全 文 :中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月·905·
A一消化DNA后的半夏叶片总RNA/3-反转录产物eDNA(泳道:M一2000DLMaker·1一以AAGCTloG为引物,2-以AAGCTt0A为
引物)C—PCR扩增产物(泳道1~4一锚定引物为AAGCTloG,随机引物分别为GATCTCAGAC、GATCATAGCC,GATCAATCGC
和GATCTAACCGI泳道5~8一锚定引物为AAGCTloA。随机引物与泳道1~4相同:泳道M·2000DLMaker)
A—totalRNAfromP.ternataleaveswasremovedDNAB-reverest anscriptedeDNA(Lanes:M·2000DLMaker,1一aprimefor
AAGCTloG,2-aprimeforAAGCTIoA)C—productsofPCRamplification(Lanes1—4一anchoredprimerisAAGCTIoG,arbitrary
primerisGATCTCAGAC,GATCATAGCC.GATCAATCGC,andGATCTAACCG,respectively;Lanes5—8-anchoredprimer
isAAGCTl0A,arbitraryprimeiss melanes1—4fLaneM一2000DLMaker)
圈2皂土抽提半夏叶片总RNART—PCR电泳检测结果
Fig.2EIectrophorogramofRT—PCRforextractedtotalRNAfromleavesofP.ternatabybentoniteme hod
而被除去[1州。皂土法提取的半夏叶片总RNA纯度[4]LiYY,WangzH,Zhangz·Aneffectivemethodfor
较高,完整性好,排除了多糖、酚类等杂质的污染,能 Bex池tr枷acti蒯ng。gt,ot,8:。翟0。怒?。竺:?⋯““”衄”m·
成功地用于RT—PCR的研究。该方法所用试剂价格[53李宏,王新力.植物组织RNA提取的难点及对策[J].生
低,用量少,耗材使用量少,大大降低了抽提成本,并 物技术通报,1999·15(1):36—39·
且操作简便,花费时间短,重复性好。所以,优化后的 口3:嚣乏0i等竺:。二慧:::亲;,呈’篾.AdT出ranRs。f,e:
皂土法是一种抽提半夏叶片总RNA的好方法。同 2002.30(14):3026—3033.
时,本研究结果也可为其他草本植物总RNA的提取 [7]LoomisWD·o”ercomingproblemsofphenolicsandquinines
提供参考和借鉴。曼:裂a。t。io,n。,of。p。l:an。t:三霉””。“8““k8们·砌6耐
参考文献: E8]ChangS.PuryearJ.CaimeyJ.Asimpleandefficient
V1]毛子成,彭正松.半夏研究进展[J].江西科学.2002,20methodforisolatingRNAfrompinetrees口]·PlantMol
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1
山药微型块茎诱导形成的影响因子研究
李明军h2,刘欣英2,李萍2,张晓丽2,赵喜亭2,柳俊1,谢从华H
(1.华中农业大学园艺林学学院园艺植物生物学教育部重点实验室,湖北武汉430070;
2.河南师范大学生命科学学院,河南新乡453007)
摘要:目的探讨培养方式、碳源、氮源对山药微型块茎诱导形成的影响,以期找到适宜的微型块茎诱导形成的
收稿日期:2007—09—23
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30670208)I河南省重点科技攻关项目(0623030700)I河南师范大学青年科学基金资助项目
(2006036)
作者简介:李明军(1962一),男,河南温县人,教授,博士、硕士生导师,长期从事植物生理学及植物生物技术方面的教学和科研工作.
Tel:(0373)3328189E—mail:limingjun2002@263.net
*通讯作者谢从华Tel:(027)87287381E—mail:xiech@mail.hzau.edu.en
万方数据
·906· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月
培养方式和培养基。方法 以B号山药试管苗为材料,运用一步培养法和两步培养法筛选最佳培养方式,在此基础
上于培养基中添加不同氮源和碳源进行诱导培养,定期对微型块茎的诱导情况进行统计。结果两步培养法、609/
L的碳源(白砂糖或蔗糖)、FNO。一]/[NH。+]为3t 1、总氮量为30mmol/L时有利于山药微型块茎的诱导形成。结论
首次建立了两步培养法诱导山药微型块茎形成的培养模式,筛选出了适宜的碳源和氮源,为微型块茎的离体诱
导形成及工厂化生产奠定了技术基础。
关键词:山药;微型块茎;培养方式;碳源;氮源
中图分类号:R282.2 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2008)06—0905—06
ImpactfactorsininvitroinductionofmicrotubersfromDioscoreapposita
LIMing—junl“,LIUXin—yin92,LIPin92,ZHANGXiao—li2,ZHAOXi—tin92,LIUJunl,XIECong—hual
(1.KeyLaboratoryofHorticulturalPlantBiology,MinistryofEducationt CollegeofHorticulture
andForestrySciences,HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan430070,ChinaI
2.CollegeofLifeSciences。HenanNormalU iversity,Xinxiang453007,China)
Abstract:ObjectiveToassesstheffectofculturemethod,carbonsource,andnitrogensourceon
theinductionofD.oppositam crotubersandoptimizetheculturemethodandmedium.MethodsD.
oppositaCV.No.Bwasusedasthematerials。one—stepandtWO—stepcultivationwerecomparedtooptimize
thebetterculturemethod.Onthebaseofdifferentcarbonsourcesandnitrogensourcesaddedinthe
medium,themicrotubersinducedw reevaluatedregularly.ResultsTwo—stepcultivation,carbonsource
with60g/Lconcentration(whitesugaro sucrose),nitrogensourcewith30mmol/Ltotalnitrogen
content,andtheratioofN03一/NH4+(3:1)wereadaptabletOthinductionofD.oppositam crotubers.
ConclusionTheinductionm deofD.oppositam crotuberswithtWO—stepcultivationhasbeen
established.theoptimalc rbonsourceandnitrogensourceareobtainedanafoundationiSlaidfor
microtubersinduction锄vitroandlargescaleproduction.
Keywords:上hoscoreaoppositaThunb.;microtuber;culturemethod;carbonsource;nitrogensource
山药DioscoreappositaThunb.,又名薯蓣,为
薯蓣科薯蓣属多年生缠绕草质藤本植物。主产于河
南省温县、武陟、沁阳、博爱一带的山药,被称为怀山
药,它药食兼宜,具有较高的营养和保健功效,但在
生产中长期采用营养繁殖,病毒感染严重,导致其种
质退化、产量下降。针对这一问题,笔者进行了怀山
药的脱毒快繁及产业化技术研究[1],但在实践中发
现,将试管苗直接供应给农户,费用高且移栽成活率
低。植物的微型块茎(microtuber)是试管苗在培养
基中或腋芽处形成的变态块茎,它对光、温的变化抗
性更强,能长时间保持活力,便于运输和种质交换,
栽种易成活,费用较低,故可取代试管苗用作种栽供
给农户。关于薯蓣属植物微型块茎诱导形成的研究
国内外已有报道[2叫],但关于山药微型块茎诱导形
成的研究报道较少。近年来,本研究室以怀山药为材
料对微型块茎诱导形成进行了系统的研究,首次建
立了微型块茎诱导形成的“两步培养法”模式,并筛
选出了适宜于微型块茎诱导形成的影响因子,为山
药薇型块茎的工厂化生产和推广应用提供了技术
支持。
l材料与方法
1.1 材料:河南师范大学生命科学学院“四大怀药”
研究室继代培养的B号山药DioscoreaoppositaCV.
试管苗。
1.2方法:采用一步培养法和两步培养法研究培养
方式对山药微型块茎诱导形成的影响。一步培养法
是将山药试管苗切成长2cm的单节带叶茎段,接种
到盛有50mL液体诱导培养基的500mL培养瓶中
培养90d。两步培养法是首先将试管苗切成长2am
的单节带叶茎段,接种到盛有50mL液体繁殖培养
基(MS+KT2mg/L+NAA0.02mg/L+30g/L
蔗糖)的500mL培养瓶中,培养30d获得长势一致
的植株,将整株转入盛有50mL液体诱导培养基的
500mL培养瓶中培养60d。诱导培养基为:MS+30
g/L蔗糖,MS+60g/L蔗糖和MS+60g/L蔗糖+
NAA0.5mg/L。每个处理接种3瓶,每瓶接3个茎
段,试验重复3次。培养温度为(25士2)℃,光照强度
为2000Ix,光周期为14h/d(下同)。
分别以0、30、60、90、120g/L的蔗糖或白砂糖
加入MS基本培养基,研究不同质量浓度和种类的
万方数据
中草黄ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月·907·
碳源对微型块茎诱导形成的影响,培养方式采用两
步培养法。
诱导微型块茎形成的基本培养基为MS,其中的
[-N03一]/[-NH。+]为1.9s 1,总氮量为60mmol/L。
当[-N03一]/[NH.+]为1.9。1时,分别以30、60、120
mmol/L的总氮量加入MS(不含氮)+60g/L蔗糖
培养基中;当总氮量为60mmol/L时,分别以
[-N03一]/[NH4+]为1.1:1、1.9:1、3:1的配比加
入MS(不含氮)+60g/L蔗糖培养基中,研究总氮
量和不同氮源(硝态氮和氨态氮)对微型块茎诱导形
成的影响,培养方式采用两步培养法。
每10d统计一次单株微型块茎数,诱导结束时
统计单株微型块茎数、块茎平均质量、平均直径和平
均长度,计算块茎指数(块茎指数=单瓶块茎个数×
块茎平均直径×块茎平均质量)。实验数据用z±s
表示,实验结果用SPSS软件进行统计分析,两组数
据比较采用t检验法,两组以上数据采用LSD法进
行多重比较。
2结果与讨论
2.1 培养方式对微型块茎诱导形成的影响:采用一
步培养法进行微型块茎诱导时,单茎节带叶茎段在
MS+30g/L蔗糖的培养基中培养20d左右有新芽
形成,40d时可形成高度为3-4cm的小植株,但植
为1.0个。茎段在MS+60g/L蔗糖的培养基中生长
至20d左右变黄,在培养过程中无新芽形成,培养
后期茎段变褐枯死,未能发育成小植株,无微型块茎
形成。茎段在MS+60g/L蔗糖+NAA0.5mg/L
的培养基中生长时,形成极少量新芽,且至培养后
期,茎段褐化严重,无微型块茎形成。90d时微型块
茎的形成情况见表1。
采用两步培养法进行微型块茎诱导时,单茎节
带叶茎段在繁殖培养基中生长30d后,形成株高5
cm左右的植株,将其转入3种诱导培养基中。在
MS+30g/L蔗糖的诱导培养基中,植株营养生长
较好,有大量新芽形成,10~20d即有微型块茎形
成;在MS十60g/L蔗糖的诱导培养基中,植株营养
生长好,叶大且绿,有大量新芽形成,10d以内即有
微型块茎形成;在MS+60g/L蔗糖+NAA0.5
mg/L的诱导培养基中,植株营养生长较好,10~20
d有微型块茎形成。在诱导培养基中培养60d时微
型块茎的形成情况见表1。诱导结束时,MS+60g/L
蔗糖培养基中单株微型块茎数为1.7个,微型块茎
的平均直径和长度分别为0.55cm和1.60cm,比其
他两种培养基中诱导效果好。山药的微型块茎有气
生(图1一A)和基生(图1一B)两种形成方式。
3种诱导培养基中单株微型块茎数、微型块茎
株较细弱,90d时可形成平均直径为0.40cm、平均 的平均直径和长度均显著优于一步培养法。故两步
长度为0.60cm的微型块茎,平均单株微型块茎数 培养法更适宜山药微型块茎的诱导形成。
表1培养方式对山药微型块茎诱导形成的影响
Table1 EffectofculturemethodoninductionofD.oppositam crotubers
表中1、2、3分别代表培养基为MS+30g/L蔗糖、MS+60g/L蔗糖、MS+60g/L蔗糖+NAA0.5mg/L。。和一分别表不每列
中数字相比P<0.05和P<0.01
Number1.2,and3 aboveindicatedme iumareMS+30g/Lsucrose,MS+60g/Lsucrose,MS+60g/Lsucrose+NAA0.5
mg/L一1.。and。。meanP<0.05andP
茎形成的数量与培养时间的关系见图2。
无论碳源种类如何,无糖的MS培养基中自始
至终无微型块茎形成。微型块茎最早形成时间随碳
源种类及质量浓度的不同而不同。同种碳源中,质量
A气生B-基生 篓度为60g乒.鬯形成最早。相同质量浓.度160g/}’
A-ln。i:昏i。。。diu。 时,蔗糖较白砂糖处理中微型块茎的形成时间提前。
圈1两步培养法诱导形成的山药微型块茎 微型块茎数量的大量增长期在碳源质量种类上无差
Fig.1D.oppositam crotubersinducedbytwo—stepway 异,仅随碳源质量浓度的不同而不同。整体而言,碳
2.2 碳源对微型块茎诱导形成的影响:将生长至 源为30、609/L时,在任一阶段,微型块茎数量的增
万方数据
·908· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月
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卷
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副
器
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10 20 30 40 50 60
10 20 30 40 50 60
培养时间/d
图2不同碳源处理中山药微型块茎数量与
培养时间的关系
Fig.2RelationshipbetweennumberofD.opposita
microtubersperplantletandculturetime
underdifferenttreatmentsofcarbonsource
长速度均高于90、120g/L处理中,且60g/L时数量
始终高于30g/L处理。
碳源对微型块茎的各项形态指标均有显著影
响。从表2可以看出:(1)无论碳源是蔗糖还是白砂
糖,单株微型块茎数在60g/L时效果最好,此质量
浓度下,白砂糖处理中数值高于蔗糖,但两者无显著
差异;(2)微型块茎的平均直径均在质量浓度为90
g/L时最大,此质量浓度下,白砂糖处理中数值高于
蔗糖,但两者无显著差异;(3)蔗糖处理中,微型块茎
的平均质量浓度在60g/L时最高;白砂糖处理中,
平均质量浓度在120g/L时最高。综上所述,无论蔗
糖还是白砂糖处理中,无糖时微型块茎均不能形成;
有糖时,碳源为60g/L时,微型块茎形成最早,单株
微型块茎数和块茎指数最高。故诱导山药微型块茎
形成的最佳碳源质量浓度为60g/L。此处,两种糖在
微型块茎形成中的效应差异并不明显,故白砂糖完
全可以替代蔗糖。
2.3氮源对微型块茎形成的影响:将生长至30d
的植株转接到不同的氮源中,微型块茎形成的数量
与培养时间的关系见图3。(1)当诱导培养基中
[-N03—3/[NH.+]为1.9l I,总氮量为30mmol/L
时,微型块茎形成最早(10d以内),总氮量为60、
120mmol/L时,微型块茎形成较晚(10~20d);整
个诱导期中,微型块茎的数量在不同总氮量处理中
均保持快速增长,大量增长期均为30~40d时;任
表2碳源对山药微型块茎形态指标的影响(60d)
Table2 EffectofcarbonsourceOnmorphologicalindexesofD.oppos打amicrotubers(60d)
一培养阶段,微型块茎数量均随着总氮量的升高而
降低,诱导结束时,总氮量为30mmol/L时形成的
微型块茎最多。(2)当诱导培养基中总氮量为60
mmol/L,无论[NO。一]/[NH。+]比值如何,微型块茎
最早均在10~20d形成;整个诱导期中,微型块茎
数量持续增长,大量形成期均在30一40d;任一培养
阶段,微型块茎数量均随着[-NO。一]/[NH.+]比值的
升高而增大,诱导结束时,ENO。一-I/ENH。+]为3:1
时,微型块茎的数量最多。
由表3可知,总氮量对单株微型块茎数和块茎指
数有显著影响。它们的值均在总氮量为30mmol/L
时最高,且均表现出随总氮量的升高而下降的趋势。
由表4可知,各处理间在对微型块茎平均质量、
平均直径和平均长度的影响上无显著差异。微型块
茎数和块茎指数均在[-NO。一]/ENH.+]为3:1时最
高,与其他两处理有显著差异,且这些指标均表现出
万方数据
中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月·909·
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10 20 30 4‘) 5U ∞
培养时间/d
圈3氮源处理中山药微型块茎数量与培养时间的关系
Fig.3RelationshipbetweennumberofD.opposita
mlcrotubersperplantletandculturetime
underdifferenttreatmentsof itrogensource
随着[NO。一]/[NH。+]比值的升高逐渐上升的趋势。
综上所述,不同氮源处理中,[NO。一3/[NH。+]
比值一定时,较低的总氮量有利于微型块茎的形成;
总氮量一定时,[-NO。一]/[NH.+]比值较高时有利于
微型块茎的形成。
3讨论
在植物贮藏器官的诱导中,根据培养目的的不
同,可采用单一固体培养、固液循环培养、固液双层
培养等多种培养方式。本实验利用两步培养法诱导
怀山药微型块茎形成,结果表明,在同样的诱导条件
下,两步培养法中单株微型块茎数、微型块茎的平均
直径和平均长度均显著高于一步培养法中。这与马
铃薯‘引、芋‘63以继代一定时间的植株为外植体诱导
贮藏器官形成取得较好效果的结论是相似的。
糖作为碳源,不仅为细胞提供合成新化合物的
碳骨架,更为其呼吸代谢提供底物与能源,而且还用
以维持一定的渗透势,调节试管苗对水分的吸收。本
实验结果表明,糖的质量浓度为60g/L时,微型块
茎数量最多且个体较大,这与多数植物贮藏器官形
成所要求的碳源浓度是一致的,即需要高质量浓度
的糖,但不宜过高。适宜质量浓度的碳源提供适合微
型块茎形成的渗透势,当碳源质量浓度过高时,培养
基中水势降低,植株吸水困难,生长速度减缓,故微
型块茎形成晚、数量少,且由于糖类分解大于合成,
衰3总氮量对山药微型块茎各项指标的影响(60d)
Table3 Effectof otalnitrogencontento differentindexesofD.oppositam crotubers(60d)
衰4[NO,一]/FNH.+]对山药微型块茎各项指标的影响(60d)
Table4 Effectof[N03一]/[NH.+]ondifferentindexesofD.oppositam crotubers(60d)
细胞中会积累较多的可溶性糖,形成较多花色素,故
实验发现糖质量浓度为90、120g/L时,植株叶片、
茎杆会发红。此外,蔗糖与自砂糖诱导效果的比较表
明白砂糖可以取代蔗糖,使生产成本大大降低,有利
于微型块茎的普及和推广。这与党玉丽等E5]在碳源
对马铃薯试管薯诱导的影响研究中结论是一致的。
氮在植物体内所占份量很小,但对植物生活有
着重要的作用,它是许多重要化合物的组成成分,参
与物质和能量的代谢等。植物的氮源主要是无机氮
’化物,而无机氮化物中又以铵盐和硝酸盐为主。本实
验结果表明,ENO。一]/[NH。+]一定时,较低的总氮
量有利于微型块茎的形成和发育;总氮量一定时,较
高的[NO。一]/[NH。+]有利于微型块茎的形成和发
育。较低的总氮量需求与Krauss[7]、徐向丽等[8]的报
道一致,但究竟是提高还是降低[-NO。一]/ENH.+]更
利于块茎形成,目前的报道还不尽相同,有人指出氮
素抑制块茎形成是由于使赤霉素类物质的活性提
高[93;也有报道推测可能是降低氮素的量特别是减
2
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万方数据
·910· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第6期2008年6月
少[NO。一]的量有利于营养物质向腋芽运输和转
化‘lo],从而更利于块茎形成。关于这方面的机制还
有待于进一步的研究。
通过本项研究,建立了一套山药微型块茎诱导
形成的培养程序,即将带芽茎段先在繁殖培养基中
培养一个月后,再转入含60g/L自砂糖或60g/L蔗
糖、总氮量为30mmol/L、[NO。一]/[NH。+]为3:1
的MS培养基中培养2个月,即可高频率地诱导微型
块茎的形成。该体系的建立为山药微型块茎的工厂
化生产奠定了技术基础。
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射干试管根茎诱导的研究
张耀华1,张慧英2’
(1.中北大学化工与环境学院中北大学图书馆,山西太原
,薛艳霞2
030051;2.广西大学农学院,广西南宁530004)
摘 要:目的 研究离体条件下射干试管根茎诱导的最适培养基。方法 利用植物组织培养技术,研究了碳源种类
和质量浓度,NAA质量浓度和活性炭对射干试管根茎诱导的影响。结果射干试管根茎诱导的最佳培养基是
MS+6一BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+白糖6%,培养基中不宜添加活性炭。试管根茎接人培养基MS+BA2.0
mg/L+白糖30A上.发芽率达61.03%。结论糖质量浓度是影响射干试管根茎诱导的主要因素。
关键词:射干;根茎;诱导
中图分类号:R282.1 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2008)06—0910—04
RhizomatousinductionofBelamcandachinensisinvitro
ZHANGYao—hual。ZHANGHui—yin92,XUEYan—xia2
(1.ChemicalIndustryandEcologyInstituteofNorthUniversityofChina,LibraryofNo thUniversityofChina,
Taiyuan030051,Chinal 2.CollegeofAgriculture,GuangxiUniversity,Nanning530004,China)
Abstract:ObjectiveTooptimizethemediumfor hizomatousind ctionofBelamcandachinensisin
vitro.MethodsByplanttissueculturetechnology,theeffectsofvariouscarbonsource,NAA,andactive
carbonatdifferentconcentrationon herhizomatousformationofB.chinensisinv trowerestudied.
ResultsMS+6一BA2.0mg/L+NAA0.5mg/L+6%whitesugarwastheoptimalediumfortherhiz—
omatousformationofB.chinensisinv tro.Activearbonshouldnotbeaddedtothemedium.The
germinationrateofrhizomatousinvitrowas61.03%ontheMS+BA2.0mg/L+3%whitesugar.
ConclusionSugarconcentrationiSthemainfactoroftheinfluenceo therhizomatousformationofB.
chinensisinv tro.
Keywords:Belamcandachinensis(L.)DC.;rhizome;induction
收稿日期:2007-10-09
作者简介:张耀华(1979一),男,山西省浮山县人,助教.2006年毕业于广西大学获硕士学位.现工作于中北大学,研究方向为生物工程
技术。 E—mail:zhangboy302@163.corn
*通讯作者张慧英E—mail:zhanghy955@sina.corn
Ⅲ
嘲
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Ⅲ
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万方数据
山药微型块茎诱导形成的影响因子研究
作者: 李明军, 刘欣英, 李萍, 张晓丽, 赵喜亭, 柳俊, 谢从华, LI Ming-jun, LIU
Xin-ying, LI Ping, ZHANG Xiao-li, ZHAO Xi-ting, LIU Jun, XIE Cong-hua
作者单位: 李明军,LI Ming-jun(华中农业大学园艺林学学院,园艺植物生物学教育部重点实验室,湖北
,武汉,430070;河南师范大学生命科学学院,河南,新乡,453007), 刘欣英,李萍,张晓丽,赵
喜亭,LIU Xin-ying,LI Ping,ZHANG Xiao-li,ZHAO Xi-ting(河南师范大学生命科学学院,河
南,新乡,453007), 柳俊,谢从华,LIU Jun,XIE Cong-hua(华中农业大学园艺林学学院,园艺
植物生物学教育部重点实验室,湖北,武汉,430070)
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2008,39(6)
被引用次数: 3次
参考文献(10条)
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本文读者也读过(10条)
1. 李明军.陈明霞.郭君丽.洪森荣.张晓丽.徐鑫.刘萍 生长调节物质和糖对怀山药微型块茎诱导形成的影响[期刊
论文]-华北农学报2004,19(3)
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9. 郭君丽.李明军.张嘉宝 光质和NAA组合对怀山药叶片脱分化的效应[期刊论文]-浙江万里学院学报2002,15(1)
10. 杨建勋.张恒瑜.蔺永平.吴林科.吴国平 土壤温度波动与马铃薯块茎发育的关系探讨[期刊论文]-陕西农业科学
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引证文献(3条)
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2.梁任繁.李创珍.张娟.何龙飞.韦本辉.甘秀芹.何虎翼 山药块茎发育中物质积累及相关代谢酶变化[期刊论文]-作
物学报 2011(5)
3.周志林.唐君.曹清河.赵冬兰.史新敏.杨峰 水山药“九斤黄”组织培养及微型块茎诱导[期刊论文]-福建农业学
报 2012(2)
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