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环草石斛试管苗生长节律及分级标准研究
孙志蓉1 ,陈明颖2 ,王美云3 ,龙友邻2 , 白 音4 ,王 明2 ,王文全1*
( 1. 北京中医药大学中药学院, 北京 100102; 2. 贵州吉仁堂药业公司,贵州 兴义 562400;
3.河北省廊坊市人民医院, 河北 廊坊 065000; 4.韶关学院英东生物工程学院, 广东 韶关 512005)
摘 要:目的 对不同生长时期的环草石斛试管苗进行生长动态及分级标准的研究, 为试管苗各生长发育时期合
理调控技术措施的确定提供科学依据。方法 采用常规方法, 测定不同生长时期试管苗的生长指标、多糖及蛋白
质的量,确定试管苗出瓶时间及分级标准。结果 播种生长 12 个月的时间内, 5~ 8 个月是环草石斛试管苗苗高和
茎粗增长最快的时期; 7~ 8个月时的试管苗生物量积累速率最高。环草石斛试管苗根与茎叶之比( R/ T )相对较
小,比值小于 1。生长 8 个月时的试管苗多糖的量和可溶性蛋白质的量较高, 7~ 8 个月时的试管苗生长代谢旺盛。
从干物质积累动态、多糖及蛋白质的量变化、试管苗活力和生产成本等方面综合考虑,环草石斛生长 8~ 10 个月的
试管苗出瓶移栽较为合适。试管苗出瓶后分级再利用能够切实保证移栽成活率。以苗高、茎粗和根数作为分级指
标,环草石斛试管苗可以分为 3 个等级。结论 环草石斛的种子质量对试管苗的生长影响较大, 生长 8~ 10 个月
的环草石斛试管苗出瓶移栽较为合适,以苗高、茎粗和根数作为分级指标, 试管苗可以分为 3 个等级加以利用。
关键词:环草石斛;组织培养;生长发育;分级标准
中图分类号: R2821 2 文献标识码: A 文章编号: 025322670( 2009)0320443205
Growth dynamic and standard degree of Dendrobium loddigesii test2tube seedling
SUN Zhi2rong1 , CHEN Ming2ying2 , WANG Mei2yun3 , LONG You2lin2 , BAI Yin4 ,
WANG Ming2 , WANG Wen2quan1
( 1. School of Chinese Mater ia Medica, Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100102, China; 2. Guizhou
Jirent ang Pharmaceutical Company, Xingyi 562400, China; 3. H ebei Langfang Peoplec s Hospita l, Langfang 065000,
China; 4. Yingdong College of Bioengineer ing, Shaoguan University, Shaoguan 512005, China)
Abstr act: Objective To study the growth dynamic and standard degree of Dend robium lod dig esii
test2tube seedling in various developing per iods. It would pr ovide the scientific theory for the realizat ion
large scale production of the test2tube seedling finally. Methods Indexes, such as growth, development,
polysaccharide content, and soluble protein contents, were determined, and indexes of standard degree of
D. lod dig esii test2tube seedling were obtained by general ways. Results In a year after sowing, the test2
tube seedling of 5 ) 8 months2old was the fastest growing per iod in height and stem thickness; the test2
tube seedling biomass accumulat ion r ate of 7 ) 8 months old was the highest. T he test2tube seedling of R/
T< 1. Eight months2old had higher polysaccharide content and soluble protein contents. T he test2tube
seedling of 8 ) 10 months2old t ransplanted bet ter on thinking of dry matter accumulat ion dynamics, poly2
saccharide content , soluble pr otein contents variat ion, seedling act ivity, and product ion cost . Classifica2
t ion and reuse after bot tle may impr ove the t ransplant ing survival rat io. Seedlings of D. lodd igesii may be
divided into thr ee grades by clustering statistic analysis on classificat ion indexes, such as height, stem
thickness, and r oot number. Conclusion The test2tube seedlings of 8 ) 10 months2old t ransplant bet ter.
Seedlings of D. lodd igesii may be divided into thr ee gr ades by cluster ing statist ic analysis on classificat ion
indexes, such as height, stem thickness, and root number.
Key words: Dendr obium lod dig esii Rolfe; t issue culture; growth and development ; standard degree
药用石斛因其特殊的生存环境和卓著的滋补功
效而名列/ 中华九大仙草0之首, 环草石斛 Den2
dr obium lodd igesii Rolfe又称美花石斛、粉花石斛,
是名贵的中药材, 其加工品在台湾、香港和东南亚等
#443#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 3 期 2009 年 3 月
* 收稿日期: 2008205228 基金项目: / 十一五0国家科技支撑计划项目( 2006BAI06A11211)作者简介:孙志蓉( 1967 ) ) ,女,山东人,副教授,博士,研究方向为药用植物资源与规范化栽培研究。
T el : ( 010) 84738624 E2mail : zrs67@126. com
地享有很高的声誉。由于野生资源匮乏[ 1] , 环草石
斛已被列为国家三级珍稀濒危保护植物。为了保护
一些濒临灭绝的石斛种类, 2005年版5中国药典6对
收载的石斛品种做了调整。环草石斛自然繁殖率
低,植株生长缓慢, 野生资源自然更新恢复速度慢,
而目前人工栽培技术还很不成熟。优质种苗的来源
与供应已成为制约环草石斛生产发展的瓶颈。通过
多年的试验研究,虽然已经成功培育出环草石斛试
管苗[ 2~ 5] , 但还存在着试管苗的数量和质量难以保
证、移栽成活率低等问题,极大地制约着环草石斛生
产规模的扩大和生产水平的提高。植物的生长发育
进程受自身生理生化特性的影响,而植物所表现出
的生长现象、规律和特点是遗传基因和环境因子共
同作用的结果。只有通过深入系统地调查研究, 掌
握环草石斛试管苗的生长发育规律及与环境条件的
相关性,才能正确指导试管苗各生长发育时期合理
调控技术措施的确定, 最终实现环草石斛规模化
生产。
1 实验材料与方法
11 1 材料:成熟的环草石斛种子采自贵州吉仁堂药
业公司环草石斛野生保育基地。种子经消毒后, 在
无菌条件下播在种子萌发培养基( MS+ NAA 01 2
mg/ L+ 2%白砂糖+ 15%马铃薯提取液+ 琼脂粉,
pH 值 51 8)表面,待萌发生长 2个月后,转接到分化
生长和生根壮苗培养基上(MS+ NAA 01 5 mg/ L+
3%白砂糖+ 20%马铃薯提取液+ 活性炭 01 1% +
琼脂粉, pH 值 51 8) ,接种瓶规格为直径 7 cm,高 9
cm, 接种密度 10株/瓶, 培养条件为光照强度 1 500
lx, 光照时间 12 h/ d, 温度( 25 ? 2) e 。
11 2 试验方法
11 21 1 试管苗生长动态调查:环草石斛种子播种后
即进行观测,第 1~ 5个月,每 10 d调查 1次, 第6~
7个月每 15 d调查 1次, 第 8~ 12个月, 每月调查 1
次。观察种子萌发情况, 记录种子转绿、萌发、出现
原球茎、出现子叶和真叶的时间,同时记录茎节数的
变化, 描述试管苗生长状况。每一形态时期可分为
始期(所有观测对象里有 5%出现原球茎即称为出
现原球茎的始期)和大量发生期(所有观测对象里有
50%以上出现原球茎即称为原球茎大量发生期)。
对播种后生长 3~ 12 个月的试管苗进行取样, 各时
期随机抽取 5瓶,再从中随机取 30株, 分单株对其
各项指标进行测定, 测量项目有苗高、茎粗、叶片数、
分蘖数、根数、根长、根茎叶鲜质量和干质量等,同时
描述生长状况。
11 21 2 多糖量测定方法:采用苯酚2硫酸法, 参照文
献方法[ 6] ,略有改进。
11 21 3 可溶性蛋白质的量测定方法:采用考马斯亮
蓝法。
11 21 4 试管苗分级标准研究方法:对种子播种后萌
发生长 7~ 12个月的试管苗进行抽样调查,各生长
月份随机抽取 30株,共 180株, 逐株测量,测定项目
为苗高、茎粗、叶片数、叶色、分蘖数、根数、根长、根
茎叶鲜干质量等, 根据聚类统计分析结果, 确定苗
高、茎粗和根数作为分级指标,将试管苗分为 3个等
级,确定各级苗各项指标的范围。对播种后萌发生
长 8~ 9个月的试管苗按照暂定的分级标准,分成 3
个等级,以不分等级作为对照, 采用随机区组设计,
各重复 3次,小区面积 1 m@5 m。将苗分别移栽到
相同的基质中, 移栽基质为杂木花, 移栽窝距
10 cm@10 cm, 管理水平一致, 定期观察其生长状
况。试管苗移栽 45 d后开始调查, 移栽生长 6个月后
调查取样,最后确定试管苗出瓶移栽前的分级标准。
2 结果与分析
21 1 环草石斛试管苗生长动态特征:成熟的环草石
斛种子播种在种胚萌发诱导培养基上, 10 d后种胚
开始变绿,约 30 d后, 种胚膨大并逐渐萌发形成绿
色原球茎,约 60 d后, 一部分原球茎顶端产生叶原
基突起,将其依次转接到分化生长和生根壮苗培养
基上,叶原基突起逐渐发育成幼叶, 继续培养 2个
月,可形成具有 1~ 2 片叶、高 01 5 cm的小苗,小苗
丛生。而另一部分原球茎则继续生长变大,这些原
球茎可用来继代增殖, 又可以用于保存种质。研究
中发现,成熟度不够的环草石斛种子播种后很难萌
发,有些半年后观察,种子大部分还是浅黄色。
环草石斛试管苗生长动态调查结果见表 1。在
生长 5、8和 11个月时试管苗苗高增长较快,以生长
8个月时增长最快, 苗高增长率为 701 9%。在生长
5个月和 6 个月时茎粗增长较快, 平均增长率为
281 5%。试管苗在生长 5、8和 11个月时发根数量
较多,在生长 7、8和 11个月时根长增长较快。在生
长 5、6和 11个月时试管苗分蘖数量较多。总体来
看, 5~ 8个月是环草石斛试管苗苗高和茎粗生长最
快的时期; 6个月和 11个月分别有 2次分蘖高峰;
5、8~ 9、11~ 12个月有 3次发根高峰。
21 2 环草石斛试管苗生物量的积累与分配:由表 2
可见,环草石斛试管苗生物量动态积累表现为前期
#444# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 3 期 2009 年 3 月
表 1 环草石斛试管苗生长发育状况( x ? s)
Table 1 Growth and development of D. loddigesii test2tube seedlings ( x? s)
生长时期
/月
苗高
/ cm
茎 粗
/ cm
叶数
/片
根 数
/条
根 长
/ cm
分蘖数
/ (个 # 株- 1)
3 0. 29 ? 0. 10 0. 09 ? 0. 04 1. 1 ? 0. 32 0. 0 ? 0. 00 0. 00 ? 0. 00 0. 0 ? 0. 00
4 0. 40 ? 0. 07 0. 10 ? 0. 01 1. 4 ? 0. 52 0. 4 ? 0. 52 0. 09 ? 0. 12 0. 0 ? 0. 00
5 1. 08 ? 0. 08 0. 12 ? 0. 00 1. 9 ? 0. 57 1. 0 ? 0. 53 0. 31 ? 0. 20 1. 2 ? 0. 00
6 1. 31 ? 0. 25 0. 17 ? 0. 05 2. 7 ? 0. 74 1. 4 ? 0. 67 0. 68 ? 0. 29 1. 6 ? 0. 67
7 1. 65 ? 0. 79 0. 20 ? 0. 03 3. 2 ? 0. 84 1. 6 ? 0. 94 1. 86 ? 0. 49 1. 1 ? 0. 32
8 2. 82 ? 1. 07 0. 22 ? 0. 04 4. 8 ? 1. 07 2. 1 ? 0. 82 2. 91 ? 1. 61 1. 1 ? 0. 42
9 3. 21 ? 0. 87 0. 24 ? 0. 04 5. 5 ? 0. 35 2. 5 ? 0. 67 3. 22 ? 1. 20 1. 1 ? 0. 84
10 3. 43 ? 0. 75 0. 25 ? 0. 04 5. 8 ? 1. 07 2. 8 ? 0. 70 3. 37 ? 1. 76 1. 3 ? 0. 63
11 3. 81 ? 1. 06 0. 25 ? 0. 03 6. 6 ? 1. 32 3. 3 ? 0. 82 4. 58 ? 2. 37 1. 4 ? 0. 52
12 4. 15 ? 1. 06 0. 26 ? 0. 04 6. 9 ? 1. 34 3. 6 ? 1. 63 5. 35 ? 1. 69 1. 6 ? 0. 42
表 2 环草石斛试管苗生物量的动态变化( x ? s)
Table 2 Biomass dynamic of D. loddigesii test2tube seedlings (x ? s)
生长时间
/月
茎叶/ ( mg# 株- 1 # d- 1) 根/ ( mg# 株- 1 # d- 1) 总生物量/ ( mg# 株- 1 # d- 1 ) 根/茎叶
鲜质量 干质量 鲜质量 干质量 鲜质量 干质量 鲜质量 干质量
5 18. 10 ? 0. 04 0. 67 ? 0. 01 4. 78 ? 0. 02 0. 33 ? 0. 01 22. 88 ? 0. 09 1. 00 ? 0. 00 0. 26 ? 0. 01 0. 50 ? 0. 00
6 46. 00 ? 0. 10 2. 74 ? 0. 06 6. 30 ? 0. 04 0. 48 ? 0. 01 52. 30 ? 0. 05 3. 22 ? 0. 03 0. 14 ? 0. 01 0. 18 ? 0. 05
7 101. 30 ? 0. 07 7. 73 ? 0. 03 15. 40 ? 0. 02 1. 80 ? 0. 03 116. 70 ? 0. 13 9. 53 ? 0. 02 0. 15 ? 0. 02 0. 23 ? 0. 00
8 189. 70 ? 0. 11 15. 94 ? 0. 01 26. 30 ? 0. 10 3. 87 ? 0. 02 216. 00 ? 0. 27 19. 81 ? 0. 03 0. 14 ? 0. 01 0. 24 ? 0. 02
9 246. 50 ? 0. 09 17. 71 ? 0. 01 28. 80 ? 0. 03 4. 45 ? 0. 01 275. 30 ? 0. 08 22. 16 ? 0. 07 0. 12 ? 0. 03 0. 25 ? 0. 07
10 297. 60 ? 0. 17 19. 99 ? 0. 02 36. 50 ? 0. 04 4. 70 ? 0. 01 334. 10 ? 0. 12 24. 69 ? 0. 06 0. 12 ? 0. 02 0. 24 ? 0. 01
11 308. 30 ? 0. 11 22. 27 ? 0. 03 45. 86 ? 0. 05 4. 94 ? 0. 03 354. 16 ? 0. 15 28. 21 ? 0. 04 0. 15 ? 0. 10 0. 22 ? 0. 02
12 325. 20 ? 0. 12 32. 50 ? 0. 03 51. 10 ? 0. 04 7. 82 ? 0. 02 376. 30 ? 0. 21 35. 32 ? 0. 15 0. 16 ? 0. 07 0. 24 ? 0. 01
缓慢,中后期较为迅速。其中 7~ 8 个月和 11~ 12
个月时试管苗生物量增长较快。环草石斛试管苗的
根与茎叶的比值(R/ T )相对于其他植物种类较小,
试管苗总生物量受茎叶生物量的影响较大, 平均单
株茎叶干质量占总干质量的 791 6%, 根干质量占总
干质量的 201 4%。
相邻两次生物量测定结果之差与生长时间的比
值即为某一时期的生物量积累速率,由此可以考察
植物生物量在不同时期积累变化的规律。在不同生
长发育阶段, 环草石斛试管苗在 7 ~ 8 个月( 01 34
mg # 株- 1 # d- 1 )和 11~ 12个月( 01 24 mg # 株- 1 #
d- 1)两个时期茎叶和根的生物量积累速率都较高,
以生长 7~ 8个月时的环草石斛试管苗总生物量积
累速率最高。
21 3 试管苗多糖及可溶性蛋白质量的动态变化:环
草石斛试管苗的多糖量与其生理活性强弱密切相
关。由图 1可见,生长 8个月时的试管苗多糖的量
最高( 51 98%) , 7、9、10 和 12个月时的试管苗多糖
量相近,平均为 41 54%。
生长时间/月
图 1 试管苗多糖量与生物量积累动态变化
Fig. 1 Dynamic of polysacchar ide content and biomass
accumulation of test2bube seedlings
蛋白质是生命的物质基础, 生命是蛋白质存在
的一种形式。随着生长发育进程, 环草石斛试管苗
可溶性蛋白质的量在不断发生变化(图 2)。播种后
生长 5个月的试管苗, 蛋白质的量为 1311 04 mg/ g,
6个月时为 1331 70 mg/ g, 随着生长时间延长,蛋白
质的量也在逐渐增加, 8个月时达到最高值( 1561 21
mg/ g) , 以后有所减少, 生长 12个月的试管苗蛋白
质的量为 1391 77 mg/ g。从图 2环草石斛试管苗单
株总干质量积累动态曲线可以看出, 7~ 8个月是试
#445#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 3 期 2009 年 3 月
管苗生物量快速增长期, 单株干质量积累速率达到
最高( 01 34 mg # 株- 1 # d - 1)。由于干物质的快速
积累,导致蛋白质的量相应增加, 8个月时的试管苗
蛋白质的量达到最高值。8个月以后的试管苗, 由
于生物量积累速率减小, 加之分蘖小苗需要消耗营
养,所以生长后期试管苗多糖和蛋白质的量有所
减少。
生长时间/月
图 2 试管苗蛋白质的量与生的物量积累动态变化
Fig. 2 Dynamic of soluble protein contents and biomass
accumulation of test2bube seedlings
21 4 环草石斛试管苗分级标准:试管苗的质量关系
到出瓶后的移栽成活率和苗的生长好坏。对播种后
萌发生长 8~ 9个月的试管苗按照暂定的分级标准,
分成3个等级,分别移栽到相同的基质中,移栽 45 d
后开始调查,发现 1级苗的长势最好,苗高茎粗, 并
有新芽萌发,叶片宽大, 萌发新根多且粗壮; 2级苗
的新苗继续生长, 封顶的苗上有新芽萌发,苗的长势
总体上较 1级苗差,根系也不及 1级苗好; 3 级苗生
长缓慢,虽有新芽和新根萌发, 但明显弱于 1、2级
苗。移栽生长 6个月后, 调查试管苗的移栽成活率
及不同等级试管苗的生长情况。1 级苗调查 360
株,其中死亡 10株, 成活率为 971 2% ; 2 级苗调查
320株, 死亡 45 株, 成活率为 851 9%; 3 级苗调查
320株,死亡 70株, 成活率为 78%。移栽生长 6个
月后, 不同等级试管苗生长状况调查结果见表 3。
根据综合分析,最后确定环草石斛试管苗移栽前的
分级标准(表 4)。
表 3 环草石斛不同等级试管苗的生长发育状况
Table 3 Growth and development among differently2graded test2tube seedlings of D. loddigesii
试管苗等级 苗高/ cm 茎粗/ cm 叶片数
/ (片 # 株- 1 )
分蘖数
/ (个 # 株- 1)
根数
/ (条 # 株- 1 ) 根长/ cm
总鲜质量
/ ( g# 株- 1)
总干质量
/ ( g# 株- 1)
1级 6. 01 0. 33 5 6 5 5. 72 0. 90 0. 12
2级 4. 52 0. 31 4 9 6 4. 65 0. 87 0. 11
3级 3. 87 0. 26 3 5 4 3. 28 0. 42 0. 05
混等 4. 67 0. 29 4 7 4 4. 75 0. 78 0. 09
表 4 环草石斛试管苗分级标准
Table 4 Standard degree of D. loddigesii test2tube seedlings
试管苗等级
分 级 指标
苗高/ cm 茎粗/ cm 有活力的短粗根条数
/ (条 # 株- 1 )
1级 \ 5 \ 0. 25 \ 3
2级 \ 3, < 5 \ 0. 2 \ 2
3级 \ 2, < 3 < 0. 2 < 2
3 结论与讨论
31 1 环草石斛成熟的种子播种 10 d 后开始转绿,
约30 d后种胚膨大并逐渐萌发成绿色原球茎,约 60
d后,一部分原球茎顶端产生叶原基突起,继续培养
2个月后, 可形成具有 1~ 2片叶、高 01 5 cm的小
苗。而成熟度较差的种子播种后需要很长时间才能
萌发,且苗多细弱, 成熟度差的种子根本就不能萌
发,说明种子质量对环草石斛试管苗的生长发育有
很大的影响。
31 2 在环草石斛种子播种生长 12 个月的时间以
内, 5~ 8个月时是试管苗苗高和茎粗生长最快的时
期, 6个月和 11 个月时各有 1次分蘖高峰, 5、8、11
个月时各有 1次发根高峰。环草石斛试管苗生物量
积累的总体趋势表现为前期缓慢,中后期较为迅速,
生长 7~ 8个月时的试管苗生物量积累速率最高。
环草石斛试管苗的根与茎叶之比(R/ T)相对较小。
试管苗的生长发育受遗传特性和环境因素两方面影
响,其中遗传特性起着决定性的作用。导致环草石
斛试管苗出现茎细弱、生长缓慢且不整齐、分蘖和发
根数量多、根质量占的比例较大等现象,有其自身遗
传特性的原因,也有培养条件和培养技术方面的原
因,这些还有待于进一步研究。
31 3 环草石斛试管苗多糖的量和可溶性蛋白质的
量随着生长发育进程不断增高, 生长 8 个月时量达
到最高值,分别为 51 98%和 1561 21 mg/ g,以后有所
减少。7~ 8个月是试管苗生物量快速增长期,单株
干质量积累速率达到最高。由于干物质的快速积
#446# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 3 期 2009 年 3 月
累,导致多糖和蛋白质的量相应增加,试管苗生长代
谢活动旺盛,生活力强。而生长 8个月以后的试管
苗,由于生物量积累速率减小,加之分蘖小苗需要消
耗营养,所以生长后期试管苗多糖和蛋白质的量有
所减少。从生物量积累、多糖的量、可溶性蛋白质的
量、试管苗活力和生产成本等几个方面综合考虑, 环
草石斛成熟的种子播种后,生长 8~ 10个月时的试
管苗出瓶移栽较为合适。
31 4 试管苗的质量关系到移栽成活率、苗生长的好
坏及最终药材的产量和质量, 直接影响经济效益, 所
以进行种苗分级标准的研究非常有必要。环草石斛
种子播种后,生长 8~ 10个月时即可出瓶移栽,此时
试管苗大小不等,分级后再利用能够切实保证种苗
的质量。以苗高、茎粗和根数作为分级指标, 将试管
苗分为 3个等级: 1 级苗苗高 \ 5 cm, 茎粗 \ 01 25
cm, 根数 \ 3 条; 2级苗苗高 \ 3 cm 且< 5 cm, 茎
粗 \ 01 2 cm, 根数 \ 2条; 3 级试管苗苗高 \ 2 cm
且< 3 cm,茎粗< 01 2 cm,根数< 2 条。分级时, 如
果 2项指标符合要求, 而其中 1项不符合者,作为下
一等级苗处理。未达到 3级标准的试管苗,生活力
强的继续转接培养,而小老苗、畸形苗、黄化苗、霉污
苗等丢弃、销毁,不使用。
参考文献:
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柴胡药材干根DNA提取及 RAPD分析
南晓洁1 ,郝媛媛2 ,赵艮贵2* ,韩 榕1 ,秦雪梅2
( 1. 山西师范大学生命科学学院,山西 临汾 041004; 2. 山西大学 化学生物学与分子工程
教育部重点实验室,山西 太原 030006)
摘 要:目的 探索一种适用于柴胡药材干根 DNA 提取的方法, 为实现以分子标记方法辨别柴胡药材奠定基础。
方法 比较研究了分别用 CTAB法、SDS法和高盐低 pH 法等 3 种方法提取柴胡样品基因组 DNA。柴胡药材干根
经过 PVP 以及 TNE 缓冲液进行不同的预处理, 以 CTAB法抽提 DNA。以 EcoR Ñ/ Mse Ñ双酶切琼脂糖凝胶电
泳及 RAPD 扩增检测提取 DNA的质量。采用 NTSYS2pc软件计算 Jaccard 遗传相似系数,以非加权配对算术平均
数法(UPGMA)建立聚类图。结果 常规 DNA 提取方法提取药材干根 DNA 溶液经 4 e 放置后, 黏稠并褐变, 严
重影响酶切和 RAPD 扩增。样品预处理优化条件是研磨时加入 3% PVP , T NE 缓冲液于 0 e 浸提 2 次, 每次 30
min。以该优化的预处理方法处理 6 个柴胡药材干根样品,提取 DNA条带清晰,酶切完全, RAPD扩增图谱清晰稳
定,共获得有效扩增条带 28条, 其中多态性条带为 20 条, 占711 43%。聚类分析表明, 6 个栽培品中, 原产地为山西
灵丘外地引种(LQWY)和甘肃陇西( LX)、山西灵丘(LQ)和山西方山( FSH )的亲缘关系较近, 陕西商洛(SH L)和其
他 5个栽培品的亲缘关系较远。结论 柴胡药材干根经过预处理后, 可采用常规的 DNA 提取方法抽提 DNA, 所
提 DNA 适合于酶切、RAPD等分子标记分析。
关键词:柴胡;干根; DNA; RAPD
中图分类号: R2821 7 文献标识码: A 文章编号: 025322670( 2009)0320447205
Genomic DNA extraction and RAPD analysis from dried roots of Bupleurum chinense
NAN Xiao2 jie1 , HAO Yuan2yuan2 , ZHAO Gen2gui2 , HAN Rong1 , QIN Xue2mei2
( 1. College of Life Science, Shanxi Normal Univer sity, Linfen 041004, China; 2. Key Laboratory of Chemical
Biology and Molecular Engineering, Ministr y of Educat ion, Shanxi University, Taiyuan 030006, China)
Abstr act: Objective To study the genomic DNA extract ion from the dried r oots of Bupleur um
#447#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 3 期 2009 年 3 月
* 收稿日期: 2008205225 基金项目:国家自然科学基金资助项目( 30570174)作者简介:南晓洁( 1983 ) ) ,女,山西省大同市人,在读硕士研究生,从事植物学研究工作。E2mail : nanxiaojie@163. com
* 通讯作者 赵艮贵 T el: ( 0351) 7011499 E2mail: chungui@ sxu. edu. cn