除去糖
图 t 新清宁片 ‹ °≤图
„q对照品 ~…1样品 ~≤1空白 ~⁄1大黄药材
t1芦荟大黄素 ~u1大黄酸 ~v1大黄素 ~w1大黄酚 ~x1大黄素甲醚
衣 o精密称定 o研细 o取 s1t ªo精密称定 o置具塞锥形
瓶中 o精密加入甲醇 xs °o密塞 o称定重量 o加热回
流 t1x «o取出 o放冷 o再称定重量 o用甲醇补足减失的
重量 o摇匀 o滤过 o精密量取续滤液 ux °o置锥形瓶
中 o蒸干 o加水 ux °o盐酸 u °o三氯甲烷 us °o置
水浴中加热回流 vs °¬±o立即冷却 o移置分液漏斗中 o
用少量三氯甲烷洗涤容器 o洗液并入同一分液漏斗
中 o分取三氯甲烷层 o水液用三氯甲烷提取 v次 ktxo
tsots °lo弃去水液 o合并三氯甲烷液 o以无水硫酸
钠适量脱水 o蒸干 o残渣加醋酸乙酯 u °使溶解 o置
ts °量瓶中 o加甲醇稀释至刻度 o摇匀 o用微孔滤膜
ks1wx Λ°l滤过 o取续滤液 o作为供试品溶液 ∀
214 线性关系考察 分别精密称取芦荟大黄素 !大
#||{t#
第 vt卷第 uu期
ussy年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vtoŒ¶¶∏¨ uu
‘²√ °¨¥¨ µoussy
黄酸 !大黄素 !大黄酚 !大黄素甲醚对照品各适量 o分
别加醋酸乙酯 2甲醇 kuΒ{l溶解并稀释至一定浓度 o
再分别精密吸取上述对照品溶液各 ts ˏo注入液
相色谱仪 o记录峰面积 o以上述对照品的进样量
kΛªl为横坐标 Ξ,峰面积为纵坐标 Ψo绘制标准曲
线 o求得回归方方程 ∀结果见表 t∀
表 t 芦荟大黄素 !大黄酸 !大黄素 !大黄酚 !
大黄素甲醚回归方程
对照品名称 回归方程 ρ 线性范围
芦荟大黄素 Ψ € | u{w1zΞ p v1wy s1||| | s1swz ∗ s1uvz
大黄酸 Ψ € zy uzyΞ n yw s1||| z s1ssx { ∗ s1swy y
大黄素 Ψ € yt wxtΞ n ut{1t s1||| x s1sw{ ∗ s1v{x
大黄酚 Ψ € | vxs1zΞ n vx1u s1||| z s1sy{ ∗ s1xw{
大黄素甲醚 Ψ € | uwx1vΞ p x{1y s1||| y s1sux ∗ s1uss
215 稳定性试验 精密吸取供试品溶液 ts ˏo分
别于配制后 sowo{otuotyouw «o依法测定 o结果芦荟
大黄素 !大黄酸 !大黄素 !大黄酚 !大黄素甲醚峰面积
• ≥⁄分别为 t1|h os1zxh os1yuh os1wsh ot1xh o
表明供试品溶液在 uw «内基本稳定 ∀
216 空白试验 按处方中药味的比例 o自配不含熟
大黄的群药 o按其工艺制成空白制剂 o再按供试品溶
液制备方法制备并测定 o结果空白溶液在与芦荟大
黄素 !大黄酸 !大黄素 !大黄酚 !大黄素甲醚对照品相
同保留时间处未显色谱峰 o故认为无干扰 ∀
217 精密度试验 精密吸取供试品溶液 o进样 ts
ˏo重复进样 y次 o结果芦荟大黄素 !大黄酸 !大黄
素 !大黄酚 !大黄素甲醚峰面积 • ≥⁄分别为 s1{vh o
s1y{h os1xsh os1wyh ot1uh o表明精密度良好 ∀
218 重复性试验 分别精密称取同一批号样品
k批号 sutusyly份 o依法测定 o结果芦荟大黄素 !大
黄酸 !大黄素 !大黄酚 !大黄素甲醚平均质量分数分
别为 u1wswow1{xsov1wwxow1|z|ot1vuw °ª# ªpt o
• ≥⁄分别为 t1vh ot1vh ot1th ou1sh os1ywh o表
明重复性良好 ∀
219 回收率试验 采用加样回收法 ∀精密称取已知
含量的同一批号的样品 k批号 sutusyl约 s1ts ªo精密
加入分别含有芦荟大黄素对照品 ks1ssu vz °ª#
°pt l!大黄酸对照品 ks1swz { °ª# °pt l!大黄素
对照品 ks1ssx {{ °ª# °pt l!大黄酚对照品 ks1ssy
sz °ª # °pt l! 大 黄 素 甲 醚 对 照 品
ks1sst {s °ª# °pt l甲醇溶液 xs °o按供试品溶
液的制备方法制备及上述色谱条件 o测定 o结果见表
u∀
表 u 新清宁片中 x种蒽醌类成分加样回收率
对照品
样品中
含量 r°ª
加入量
r°ª
测得量
r°ª
回收率
rh
平均值
rh
• ≥⁄
rh
芦荟大黄素 s1tuu w s1tt{ y s1uws t ||1u |{1t t1z
s1tuw { s1tt{ y s1uws x |z1y
s1tuv v s1tt{ y s1uws z ||1s
s1tuy z s1tt{ y s1uws t |x1y
s1tuw { s1tt{ y s1uv| | |z1s
s1tut y s1tt{ y s1uws x tss1u
大黄酸 s1uwy | s1uv| u s1w{{ | tst1u ||1{ t1z
s1uxt z s1uv| u s1w{{ w ||1s
s1uw{ { s1uv| u s1w{{ | tss1w
s1uxx y s1uv| u s1w{{ w |z1v
s1uxt z s1uv| u s1w{{ | ||1u
s1uwx w s1uv| u s1w{| w tsu1s
大黄素 s1tzw z s1u|w s s1wys { |z1v |z1v s1tz
s1tzx w s1u|w s s1wyw w |z1v
s1tzy w s1u|w s s1wyu { |z1w
s1tz| x s1u|w s s1wyx y |z1v
s1tzy s s1u|w s s1wyu { |z1y
s1tzz w s1u|w s s1wyu { |z1t
大黄酚 s1uxu w s1vsv y s1xx| u tst1s tss1s s1{{
s1uxv w s1vsv y s1xx{ w tss1x
s1uxw | s1vsv y s1xx{ y tss1s
s1ux| w s1vsv y s1xx{ { |{1y
s1uxw w s1vsv y s1xx| u tss1w
s1uxy w s1vsv y s1xxz | ||1v
大黄素甲醚 s1syz w s1s|s s s1txu w |w1w |v1x t1x
s1sy{ z s1s|s s s1txs | |t1v
s1syz | s1s|s s s1txv w |x1s
s1sy| { s1s|s s s1txu | |u1v
s1sy{ z s1s|s s s1txv w |w1t
s1syz s s1s|s s s1txt v |v1z
2110 新清宁片测定 分别精密吸取上述对照品溶
液及供试品溶液各 ts ˏo注入液相色谱仪 o测定 o
并与 5中国药典 6usss年版收载方法进行了比较 o结
果见表 v∀
表 v 新清宁片中 x种蒽醌类成分含量 kν € ul °ªr片
厂家 批号
芦荟大
黄素
大黄
酸
大黄
素
大黄
酚
大黄素
甲醚
总量
药典法测
定 k˜∂ l
中国中 sustvs s1yuu t1stv t1uu u1tt s1xw{ x1xt z1w{
医科学 susvsz s1y|w t1t{x t1ww u1v{ s1ysu y1vs z1vz
院实验 susytv s1ytw t1sxt t1uz u1tt s1xxu x1ys z1uw
药厂 susztw s1yv| t1tvz t1vs u1uu s1x{v x1{{ z1vu
sus|ty s1yss t1tuz t1ux u1tt s1xyx x1yx z1wz
sutst| s1yst t1tyu t1uy u1ty s1xzt x1zx z1tx
suttus s1ytz t1st| t1uv u1s{ s1xuv x1wz z1sz
suttut s1ysw t1stz t1us u1sz s1xvt x1wu z1sx
sutusy s1ztw t1wwt t1su t1w{ s1v|v x1sx z1ts
sutuuu s1x|w t1stu t1t| u1sw s1xvz x1vz z1uz
svstst s1x|| s1|wv t1uv u1sw s1xtw x1vv z1u|
营口中 ussus|uz t1s|v s1{|x t1w{ u1zy s1yzz y1|s
药厂 ussutstz s1{|y s1{zy t1wy u1wv s1y{x y1vx
2111 用本研究所建立的方法测定了大黄及熟大黄
#ss|t#
第 vt卷第 uu期
ussy年 tt月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯1vtoŒ¶¶∏¨ uu
‘²√ °¨¥¨ µoussy
原料药材各 v批 o结果见表 w∀
表 w 大黄药材中 x种蒽醌类成分含量 kν € ul h
药材 批号
芦荟大
黄素
大黄酸 大黄素 大黄酚 大黄素 总量
生大黄 svsws{ s1uv s1zx s1ut s1vx s1szy t1yty
svsws| s1uw s1{s s1uu s1vx s1s{t t1y|t
svswts s1uu s1zy s1uu s1vx s1szz t1yuz
熟大黄 svswtw s1us s1wy s1vs s1vz s1tw t1wz
svswtx s1uu s1wz s1vu s1ys s1ty t1zz
svswty s1uu s1w{ s1vu s1x| s1ty t1zz
3 讨论
311 实验条件的选择
31111 提取方法的选择 分别采用乙醇 !甲醇加热
回流 ys °¬±o及甲醇超声处理 ys °¬±测定同批样
品 o结果表明采用甲醇加热回流的方法提取较完全 ∀
31112 提取时间的选择 用甲醇为溶剂 o分别加热
回流 txovso|sotus °¬±测定同批样品 o结果表明加
热回流 |s °¬±为宜 o提取较完全 ∀
31113 萃取溶剂的选择 水解后分别采用三氯甲
烷 !乙醚萃取 o测定同批样品 o结果表明采用以三氯
甲烷萃取较完全 ∀
31114 酸用量的选择 加入 u1x °²¯ # pt硫酸溶
液 ux °o及分别加水 ux °和盐酸 t1sot1xou1so
u1xov1s °o测定同批样品 o结果表明采用加入水
ux °和盐酸 u1s °o加热水解提取较完全 ∀
31115 水解时间的选择 分别水解 txovsowxoyso
|s °¬±o及测定同批样品 o结果表明采用加热水解 vs
°¬±提取较为完全 ∀
31116 萃取次数的选择 以酸水加三氯甲烷水解
后 o用三氯甲烷振摇提取 v次后 o再分别用三氯甲烷
ts °振摇提取 o结果第 w次和第 x次均未检出芦
荟大黄素 !大黄酸 !大黄素 !大黄酚和大黄素甲醚的
色谱峰 o故认为提取 w次即可提取完全 ∀
312 曾经采用甲醇 2s1th磷酸溶液 k{xΒtxl!乙腈 2
水 2冰醋酸 kysΒwsΒtl等流动相系统 o但芦荟大黄素
和大黄酸的分离效果均不理想 o后经实验发现使用
乙腈 2甲醇 2s1th磷酸溶液分离效果较好 o反复摸索
对比后确定乙腈 2甲醇 2s1th磷酸溶液 kwwΒwyΒvvl
系统比例 o经过实验 o此系统在同时测定大黄中的 x
种成分时可以达到较好的分离度和重复性 ∀
313 本研究实验中发现在将样品转溶置 ts °量
瓶时 o由于样品极性较小 o采用甲醇为溶剂转移时 o
溶解不完全 o容易造成成分的损失 o经研究使用醋酸
乙酯为溶剂转移样品 o结果转移速度提高且完全 ∀
≈参考文献  
≈t  中国药典 ≈≥ 1一部 1 usss}t{1
≈u  肖培根 o李大鹏 o杨世林 o等 1新编中药志 ≈  1第 t卷 1北
京 }化学工业出版社 oussu}yy1
≈v  肖培根 o阴 健 o郭力弓 o等 1中药现代研究与临床应用
≈  q北京 }学苑出版社 ot||x}yt1
≈责任编辑 鲍 雷  
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5中国中药杂志 6荣获第三届国家期刊奖百种重点期刊 ∀
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