全 文 ：3 中国人民解放军青年基金资助课题 ‘²q|vxtustx
#药理#
叶下珠抗肝细胞损伤作用机制 3
周世文 徐传福 周宁 黄永平 黄林清
k第三军医大学第二附属医院临床药理基地 重庆 yvssvzl
陈晓红 胡友梅 廖雅琴
k第三军医大学药理学教研室 重庆 yvssv{l
摘要 叶下珠能明显降低 ≤≤ w¯引起的小鼠血清 „× 的升高 o抑制肝脏  ⁄„的生成 ∀叶下珠体外
与大鼠肝细胞共同孵育 o能抑制 ≤≤ w¯所致肝细胞膜流动性降低 o降低1≤¤u n 2¬浓度 ∀结果提示 o叶下珠
保护肝脏损伤作用可能与其抗指质过氧化和膜保护作用有关 ∀
关键词 叶下珠 „×  ⁄„ 细胞膜流动性 1≤¤u n 2¬
叶下珠为大戟科油柑属一年生小草本植
物 o我国南方各省及长江流域地区盛产叶下珠 ∀
近年来国外报道同属植物苦味叶下珠 Πηψλ2
λαντηυσ αµ αρυσ和珠子草 Π. νιρυρι有明显的抗
肝炎病毒和抗肝细胞损伤作用≈t ∗ v  ∀我们曾
报道了重庆地区生长的叶下珠能明显减轻
≤≤ w¯引起的小鼠肝脏病理损害≈w  ∀本文采用
体内和体外肝损伤模型 o研究叶下珠对肝细胞
损伤的保护作用机制 ∀
1 材料与方法
1 q1 药品与试剂 植物药叶下珠于当年 |月
份采集于重庆地区 o经四川省中药研究所鉴定
为 Πηψλλαντηυσ υριναρια q∀全草洗净后切碎
用 xs h乙醇回流提取 v次 o合并提取液减压回
收乙醇后浓缩干燥 o提取物用生理盐水溶解配
制成 tªr的溶液备用 ∀ ≤≤ w¯ 为上海长江化学
试剂厂产品 o体内实验配成 s qu h ≤≤ w¯ 橄榄油
溶液备用 ~体外实验用二甲亚砜k⁄ ≥’l配成
浓度为 ts°°²¯r的溶液备用 o⁄ ≥’ 的工作
浓度为 s qw h ∀胶原酶 ´型和 t oy2二苯基2t o
v ox2乙三烯k⁄°‹l均为 ≥¬ª°¤产品 ∀  ∞ 培
养基为 ŠŒ…≤ ’ 产品 oƒ∏µ¤2ur„  为中国科学
院生理研究所产品 o以 ⁄ ≥’ 配成 t°°²¯r
的溶液 p us ε 保存备用 ∀
1 q2 动物 ‘Œ‹ 小鼠 o雌性 okus ? ulªo重庆
医科大学动物所 ∀ • ¬¶·¤µ大鼠 o雌雄兼用 o体重
kt|s ? uslªo第三军医大学实验动物所 ∀
1 q3 ≤≤ w¯ 体内肝损伤小鼠分组和造型 取
‘Œ‹小鼠 xs只 o随机分为 x组 o分别为生理盐
水对照组 o≤≤ w¯ 中毒组 o叶下珠 s qu os qw o
s qy °¯ r只治疗组 o叶下珠治疗组均连续灌胃给
药 z天 o每天 u次 o第 z天除生理盐水对照组
外 o每只小鼠按 ts °¯ r®ª灌胃给予 s qu h 的
≤≤ w¯橄榄油 u次 o每次间隔 tu«o第 {天晨眼眶
采血 o离心 tsssµr°¬± x°¬±o分离血清用赖氏法
测丙氨酸转氨酶k„×l≈x  ∀同时取肝脏用生
理盐水制成 ts h的匀浆液 o用 ׅ„ 法测定肝
脏脂质过氧化产物丙二醛k  ⁄„l≈y  ∀
1 q4 肝细胞膜流动性测定和肝细胞1≤¤u n 2¬
水平测定 用胶原酶二步灌流法≈z 分离大鼠
肝细胞 o置 x h ≤ ’u 培养箱 vz ε 培养 w«o换培
养基后加入 ≤≤ w¯k终浓度为 ts°°²¯rl o叶下
珠组分别加入叶下珠提取物 tsp v otsp u otsp t o
tªro药物与肝细胞作用 t«后再加入终浓度
为 ts°°²¯r的 ≤≤ w¯ o再培养 w«后测定肝细胞
膜流动性和肝细胞1≤¤u n 2¬水平 ∀肝细胞膜流
动性用林克椿等方法≈{  o将上述培养的肝细
胞 o悬浮于 s qst°²¯r磷酸缓冲液中 o调整细
#|st# 中国中药杂志 t||z年第 uu卷第 u期
胞密度为 x ≅ tsy 个r °¯ o取该细胞悬液 u °¯ o加
入 ⁄°‹k终浓度为 u ≅ tsp y °²¯rl oux ε 温育
vs°¬±o在岛津 • ƒ2wxs型荧光分光光度计上测
定荧光强度 ∀激发波长 v{u±° o发射波长为
wvu±° ∀计算荧光偏振度kΘl o微粘度kΓl o各向
异性kΧl ∀用 Θ表示偏振度时 oΘoΓ oΧ值越大 o
膜流动性越小 ~反之 o各值越小 o则膜脂的流动
性越大 ∀肝细胞1≤¤u n 2¬水平测定用 ƒ∏µ¤2ur
„  方法进行 o分别取正常对照组 !≤≤ w¯组和叶
下珠组的肝细胞 o用 Ž2‹ ¥∏©©¨µk‘¤≤¯ tt{ qw
°°²¯ oŽ≤¯ w qz°°²¯ oŽ‹u°’wt qu°°²¯ o ª≥’w
# z‹u’ t q|°°²¯ o ‘¤‹≤ ’v ux°°²¯ o ≤¤≤ u¯
t q|°°²¯ oŠ¯ ∏¦²¶¨ ts°°²¯ o‹∞°∞≥ us°°²¯ o
³‹ z qwl悬浮 o调整细胞密度为 t ≅ tsy 个r °¯ o
取 u °¯ 该细胞悬液 o加入 ƒ∏µ¤2ur„  u qxΛ°²¯ o
于 vz ε 孵育 ts°¬±后用 • ƒ2wxs型荧光分光光
度计测定荧光强度≈|  ∀计算1≤¤u n 2¬浓度仍沿
用 ∏´¬±2u的计算公式 }1≤¤u n 2¬€ Ž§kƒ p ƒ°¬±lr
kƒ°¤¬ p ƒl oŽ§€ uuw±°²¯roƒ 为不同实验条
件下测得的荧光强度 oƒ°¤¬为最大荧光强度 o由
加入 ×µ¬·²±÷2tssk终浓度为 s qt h l测得 oƒ°¬±
为加入 |°°²¯ ∞⁄× „ 络合全部 ≤¤u n测得的最
小荧光强度 ∀
2 结果
2 q1 叶下珠对 ≤≤ w¯ 肝损伤小鼠血清 „× 和
肝脏  ⁄„ 含量的影响 用 ≤≤ w¯ 灌胃造成小
鼠肝损伤后 o其血清中 „× 活性和肝脏  ⁄„
含量明显升高 o分别为生理盐水对照组的 w qx{
倍和 x qz倍 ∀给予叶下珠能明显降低 ≤≤ w¯ 所
致的 „× 和肝脏  ⁄„ 的升高 o叶下珠 s qw o
s qy °¯ 组能使 „× 分别降低 v| qyx h 和
xs qxz h ~叶下珠 s qu os qw os qy °¯ 组分别使肝脏
 ⁄„降低 uy qz h oxt qx h ox{ qy h k Π s qst o
见表 tl ∀
2 q2 叶下珠对 ≤≤ w¯体外损伤大鼠肝细胞膜流
动性的影响 大鼠肝细胞体外培养时加入
≤≤ w¯ o可使肝细胞 ΘoΓoΧ明显升高 o即肝细胞膜
的流动性明显降低 o叶下珠可以防止膜流动性
降低 o结果见表 u ∀
表 t 叶下珠对 ≤≤ w¯肝损伤小鼠血清 „× 和
肝脏  ⁄„含量的影响
组 别 ν 剂量 °¯ r只 „× ˜r  ⁄„ ±°²¯rª
生理盐水
≤≤ w¯
叶下珠
ts
|
|
ts
{
s qw
s qw
s qu
s qw
s qy
v{ ? {tl
tzw ? |
tyz ? tu
tsx ? vttl
{y ? uwtl
t{u ? tvtl
tsv| ? {t
zyu ? ts{tl
xsw ? {vtl
wvs ? zztl
注 }ξ ? σ tl与 ≤≤ w¯组相比 Π s qstk下同l
2 q3 叶下珠对 ≤≤ w¯ 体外损伤大鼠肝细胞
1≤¤u n 2¬的影响 用钙离子荧光指示剂 ƒ∏µ¤2
表 u 叶下珠对 ≤≤ w¯体外损伤的大鼠肝细胞膜流动性的影响
组 别 剂量 ªr Θ Γ Χ
对照组 s qt{{ ? s qssytl t qvyy ? s qszttl s qtvu ? s qsswtl
≤ ≤ w¯组 tsul s quvv ? s qssvtl u qsxz ? s qsyu s qty{ ? s qssu
叶下珠组 ts p v s quvt ? s qssztl u qstz ? s qtuttl s qtyz ? s qssxtl
ts p u s qutz ? s qssxtl t qzz| ? s qszutl s qtxy ? s qssvtl
ts p t s quts ? s qssytl t qy{z ? s qs{xtl s qtxt ? s qsswtl
t s qt|s ? s qssv t qwsw ? s qswwtl s qtvx ? s qssutl
注 }ν € w ul剂量单位为 °°²¯rk下同l
ur„  测定肝细胞内钙 o结果表明 o≤≤ w¯ 可使肝
细胞1≤¤u n 2¬明显升高 o其升高值为正常对照组
的 v qy 倍 ∀不同浓度的叶下珠可以抑制 ≤≤ w¯
引起的肝细胞1≤¤u n 2¬升高 o抑制率依次分别为
v qw h ots q| h ovx qv h owv qs h o叶下珠浓度为
tsp t otªr时 o与 ≤≤ w¯ 肝细胞损伤组相比有显
著性差异k Π s qst o表 vl ∀
#stt# 中国中药杂志 t||z年第 uu卷第 u期
表 v 叶下珠对 ≤≤ w¯体外损伤的大鼠
肝细胞1≤¤u n 2¬浓度的影响
组 别 药物剂量 ªr 1≤¤u n 2¬ ±°²¯r
对 照
≤≤ w¯
叶下珠
tsu
ts p v
ts p u
ts p t
t
uv{ qx ? uy qutl
{{z q{ ? tuw qy
{{w qs ? xs qu
z|t qs ? xy qu
xzw qs ? xx qxtl
xsy qs ? tsu q{tl
3 讨论
≤≤ w¯是一种典型的肝脏毒物 o≤≤ w¯ 经肝脏
微粒体混合功能氧化酶系统作用后 o生成三氯
甲基游离基k#≤≤ v¯l o#≤≤ v¯ 可攻击肝细胞膜上
的磷脂分子 o引起脂质过氧化反应 o#≤≤ v¯ 还可
以与肝细胞微粒体脂质和蛋白质发生共价结
合 o损伤肝细胞膜的结构与功能 o从而使肝脏的
可溶性酶如丙氨酸转氨酶 !乳酸脱氢酶等酶的
活性升高≈ts ott  ∀ ≤≤ w¯ 可以抑制内质网上的钙
泵使 ≤¤u n水平增加 o升高的1≤¤u n 2¬也可激活
肝细胞膜上的磷酸化酶 o从而引起膜的脂质过
氧化 o导致细胞膜损伤≈tu  ∀细胞膜损伤后 o不
能保持正常的膜流动性和电解质的平衡 o尤其
是 ≤¤u n的稳态失调 o使细胞内钙堆聚 o最终引
起细胞坏死 ∀本文实验结果表明 o叶下珠能明
显降低 ≤≤ w¯ 所引起的小鼠血清 „× 的升高 o
抑制肝脏  ⁄„ 的生成 o能阻止 ≤≤ w¯ 体外引起
的大鼠肝细胞膜流动性的降低 o抑制肝细胞
1≤¤u n 2¬升高 ∀结果提示 o叶下珠的抗 ≤≤ w¯ 肝
损伤作用机制与其抑制脂质过氧化反应和阻止
≤¤u n升高有关 o从而保护了肝细胞膜正常流动
性和完整性 ∀
4 参考文献
t ∂ ±¨®¤·¨¶º¤µ¤± ° ≥ ·¨¤¯ q°µ²¦‘¤·¯ „¦¤§≥¦¬˜≥„ ot|{z ~{w
ktl }uzw
u ׫¼¤ª¤µ¤­¤± ≥ ° ·¨¤¯ q¤±¦¨·ot|{{ ~uk{ytwl }zyw
v ‹¬®¬±² ‹ ·¨¤¯ q ∞·«±²³«¤µ°¤¦²¯ ot|{x ~twktl }t|
w 周世文等 q中药材 ot||w ~tzktul }vt
x 生物化学及生物化学检验技术编写组 q生物化学及生物化
学检验技术 q南京 }江苏科学技术出版社 ot|{s }uws
y 翁玉椿等 q细胞生物学杂志 ot|{x ~zkvl }twu
z ≥¨¯ª¨ ± ° ’ q  ·¨«²§¶≤¨¯¯ …¬²¯ ot|zy ~tv }u|
{ 林克椿等 q生物化学与生物物理学进展 ot|{t ~y }vu
| Šµ¼±®¬¨ º¬¦½ Š ·¨¤¯ q…¬²¯ ≤«¨ ° ot|{x ~uyskyl }vwws
ts 仲来福等 q中国药理学和毒理学杂志 ot|{| ~vkwl }u|{
tt 周炯亮 q职业医学 ot|{{ ~txkul }wz
tu ²±ª •  ·¨¤¯ ~…¬²¦«¨ ° °«¤µ°¤ot|{z ~vyk{l }tutx
t||x ) tt ) uu收稿
3 吉林省蚕业科学研究所 长春 tvssss
蚕蛹虫草的抗肿瘤及激素样作用
刘洁 杨世杰 杨旭 陈正 李景洛 3
k白求恩医科大学 长春 tvssutl
摘要 蚕蛹虫草对小鼠 ≥t{s有明显抑制作用 o延长荷瘤小鼠寿命 ~可明显抑制小鼠 ¨ º¬¶肺癌原发
灶生长和自发性肺部转移 ∀蚕蛹虫草明显升高正常大鼠血浆皮质醇及睾酮含量 o促进正常及去势大鼠
性器官的增殖 o具有雄激素样作用 ∀
关键词 蚕蛹虫草 抗肿瘤作用 ≥t{s ¨ º¬¶肺癌 雄激素
冬虫夏草 Χορδψχεπσ σινενσισ k …¨ µ®ql
≥¤¦¦qk≤≥≥l为传统的滋补强壮药 o现代药理实
验证明其具有广泛药理作用≈t  ∀目前 o≤≥≥的
代用品及人工培养菌丝相继问世≈t  ∀本实验
使用吉林人工培养的蚕蛹虫草 Χορδψχεπσ µιλι2
ταρισ kql ¬±® „±·«¨µ¤¨ ¤ ° µ¨±¼¬k ≤  l与
≤≥≥比较 o观察了 ≤  的抗癌作用及激素样
作用 ∀
1 材料和方法
1 q1 制剂 ≤  由吉林省蚕业科学研究所提
#ttt# 中国中药杂志 t||z年第 uu卷第 u期