全 文 ：高效液相色谱法测定银杏叶
提取物中槲皮素的含量
周欣 钟世江 陈树琳
k贵州工业大学理化分析研究中心 贵阳 xxsssvl
摘要 采用反相高效液相色谱法分离银杏叶提取物中黄酮类化合物并测定其中槲皮素含量 ∀
≠ • Š2≤t{ks1wy¦° ≅ tx¦°l色谱柱 o流动相甲醇2水2磷酸kxsΒw|1{Βs1ul o检测波长 vys±° ∀回收率在
|x1v h ∗ tsv1u h之间 oΡΣ∆为 t1{y h ∀
关键词 高效液相色谱 槲皮素 银杏叶
近 ts多年来 o国内外对银杏叶中的化学成
分及其分离方法 !药理试验和临床应用进行了
大量的研究工作≈t ∗ {  o结果表明 o银杏叶中黄酮
类化合物对治疗冠心病 !心绞痛 !高血压 !支气
管哮喘等有显著效果 o用银杏叶黄酮研制的新
药相继在国内外投入市场≈y  ∀槲皮素是银杏叶
提取物中黄酮类化合物的主要成分之一≈z  ∀在
其测定方面 o过去多采用络合2分光光度
法≈w ∗ x  o也有衍生2气相色谱法≈t  ∀本文报道了
反相液相色谱分离银杏叶提取物中黄酮化合物
并测定其中槲皮素含量的方法 ∀
1 实验部分
111 药品 !试剂与仪器
槲皮素k北京化工厂l在 tsx ε 干燥至恒
重 ∀甲醇 !磷酸均为分析纯 o水为重蒸馏的二次
去离子水 ∀ Š²¯§2tuy高效液相色谱仪及 Š²¯§2
tyy˜ ∂ 检测器k美国 …¨ ¦®°¤±公司l o超声波滤
清器k上海超声波仪器厂l ∀
112 色谱条件
≠ • Š2≤t{ks1wy¦° ≅ tx¦°l色谱柱 o流动相
甲醇2水2磷酸kxsΒw|1{Βs1ul o柱温为 vs ε o流
速为 t °¯ r°¬±o检 测波长 vys±° o灵 敏 度
s1st„ ˜ƒ≥ o进样量为 tsΛ¯ o定量方法为外标法 ∀
‹°≤ 图谱见附图 ∀
113 标准曲线
用干燥至恒重的槲皮素配制成一系列标准
溶液kts ows o{s otus otysΛªr°¯ l o依次进样 o按
色谱条件进行测定 o得到回归方程为 Ψ €
t1sws Ξ n s1xwxs , ρ € s1|||t o线性范围 s1st
∗ s1tyΛªrΛ¯ ∀
附图 对照品及样品的 ‹°≤ 图谱
„1 对照品 …1 银杏叶提取物
114 样品测定
精密称取银杏叶提取物 s1txª于 tss °¯ 圆
底烧瓶内 o加 us °¯ 甲醇溶解 o加 t1x°²¯r盐酸
us °¯ o水浴上回流水解 v«o放置于室温 o水解液
转移至 xs °¯ 容量瓶中 o甲醇定容至刻度 o摇匀 ∀
高速离心机ku ≅ tswµr°¬±l离心 ts°¬±o‹°≤
检测 ∀
115 重现性测定
样品溶液按色谱条件重复进样 y次进行测
定 o结果槲皮素含量分别为 s1tvy os1tvv o
s1tv{ os1tv| o s1tvx o s1tvvΛªrΛ¯ o ΡΣ∆ 为
t1{y h ∀
116 回收率测定
分别取已知含量的样品液 y份 o精确加入
一定量的槲皮素对照品 o按色谱条件测定 o并计
算回收率 o结果见附表 ∀
#yty# 中国中药杂志 t||z年第 uu卷第 ts期
附表 加样回收实验
样品编号
样品重
Λª
加入量
Λª
测定值
Λª
回收率
h
t s1tzx s1usw s1vzw |z1x
u s1utx s1txs s1vx{ |x1v
v s1vyv s1uxs s1yty tst1u
w s1wys s1u{s s1zvw |z1|
x s1ytx s1vxs s1|zu tsu1s
y t1sts s1w{s t1xsx tsv1u
注 }± € v
2 讨论
211 测定波长的选择
将槲皮素对照品溶液通过扫描 o在 uxw±°
处有最大吸收 ∀但样品在 uxw±°处测定时 o槲
皮素出峰前的杂质吸收峰较大 o而波长在
vys±°处 o杂质吸收峰降到最低而槲皮素仍有
较大吸收值 o所以测定波长选择 vys±° ∀
212 流动相条件的选择
过去的实验多采用 s1w h 的磷酸≈{  o因磷
酸对柱子的填料损害较大 o为了保持柱的稳定
性 o延长柱子的使用寿命 o在本实验中 o我们在
保证样品分离度的情况下将磷酸含量降至
s1u h o样品的分离情况见附图 ∀另外 o在保证
样品分离度的前提下 o适当增加流动相中甲醇
量可使出峰敏锐 o减少拖尾 o缩短分析时间 ∀
213 柱温
柱温对样品保留时间的影响很大 o当柱温
为 tx ε 时 o分离测定一个样品需 ws°¬±∀柱温
为 vs ε 时 o分离测定同一个样品只需 ts°¬±o所
以选择柱温为 vs ε ∀
3 参考文献
t 庄林根 1 国外医药#植物药分册 ot||v ~{kyl }uxt
u …¨ ®¨ × „ ∂ q ≤«µ²°¤·²ªµ¤³«¬¤ot||t ~xwv }vzx
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{ 张晓琦等 1 色谱 ot||w ~tukwl }vsu
t||z ) sw ) tx收稿
两种简易的抗肿瘤活性初筛方法
杰利##麦克劳林
k泊杜大学药物化学及分子物理系 美国印第安纳州拉法耶 wz|s|l
顾哲明 3 k成都中医药大学药学院 成都 ytssssl
天然药物化学家需掌握 v种技能 }≠ 分离
技术 o结构解析 o≈简单的生物活性测试 ∀天
然药物化学家多熟悉前 u种技能却忽视了最后
一项 ∀我们期望通过此文促使越来越多的人力
财力付之于开发有活性的天然成分 o而抛弃那
些无益的对非活性天然物的研究 ∀
活性测试要从粗提物开始 o并在分离每步
中对各组分测试 o有活性的才进一步纯化 o只有
这样才能发现高活性的天然成分以用于开发应
用 ∀近年来 o基于特有作用机制的体外活性自
动化测试蜂拥而起 o如受体结合 o酶抑制 o亲合
柱 o⁄‘„缺陷 o微管抑制等 ∀但是 o机制越特有
观察范围就越窄 ∀采用特有活性测试方法 o同
一提取物在测体内活性前往往被分析无数次 ∀
显然 o初筛的活性测试方法应容纳一定的范围 o
使不同作用机制的未知活性测试方法应容纳一
定的范围 o使不同作用机制的未知活性物均能
被发现 ∀逻辑上讲这样做较合理 }先用一种广
谱活性法筛选 o有效的再用特有活性方法测试 ∀
遗憾的是 o这样的作法尚未被广泛采用 ∀我们
发展了 u种简易的广谱活性测试法 o可容易地
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#zty# 中国中药杂志 t||z年第 uu卷第 ts期