全 文 ：·1364· 中草焉 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9月
[J]．Expert肋340lDiagn，2004，4(4)：549—557·
[z]李翘英．抗癌中药新型给药系统的研究及展望[J]．中医药
学报，2001，29(6)：31-33．
Is]BeekmauAC，WoerdenbagHJ。VanUdenW，盯a1．
Stabilityofartemisinininaqueousenvironments：impact011
itscytotoxicactiontoEhrlichascitesturaourcells[J]．
PharfnPharmacd，1997，49(12)：1254—1258．
[43SinghNP，LaiHC．Synergisticeytotoxicityofar emisinin
andsodiumbutyrateonhumancancercellsD]．Anticancer
Res，2005，(6B)：4325—4331．
[53樊蝾，谢红，杨磊，等．青蒿索及其衍生物抑制K562
细胞生长作用比较[J]．武警医学院学报，2006，15(3)t
199—201．
[53CrowtherDJ．Applicationsofmicroarraysinthepharma—
ceuticalindustry[J]．CurtOpinPharmacol，2002，2(5)；
551．554．
NambiarS，MirmohammadsadeghA，BarA， ta1．Appli—
cationsfarraytechnology：melanomarese rchdi gnosis
[J]．ExpertR月MolDiagn，2004，4(4)：549—557·
EfferthT．DunstanH，SauerbreyA， ta／．Theanti—
malarialartesunateisalsoactiveagainstcancer[J]．Int
Oneol，2001，18(4)：767—773．
ZhouZ，FengY．Artesunatereducesproliferation，interferes
DNAreplicationndcellcycleandenhancesapoptosisin
vascularsmoothmusclec lls[J]．JHuazhongUnivSci
T“hnol(MedSci)，2005．25(2)l13 —136．
WuGD，ZhouHJ，WuXH．Apoptosisofhumanumbilical
veinendothelialce lsinducedbyartesunate[J]．Vascul
Pharmacol，2004，41(6)：205-212．
EfferthT，SauerbreyA，Olbrich，eta1．Molecularmodesof
actionofartesunateinyumorcellines[J]．MolPharmacol，
2003．64(Z)：382—394．
野西瓜多糖诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究
季宇彬1’2，东 方h2，高世勇1’2，邹翔1’2
(1．哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心药物研究所博士后科研工作站，黑龙江哈尔滨150076}
2．国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心，黑龙江哈尔滨 150076)
摘 要：目的 观察野西瓜多糖诱导人肺癌HepG2细胞凋亡作用。方法通过MTT法测定野西瓜多糖对HepG2
细胞的细胞毒作用；倒置显微镜观察野西瓜多糖对HepG2细胞形态的影响；AO／EB双染，激光共聚焦扫描显微镜
观察野西瓜多糖对HepG2细胞形态的影响,PI染色法，流式细胞术检测细胞凋亡率。结果MTT结果显示野西
瓜多糖对HepG2细胞有抑制作用，IC50为471．53mg／L；倒置显微镜、激光共聚焦扫描显微镜下观察细胞形态，表
现为细胞皱缩、碎裂、甚至出现凋亡小体；流式细胞术检测到野西瓜高剂量组凋亡率为74．926％。结论野西瓜多
糖具有诱导HepG2细胞凋亡的作用。
关键词：野西瓜多糖；HepG2细胞；凋亡
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)09—1364—04
ApoptosisinducedbyCapparisspionosapoIysaccharideinhumanHepG2
JIYu—binl”，DONGFan91”，GAOShi—yon91”，ZOUXian91’2
(1．PostdoctoralRese rchStationofInstituteofMateriaMediea，ResearchCenterofLifeScienceandEnvironmentSci ce，
HarbinUniversityofCommerce，Harbin150076，China，2．EngineeringResearchC nter
ofNaturalAnticancerDrugs，MinistryofEducation，Harbin150076，China)
Abstract：ObjectiveToinvestigatetheapoptosisfCappaHsspionosapolysaccharide(CSPS)on
humanHeDG2．MethodsMTTwasadoptedodetermineifCSPShadcytotoxiceffecttoHepG2．The
alterationofHepG2
7
smorphologywasobservedbyinvertmicroscope．MorphologyofHepG2changed
withdosageofCSPSwasdetectedbyAO／EBandlaserconfocalscanningmicroscope．Flowcytometry
(FCM)wasusedtodetecttheapoptosisindexwithPIlabelingmethod．ResultsTheresultofMTT
showedthatCSPScouldinhibitthegrowthofHepG2，IC50was471．53mg／L；Themorphologyofeellwas
observedbyinvertmicroscopeandlaserconfocalscanningmicroscopeincellcollapsed，breaktopieces，
evenappearanceofapoptosisbody．Theapoptosisrateinhighdosegroupwas74。926oA，detectedby
FCM．ConclusionThisc nsequenceindi atesthatCSPScouldinducehumanHepG2apoptosis．
Keywords：Cappariss ionosaL．polysaccharide(CSPS)；HepG2；apoptosis
收稿日期：2008—04—25
基金项目：黑龙江省研究生创新科研项目(YJSCX2008—185HLJ)，黑龙江省自然科学基金项目(D200610)
作者简介：季字彬(1956一)，男．博士，教授，博士生导师，研究方向为肿瘤药理学。
刁
叮
妇
叮
q
[
[
[
口
n
万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9月·1365·
野西瓜Capparissp nosaL．为白花菜科山柑仔
属植物，又称刺山柑、老鼠瓜、瓜儿菜、褪果藤、菠里
克果等，其叶、果、根皮均可入药，具有祛风、除湿、通
鼻窍、散瘀消肿、止痛活血之功效；外敷患处治风湿
性关节炎和疮毒。化学研究发现，野西瓜含有多种活
性成分：挥发油、糖配基、葡萄糖异硫氰酸盐、生物碱
等口]。现代药理学研究表明，野西瓜具有杀虫、抗菌、
抗炎、抗氧化、保肝、降血糖、调血脂等作用，野西瓜
多糖是其有效成分之一。近年来，越来越多的研究表
明许多植物多糖具有良好的抗肿瘤作用[2叫]。本实
验先通过MTT法证实野西瓜多糖可以抑制人肝癌
HepG2细胞的生长，然后应用倒置显微镜、激光共
聚焦显微镜、流式细胞仪等仪器观察野西瓜多糖对
HepG2肿瘤细胞凋亡的诱导作用，为其抗肿瘤作用
提供依据。
1实验材料
1．1 细胞与药物：HepG2人肝癌细胞株(黑龙江
省肿瘤医院肿瘤研究所)；阿霉素(浙江海正药业股
份有限公司)；野西瓜多糖(新疆万邦生物科技有限
公司，质量分数为66．42％)。
1．2 试剂与仪器：RPMI一1640细胞培养基
(HyCLoneLaboratories公司)，胎牛血清(杭州四
季青生物工程材料有限公司)，胰酶(Gibio公司)，噻
唑蓝(MTT，美国MolecularProbe公司)；激光共聚
焦扫描显微镜(德国Leiea公司)，COz培养箱(美国
NBS公司)，倒置显微镜(日本Olympus)，超净工作
台(中国苏州苏净集团公司)，流式细胞仪FACS—
Calibur(美国Beckman—Coulter公司)。
2方法
2．1 细胞培养：HepG2细胞培养于含10％胎牛血
清的RPMI一1640培养液中，置C02培养箱(37℃，
5％CO：条件下培养，相对湿度95％)培养，每2～3
d传代1次，取对数生长期细胞进行实验。
2．2 MTT法测定肿瘤细胞的抑制率：将对数生长
期的细胞用胰酶消化后配制成浓度为1×104／mL
的细胞悬液，按1000个／孔接种于96孔板，每孔加
100弘L。次日加入野西瓜多糖(终质量浓度分别为
1、10、100、100mg／mL)、阿霉素(终质量浓度分
别为0．01、0．1、1、10mg／mL)，阴性对照组加入
RMPI一1640培养液，每孔加100pL，每组设6个平
行孔，给药后于37℃继续培养72h，弃上清液，每
孔加lOOpL新鲜配制的含0．5mg／mLMTT的无
血清培养基，继续培养4h，弃上清液，每孔加200
肛LDMSO溶解，用微型振荡器振荡混匀，用MK3
型酶标仪在参考波长490nm，检测波长570nm条
件下测定吸光度(A)值，以溶剂对照处理的肿瘤细
胞为对照组，计算药物对肿瘤细胞的抑制率，并按中
效方程计算IC。。[5]。实验重复3次。
‘
抑制率=(1一给药组A值／对照组A值)×100％
2．3分组与给药：分为5组，分别为：阴性对照组，
加入等量的RPMI一1640细胞培养液；阳性对照组，
lOg／L阿霉素加入对照组细胞，终质量浓度为
5mg／L；实验组，野西瓜多糖加入各组细胞，终质量
浓度分别为100、500、100mg／L。
2．4倒置显微镜观察HepG2细胞形态学：取对数
生长期的肿瘤细胞，加入适量0．25％胰蛋白酶液
消化细胞，使贴壁细胞脱落。用含10％胎牛血清的
培养基制备成浓度为3×105／mL的细胞悬液，接种
于5mL培养瓶中。将培养瓶置于37℃、5％CO：培
养箱，24h后加入不同质量浓度的野西瓜多糖，阳
性对照组加入阿霉素，阴性对照组加入相同体积的
培养液，48h后置于倒置显微镜下观察，拍照。实验
重复3次。
2．5激光共聚焦扫描显微镜检测：取对数生长期
HepG2细胞，调整细胞浓度为5×104／mL，加入
5mL培养瓶中，培养24h使之贴壁，24h后加入
不同质量浓度的野西瓜多糖，阳性对照组加入阿霉
素，阴性对照组加入相同体积的培养液，继续培养
48h，培养终止，用0．25％的胰酶消化成细胞悬液，
1 000r／min离心5min，弃上层液，95弘LPBS混匀
细胞，加吖啶橙(AO)／溴化乙啶(EB)染液(100
ttg／mLAO和100tlg／mLEB，用PBS配制)5弘L
进行双染，使终质量浓度为5t-g／mL，37℃下孵育
5～10min，30min之内激光共聚焦扫描显微镜下
观察细胞形态，测定采用双通道激发，PMTl(AO)
激发波长488nm，发射波长500～520nm；PMT2
(EB)激发波长543nm，发射波长600一--700nm[6]，
PinhoLe<1．5。
2．6 流式细胞术观察细胞凋亡；给药组及对照组细
胞胰酶消化，加PBS1000r／rain离心3min洗细
胞2次，弃上清液，沉淀用PBS溶解，调整细胞浓度
至1×106／mL；加70％冷乙醇固定，4℃放置过夜
(固定时间大于12h)。检测前离心除去乙醇，PBS
洗2次，加1g／LRNaseA(核糖核酸酶A，Sigma)
200弘L，37℃水浴消化细胞30min；力Ⅱ800pLPI
染液(100mg／LPI，1％TritonX-100，9g／L
NaCI)混匀，4℃避光染色30min；流式细胞仪进
行检测，激发光波长为488nm[7]。实验重复3次。
万方数据
·1366· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9月
2．7 统计学处理：数据以z士s表示，采用SPSS
11．5软件进行统计。
3结果
3．1 MTT法测定肿瘤细胞的抑制率：MTT实验
结果表明，随着剂量增大，野西瓜多糖对HepG2细
胞的抑制作用增强，野西瓜多糖及阿霉素处理
HepG2细胞72h的IC5。值分别为471．53mg／L及
52pg／L。
3．2倒置显微镜观察结果：在倒置显微镜下可以看
到，阴性对照组细胞排列紧密，细胞呈菱形；阳性对
照组细胞数量明显减少，细胞不规则；野西瓜多糖组
细胞随着剂量增大，细胞数量和形态呈明显变化，数
量由多至少，形态由菱形至圆形。结果见图1。
3．3激光共聚焦扫描显微镜检测结果：用荧光染料
AO和EB对细胞染色后，用激光共聚焦扫描显微
镜对野西瓜多糖作用的HepG2细胞进行形态学观
察，从图2可以看到，阴性对照组细胞形态规则，着
色均匀，外形较圆，能够被AO染色发出绿色荧光，
而不能够被EB染色；阳性对照组细胞出现了凋亡
小体；野西瓜多糖低剂量组细胞通透性增大，颜色为
黄绿色，有少量细胞出现微弱的皱缩，抱团现象；野
西瓜多糖中剂量组细胞形态呈明显的固缩状，部分
细胞核出现碎片和凋亡小体；野西瓜多糖高剂量组
细胞出现大量凋亡小体。
图1 倒置显微镜观察野西瓜多糖作用HepG2细胞48h后形态学变化
Fig．1MorphologicalchangesofHepG2cellstreatedwithCSPSfor48hobservedbyinvertmicroscope
图2激光共聚焦检测野西瓜多糖作用HepG2细胞48h结果
Fig．2ConfocalresultofHepG2cellstreatedwithCSPSfor48h
万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第9期2008年9月·1367·
3．4流式细胞术观察细胞凋亡结果：野西瓜多糖作
用于HepG2细胞48h后，肿瘤细胞有明显的凋亡
峰出现，细胞凋亡随着药物剂量增加而增加，凋亡率
由(6．84士0．31)％上升至(23．26士1．25)％，说明
野西瓜多糖对HepG2的抑制作用与诱导细胞凋亡
有关，见表1。
寰1野西瓜多糖对HepG2细胞凋亡的影响(；士s，n一3)
Table1 EffectofCSPSOilapoptosisfHepG2
cells(；士j，尼=3)
DNA，发橘红色荧光，所以在激光共聚焦扫描显微
镜下观察可见不同的细胞形态。野西瓜多糖低剂量
组细胞通透性增大，颜色为黄绿色，有少量细胞出现
微弱的皱缩，抱团现象；野西瓜多糖中剂量组细胞形
态呈明显的固缩状，部分细胞核出现碎片和凋亡小
体；野西瓜多糖高剂量组细胞出现大量凋亡小体。采
用PI染色法，流式细胞术检测细胞凋亡率，野西瓜
多糖高剂量时，细胞凋亡率为74．926％。结果表明，
野西瓜多糖具有诱导HepG2肿瘤细胞凋亡的作
用。本研究提示野西瓜多糖的抗肿瘤作用及构效关
系值得进一步探讨。
参考文献：
[1]季宇彬，郭守东，汲晨峰．野西瓜的化学和药理研究口]．哈
尔滨商业大学学报；自然科学版．2006，22(1)：5-8．
与阴性对照组比较：一P
4讨论 掣发kid”口1加删。s舯一m以2004’34Qh
近几年，随着对植物多糖的研究越来越深入，多 [33TrombettaD，OcchiutoF．Ant allergicandantihistamin
糖新的药理作用也不断发现。其中，多糖抗肿瘤作用 眷‘：：Z焉：：蒜￡篙翟篙写i
Ln。””8bud8
机制也有新的发现，曾经认为多糖的抗肿瘤机制主 F4]赵圆，尚德静．多糖诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展
要是提高机体免疫功能[8]，但越来越多的实验表明 [J]·中华肿瘤防治杂志，2006，13(6)：472—474·
多糖也具有细胞毒作用，可以诱导细胞凋亡‰loI。 邸1翟的篓：瓣J’]亍；言；雾筹之麓用29及(9体)笼爨要?
本实验以野西瓜多糖作用于HepG2细胞，通[6]BernasT，A emEK，Robin80nJ P，甜吐Co。focal
过MTT法验证野西瓜多糖对HepG2细胞的生长fluorescenceimagingofphotosensitizedDNAdenaturationin
有抑制作用，IC。。为471．53mg／L。倒置显微镜下观 [，]裂嚣掣?3Z篙罢警警?絮耄嚣薰警≥，鬻誓：
察到野西瓜多糖作用于HepG2细胞48h后细胞形 亡的研究YJ]．中国医科大学学报．2006，35(2)：134—136．
态发生变化，细胞形态由菱形变圆形；采用AO／EB 凹1主毒喜蒜用台]●当嚣气．o罢支妻嚣哿翟￡曼尊疗的
双染染色法，激光共聚焦扫描显微镜检测到HepG2[9]季宇彬，高世勇，张秀娟．羊栖菜多糖体外抗肿瘤作用及其诱
肿瘤细胞形态，因为吖啶橙(Ao)能透过胞膜完整 导肿瘤细胞凋亡的研究[J]．中草药，2003，34(7)：65—67·
的细胞，嵌入细胞核DNA，使之发出明亮的绿色荧 口叩篓能翟磊高j喜票裹击呈羹耄摹嚣麓鬈并墨差细2胞00膜5,
光，溴乙锭(EB)仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核 21(1)：11—13．
《现代药物与临床》征稿启事
(原名《国外医药·植物药分册》)
经国家新闻出版管理部门批准，从2009年开始由天津药物研究院和中国药学会共同主办的国家级科技期刊《国外医
药·植物药分册》更名为《现代药物与临床》(新刊号为CNl2—1407／R)。《现代药物与临床》杂志将继续关注国内外的植物药发
展，同时拓展生物医药、化学药和现代中药领域的新成果，将药物研究与临床用药结合起来，为广大读者服务。
《现代药物与临床》杂志的办刊宗旨为：主要报道国内外有关现代药物研究的新进展与新技术，以及现代药物在临床应用
方面的最新动态，以科学性、实用性为导向，为从事药物生产、研究和管理的人员提供启迪与帮助，为临床医生与药荆师合理
用药提供有益的参考。
《现代药物与临床》杂志将继续保留原来《国外医药·植物药分册》杂志的“综述与编译”、“市场信息”、。研究动态”、“植物
药专利摘要”等特色栏目I同时增加现代药物研究与临床方面实验文章的报道，开辟涉及新药研究、药物相互作用、临床用药、
药事管理等新栏目。
《现代药物与临床》杂志的读者对象为：在大专院校、科研院所、制药企业、医院、药品检验与监督等单位从事现代药物生
产、研究、临床应用和管理的工作人员，以及各级医师、药师等。
欢迎广大读者踊跃订阅，欢迎广大作者积极投稿。本刊白办发行，请直接与编辑部订阅。
《现代药物与临床》编辑部 地址：天津市鞍山西道308号 邮编：300193电话：(022)23006823
传真：(022)27381305网址：WWW．TJIPR．corn电子信箱：mordenpharm@163．COrn
开户银行：天津市工商银行南门外支行 帐号：0302070109009716502
万方数据
野西瓜多糖诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的实验研究
作者： 季宇彬， 东方， 高世勇， 邹翔， JI Yu-bin， DONG Fang， GAO Shi-yong， ZOU Xiang
作者单位： 哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心药物研究所博士后科研工作站,黑龙江,哈尔滨
,150076;国家教育部抗肿瘤天然药物工程研究中心,黑龙江,哈尔滨,150076
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(9)
被引用次数： 4次
参考文献(10条)
1.季宇彬;郭守东;汲晨峰 野西瓜的化学和药理研究[期刊论文]-哈尔滨商业大学学报(自然科学版) 2006(01)
2.Sa A;Hf A Induced changes in bio-chemical parameters of the Molluscan tissues non-infected using
tWO potent plant smolluscicides 2004(02)
3.Trombetta D;Occhiuto F Antiallergic and antihistamin effect of two extracts of CappaHs spinosa
L.flowering buds[外文期刊] 2005(01)
4.赵圆;尚德静 多糖诱导肿瘤细胞凋亡机制的研究进展[期刊论文]-中华肿瘤防治杂志 2006(06)
5.刘薇;林文翰;季宇彬 青龙衣毒性作用及体外抗肿瘤作用的实验研究[期刊论文]-中国中药杂志 2004(09)
6.Bernas T;Asem E K;Robinson J P Confocal fluorescence imaging of photosensitized DNA denaturation
in cell nuclei[外文期刊] 2005(04)
7.张晓晶;王娃;刘云鹏 紫杉醇诱导黑色素瘤细胞凋亡的研究[期刊论文]-中国医科大学学报 2006(02)
8.马岩;张锐;于小风 黄蘑多糖对荷瘤小鼠化疗的减毒增效作用[期刊论文]-中草药 2006(08)
9.季宇彬;高世勇;张秀娟 羊栖菜多糖体外抗肿瘤作用及其诱导肿瘤细胞凋亡的研究[期刊论文]-中草药 2003(07)
10.邹翔;孙宇;王宏亮 芦荟多糖对荷瘤小鼠肿瘤细胞膜功能的影响[期刊论文]-哈尔滨商业大学学报(自然科学版)
2005(01)
本文读者也读过(10条)
1. 凌娜.于蕾.邹翔.季宇彬.LING Na.YU Lei.ZOU Xiang.JI Yu-bin 野西瓜挥发油对人胃癌SGC-7901细胞的抑制
[期刊论文]-哈尔滨商业大学学报（自然科学版）2010,26(4)
2. 庞琳琳.于蕾.杨海帆.刘光达.李海娇.季宇彬.PANG Lin-lin.YU Lei.YANG Hai-fan.LIU Guang-da.LI Hai-jiao
.JI Yu-bin 野西瓜水溶性生物碱抑制HepG-2增殖作用[期刊论文]-哈尔滨商业大学学报（自然科学版）2009,25(4)
3. 季宇彬.莫科.于蕾.王崴.崔荣田.JI Yu-bin.MO Ke.YU Lei.WANG Wei.CUI Rong-tian 野西瓜总生物碱诱导SGC-
7901凋亡机制的研究[期刊论文]-哈尔滨商业大学学报（自然科学版）2009,25(1)
4. 崔荣田.于蕾.王崴.莫科.邹翔.CUI Rong-tian.YU Lei.WANG Wei.MO Ke.ZOU Xiang 野西瓜总皂苷诱导SGC-
7901凋亡的初步研究[期刊论文]-哈尔滨商业大学学报（自然科学版）2008,24(6)
5. 季宇彬.于蕾.王崴.邹翔.JI Yu-Bin.Yu Lei.WANG Wei.ZOU Xiang 野西瓜挥发油对HepG-2细胞线粒体膜电位和
Ca2+浓度的影响[期刊论文]-中国天然药物2008,6(6)
6. 姜薇.林文翰.郭守东.JIANG Wei.LIN Wen-Han.GUO Shou-dong 野西瓜果实的化学成分研究[期刊论文]-哈尔滨
商业大学学报（自然科学版）2005,21(6)
7. 季宇彬.郭守东.汲晨锋.JI Yu-bin.GUO Shou-dong.JI Chen-feng 野西瓜的化学和药理研究[期刊论文]-哈尔滨
商业大学学报（自然科学版）2006,22(1)
8. 吴霞.叶蕴华.周亚伟 维药野西瓜化学成分的研究[期刊论文]-中国实验方剂学杂志2010,16(6)
9. 季宇彬.郭守东.汲晨锋.JI Yu-bin.GUO Shou-dong.JI Chen-feng 野西瓜成熟果实中多糖的含量测定及毛细管
电泳分析[期刊论文]-中国药学杂志2006,41(15)
10. 宋劲.唐红忠.邓珺 浅谈如何判定云状[期刊论文]-贵州气象2010,34(z1)
引证文献(4条)
1.季宇彬.王崴.于蕾.崔荣田.莫科.邹翔 野西瓜挥发油抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖的研究[期刊论文]-中草药
2009(1)
2.于蕾.莫科.王崴.崔荣田.邹翔.季宇彬 野西瓜总生物碱诱导HepG2细胞凋亡与[Ca~(2+)]_i变化的相关性[期刊论
文]-中草药 2009(2)
3.于蕾.贺春朋.张小敏.于娜.谢乐琼 野西瓜化学成分提取分离及抗氧化活性测定[期刊论文]-哈尔滨商业大学学报
(自然科学版) 2011(4)
4.季宇彬.袁会成.高世勇.孙海波 龙葵多糖细胞毒活性物质基础研究[期刊论文]-中草药 2011(11)
本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200809028.aspx