全 文 ：大黄醇提液的抗疱疹病毒作用
王志玉 王桂亭 许洪芝
k山东医科大学病毒研究室 济南uxsstul
王
k山东省医学科学院药物所 济南uxssyul
摘要 大黄乙醇提取物的细胞毒性极低oussssΛªÙ°¯未见细胞毒性o反而能促进细胞生长~在细胞
培养上有明显的抗病毒作用o对单纯疱疹病毒k ≥∂ l的有效抑制浓度为tssΛªÙ° o¯并对 ≥∂ 的感染有
预防作用和对病毒颗粒有直接杀伤作用∀
关键词 大黄 单纯疱疹病毒 抗病毒作用 细胞培养
单纯疱疹病毒k ≥∂ l感染及其所引起的
并发症严重威胁着人类健康o目前尚无有效疫
苗用于预防∀临床上虽有几种化学药物用于治
疗o但不是毒性太大o就是有耐药性产生1t2o从
而限制了临床应用o尤其是体内用药∀因此o有
必要开发新药∀中草药是中华医学的瑰宝o来源
广泛o抗病毒作用正日益受到人们的重视∀我们
采用 ¨¯¤和 ³¨2u两种传代细胞以及原代兔
肾细胞k° l对大黄醇提液的抗 ≥∂ 作用进
行了较细致的实验研究∀
1 材料与方法
111 细胞 ¨¯¤细胞引自山东省医学科学院
药物所细胞室o ³¨2u细胞由山东省卫生防疫
站提供o均用 ∞¤ª¯¨培养基常规培养传代~°
细胞取自x日龄之内乳兔o用xh 乳蛋白水解物
培养o乳兔由山东省医学科学院实验动物中心
提供∀
112 病毒 ≥∂ 2t ²±ª株为标准野毒株o引
自北京生物制品研究所o用含uh 小牛血清的
∞¤ª¯¨培养基在上述v种细胞上传代∀实验用
tsx× ≤ ⁄xsÙ° ∀¯
113 药物
11311 大黄醇提液 将大黄 Ρ ηευµ οφφιχιναλε
¤¬¯¯q用|xh 的乙醇浸泡过夜o加热提取u次o每
次u«∀合并提取液o减压浓缩o将浓缩的大黄醇
提物在无菌条件下自然挥发至干o然后用
¤±®χ¶缓冲液配成tss°ªÙ°¯溶液owε 保存备
用∀
11312 无环鸟苷k ¦¼l为上海第六制药厂产
品o用 ¤±®χ¶缓冲液配制成t°ªÙ° o¯wε 保存
备用∀
114 细胞毒性实验 每种细胞长成单层后o换
成含uh 小牛血清的维持液o加入不同浓度的药
物~vzε 培养|y«o每天观察细胞形态变化∀
115 药物抗病毒实验
11511 大黄醇提液对病毒所致细胞病变
k≤°∞l的抑制作用 每种细胞接近生长成单层
时接种病毒o同时加入不同浓度的药物o每一浓
度w管o用含uh 小牛血清的维持液vvε 培养∀当
病毒对照 ≤ °∞ 达n n n n ktssh l时o判断结
果∀
11512 大黄醇提液对病毒感染的预防作用
每种细胞形成单层后加入不同浓度的药物o于
vzε 分别培养uwow{«o弃掉含药物的维持液o
用 ¤±®χ¶缓冲液洗涤v次o加入病毒攻击o
vvε 培养zu«∀
11513 大黄醇提液对病毒的直接杀伤作用
将tssssΛªÙ°¯大黄醇提液与病毒液等量混合o
于vzε 分别处理tu«和uw«∀每一时间!每一病
毒各w管∀用混合液感染细胞ovvε 培养zu«o观
察 ≤°∞产生情况∀
11514 大黄醇提液阻止病毒复制的动力学测
定 tssssΛªÙ°¯大黄醇提液加tsx× ≤ ⁄xsÙ°¯
≥∂ 2t为实验组~病毒对照组不加药物∀每组均
于vvε 培养o分别于感染后soyotuouwow{ozuo
|y«时取出o经反复冻融后o再按对数比例稀释
#wyv# 中国中药杂志 t||y年第ut卷第y期
tsp t∗ tsp {∀每一稀释度接种w瓶ovvε 培养o
|y«判定结果∀以横坐标为不同感染持续时间
k«l和纵坐标为病毒滴度ktª × ≤⁄xsÙ° l¯制成
病毒复制曲线∀
每一实验均设病毒对照!药物对照!细胞对
照o并以 ¦¼作为药物阳性对照∀每一实验重
复u次∀
2 结果
211 大黄醇提液对不同细胞的毒性 将大黄
醇提液稀释成tssoxssotsssoxssso{sssot≅
tswot1u≅ tswot1w≅ tswot1y≅ tswot1{≅ tswo
u1s≅ tswΛªÙ° o¯用v种细胞做毒性实验表明o每
一浓度组对每种细胞均无毒性作用~相反o细胞
生长得比对照组更好k图toulo维持时间更长o
说明大黄醇提液有促进细胞生长的作用∀ ¦¼
的细胞毒性剂量为xsssΛªÙ° ∀¯
图u 大黄醇提液的细胞毒性实验
³¨2u细胞加入大黄醇提液kt≅ tswΛªÙ° l¯vzε
维持|y«o未见细胞毒性o细胞形态反而更好k≅ wsl
212 大黄醇提液对 ≥∂ 所致 ≤°∞ 的抑制作
用 将大黄醇提液稀释成tsousoxsotssousso
xssotsssΛªÙ°¯做抗病毒实验表明o药物浓
度∴ tssΛªÙ°¯时o没有 ≤°∞ 产生k图vlo说明
药物对 ≥∂ 的复制有抑制作用∀在v种细胞上
药物对 ≥∂ 的作用程度一致o说明大黄醇提
液的抗病毒作用无细胞差异∀ ¦¼的有效抑制
浓度为usΛªÙ° ∀¯
图w 大黄醇提液的抗 ≥∂ 2t实验
° 细胞在感染 ≥∂ 2t的同时加入t≅ tswΛªÙ
°¯大黄醇提液ozu«未见 ≤ °∞o说明 ≥∂ 2t的复
制被抑制k≅ wsl
213 大黄醇提液对病毒侵入细胞的阻断作用
用tsssoxsssotssssΛªÙ°¯大黄醇提液做药
物对病毒感染的预防作用表明oxsssΛªÙ°¯和
tssssΛªÙ°¯浓度组可明显减轻和延缓 ≥∂ 引
起 ≤ °∞o与病毒对照组k图wl有明显差异~而
tsssΛªÙ°¯浓度组则无明显阻断病毒侵入细胞
的作用∀提示大剂量应用大黄醇提液才有预防
≥∂ 感染的作用∀
214 大黄醇提液对病毒颗粒本身的直接杀伤
作用 将tssssΛªÙ°¯的大黄醇提液与 ≥∂ 悬
液混合o于vzε 作用tuouw«o未加药物的病毒
同样处理作为对照∀结果表明o二者作用uw«使
≥∂ 的感染力明显减弱o≤°∞ 只占uxh o即
zxh 的细胞未出现 ≤°∞~而作用tu«病毒感染
力无明显减弱o≤ °∞ 程度与病毒对照组无差
异o均为n n n n o即全部细胞出现 ≤ °∞∀
#xyv# 中国中药杂志 t||y年第ut卷第y期
215 大黄醇提液阻止病毒复制的动力学
≥∂ 对照组于zu«达到增殖高峰o滴度为tsz1ux
× ≤ ⁄xsÙ° o¯此时实验组已下降 w个对数值
ktsv1ux× ≤ ⁄xsÙ° l¯k图xl∀从图x中可以看出o
≥∂ 在加入大黄醇提液后o病毒复制动力学明
显改变o已达不到原来最高滴度水平k°
s1stlo说明药物有效地抑制了病毒的增殖∀
图x 大黄醇提液对 ≥∂ 2t滴度的影响
q ≥∂ 2t
q ≥∂ 2t加大黄醇提液
3 讨论
≥∂ 是人类重要致病病毒o能引起口唇疱
疹!生殖器疱疹1u2!脑炎1v2!内脏器官感染o并与
宫颈癌和唇癌有关1w2∀人们虽然致力于研制疫
苗用于 ≥∂ 感染的预防o但因 ≥∂ 的基因为
双链 ⁄ o易与宿主 ⁄ 发生整合作用o或
形成潜伏状态o从而限制了病毒疫苗的发展与
应用∀筛选有效的抗病毒药物是当务之急∀到目
前为止o已发现多种化学药物有抗疱疹病毒作
用o但往往因为毒性太大或耐药性的产生而限
制了它们的临床应用∀而祖国的中草药资源非
常丰富o有化学药物无法比拟的优点∀
我们将大黄醇提液对 ≥∂ 的抑制作用在
多种细胞培养上进行了系统研究∀结果表明o大
黄醇提液在体外有明显的抗 ≥∂ 作用o剂量
增加抗病素毒作用越明显o且有阻断病毒侵入
细胞的作用o即预防作用o但需要大剂量才呈现
作用∀此种阻断作用的产生提示大黄醇提液能
诱导宿主细胞产生一种/抗病毒状态0o当受到
≥∂ 侵入时可以产生/免疫力0o其详细机理有
待进一步研究∀
由于用乙醇提取o大黄中有效抗病毒成分
应为蒽醌类化合物1x2∀后经挥发去掉乙醇o溶入
水溶剂o提示为结合状态的蒽醌o因游离状态的
蒽醌不易溶入水∀结合状态的蒽醌有大黄酚甙!
大黄酸甙!大黄素甲醚甙等∀究竟是何种成分有
抗 ≥∂ 作用o其详细作用机理如何o尚需进一
步研究∀
大 黄 醇 提 液 另 有 一 明 显 优 点 在 于
ussssΛªÙ°¯竟无细胞毒性o甚至有助于细胞生
长o提示可以内服用于全身性感染o如脑炎!内
脏感染等的治疗o这是到目前为止o任何一种用
于抗 ≥∂ 感染治疗的药物所不能比拟的∀这
为中药大黄充分开发利用提供了科学依据o前
景非常乐观∀
4 参考文献
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x 中国医学科学院药物研究所q中草药成分的研究q 北京}
人民卫生出版社ot|zuÚ uv|
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4 参考文献
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