全 文 ：中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第5期2008年5,El·757·
绞股蓝叶片分化与植株再生
赵瑞强1，凌征柱2，罗 育1，李雄英1，蒋军富1，吴耀生1．
(1．广西医科大学，广西南宁530021，2．广西药用植物园，广西南宁530023)
摘 要：目的 建立高效稳定的绞股蓝受体系统，为绞股蓝基因转化研究奠定基础。方法 以五叶绞股蓝
Gynostemmapentaphyllum叶片作为外植体，采用不同配比激素的MS培养基进行诱导培养获得丛生芽，进而生根
获得再生植株。结果 采用MS+6-BA1．0mg／L培养基时，绞股蓝叶片分化频率最高(40％)，MS+6-BA
1．0mg／L适合绞股蓝丛生芽继代增殖，1／2MS适宜诱导生根获得健全再生植株。结论为利用根癌农杆菌介导法
进行绞股蓝基因转化建立了稳定的直接分化再生系统。
关键词：绞股蓝；叶片分化}植株再生
中图分类号：R282．21 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)05—0757—03
Bladeifferentiationandplantletr generationofGynostemmapent ph37llum
ZHAORui-qian91，LINGZheng-zhu2，LUOYul，LIXiong—yin91，JIANGJun—ful，WUYao—shen91
(1．GuangxiMed calUniversity，Nanning530021，China；2．GuangxiBotanicalGarden
ofMedicinalPl nts，Nanning530023，China)
Abstract：ObjectiveTo onstructa stably—performingandhigh—efficiencyregenerationsystemof
Gynostemmap nt phyllumandlayafoundationforthegenetransformationofi ．MethodsThebladesof
five—leafG．pentaph)rllumwereusedasthexplantsandculturedinMSmediawithdifferentportionsof
hormonetoinducefascicled—bud，rootandplan letr generation．ResultsThemediumuitablefor
inducingthebladeifferentiationofG．pe taph3，llumwasMS+6一BA1．0mg／Landforthefrequencyof
bladeifferentiationcouldreach40％．ThecuhuralmediumMS+6一BA1．0mg／Lwasuitableforthe
sub--multiplicationoffascicled··budandthemedium1／2MSforrootinducementandtheplantlet
regeneration．ConclusionAstably—performingacceptorsystemofthedirectdifferentiationfor
AgrobacteriumumefaciensmediatedgenetransformationofG．pe taphyllumbladesisconstructed．
Keywords：Gynostemmapentaphyllum(Thunb．)Makino；bladedifferentiation；plantletregeneration
绞股蓝Gynostemmapentaphyllum(Thunb．)
Makino为葫芦科绞股蓝属的草质藤本植物，是五加
科以外植物中发现含有人参有效成分的为数不多的
一种植物药。对绞股蓝的化学成分研究证实，绞股蓝
含有80余种单体皂苷，均属达玛烷醇类结构，可视
为人参二醇或人参三醇的异构体。其中绞股蓝皂苷
I、Ⅳ、VI、xI，绞股蓝皂苷元V—AH分别与人参皂
苷Rb，、Rb。、Rd、F2、Rg。为同一化合物。绞股蓝皂苷
I酶解可得人参皂苷K。全世界已发现13个绞股蓝
品种，中国占11种，主产于中国秦岭山区和江南各
省，尤其是西南地区，绞股蓝资源极为丰富，被誉为
“南方人参”。经国内近年来药理和临床方面的研究
证明，绞股蓝有如下药理作用：①抗肿瘤；②抗应激
作用；③抗心肌缺血、缺氧作用；④降低血脂、抑制肥
胖作用；⑤清除皮质激素副作用，增强机体免疫功
能；⑥抗衰老、延长寿命；⑦护肝作用；⑧抗突变作
用；⑨镇静、止痛、抗紧张等作用[1。。国内学者对绞股
蓝离体分化培养做了不少研究，但大多是用于快速
繁殖上的茎尖或器官培养[2“]，而通过分化途径再
生植株的报道不多。笔者以五叶绞股蓝叶片为材料
建立分化频率高且培养方法简单的再生体系，旨在
为利用转基因技术进行品种改良打下基础。
1材料与方法
1．1 试验材料：绞股蓝无菌苗(由广西药用植物园
凌征柱教授提供)叶片作为外殖体。
1．2试验方法
收稿日期：2007—07—30
基金项目：广西区自然科学基金(桂科基0575065)；中科院植物生理生态研究所开放课题
作者简介：赵瑞强(1976一)，男，河南洛阳人，硕士研究生，从事药用植物分子生物学研究。E—mail：ruiqian91223@sina．com．ca
·通讯作者吴耀生Tel：(0771)5358817E—mail：wuyaoshen903@sina．coln
万方数据
·758· 中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第5期2008年5月
1．2．1不同激素组合的培养基对叶片分化的诱导：
绞股蓝的茎尖Ⅲ、有节茎段Ⅲ、带腋芽茎段‘53组织培
养采用MS培养基并配合使用6～BA与NAA，所以应
用MS培养基为基本培养基，激素以6-BA、NAA为
主，考虑到细胞分裂素的种类对不同植物的敏感性
不同，再设置3种培养基，包含ZT或KT。将所选绞
股蓝叶片在无菌条件下做不同部位切口并转入7种
固体培养基中，见表1。T系列培养基中，含蔗糖3％，
琼脂o．8％。每种培养基15个培养皿，每皿2块叶片，
培养温度(25士1)℃，采用日光灯照明，光照时间：
16h／d，光照强度：30～40弘mol／(m2·s)。
1．2．2不同BA浓度对叶片分化的诱导：在1．2．1
实验结果的基础上，将绞股蓝叶片在无菌条件下从
叶柄处切开并将切口部位插入培养基中，设置7种
培养基，见表2。
表1不同激素组合的培养基
Table1 Medlacombinatedwi hdifferenthormones
尝 培养基组成 嚣 培养基组成编号 用开8组“
Tl MS+BA1．0mg／L+TsMS+BA2．0mg／L+KT2．0
NAA0．05m#L mg／L+NAA0·1mg／L
T2 MS+BA2．0mg／L T6MS+ZT0．5rng／L+KT0．5
Ta MS+BA2．0mg／L+ nlg／L+NAA0．1mg／L
NAA0．1mg／L T7MS+ZT1．0mg／L+KT1．0
T4 MS+BA2．0rag／L+ mg／L+NAA0·2mg／L
NAA0．2mg／L
表2不同6-BA浓度诱导培养基
Table2 Medianducedof6一BAindifferent
concentration
培养基编号 培养基组成 峪养基编号 培养基组成
SL MSO s5 MS+BA3．0m曙／L
S2 MS+BA0．5mg／L Se MS+BA4．0nIg／L
S3 MS+BA1．0mg／L S7 MS+BA5．0mg／L
S4 MS+BAZ．0mg／L
S系列培养基中，含蔗糖3％，琼脂O．8％。每种培
养基15瓶，每瓶2片叶片，培养温度(254-1)℃，采用
日光灯照明，光照时间：12h／d，光照强度：20～25
}tmol／(m2·s)。培养40d左右统计不定芽分化情况。
1．2．3丛生芽的继代增殖：根据离体培养结果，将
诱导产生的芽丛带叶片转入新鲜继代培养基(MS+
BA1．0mg／L)中培养。
1．2．4分化苗生根：继代增殖培养后，一部分材料
用于继续增殖继代培养，一部分壮芽苗分成单株转
接到1／2MS培养基生根。
2结果
2．1 叶片分化：对转入各培养基的叶片进行观察，
约30d后在T：(MS+BA2．0mg／L)培养基中有2
个叶片分化出芽(图1)。出芽部位位于叶柄根部，见
图1中画圈所示。
2．2不同BA浓度对叶片分化的诱导：经过45d左
右的诱导培养，在叶片叶柄根部长出芽丛，见图2。通
过BA不同质量浓度试验，筛选出效果最好的培养
基为MS+BA1．0mg／L。由表3可见，几种培养基
都可以诱导叶片分化，S。号培养基优于其他几种培
养基。表明绞股蓝的叶片分化诱导对BA的质量浓
度有较宽的适应范围。
图1绞股蓝叶片分化(诱导30d)画圈所示为分化部位
Fig．1BladeifferentiationofG．pe taphyllum
(inducedfor30d)，positionofdifferentiation：
showingasredcircle
图2绞股蓝叶片分化(诱导45d)
Fig．2BladeifferentiationofG·pe taphyllum
(inducedfor45d)
2．3丛生芽的继代增殖：60d后芽丛增生见图3。
将丛生芽切割成小芽丛，转入新鲜继代培养基，约30
d后，芽丛增生，随后长满培养基表面，如此再将丛
生芽在相同成分的新鲜培养基上，不断切分继代，芽
的数量即能得到大量的增殖，见图4。
2．4分化苗生根：试验中，以1／2MS的生根培养基
最好，发根及成苗壮苗的速度最快，见图5。其他培养
基包括继代培养基，如不及时转瓶，也能获得生根
苗，但速度慢。表明绞股蓝比较容易诱导生根。
万方数据
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图3绞股蓝叶片分化(诱导60d)
Fig．3BladeifferentiationofG．pe taphyllum
(inducedfor60d)
图4绞股蓝继代培养
Fig．4SecondarycultureofG．pentaphyllum
图5绞股蓝生根培养
Fig．5RootingoftissuecultureofG．pentaphyllum
2．5移栽：当生根苗根系发达，苗高5～7cm时，即
可出瓶移栽。炼苗2～3d和不炼苗直接移栽成活率
一样啪。
3讨论
自20世纪70年代末，日本竹本常松教授报道了
70余种绞股蓝皂苷的分离与鉴定，为绞股蓝的药用
研究奠定了基础。绞股蓝的慢性毒性研究显示其水
提取物在实验期间未产生明显的毒性‘引，绞股蓝的
药用价值愈加显现。利用生物技术育种手段将不断
加快绞股蓝的育种工作，但从目前人们的研究结果
来看，这方面的进展并不尽如人意，其原因之一在于
缺乏高效的组织培养再生体系。通过本实验初步建
立了绞股蓝的离体再生系统，对于进行绞股蓝的遗
传转化等研究具有重要的参考价值。下一步可以利
用转基因技术将人参等五加科植物次生代谢物代谢
途径中的关键酶转入绞股蓝中，使其人参皂苷等有
效成分合成增加。但目前分化效率仍只有40％左右，
用于转化体系还不够理想，因此在今后的实验中需
要进一步优化培养基条件，提高分化效率。
致谢：本研究得到中国科学院上海生命科学研
究院植物生理生态研究所植物分子遗传国家重点实
验室开放课题的资助，并得到陈晓亚老师领导的植
物次生代谢调控和棉花生物学研究组的大力支持，
王凌健老师给予具体指导。
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万方数据
绞股蓝叶片分化与植株再生
作者： 赵瑞强， 凌征柱， 罗育， 李雄英， 蒋军富， 吴耀生， ZHAO Rui-qiang， LING Zheng-
zhu， LUO Yu， LI Xiong-ying， JIANG Jun-fu， WU Yao-sheng
作者单位： 赵瑞强,罗育,李雄英,蒋军富,吴耀生,ZHAO Rui-qiang,LUO Yu,LI Xiong-ying,JIANG Jun-
fu,WU Yao-sheng(广西医科大学,广西南宁,530021)， 凌征柱,LING Zheng-zhu(广西药用植
物园,广西,南宁530023)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(5)
被引用次数： 1次
参考文献(6条)
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