全 文 ：复方甘草酸苷片在家兔体内的药动学研究
田 　莉1 ,高晓黎2 ,3 3 ,云 　奇3 ,孔金金2 ,麦合苏木 ·艾克木2
(11 新疆医科大学中医学院 ,新疆 乌鲁木齐 　830011 ; 21 新疆医科大学药学院 ,新疆 乌鲁木齐 　830011 ;
31 新疆特丰药业股份有限公司 , 新疆 乌鲁木齐 　830011)
摘 　要 :目的 　建立测定家兔体内甘草酸和甘草次酸血药浓度的 HPLC 法 ,进行家兔体内复方甘草酸苷片的药动
学研究和生物等效性评价。方法 　采用双周期自身交叉给药方案 ,12 只新西兰家兔按 300 mg/ kg 剂量 ig 给药 ,采
用 HPLC 法测定不同时间的血2药浓度 ,经 3p97 药动学软件计算药动学参数。结果 　单剂量 ig 复方甘草酸苷片受
试制剂和参比制剂后 ,受试制剂和参比制剂的药动学参数分别为 : (1)甘草酸的 MRT 为 (44129 ±22189) 、(50131 ±
35109) h , t1/ 2为 (28134 ±17189) 、(33122 ±25196) h , tmax为 (1019 ±518) 、(713 ±319) h , Cmax分别为 (1181 ±0169) 、
(1184 ±0154) mg/ L ,AUC0～ t为 (37137 ±9176) 、(39111 ±9188) mg ·h/ L ,相对生物利用度为 (9915 ±2910) % ; (2)
甘草次酸的 MRT 为 (37193 ±32197) 、(31142 ±21181) h , t1/ 2为 (18122 ±23167) 、(16150 ±16160) h , tmax为 (18110
±6120) 、(12120 ±5100) h , Cmax 分别为 (0154 ±0125) 、(0150 ±0116) mg/ L , AUC0～ t 为 (9115 ±3188) 、(8169 ±
2130) mg ·h/ L ,相对生物利用度为 (11014 ±4613) %。结论 　建立的 HPL C 法简便、准确 ,重现性好 ,复方甘草酸
苷片受试制剂和参比制剂在家兔体内生物等效。
关键词 :复方甘草酸苷片 ;甘草酸 ;甘草次酸 ;高效液相色谱 ;生物等效性
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0921399204
　　复方甘草酸苷片由甘草酸单铵盐、甘氨酸、DL2
蛋氨酸组方 ,在肝病领域主要用于治疗慢性肝病 ,改
善肝功能[1 ] ,在非肝病领域用于过敏性反应 (如皮
疹、荨麻疹、药物疹) 、小儿异位性皮炎、斑秃、系统性
红斑狼疮等 ,临床应用广泛[2 ] 。甘草酸口服后 ,大部
分被胃肠道菌群代谢为甘草次酸吸收 ,少量原形药
物以主动转运方式进入血液[ 3 ] 。鉴于甘草酸的吸收
特性 ,体内需要检测甘草酸及其代谢产物甘草次酸
才能全面评价其体内过程。因此本实验建立了可同
时测定血浆中甘草酸和甘草次酸的 H PL C 法 ,进行
家兔体内复方甘草酸苷片的药动学研究和生物等效
性评价。
1 　材料与仪器
　　新西兰家兔 ,体质量 (2 ±012) kg ,由新疆医科
大学实验动物中心提供。甘草酸单铵对照品 (中国
药品生物制品检定所 ,批号 07312200205 ,质量分数
为 9018 %) ,甘草次酸对照品 (中国药品生物制品检
定所 ,批号 1107232200411) 。参比制剂复方甘草酸
苷片 (商品名 :美能 ,日本米诺发源制药株式会社生
产 ,每片含甘草酸苷 25 mg、甘氨酸 25 mg、DL2蛋氨
酸 25 mg ,批号 06105) ;受试制剂复方甘草酸苷片
(新疆特丰药业股份有限公司生产 ,每片含甘草酸苷
25 mg、甘氨酸 25 mg、DL2蛋氨酸 25 mg , 批号
20060514) 。甲醇、冰醋酸为色谱纯 ,其他试剂均为
分析纯。
　　Agilent 1100 高效液相色谱仪 (美国 Agilent 公
司) ,BP211D 精密天平 (德国 Sartorius) ; S K—1 型
快速漩涡混合器 (江苏金坛医疗仪器厂) ; T GL —
16C 高速离心机 (上海弗鲁克机电设备有限公司) 。
2 　方法和结果
211 　色谱条件 : Zorbax C8 色谱柱 (150 mm ×416
mm ,5μm) ; 流动相 :甲醇2水2冰醋酸 (78 ∶21 ∶1) ;体
积流量 :018 mL/ min ;柱温 :35 ℃;检测波长 :250 nm。
212 　血浆样品的处理 :精密吸取 200μL 血浆至 1mL
离心管 ,加入内标溶液 40μL ,加入甲醇 600μL ,漩涡
振荡 1 min ,在高速离心机上以 14 000 r/ min 离心 10
min ,取上清液 50μL 进样 ,进行 HPLC分析。
213 　给药方案与血样采集 :采用双周期自身交叉设
计 ,美能片为参比制剂。12 只健康新西兰家兔 ,雄
性 ,随机分为两组 ,禁食不禁水 12 h 后 ,分别单剂量
ig 给予相同受试制剂和参比制剂 (按 300 mg/ kg 甘
草酸单铵盐计) ,服药后 0、1、2、4、6、8、10、12、14、
16、21、24、30、36 h 从耳缘静脉采血 2 mL 置肝素化
离心试管中 ,4 000 r/ min 离心 15 min ,分离血浆后
·9931·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 9 期 2009 年 9 月
3 收稿日期 :2009203223　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :新疆维吾尔自治区科技攻关 (含重大专项)和重点项目计划 (200733146)
作者简介 :田　莉 (1974 —) ,女 ,四川人 ,博士研究生 ,主要从事新药、民族药的研究与开发。
E2mail :tianli109 @1261com3 通讯作者　高晓黎　Tel : (0991) 4312411 　E2mail :gxli @tefeng1com
保存于 - 20 ℃冰箱保存。
214 　方法学评价
21411 　专属性试验 :在该色谱条件下 ,按血浆样品
的处理方法处理空白血浆、空白血浆加对照品与内
标联苯、家兔给药后的含药血浆 , 结果甘草酸、甘草
次酸与内标完全分离 ,保留时间分别约为 318、
1417、617 min ,峰形对称性好 ,且不受内源性杂质的
干扰。色谱图见图 1。
t/ min
12甘草酸　22甘草次酸　32内标联苯
12glycyrrhizin 　22glycyrrhetic acid 　32biphenyl internal standard
图 1 　空白血浆( A) 、加对照品空白血浆( B)和给药后血浆样品( C)的 HPLC色谱图
Fig1 1 　HPLC Chromatograms of blank plasma ( A) , reference substances in blank plasma ( B) , and plasma sample ( C)
21412 　线性与灵敏度 : 分别精密吸取空白血浆
200μL 至 1 mL 离心管 ,加入内标联苯溶液 40μL ,
加入甘草酸、甘草次酸对照品溶液 ,使甘草酸质量浓
度分别为 0142、0185、1127、4124、1016、2112、
38116、50188 mg/ L , 甘草次酸质量浓度分别为
0105、0110、0120、1101、1152、2101、3103、5105 mg/
L ,按血浆样品的处理方法进行 ,记录甘草酸、甘草
次酸和内标峰面积 ,并以信噪比的 3 倍为最低检出
限。以样品与内标峰面积比 ( Y) 对质量浓度 ( X) 回
归 ,得回归方程。甘草酸 : X = 121382 Y + 01510 4 ,
r = 01996 ,线性范围 0185～50188 mg/ L ,最低检测
质量浓度为 0185 mg/ L ;甘草次酸 : X = 51948 9 Y + 01018 4 , r = 01998 ,线性范围 01 10～5105 mg/ L ,最低检测质量浓度为 0110 mg/ L 。21413 　精密度和回收率试验 :配制含甘草酸 1127、2112、50188 mg/ L ,甘草次酸 0110、1101、5105 mg/ L对照品的低、中、高质量浓度空白血浆样品 ,按“血浆样品的处理方法”处理后进样分析 ,日内连续测定 5次 ,日间连续测定 5 d。以所测质量浓度与加入质量浓度相比 ,计算空白血浆中甘草酸、甘草次酸的相对回收率和日内、日间精密度。另配制相应质量浓度的标准溶液 ,不经处理直接以等量进样 ,计算血浆中甘草酸、甘草次酸的绝对回收率。结果见表 1。215 　家兔给药后的药动学试验 :新西兰家兔单剂量
表 1 　家兔血浆中甘草酸、甘草次酸的日内、日间精密度和回收率试验结果( x ±s , n = 5)
Table 1 　Precision of intra2day and inter2day determination and recovery rate of glycyrrhizin
and glycyrrhetic acid in plasma of rabbits ( x ±s , n = 5)
样　品
质量浓度
/ (mg ·L - 1)
日内精密度
测得量/ (mg ·L - 1) RSD/ %
日间精密度
测得量/ (mg ·L - 1) RSD/ %
相对回收率/ % 绝对回收率/ %
甘草酸　 1127 11 22 ±01 05 41 22 1124 ±0116 12178 93127 ±2166 971 37 ±3173
21120 211 09 ±01 29 11 42 21101 ±0196 4156 102103 ±1125 1001 90 ±0121
50188 501 57 ±01 95 11 87 50161 ±4133 8157 99170 ±2128 991 33 ±0118
甘草次酸 0110 01 11 ±01 02 21 17 0110 ±0100 0186 99103 ±2157 1081 66 ±6177
1101 11 01 ±01 02 11 55 1101 ±0105 4185 102145 ±1123 1001 01 ±0134
4104 41 01 ±01 01 01 28 4102 ±0134 8148 100128 ±0130 991 34 ±0186
ig 受试和参比制剂 (按 300 mg/ kg 甘草酸单铵盐剂
量给药) 后的平均药2时曲线见图 2。Cmax 、tmax 用实
测值表示 ,AUC 用梯形法计算。采用 3p97 程序计
算主要药动学参数 ,见表 2。AUC0～36 h及 Cmax进行
对数转换后进行方差分析和双单侧 t 检验和 90 %置
信区间 ,对 tmax进行非参数检验法 ,评价制剂生物等
效性。
　　受试制剂甘草酸相对生物利用度为 (9915 ±
2910) % ,甘草次酸为 (11014 ±4613) % 。两制剂主 要药动学参数在制剂间、个体间均无显著性差异( P > 0105) ,而周期间甘草酸有差异 ( P < 0105) ,甘草次酸无差异。受试制剂甘草酸和甘草次酸的AUC0～36 90 %可信限分别为 83105 %～109142 % ,85197 %～ 118115 % ,均落在参比制剂的 80 %～125 % ;受试制剂甘草酸和甘草次酸的 Cmax 90 %可信限分别为 77103 % ～ 119138 % , 90140 % ～1211 88 % ,均落在参比制剂的70 %～143 %。采用非参数检验法的秩和检验对 tmax 进行统计分析可
·0041· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 9 期 2009 年 9 月
图 2 　家兔单剂量 ig 复方甘草酸苷片后甘草酸( A) 、
甘草次酸( B)的平均药2时曲线( x ±s , n = 12)
Fig12 　Mean plasma concentration2time curve 　　　　
of glycyrrhizin ( A) and glycyrrhetic acid ( B)
after single ig dose of Compound Glycyrrhizin
Tablets in rabbits ( x ±s , n = 12)
知 ,受试制剂与参比制剂间 tmax无差异。根据生物
等效性判断标准 ,可以认为两种制剂生物等效。
3 　讨论
　　采用样品量 4～5 倍的甲醇使血浆中蛋白沉淀
完全 ,无需采取二次提取的步骤 ,操作中对低质量浓
度采用倍量进样测定 ,一次提取回收率大于 85 % ,
简化了样品处理步骤。
　　家兔 ig 给予两种片剂后甘草酸和甘草次酸的
主要药动学参数均无显著差异 ,相对生物利用度甘
草酸为 ( 9915 ±2910 ) % , 甘草次酸为 ( 11014 ±
4613) % ,以 AUC0～36和 Cmax为指标 ,经双单侧 t 检
验 ,受试制剂和参比制剂生物等效 ,但在人体是否会
得到相似的结论有待进一步探讨。
　　片剂的生物等效性试验动物一般宜选用犬和大
鼠 ,但为了保持口服剂型的完整性 ,大鼠给药困难 ,
而犬价格较贵。因此本实验选用家兔为实验动物对
国产复方甘草酸苷片和进口市售产品美能片进行生
物等效性评价。
表 2 　家兔 ig 复方甘草酸苷片的受试制剂和参比制剂后的药动学参数( x ±s , n = 12)
Table 2 　Pharmacokinetic parameters of tested tablet and reference tablet of Compound Glycyrrhizin Tablets
by ig administraion to rabbits ( x ±s , n = 12)
参　数 单　位
甘草酸
受试制剂 参比制剂
甘草次酸
受试制剂 参比制剂
Cmax mg ·L - 1 11 81 ± 0169 11 84 ± 0154 0154 ± 01 25 0150 ± 01 16
tmax h 101 90 ± 5180 71 30 ± 3190 18110 ± 61 20 12120 ± 51 00
AUC0～∞ mg ·L - 1 ·h 631 35 ±12116 731 21 ±26154 14150 ± 81 25 12109 ± 31 98
AUC0～36 h mg ·L - 1 ·h 371 37 ± 9176 391 11 ± 9188 9115 ± 31 88 8169 ± 21 30
t1/ 2 (β) h 281 34 ±17189 331 22 ±25196 18122 ±231 67 16150 ±161 60
MR T h 441 29 ±22189 501 31 ±35109 37193 ±321 97 31142 ±211 81
　　国外有文献采用高效液相色谱法测定新西兰家
兔血清中的甘草酸及代谢产物甘草次酸[4 ] ,由于甘
草酸和甘草次酸极性差别大 ,分别采用不同的流动
相比例进行测定。本实验依据文献方法[5～7 ] 进行改
进 ,在同一色谱条件下可同时测定家兔血浆中甘草
酸和甘草次酸 ,方法简便 ,准确 ,专属性强 ,该检测方
法可为复方甘草酸苷片的临床研究提供初步依据。
　　目前 ,检测在生物样品中的甘草酸及其代谢产
物仍以色谱技术为主。如液质联用技术灵敏 (可达
纳克级) 、快速、准确、简便 ,在定量分析的同时还可
进行结构解析 ,有无与伦比的优越性 ,但昂贵的费用
制约了其广泛使用。气相色谱法专属性强 ,检测限
低但样品前处理复杂。因此 ,尽管 HPL C 法灵敏度
低于液质联用技术 ,但由于其高效、快速、简便、经济
等特性 ,仍是国内外检测生物样品中甘草酸及其代
谢产物使用最广泛的方法 ,只是给药剂量均较大 ,多
在 100～500 mg/ kg[ 5～9 ] 。本实验对甘草酸及其代
谢物的体内分析在实验对象的选择 ,样品处理方法
以及检测条件等方面进行了初步探讨 ,为今后采用
HPL C 法更有效地进行甘草类制剂的体内研究提
供了参考。
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银杏叶总黄酮及其水解物静脉注射给药后在大鼠体内的药动学研究
冯小龙 ,王 　伟 ,张兰桐 3
(河北医科大学药学院 药物分析教研室 ,河北 石家庄 　050017)
摘 　要 :目的 　研究银杏叶提取物中黄酮类成分及其水解物大鼠尾 iv 给药后的药动学差异 ,同时研究内酯类成分
对黄酮类成分药动学的影响。方法 　以高效液相色谱法测定血浆中槲皮素、山柰素和异鼠李素 ,用 3p97 软件进行
药动学参数的计算。结果 　槲皮素药动学符合二房室模型 ,山柰素和异鼠李素的药动学符合非房室模型。银杏水
解物中槲皮素的 t1/ 2比银杏叶提取物中槲皮素的 t1/ 2短 ,与水解物相比提取物的相对生物利用度低 ,水解物中异鼠
李素的相对生物利用度高。结论 　银杏黄酮糖苷在大鼠体内转化为黄酮苷元的量较少 ,苷元的相对生物利用度较
高 ;内酯对黄酮的代谢无明显影响。
关键词 :银杏 ;槲皮素 ;山柰素 ;异鼠李素 ;药动学
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0921402205
　　银杏叶提取物的主要活性成分是黄酮类和萜内
酯类化合物。黄酮类主要是由山柰酚、槲皮素和异
鼠李素等的糖苷组成。研究表明 ,黄酮苷元的生物
活性明显优于糖苷[1 ] ,糖苷与苷元的体内过程有较
大差异且不同苷元间可相互转化[2 ,3 ] 。银杏黄酮类
成分药动学研究需对血浆样品进行水解后测定苷
元 ,操作复杂 ,因水解后部分苷元的代谢产物转化为
相应的苷元 ,测得的苷元量不准确[4 ] 。本实验旨在
建立简易的同时测定血浆中槲皮素、山柰素和异鼠
李素苷元的 HPL C 方法 ,比较大鼠尾静脉注射银杏
叶提取物及其水解物后槲皮素、山柰素和异鼠李素
药动学的差异 ,为银杏叶提取物制剂的进一步开发
提供理论依据。
1 　仪器与材料
　　Agilent1200 高效液相色谱仪 ; XW —80A 旋涡
混合器 (上海医科大学仪器厂) ,L G16 —W 高速离
心机 (北京医用离心机厂) 。
　　槲皮素 (批号 1000812200406) 、山柰素 (批号
1108612200405)和异鼠李素 (批号 1108602200406)
对照品均购自中国药品生物制品检定所 ;甲醇 (色谱
纯) ;银杏叶提取物由山东仁和制药有限公司提供。
　　Wistar 大鼠 ,雄性 ,200～250 g ,由河北医科大
学实验动物中心提供 , 合格证号 : SCXK(冀) 20072
12003。
2 　方法与结果
211 　样品的制备
21111 　银杏叶提取物的制备 :按《中国药典》2005
年版一部制备。
21112 　银杏叶水解物的制备 :取银杏叶提取物样品
溶解于水解液 25 %盐酸2甲醇 (1 ∶4) 中 ,80 ℃加热
回流 30 min ,迅速冷至室温 ,每次用 1/ 2 体积乙醚2
丙酮 (15 ∶1)萃取 ,共 3 次 ,合并有机相并减压蒸干
即得。
21113 　无内酯银杏叶提取物的制备 :取银杏叶提取
物适量溶解于 60 ℃水中 ,每次用 1/ 2 体积醋酸乙酯
萃取 ,共 3 次 ,除去内酯类成分 ;水相减压分离水中
溶解的醋酸乙酯后 ,用 1/ 2 体积正丁醇萃取 ,共 4
次 ,合并正丁醇相并减压蒸干即得银杏总黄酮。
21114 　无内酯银杏叶水解物的制备 :取银杏总黄酮
(去除萜内酯)样品按“银杏叶水解物的制备”的方法
制备 ,即得。
212 　给药剂量的确定 :4 个样品和槲皮素、山柰素、
异鼠李素对照品均用丙二醇、乙醇和水组成的复合
溶剂配制成适当质量浓度的溶液 ,经 0122μm 微孔
·2041· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 9 期 2009 年 9 月
3 收稿日期 :2008212228　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :冯小龙 (1976 —) ,男 ,河北医科大学药学院博士研究生 ,研究方向为中药有效成分的药物代谢研究。3 通讯作者　张兰桐　Tel/ Fax : (0311) 86266419 　E2mail : zhanglantong @2631 net