全 文 ：茵陈注射液的质量标准研究
曲　毅1, 2, 刘太华1, 王伽伯1, 金　城1, 何永志2, 肖小河1Ξ
(11 中国人民解放军第 302 医院 全军中药研究所, 北京　100039; 21 天津中医药大学, 天津　300193)
摘　要: 目的　对茵陈注射液的质量标准进行研究。方法　采用薄层色谱法定性蒿属香豆素, 展开剂为石油醚 (60～
90 ℃) 2醋酸乙酯2丙酮 (6∶3∶015) , 检测波长为 365 nm。采用高效液相色谱法定量蒿属香豆素, 色谱柱: Λ2Bonda2
pak C18柱 (300 mm ×319 mm , 5 Λm ); 流动相: 甲醇2水 (40∶60) ; 检测波长: 344 nm ; 柱温: 室温。采用紫外分光光度
法定量总黄酮, 检测波长为518 nm。采用酸碱滴定法定量总有机酸。结果　薄层色谱鉴别中, 在供试品与对照品色
谱相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点。H PL C 法测定蒿属香豆素的量分别为01178、01173、01180 m gömL ; 紫外
分光光度法测定总黄酮的量分别为 01633、01634、01653 m gömL ; 酸碱滴定法测定总有机酸的量分别为 01146、
01147、01142 m gömL。建立各指标的检测下限, 其中蒿属香豆素的量不得低于 0117 m gömL , 总黄酮的量不得低于
0163 m gömL , 总有机酸的量不得低于 0114 m gömL。结论　所建立的质量标准可以作为茵陈注射液的内在质量控
制标准。
关键词: 茵陈注射液; 质量控制; 薄层色谱; H PL C; 酸碱滴定; 分光光度法
中图分类号: R 286102　　　文献标识码: A 　　　文章编号: 0253- 2670 (2008) 03- 0383- 03
　　茵陈蒿汤源自张仲景《伤寒论》, 主要是由茵陈、
栀子、大黄 3 味中药组成, 该方及其加减方具有清
热、除湿、利胆、退黄的功效, 在临床上用于治疗病毒
性肝炎、胆石症、胆囊炎、高血脂症及恶性肿瘤等。在
茵陈蒿汤的基础上开发研制而成的复方茵陈蒿注射
液、茵栀黄注射液对于治疗急性黄疸型、病毒性肝炎
等急危重肝病发挥了重要作用。但据目前文献分析
和实验研究表明: 方中大黄有一定的遗传毒性风
险[1 ] , 全方研发成注射剂的安全性难以保证; 栀子苷
口服利胆作用好, 但注射给药效果较差; 全方药味偏
多, 制备工艺复杂, 制剂稳定性和安全性难以保证,
不适合开发成现代中药注射剂等。笔者初步研究发
现, 无论口服还是注射给药, 单味茵陈利胆退黄效果
显著, 可与茵陈蒿汤疗效相媲美。因此, 从利胆退黄
的角度考虑, 可以将茵陈蒿汤 3 味药精简优化为单
味茵陈, 提取精制茵陈的主要有效部位, 从而开发成
单味茵陈注射液[2 ]。该注射液含有多种利胆成分, 包
括蒿属香豆素、总黄酮和总有机酸等, 可明显增加胆
酸、胆固醇等脂类成分的分泌量, 使胆汁流量增
加[3, 4 ]。本实验对茵陈注射液质量标准进行了研究。
1　仪器与试药
W aters 高效液相色谱仪 (包括 484 型检测器、
U 6k 型进样阀) ; H P8452A 型紫外分光光度计; 试剂
均为分析纯; 甲醇 (色谱纯, 美国F isher 公司) ; 蒿属
香豆素 (自制, 经UV、IR、M S、1H 2NM R 确定其结
构, 采用高效液相分离, 面积归一化法计算蒿属香豆
素的质量分数为9919% , 可做定量之用) ; 芦丁 (批号
008029705)、绿原酸 (批号 07532200111) 对照品均购
自中国药品生物制品检定所; 茵陈注射液规格为 (10
mL , 解放军第302 医院全军中药研究所制备)。
2　方法与结果
211　TL C 鉴别: 吸取茵陈注射液 1 mL , 挥干, 加甲
醇 10 mL , 作为供试品溶液。另取蒿属香豆素对照
品, 加甲醇制成 0105 m gömL 溶液, 作为对照品溶
液。照薄层色谱法[5 ] 试验, 吸取上述两种溶液各
2 ΛL , 分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅
胶G 薄层板上, 以石油醚 (60～ 90 ℃) 2醋酸乙酯2丙
酮(6∶3∶015) 为展开剂, 展开, 取出, 晾干, 置紫外
光灯 (365 nm )下检视。供试品色谱中, 在与对照品色
谱相应的位置上, 显相同颜色的荧光斑点, 见图1。
212　茵陈注射液中蒿属香豆素的测定
21211　色谱条件: 色谱柱: Λ2Bondapak C 18柱 (300
mm ×319 mm , 5 Λm ) ; 流动相: 甲醇2水 (40∶60) ; 检
测波长: 344 nm ; 体积流量: 1 mL öm in; 柱温: 室温。
色谱图见图2。理论塔板数按蒿属香豆素峰计算, 应
不低于2 000。
21212　对照品溶液的制备: 精密称取蒿属香豆素对
照品 1316 m g, 置 100 mL 量瓶中, 加甲醇 50 mL 超
·383·中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 3 期 2008 年 3 月
Ξ 收稿日期: 2007205220
基金项目: 全军“十五”杰出人才基金项目 (01J019) ; 军队“九五”科技基金项目 (98M 125)
作者简介: 曲　毅 (1981—) , 男, 辽宁省丹东市人, 硕士研究生, 研究方向为中药新剂型的研究。E2m ail: yifo rever2000@ho tm ail1com3 通讯作者　肖小河　T el: (010) 66933322　E2m ail: pharm acy302@ 1261com
12蒿属香豆素对照品　2～ 42茵陈注射液
12scoparone reference substance　2—42Yinchen In jection
图 1　茵陈注射液的TLC 鉴别
F ig11　TLC Iden tif ica tion of Y inchen In jection
töm in3 2蒿属香豆素3 2scoparone
图 2　蒿属香豆素对照品 (A)和茵陈注射液 (B)的
HPLC 图谱
F ig12　HPLC Chromatogram s of scoparone reference
substance (A) and Y inchen In jection (B)
声溶解, 放冷, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀。精密量取5
mL , 转移至 10 mL 量瓶中, 加甲醇稀释至刻度, 摇
匀, 即得 (含蒿属香豆素01068 m gömL )。
21213　供试品溶液的制备: 精密吸取注射液2 mL ,
置 100 mL 量瓶中, 加甲醇稀释到刻度, 摇匀,
0145 Λm滤膜滤过, 即得。
21214　线性关系考察: 精密吸取 68 ΛgömL 蒿属香
豆素对照品溶液1、2、6、10、14、16 ΛL , 按上述色谱条
件测定峰面积。以峰面积为纵坐标, 进样量为横坐
标, 绘 制 标 准 曲 线, 计 算 得 回 归 方 程 为 Y =
4 557 04118X - 3 5691855 5, r = 01999 9, 结果表
明, 蒿属香豆素在 01068～ 11088 Λg 具有良好的线
性关系。
21215　精密度试验: 精密吸取 68 ΛgömL 蒿属香豆
素对照品溶液 10 ΛL , 依上述色谱条件, 重复进样 6
次, 测定峰面积, 结果其R SD 为0151%。
21216　稳定性试验: 取同一供试品溶液, 分别于配
制后0、2、4、8、24 h 进样10 ΛL , 记录峰面积, 结果蒿
属香豆素峰面积的R SD 为0160% , 表明供试品溶液
在24 h 内稳定。
21217　重现性试验: 同一注射液按供试品溶液制备
方法平行制备6 份, 测定蒿属香豆素峰面积, 计算蒿
属香豆素质量浓度, 结果蒿属香豆素质量浓度的
R SD 为2101%。
21218　回收率试验: 采用加样回收法。精密称取蒿
属香豆素对照品 54 m g, 置于 100 mL 量瓶中, 加甲
醇超声溶解, 放冷后, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀。取同
一供试品溶液 5 份, 分别精密加入蒿属香豆素对照
品溶液10 mL , 制成加样回收率供试液, 按上述色谱
条件测定, 计算回收率。结果蒿属香豆素平均加样回
收率为99148% , R SD 为1184%。
21219　样品测定: 分别取3 批不同批号的茵陈注射
液 (批号: 021017、021027、021121) , 按上述方法制备
供试品溶液, 直接进样 10 ΛL 测定蒿属香豆素峰面
积, 每批样品测定3 份, 以3 次测定结果的平均值作
为测定值, 计算蒿属香豆素质量浓度, 结果蒿属香豆
素质量浓度分别为01178、01173、01180 m gömL。
213　茵陈注射液中总黄酮的测定
21311　对照品溶液的制备: 精密称取在 120 ℃减压
干燥至恒重得芦丁对照品 2212 m g, 置 100 mL 量瓶
中, 加甲醇 70 mL , 置水浴上微热使溶解, 放冷, 加甲
醇稀释至刻度, 摇匀, 即得 (含芦丁01222 m gömL )。
21312　供试品溶液的制备: 精密吸取注射液2 mL ,
置100 mL 量瓶中, 加甲醇稀释到刻度, 摇匀, 即得。
21313　线性关系考察: 精密量取 01222 m gömL 芦
丁对照品溶液 0、1、2、4、8、10 mL , 分别置 25 mL 量
瓶中, 各加水至6 mL , 加5% 亚硝酸钠溶液1 mL , 使
混匀, 放置6 m in, 加10% 硝酸铝溶液1 mL , 摇匀, 放
置6 m in, 加氢氧化钠试液10 mL , 再加水至刻度, 摇
匀, 放置 15 m in, 参照分光光度法在 518 nm 波长处
测定吸光度值。以吸光度值为纵坐标, 质量浓度为横
坐标, 绘制标准曲线。计算回归方程为Y = 01012 878
8 + 01440 846 X , r = 01999 6, 结果表明, 芦丁在
01222～ 11332 m gömL 具有良好的线性关系。
21314　精密度试验: 精密吸取 01222 m gömL 芦丁
对照品溶液 3 mL , 按上述的测定方法, 重复操作 5
次, 计算, 结果吸光度R SD 为0173%。
21315　稳定性试验: 取同一供试品溶液5 mL , 按上
述的比色方法操作, 比色后分别于 10、20、30、40、50
m in 测定吸光度, 结果吸光度的R SD 为 0128% , 表
明供试品溶液在50 m in 内稳定。
21316　重现性试验: 取同一供试品溶液5 mL , 测定
吸光度, 结果总黄酮质量浓度的R SD 为0186%。
21317　回收率试验: 采用加样回收法。精密称取芦丁
·483· 中草药　Ch inese Traditiona l and Herbal D rugs　第 39 卷第 3 期 2008 年 3 月
对照品1614 m g, 置于100 mL 量瓶中, 加甲醇50 mL
超声溶解, 加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 即得芦丁对照品
溶液。取同一供试品溶液5 份, 分别精密吸取5 mL ,
置于25 mL 量瓶中, 再加入对照品溶液5 mL , 制成加
样回收率供试液。按上述的测定方法操作, 测定吸光
度, 计算回收率。结果总黄酮质量浓度的平均加样回
收率为99171% , R SD 为0170% (n= 5)。
21318　样品测定: 分别取3 批不同批号的茵陈注射
液 (批号 021017、021027、021121) , 制备成供试品溶
液, 吸取5 mL , 测定吸光度。每批样品测定3 份, 以3
次测定结果的平均值作为测定值。结果总黄酮质量
浓度分别为01633、01634、01653 m gömL (n= 3)。
214　注射液中总有机酸的测定
21411　氢氧化钠滴定液的配制: 取氢氧化钠液适
量, 加水振摇使溶解成饱和溶液, 冷却后, 置聚乙烯
塑料瓶中, 静置数日, 澄清后备用。取澄清的氢氧化
钠饱和溶液516 mL , 加新沸过的冷水使成1000 mL ,
即得011 mo löL 氢氧化钠滴定液。
21412　氢氧化钠滴定液的标定: 精密称取在 105 ℃
干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾 01102 8 g, 加新
沸过的冷水50 mL , 振摇, 使其尽量溶解, 加酚酞指示
液2 滴, 用本液滴定, 滴定至溶液显粉红色。每1 mL
氢氧化钠滴定液 (011 mo löL ) 相当于20142 m g 邻苯
二甲酸氢钾。消耗氢氧化钠滴定液体积4144 mL , 计
算得氢氧化钠滴定液的浓度为01113 mo löL。
21413 　供试品溶液的制备: 精密吸取茵陈注射液 2
mL , 挥干, 加水溶解, 上预处理好的D 2101 大孔树脂
柱, 收集过柱液、水洗液50 mL , 即得到供试品溶液。
21414　样品测定: 在供试品溶液中, 加入酚酞指示
液2 滴, 用标定好的氢氧化钠滴定液 (01113 mo löL )
滴定, 滴定至溶液显粉红色。每1 mL 氢氧化钠滴定
液 (01113 mo löL ) 相当于 40104 m g 绿原酸, 总有机
酸以绿原酸计, 结果总有机酸质量浓度分别为
01146、01147、01142 m gömL。
3　讨论
本实验建立了茵陈注射液内在质量控制方法。
以高效液相色谱法测定蒿属香豆素的量, 紫外分光
光度法测定总黄酮的量, 酸碱滴定法测定总有机酸
的量, 质量标准符合《中药新药制备工艺研究的要
求》, 为茵陈注射液的内在质量控制提供了方法。
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