全 文 ：¬±¦²µ³²µ¤·¬²± o·«¨ ¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ²©¦¼·²¶²¯¬¦©µ¨¨≤¤u n º¤¶ ∏´¤±·¬·¤·¨§∏¶¬±ª·«¨ ©¯∏²µ¨¶¦¨±·≤¤u n ¬±§¬¦¤·²µƒ∏µ¤2
u qΡεσυλτσ: ∏¶®2t ¤·¦²±¦¨±·µ¤·¬²± ²©t ∗ tss Λª# °¯ p t ¦¤± ¶¬ª±¬©¬¦¤±·¯¼ ¬±«¬¥¬·³µ²§∏¦·¬²± ²© °ƒ o¤¦·¬√¬·¼ ²©
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χλυσιον : °¤µ·²© ° ¦¨«¤±¬¶°¶∏±§¨µ¯¼¬±ª¤±·¬¬±©¯¤°°¤·²µ¼ ¤¦·¬²± ²© ∏¶®2t¬¶·«µ²∏ª«¬±«¬¥¬·¬±ª·«¨ ¶¼±·«¨¶¬¶²©
°ƒ ¤±§·«¨ ¬±¦µ¨¤¶¨ ²©¦¼·²¶²¯¬¦≤¤u n¯¨ √¨¯ q
[ Κεψ ωορδσ] ∏¶®~³²¯¼°²µ³«²±∏¦¯¨ ¤µ¯ ∏¨®¦¼·¨ ~°ƒ ~¤¦¨·¼¯ ·µ¤±¶©¨µ¤¶¨ ~¦¼·²¶²¯¬¦©µ¨¨ ≤¤u n
≈责任编辑 方文贤
东亚钳蝎毒抗癌多肽对 uu荷瘤
小鼠免疫调节作用
杨建斌t o李晓雯u o董伟华u o孔天翰u o宋红霞t o郑相予u o刘桂亭u
kt q长治医学院 附属医院 o山西 长治 swysss ~u q河南医科大学 o河南 郑州 wxssxul
≈摘要 目的 }探讨东亚钳蝎毒抗癌多肽k°
∂ l对 uu荷瘤小鼠免疫功能的影响 ∀方法 }采用 × × 比色法
和血清溶血素测定法检测了经 °
∂ 及其与 x2ƒ∏联合用药治疗的 uu荷瘤小鼠的细胞及体液免疫功能 ∀结果 }
°
∂ 组及 °
∂ 与 x2ƒ∏联用组的 细胞活性明显增高k Π s qsxl o≤²± 诱导的淋巴细胞转化指数明显增
高k Π s qsx ~Π s qstl o与 x2ƒ∏组比较差异显著k Π s .sx ; Π s qstl ∀ ⁄≤
诱导的皮肤迟发型超敏反应表明 o
°
∂ 组及其与 x2ƒ∏联用组的耳重差显著增高k Π s .st ; Π s qsxl o与 x2ƒ∏组比较也有显著差异k Π s qstl ∀
x2ƒ∏组的白细胞数最低 o与 °
∂ 组及 °
∂ 与 x2ƒ∏联用组比较有显著差异性k Π s .sst ; Π s qsxl o°
2
∂ 组的半数溶血值k≤xsl显著增高k Π s qstl ∀结论 }°
∂ 可显著增强 uu荷瘤小鼠免疫功能 o减低肿瘤或
化疗所致的免疫功能低下 ∀
≈关键词 蝎毒 ~移植肿瘤 ~免疫系统
≈中图分类号 u{x qx ≈文献标识码
≈文章编号 tsst2xvsukusssltu2szvy2sw
全蝎作为名贵的中药其抗肿瘤作用已见诸多报
道≈t ∀蝎毒k¶¦²µ³¬²± √ ±¨²°l是成年活蝎受激惹时
尾节毒囊分泌的毒液 o其具有包括抗癌作用的多种
药理作用≈t ∀东亚钳蝎毒抗癌多肽 k ±·¬¦¤±¦¨µ
³²¯¼³¨ ³·¬§¨ ©µ²°
∏·«∏¶¤µ·¨±¶¬¬∂ ±¨²° o°
∂ l
是从河南马氏钳蝎毒中新近分离出的一种成分 o我
们已观察到其对食管癌细胞 ∞¦¤2ts|细胞和宫颈癌
细胞 ¨¯¤细胞的毒性作用≈u o以及与 x2ƒ∏对 uu荷
瘤小鼠的联合抗肿瘤作用≈v ∀本文进一步探讨其对
uu荷瘤小鼠的免疫功能的影响 ∀
1 材料
1 q1 主要试剂 °
∂ }源于河南东亚钳蝎 ∀由
≈收稿日期 usss2sv2s|
≈基金项目 河南省/九五0科技攻关项目k|xtusstsul
河南医科大学生物毒素中心进行采毒k电脉冲法l !
分离 !鉴定 !并提供 °
∂ ∀冻干粉 }xsΛªr支 o
p us ε 低温保存 o使用时用生理盐水溶解 o配成所
需浓度 ∀刀豆蛋白 k¦²±¦¤±¤√¤¯¬± o ≤²±l }美国
≥¬ª°¤公司产品 ∀二硝基氯苯k§¬±¬·µ²¦«¯²µ²¥¨ ±½²±¨ o
⁄≤
l }北京化工二厂产品 ∀绵羊红细胞k¶«¨ ³¨
µ¨§¥¯²²§¦¨¯¯ o≥
≤l }羊血由河南省实验动物中心
提供 o压积 ≥
≤ 自行制备 ∀豚鼠血清k补体l }豚
鼠购自河南省实验动物中心 o豚鼠血清自行制备 ∀
1 q2 细胞株 xyu 细胞株 }为人红白血病细胞
株 o细胞的靶细胞株 o由河南省肿瘤研究所刘雄
伯研究员馈赠 ∀小鼠腹水型肝癌 uu瘤株 o由河南
省医学科学研究所引进 ∀
1 q3 动物 昆明种小鼠 o雄性 oy ∗ {周龄 okus ? ul
ªo由河南省实验动物中心提供 ∀
#yvz#
第 ux卷第 tu期
usss年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o²qtu
⁄¨ ¦qousss
2 方法
2 q1 荷瘤动物模型的建立 参照文献≈w 方法 ∀
2 q2 实验分组 将 ws只昆明种雄性小鼠随机分为
w组 }空白对照组k等体积生理盐水 o¬³l ox2ƒ∏给药
组kts °ª#®ªp t o¬³l o °
∂ 给药组ks qsv °ª#
®ªp t o¬³l o°
∂ 与 x2ƒ∏联合用药组kx2ƒ∏ots
°ª#®ªp t o °
∂ s qsv °ª#®ªp t o¬³l o接种 uu细
胞 uw «开始给药 o每日 t次 o连用 x §∀
2 q3 °
∂ 对 uu荷瘤小鼠 细胞活性的影响
参照文献≈x 方法略有改动 ∀于停药后第一日脱
颈椎处死小鼠 o无菌剖腹摘出脾脏 o剪碎 !研磨 !uss
目不锈钢网过滤 o用 ¤±®. ¶液 u sssµ# °¬±p t x°¬±
离心洗涤 t遍 o弃 ¤±®. ¶液 o加入 ×µ¬¶2w≤¯∀用
¤±®. ¶液同法洗涤 u遍 os qu h台盼蓝染色计数活
细胞 |y h 以上 ∀用 ° tyws完全培养液调脾细
胞浓度为 w ≅ tsy 细胞r °¯ o加入 |y孔培养板 o每孔
tss Λ¯ o每只小鼠脾细胞设 v个重复孔 ∀取对数生长
期的 xyu细胞 o调细胞浓度为 u ≅ tsx# °¯ p t o加入
|y孔板 o每孔 tss Λ¯ o使效靶比为 usΒt o并设效应
细胞及靶细胞对照孔 ∀于 vz ε x h ≤ u 湿化培养
箱中培养 uw «o加入 × × kx °ª# °¯ p tl ts Λ¯r孔 o
继续培养 w «o将 |y孔板 t sss µ# °¬±p t ts °¬±离
心 o吸去上清液 o加入 tss Λ¯ ⁄ ≥ o混匀 o溶解甲
∀用酶标仪测 xzs ±°波长处的 值 o按下式计
算杀伤率 }
杀伤率k h l t p ⁄∞n × p ⁄∞⁄× ≅ tss h
⁄∞n × }指效应细胞 ⁄值 n靶细胞 ⁄值
⁄∞ }效应细胞 ⁄值
⁄× }相应靶细胞对照孔 ⁄值
2 q4 对小鼠迟发型超敏反应的影响 参照文献≈y
并略有改进 ∀于给药第 t天 o用 u qw h ⁄≤
s qsu
°¯ r只背部皮下多点注射免疫小鼠 ∀致敏后第 x天 o
于小鼠两耳耳廓用三棱针划痕 o再涂抹以 u qw h
⁄≤
ts Λ¯ o左耳涂以等体积生理盐水 ∀攻击后 uw
«o剪下左右耳壳 o用直径为 x °°的打孔器k角膜环
钻l于耳壳上打孔 o取下耳片电子天平称重 o计算左
右耳重差 ∀
2 q5 对小鼠血清溶血素的影响 参照文献≈w 方
法 ∀试验样品中半数溶血值 ≤xs按下式计算 }≤xs
样品吸收度值r≥
≤ 半数溶血时的吸收度值 ≅
小鼠血清稀释倍数 ∀
2 q6 对小鼠白细胞计数的影响 于停药第 1 天 o小
鼠剪尾采血 us Λ¯r只 o与白细胞稀释液 s qv{ °¯ 混匀
后冲入白细胞计数池中计数 ∀
2 q7 对 uu小鼠淋巴细胞增殖的影响 参照文献
≈z 取脾细胞悬液调细胞浓度为 w ≅ tsy# °¯ p t o加入
|y孔板 o每孔 uss Λ¯ o每样本设立 y个重复孔即 v
个对照孔和 v 个实验孔 ∀实验孔加 ≤²± tx Λª#
°¯ p t o对照孔加等体积生理盐水 ∀置于 vz ε x h
≤ u培养液中培养 w{ «o加入 × × ts Λ¯r孔 o继续
培养 w «o离心去上清 o加入 ⁄ ≥ tss Λ¯r孔溶解甲
o用酶标仪测 xzs ±°波长 值 ∀用下式计算淋
巴细胞转化指数 }转化指数 加 ≤²± 孔 均值r不
加 ≤²±孔 均值 ∀
2 q8 统计分析 采用两均数比较的 τ检验 ∀
3 结果
3 q1 °
∂ 对 uu荷瘤小鼠 活性的影响 由
表 t可见 o °
∂ 组小鼠 活性可达 vw qt{ h o
与对照组比较有明显差异k Π s qstl ~ °
∂ n x2
ƒ∏组 活性较 °
∂ 组为高kws q{y h l o但二
者比较无显著差异k Π s qsxl o与对照组比较却差
异显著k Π s qstl ~x2ƒ∏组 活性较对照组稍有
增长 o但无显著差异性 o与 °
∂ 组及 °
∂ n
x2ƒ∏组相比较却差异显著k Π s qsx oΠ s qstl ∀
3 q2 对 uu小鼠 ⁄≤
诱导的迟发性超敏反应的
影响 如表 t 所示 o °
∂ 组和 °
∂ n x2ƒ∏
的耳重差较对照组明显增高k Π s qstl o但二者之
间比较无显著差异性k Π s qsxl }x2ƒ∏组虽较对照
为高 o却无显著差异性k Π s qsxl o与 °
∂ 组及
°
∂ n x2ƒ∏组相比较差异显著k Π s qstl ∀
3 q3 对 uu小鼠血清溶血素的影响 实验组的 v个
组的 ≤xs都较对照组为高 ~但只有 °
∂ 组与对
照组比较有显著差异k Π s qsxl o余组皆无显著差
异性k Π s qsxl o见表 u ∀
3 q4 对 uu小鼠外周血白细胞总数的影响
由表 u 可见 o以 °
∂ 组的白细胞计数最
高 o与对照组比较有显著差异k Π s qstl ~而以 x2
ƒ∏组的白细胞计数最低 o与对照组及 °
∂ 组比
较有明显差异k Π s .st和 Π s qstl ~ °
∂ n
x2ƒ∏组白细胞计数低于对照组 o但无显著差异性 o
与 x2ƒ∏组相比较却差异显著k Π s qsxl ∀
3 q5 对 uu小鼠 ≤²±诱导的淋巴细胞转化的影响
°
∂ 组和 °
∂ n x2ƒ∏组的淋巴细胞转
#zvz#
第 ux卷第 tu期
usss年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o²qtu
⁄¨ ¦qousss
化指数明显较对照组为高k Π s .st和 Π s qsxl ~
x2ƒ∏组的淋巴细胞指数虽较对照组为高 o但无显著
差异性k Π s qsxl o较 °
∂ 组及 °
∂ n x2ƒ∏
组明显降低 o且有显著差异性k Π s .st和 Π
s qsxl见表 u ∀
表 t °
∂ 对 uu荷瘤小鼠 活性和 ⁄≤
诱导迟发型超敏反应的影响
组别
剂量r°ª#®ªp t
°
∂ x2ƒ∏
耳重差
rª
细胞活性
r h
对照组 s s s qssvv ? s qsss| t| qwv ? u q{s
x2ƒ∏组 s ts s qssvy ? s qsstt us qyx ? v qu|
°
∂ 组 s qsv s s qsszt ? s qsstut oul vw qt{ ? y qsvt oul
°
∂ n x2ƒ∏组 s qsv ts s qsszx ? s qsstwt oul ws q{y ? { qyxt oul
注 }≠ ξ ? σ ν ts 与对照组比较 t) Π s qsx 与 x2ƒ∏组比较 ul Π s qsxk下同l
表 u °
∂ 对 uu荷瘤小鼠脾淋巴细胞转化 !血清溶血素及白细胞计数影响
组别
剂量r°ª#®ªp t
°
∂ x2ƒ∏
淋巴细胞转化
指数
•
≤
r ≅ ts|#p t
≤xs
r h
对照组 s s v qtz ? s qzz | qsv ? t qvv twt qt{ ? t{ q|y
x2ƒ∏组 s ts v qxt ? s qyv x q|x ? u qwvtl txv qsv ? tx qus
°
∂ 组 s qsv s x qux ? t q{wt oul tu qzs ? v qsvt oul ty{ qys ? us qz|tl
°
∂ n x2ƒ∏组 s qsv ts w qzw ? t qu{t oul { qzz ? t qt{ul tx| qu{ ? uv qtz
4 讨论
我国的科技工作者对祖国的传统中医药进行了
深入的研究 o从中草药中发现了许多具有免疫调节
作用的药物≈{ ∀本实验观察了 °
∂ 单用及与 x2
ƒ∏联合用药对 uu小鼠免疫功能的影响 ∀结果表
明 o°
∂ 及其与 x2ƒ∏联用可显著提高其淋巴细
胞的转化指数 o使其末稍血的白细胞计数显著增高 o
增强 ⁄≤
诱导的皮肤迟发型超敏反应 o与对照组
及单用 x2ƒ∏组有显著差异 o单用 °
∂ 还可明显
提高 uu小鼠血清的溶血素水平 ∀ 细胞属非特
异性肿瘤杀伤细胞 o其抗肿瘤作用不需预先致敏 o抗
瘤谱广 o无 ≤ 限制性 o为肿瘤免疫的第一道防线 o
在免疫监视中起重要作用≈| ∀ ⁄≤
诱导的皮肤迟
发型超敏反应为回忆性抗原所致的细胞免疫反应 o
可反映机体细胞免疫功能状态 ∀ ≤²± 体外诱导的
淋巴细胞增殖实验可反映机体淋巴细胞活力的高
低 ∀血清溶血素水平反映外周血中 ª 水平的高
低 ∀外周血白细胞计数也在一定程度上反映着细胞
免疫的功能状态和骨髓的抑制程度 ∀由此看来 o
°
∂ 可显著增强 uu小鼠的免疫功能 o尤其是在
肿瘤免疫中占主导地位的细胞免疫功能 o提高对化
疗的耐受性 ∀提示这可能是 °
∂ 与 x2ƒ∏的协
同治疗作用的机理之一 ∀
≈参考文献
≈t 孔天翰 o董伟华 o田中岭 q全蝎及蝎毒抗肿瘤研究进展 q河南
肿瘤学杂志 ot||w ozkvl }uww q
≈u 杨建斌 o王庸晋 o董伟华 o等 q东亚钳蝎毒抗癌多肽对食管癌细
胞 ∞¦¤2ts|细胞和宫颈癌细胞 ¨¯¤细胞的毒性作用 q中国病理
生理杂志 ot||| otxktul }ttty q
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鼠肝癌的联合治疗作用 q中华肝胆外科杂志 ousss oyktl }tz
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uu肝癌小鼠的抗肿瘤作用 q癌症 ot||w otvkyl }xs| q
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的方法学探讨 q中国实验临床免疫学杂志 ot||w oykxl }tu q
≈y 王德昌 q免疫调节剂的研究方法 q见韩锐 q肿瘤化学预防及药
物治疗 q北京 }北京医科大学中国协和医科大学联合出版社
出版 ot||w qtxy q
≈z ∂¬¶·¬¦¤⁄ × o≥®¨ «¤± ° o≥¦∏§¬¨µ² ⁄o ·¨¤¯ q× ·¨µ¤½²¯¬∏°2¥¤¶¨§¶2
¶¤¼¶©²µ≤¨¯ ∏¯¯¤µ∂¬¤¥¯ ¬¯·¼ } ≤µ¬·¬¦¤¯ ∞¬¤°¬±¤·¬²± ²©≥¨¯ ¦¨·¨§°¤2
µ¤° ·¨¨µ¶©©¨ ¦·¬±ª ƒ²µ°¤½¤± °µ²§∏¦·¬²±q ≤¤±¦¨µ ¶¨ot||t oxt }
uxtx q
≈{ 储大同 o孙 燕 q生物反应调节剂进展 q实用肿瘤杂志 ot||s o
x kvl }tvw q
≈| 高 静 o田景先 o赵德容 o等 q杀伤肿瘤细胞的免疫活性细胞 q
国外医学#肿瘤学分册 ot||w outkyl }vvt q
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第 ux卷第 tu期
usss年 tu月
中 国 中 药 杂 志
Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o²qtu
⁄¨ ¦qousss
Εφφεχτ οφ Αντιχανχερ Πολψπεπτιδε φροµ Βυτηυσ Μαρτενσιι ς ενοµ
ον Ιµ µ υνε Φυνχτιον ιν τηε Ηuu2βεαρινγ Μιχε
≠ ¬¤±2¥¬±t o ÷¬¤²2º ±¨u o⁄ • ¬¨2«∏¤u o
׬¤±2«¤±u o≥ ²±ª2¬¬¤t o ∞ ÷¬¤±ª2¼∏u o ∏¬2·¬±ªu
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¤¶¶¤¼ o ¼¯°³«²¦¼·¨·¶¤±¶©²µ°¤·¬²± ·¨¶·o§¨ ¤¯¼¨ §«¼³¨µ¶¨±¶¬·¬√¬·¼ ¤¶¶¤¼ ¤±§ •
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∂ ¦²∏¯§²¥√¬²∏¶¯¼ ¤∏ª¨ ° ±¨·¤¦·¬√¬·¼ o³µ²°²·¨ ³µ²¯¬©¨µ¤·¬²± ²© ¼¯°³«2
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∂ ¦¤± ²¥√¬²∏¶¯¼¬±¦µ¨¤¶¨ ¬°°∏±¨
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≈责任编辑 方文贤
马宝与人工合成品磷酸铵镁药理作用的比较研究
唐仁茂t o吴德康u
kt1 江苏省苏中制药厂 o江苏 苏州 uuxxss ~u1 南京中医药大学 o江苏 南京 utssu|l
马宝来源于哺乳纲马科动物马的胃肠道结石 o
属于马的病理产物 ∀其性凉 o味甘 !咸 !微苦 ∀具有
镇惊 !化痰 !清热解毒之功 ∀中医主治惊痫 !癫狂 !神
志昏迷等病症 ∀现代文献资料中有关马宝的临床报
道仅见周康的/马宝治疗 wv例精神分裂症报告0k神
经精神疾病杂志 ot|{t okul }zsl及周炜的/马宝治顿
咳0≈t o而实验研究未见报道 ∀目前马宝资源越来
越少 o且价格昂贵 ∀本课题旨在解决马宝的资源 ∀
在初步确定了马宝的主成分为磷酸铵镁且已人工合
成的基础上 o对两者进行了有关药理作用的比较研
究 ∀
1 实验材料
111 药品及试剂 马宝购自南京市药材公司 ~磷酸
≈收稿日期 usss2sv2s|
铵镁由南京中医药大学化学教研究提供 o马宝及磷
酸铵镁均为白色结晶体 o实验前研磨成细末后用
us h吐温 {s 配成适当浓度的混悬液 ∀戊巴比妥钠
由佛山市化工实验厂生产 ~阿斯匹林购自南京医药
公司 ~苯巴比妥钠由上海新亚药业有限公司提供 ~士
的宁由南京中医药大学中医药研究所提供 ~酚红由
上海试剂三厂生产 ~桔梗 !天麻购自南京市药材公
司 o按常规水煎法制成水煎液 t ª# °¯ p t ∀
112 致热原 伤寒 !副伤寒杆菌由上海生物制品所
提供 ∀
113 动物 ≤ 小鼠 !大耳白家兔由南京中医药大
学实验动物中心提供 ∀
114 仪器 ≠≥⁄2w型药理生理多用仪由安微蚌埠
无线电二厂生产 ~zut型分光光度计由上海第三分
#|vz#
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Χηινα ϑουρναλ οφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯ qux o²qtu
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