全 文 ：2 5 2 线性关系考察:取对照品溶液, 依次进样 2、
4、6、8、10、15 L。按上述色谱条件进行 HPLC 分
析,以峰面积对进样量进行回归, 得儿茶素、表儿茶
素和没食子酸线性回归方程及线性范围分别为Y=
192 718X - 98 059 ( r 2 = 0 991 3) , 0 52~ 3 9 g;
Y= 14 534 X- 2 1491 ( r2= 0996 2) , 048~ 3 6 g;
Y= 349 708 X- 23 043 ( r
2
= 0998 1) , 04~ 3 g。
2 5 3 精密度试验:取对照品溶液各 10 L, 按给
定色谱条件重复进样 6次,儿茶素、表儿茶素和没食
子酸的峰面积 RSD分别为 1 6%、1 8%、1 4%。
2 5 4 重现性试验: 取同一批次的样品 ( 批号
20090316) 6份, 按供试品溶液的制备方法制备, 在
所选色谱条件下测定,结果儿茶素、表儿茶素和没食
子酸质量分数的 RSD分别为 2 3%、1 7%、2 2%。
2 5 5 稳定性试验: 将批号 20090316 同一份样品
制备供试品溶液, 分别在 1、2、4、8、12、16 h进样 10
L, 测定其峰面积, 结果儿茶素、表儿茶素和没食子
酸的 RSD值分别为 1 6%、2 0%、2 2%。
2 5 6 加样回收率试验: 精密称取批号 20090316
复方儿茶止泻膜剂约 0 12 g ,共 6份, 精密称定, 分
别加入儿茶素、表儿茶素和没食子酸对照品 1 57、
1 54、1 24 mg, 按供试品溶液制备方法处理并测
定,计算回收率,结果儿茶素平均回收率为 97 5% ,
RSD为 1 5%; 表儿茶素平均回收率为 98 4% ,
RSD为 1 3%; 没食子酸平均回收率为 102 3% ,
RSD为 0 7%。
2 6 样品测定:取 3 批复方儿茶止泻膜剂, 按供试
品溶液的制备方法制备, 每批取 3份,依给定色谱条
件测定,外标法计算,结果见表 1。
3 讨论
儿茶素、表儿茶素易溶于水和醇,根据其溶解性
分别以水、甲醇水( 1 1)、甲醇为提取溶剂进行试
表 1 复方儿茶止泻膜剂中儿茶素、表儿茶素和没食子酸的
测定结果( n= 3)
Table 1 Determination of catechin, epicatechin,
and gallic acid in Compound Ercha
Antidiarrheal Membranes ( n= 3)
批 号
儿茶素
质量分数/
( mg g- 1)
RSD/
%
表儿茶素
质量分数/
( mg g - 1)
RSD/
%
没食子酸
质量分数/
( mg g - 1)
RSD/
%
20090316 12 3 2 4 12 2 2 6 9 6 2 5
20090401 11 6 1 9 11 8 2 2 9 4 2 0
20090412 12 0 2 1 11 6 1 6 9 3 2 8
验,测得质量分数在甲醇水( 1 1)中最高, 而且以
水为提取溶剂很难滤过,以甲醇为溶剂提取率较低,
因此选择甲醇水( 1 1)为提取溶剂。又考察了超
声提取 15、30、45 m in 对提取率的影响, 结果表明,
超声提取 30 m in 质量分数达最高,超声提取30 min
以上,儿茶素和表儿茶素质量分数反而降低,可能因
为儿茶素和表儿茶素属于可缩合鞣质, 长期高温状
态下在方中不稳定, 可能脱水缩合形成大分子化合
物鞣红。
色谱系统曾考察以不同比例甲醇磷酸盐为流动
相,但儿茶素和表儿茶素峰形不对称,且与邻近峰分
离不好。后尝试多种溶剂系统,最终确定以乙腈50
mmol/ L 磷酸二氢钾为流动相得到满意分离结果。
参考文献:
[ 1] 谢世荣,高 明,孙长滨,等 复方儿茶水提液的毒理学研究
[ J] 大连医科大学学报, 2006, 28( 4) : 282283
[ 2] 谢世荣,高 明,韩再虹,等 复方儿茶水提液的抗腹泻和抗炎
效应[ J] 中国临床康复, 2006, 10( 35) : 6971
[ 3] 王夏青,於洪建,赵余庆 干红葡萄酒中儿茶素、表儿茶素、白
藜芦醇和原花青素的测定[ J] 中草药, 2009, 40( 5) : 745747
[ 4] 袁倬斌,李向军 毛细管电泳安培检测法测定儿茶中的儿茶
素,表儿茶素[ J] 分析试验室, 2003, 22(增刊) : 109111
[ 5] 顿 珠,刘 青,索朗其美,等 HPLC法测定余甘子膏中没食
子酸[ J] 中草药, 2010, 41( 9) : 14771478
[ 6] 刘起中,张可可 HPLC法测定五倍子中没食子酸的含量[ J]
中草药, 2002, 33(5) : 427
HPLC法测定地黄及含地黄成药中寡糖
邱建国, 张汝学,贾正平* ,李茂星,王娅娣,樊鹏程
收稿日期: 20100210
基金项目:国家自然科学基金资助项目( 30672643, 30472186, 30772773)
* 通讯作者 贾正平 T el: ( 0931) 8994652 Email: jiazp166@ sina com
(兰州军区兰州总医院 药材科,甘肃 兰州 730050)
摘 要:目的 考察不同产地、不同中成药中生地黄、熟地黄所含地黄寡糖。方法 采用 NH 2硅胶色谱柱分离, 示
差折光检测器检测,高效液相色谱法测定地黄寡糖。结果 产地不同,生地黄、熟地黄中的地黄寡糖成分、量不同;
1997 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
不同中成药中含有的地黄寡糖成分、量也不同。结论 本方法操作简便、准确、快速、干扰少, 适用于生地黄、熟地
黄及不同中成药中地黄寡糖的测定。
关键词:生地黄; 熟地黄;中成药; 寡糖;高效液相色谱
中图分类号: R286 02 文献标识码: B 文章编号: 0253 2670( 2010) 12 1997 04
地黄为玄参科植物地黄 R ehmannia glutinosa
Libosch.的新鲜或干燥块根。本课题组多年来对地
黄的降血糖机制进行了研究, 发现其调节血糖的主
要成分是地黄寡糖。地黄寡糖含有楝二糖、蔗糖、棉
子糖、水苏糖、甘露三糖、毛蕊四糖、毛蕊糖等, 其中
生地黄中水苏糖的量最高, 熟地黄中甘露三糖的量
最高。!中国药典∀2010年版一部收载的含有地黄、
熟地黄的不同剂型中成药 (浓缩丸、蜜丸、胶囊、膏
剂、片剂)有 90多个,但是都没有对其中寡糖进行测
定。本课题组对不同剂型,且以六味地黄丸为主, 对
不同厂家、批次进行了考察;地黄的产地很多, 其中
河南是其道地药材产地, 产地不同,生地黄中寡糖成
分、量不同;熟地黄炮制程度对地黄寡糖成分、量影
响很大。所以本课题组对不同产地地黄及含有地黄
成药中寡糖进行研究, 为进一步研究影响地黄寡糖
成分、量的因素奠定一定的基础。
1 仪器与材料
SCL # 6A 高效液相色谱仪、Shimadzu RID #
6A 示差折光检测器(日本) ,分析之星色谱工作站,
MET TLER AE240电子分析天平(瑞典)。
地黄对照药材(中国药品生物制品检定所,批号
1180200001) ,生地黄来自河南新乡、西峡、三门峡、
温县、淮阳以及甘肃庆阳、清水、金崖、大康营, 熟地
黄为相应生地黄经过本课题组炮制。
棉子糖 (西安舟鼎国生物技术有限公司, 批号
X08D10MZT ) , 甘 露 三 糖 ( P roduct of Sigma
Aldrich, 批号 1450717) , 水苏糖 ( United Kingdom
批号 065K3775GAS10094583)。龙胆泻肝丸 (水
丸,北京同仁堂制药有限公司,批号 9083006) , 六味
地黄丸 (浓缩丸, 九芝堂股份有限公司, 批号
200903018) ,六味地黄丸(大蜜丸, 兰州佛慈制药有
限公司,批号 20082) , 六味地黄胶囊(北京云大药业
有限公司,批号 080501) ,妇科十味片(山西亚宝药
业集团股份有限公司,批号 081101) , 其他试剂均为
分析纯,水为重蒸水。
2 方法与结果
2 1 色谱条件 [ 12] : 色谱柱为 Phenomenex NH 2 柱
( 150 mm ∃ 4 6 mm, 5 m) (美国) , 检测器为 Shi
madzu RID # 6A 示差折光检测器, 流动相为乙腈
水( 7228) ,体积流量: 1 0 mL/ min,柱温为室温。
2 2 对照品溶液的制备: 精密称取棉子糖、甘露三
糖、水苏糖对照品适量, 分别配制成质量浓度为
17 2、17 6、17 1 mg / mL 混合对照品溶液。
2 3 供试品溶液的制备:分别称取不同产地熟地黄
0 5 g ,精密称定, 加水 9 mL, 超声提取 30 m in, 放
冷,用水定容至 10 mL, 取 1 mL, 8 000 r/ m in 离心
15 m in,上清液 0 45 m 滤过, 得滤液,即得, 备用。
2 4 线性关系考察: 取适量对照品溶液,分别进样
3、5、10、15、20、25、30 L,由峰面积对质量浓度求得
工作曲线,得回归方程。棉子糖: A = 5 60 ∃ 105 C+
1 15 ∃ 106 , R 2= 0 995 3,线性范围: 51 6~ 516 mg/
mL;甘露三糖: A = 5 58 ∃ 105 C+ 1 22 ∃ 106 , R2 =
0 991 4, 线性范围: 52 8 ~ 528 mg/ mL; 水苏糖:
A = 3 05 ∃ 107 C+ 7 99 ∃ 105 , R2 = 0 997 9,线性范
围: 51 3~ 513 mg/ mL。
2 5 精密度试验:取熟地黄(河南新乡)同一供试品
溶液,分别连续进样 6 次, 测定峰面积, 计算得棉子
糖、甘露三糖、水苏糖峰面积的 RSD 分别为
1 94%、0 83%、0 91%。
2 6 稳定性试验:取同一熟地黄(河南新乡)供试品
溶液,放置室温, 在同 1 d内每隔 2 h 测定, 连续考
察 8 h,测定峰面积, 计算得棉子糖峰、甘露三糖峰、
水苏糖峰面积的 RSD 分别为 0 99%、1 12%、
1 66%。
2 7 重现性试验: 取同一批熟地黄(河南新乡) 6
份,制备供试品溶液,分别进样测定并计算,结果熟
地黄中棉子糖平均质量分数为 7 6 mg/ g, RSD 为
2 58% ;甘露三糖平均质量分数为 119 1 mg / g,
RSD为 2 61% ;水苏糖平均质量分数为 87 5 mg/ g,
RSD为 2 65%。
2 8 加样回收率试验:取同一批熟地黄(河南新乡)
样品 6份, 分别精密称取 0 15 g (约相当于棉子糖
1 14 mg, 甘露三糖 17 87 mg , 水苏糖 12 12 mg ) ,
分别精密加入对照品溶液(棉子糖、甘露三糖、水苏
糖质量浓度分别为6、5、30 mg / mL) 1 mL,制备供试
品溶液,进样测定,结果棉子糖、甘露三糖、水苏糖平
均回收率分别为 99 86%、99 35%、100 32%, RSD
分别为 2 32%、2 86%、3 16%。
2 9 寡糖的测定 [ 3]
2 9 1 不同产地生地黄、熟地黄供试品溶液的制备
1998 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
及测定:分别称取不同产地生地黄、熟地黄各 0 5 g,
精密称定,加水 9 mL,超声提取30 min,放冷,用水定
容至 10 mL,取 1 mL, 8 000 r/ min离心 15 min,上清
液0 45 m 微孔滤膜滤过,滤液作为供试品溶液。按
照色谱条件进行测定,结果见图 1、表 1。可以看出熟
地黄中甘露三糖相对较高,但是差异较大;水苏糖量
相对较低,差异也较大;棉子糖量较低,有的熟地黄不
含。生地黄中水苏糖量最高, 产地不同,有所差异,河
南产的生地黄普遍较高,甘肃产的生地黄中水苏糖量
差异较大;河南新乡、河南三门峡、河南淮阳、河南西
峡、对照药材中没有检测到甘露三糖,其他产地的甘
露三糖量也较低;所有产地均含有棉子糖,量相对较
高,水苏糖量较高的生地黄,棉子糖量也较高,水苏糖
量较低的生地黄,棉子糖量也较低。
1棉子糖 2甘露三糖 3水苏糖
1 raf f iose 2mannot riose 3stachyos e
图 1 棉子糖对照品(A)、甘露三糖对照品( B)、水苏糖对照品( C)、熟地黄( D)、生地黄(E)和六味地黄胶囊( F)的 HPLC图
Fig 1 HPLCChromatograms of raffiose reference substance (A) , mannotriose reference substance (B) , stachyose ref erence
substance ( C) , Rehmanniae Praeparata Radix ( D) , Rehmanniae Radix (E) and Liuwei Dihuang Capsula (F)
表 1 熟地黄、生地黄中地黄寡糖的测定结果
Table 1 Oligosaccharide of Rehmanniae Praeparata
Radix and Rehmanniae Radix
名 称 产 地 采集时间 棉子糖
/ %
甘露三
糖/ %
水苏糖
/ %
熟地黄 河南新乡 2008年 0 76 11 91 3 69
熟地黄 河南西峡 2008年 # 17 23 0 61
熟地黄 河南温县 2007年 0 54 10 99 6 84
熟地黄 河南三门峡 2008年 5 67 # 34 32
熟地黄 河南淮阳 2008年 # 2 65 2 02
熟地黄 甘肃庆阳 2008年 9 15 # 43 63
熟地黄 甘肃清水 2008年 12 64 10 81 12 64
熟地黄 甘肃金崖 2008年 0 86 12 74 10 79
熟地黄 甘肃大康营 2008年 8 48 # 39 17
生地黄 河南新乡 2008年 7 49 # 37 69
生地黄 河南西峡 2008年 8 96 # 45 83
生地黄 河南温县 2007年 6 63 2 05 33 79
生地黄 河南三门峡 2008年 7 75 # 36 26
生地黄 河南淮阳 2008年 8 57 # 45 46
生地黄 甘肃庆阳 2008年 11 08 0 44 47 42
生地黄 甘肃清水 2008年 2 11 2 25 19 05
生地黄 甘肃金崖 2008年 4 51 1 64 44 19
生地黄 甘肃大康营 2008年 8 17 0 97 41 70
对照药材 1180200001 8 48 # 36 89
2 9 2 不同中成药供试品溶液的制备及测定:取龙
胆泻肝丸 100粒,研匀,称取3 48 g ,精密称定,置具
塞烧杯中,加水约 10 mL, 超声提取 30 m in, 棉花滤
过,滤液置 10 mL 量瓶中, 用水定容至刻度, 摇匀,
取 1 mL, 8 000 r/ m in离心 15 min,上清液 0 45 m
微孔滤膜滤过,滤液作为供试品溶液,按照色谱条件
进行测定,结果见表 2。
取六味地黄丸(浓缩丸) 20粒,研匀,称取 0 5 g,
精密称定,置 10 mL 量瓶中, 加水 9 mL,超声提取 30
min,用水定容至刻度, 摇匀, 取 1 mL, 8 000 r/ min离
心 15 min,上清液 0 45 m微孔滤膜滤过, 滤液作为
供试品溶液,按照色谱条件进行测定,结果见表 2。
取六味地黄丸(蜜丸) , 切碎,称取 0 5 g,精密称
定,置 10 mL 量瓶中,加水 9 mL,超声提取 30 min,
用水定容至刻度,摇匀, 取 1 mL, 8 000 r/ m in 离心
15 min,上清液 0 45 m 滤过, 滤液作为供试品溶
液,按照色谱条件进行测定,结果见表 2。
取六味地黄胶囊 10粒,倾出内容物, 研匀, 称取
0 9 g,精密称定,置 10 mL 量瓶中, 加水 9 mL, 超声
提取 30 min, 用水定容至刻度,摇匀, 取 1 mL, 8 000
r/ min离心 15 min,上清液 0 45 m微孔滤膜滤过,滤
液作为供试品溶液, 按照色谱条件进行测定,结果见
1999 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月
表2,图 1。
取妇科十味片 30片, 去膜衣,研匀,称取 7 5 g,
精密称定, 置具塞烧杯中,加水约 20 mL, 超声提取
30 min, 棉花滤过,滤液置 10 mL 量瓶中,用水定容
至刻度,摇匀, 取 1 mL, 8 000 r/ m in离心 15 min, 上
清液 0 45 m 微孔滤膜滤过, 滤液作为供试品溶
液,按照色谱条件进行测定,结果见表 2。
表 2 不同中成药中寡糖测定结果
Table 2 Determination of oligosaccharide in different
Chinese patent drugs
名 称 批 号 说 明 棉子糖
/ %
甘露三
糖/ %
水苏糖
/%
龙胆泻肝丸 9083006 水丸,使用地黄 0 58 # 1. 96
六味地黄丸 200903018 浓缩丸,使用熟地黄 # 6 71 0. 84
六味地黄丸 20082 大蜜丸,使用熟地黄 # 2. 68 0 86
六味地黄胶囊 080501 使用熟地黄 # 5. 63 0. 97
妇科十味片 081101 使用熟地黄 0. 09 0. 16 #
由不同中成药中生地黄或熟地黄中地黄寡糖测
定结果可知,中国药典规定的处方中的地黄药材、熟
地黄药材测定结果均与生地黄药材、熟地黄药材测
定结果有很大相关性。
3 讨论
由熟地黄测定结果可以看出, 产地不同其所含
寡糖成分、量均不一样,甘露三糖量低的或未检测到
的熟地黄考察外观性状, 饮片中心不同程度的有黄
心,没有达到!中国药典∀2010 年版一部熟地黄% 性
状&项目的要求,所以熟地黄中寡糖成分的差异及量
差异可能主要由于炮制程度有关。
由生地黄测定结果可以看出, 产地不同其所含
寡糖成分、量均不一样,有的产地没有检测到甘露三
糖。究竟什么导致了寡糖成分的差异, 鲜地黄炮制
成生地黄时造成的,还是生长环境造成的? 因此本
课题组对超声提取和煎煮提取做了对比, 并对干燥
条件做了考察,发现在较高的温度和较长时间下,水
苏糖不稳定,分解成甘露三糖和果糖;所以亟待进一
步深入研究造成不同产地生地黄所含寡糖成分的差
异及量差异的真正原因。
!中国药典∀2010 年版一部收载的大部分中药
材测定测定项中供试品的制备采用甲醇等有机溶剂
提取、纯化制备,但是在中成药的制备中多采用水煎
提取,所以对此方法制备的中成药,控制量有一定的
难度。本课题组对含有生地黄药材、熟地黄药材的
不同工艺制备的中成药及不同剂型进行了初步考
察,测定结果显示,此检测方法简便、易行,供试品的
制备也较简单,可以从药材、中间体、成品采用一套
方法进行检测、控制。
参考文献:
[ 1] 邱建国,张汝学,贾正平, 等 地黄中寡糖含量 HPLC 法测定
[ J] 中国实验方剂学杂志, 2009, 15( 8) : 89
[ 2] 邱建国,贾正平,张汝学,等 生地与熟地中糖类和梓醇的比较
研究[ J] 中草药, 2010, 41( 7) : 11171119
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[ J] 解放军药学学报, 2005, 21( 1) : 3436
复方泽泻胶囊中葛根素和总黄酮的测定
林 绥* ,阙慧卿,钱丽萍,邓思珊
收稿日期: 20100613
基金项目:福建省省属公益类基本专项( 2009R100174)
* 通讯作者 林 绥 T el: 13605948318 Email: linsui syy@ sina com cn
(福建省医学科学研究院, 福建 福州 350001)
摘 要:目的 采用 H PLC 法建立复方泽泻胶囊中葛根素和总黄酮的测定方法。方法 葛根素测定的色谱条件为
Lcromasil C18色谱柱( 250 mm∃ 4 6mm, 5 m) ; 流动相:甲醇水( 40 60) ;检测波长: 254 nm;体积流量: 1 mL / min; 进
样量: 20L,柱温:室温。总黄酮采用紫外可见分光光度计在 360 nm 处测定。结果 葛根素在 2 032~ 65 g/ mL 线
性关系良好,平均回收率为 97 9% , RSD 为 1 98%。总黄酮在 0 ~ 27 50 g/ mL 线性关系良好, 平均回收率为
97 1% , RSD为 2 98%。结论 本方法重现性好,灵敏度高, 可用于制剂的质量控制。
关键词:复方泽泻胶囊; 葛根素;总黄酮; 高效液相色谱;紫外分光光度
中图分类号: R286 02 文献标识码: B 文章编号: 0253 2670( 2010) 12 2000 03
复方泽泻胶囊以泽泻和葛根为君药, 本课题组
以之对动物脂肪肝进行治疗作用的研究, 尤其是酒
精性脂肪肝的疗效显著。葛根总黄酮用于解表[ 1] ,
具有很强的抗酒精所致的中枢抑制作用 [ 2] , 葛根素
2000 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 12 期 2010 年 12月