全 文 ：·1078· 中草蒋ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月
speciesgrownu derfieldconditions[J]．PlantCellEnviro，
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裕丹参愈伤组织诱导、继代及植株再生的研究
李明军，刘 杰，周 娜，张晓丽，孙琳静，涂荣涛
(河南师范大学生命科学学院，河南新乡453007)
摘要：目的建立裕丹参愈伤组织的诱导、继代及植株再生体系。方法 比较不同的外植体基本培养基及植物生
长调节剂对裕丹参愈伤组织的诱导、继代及植株再生的影响。结果MS+6一BA2mg／I。+NAA0．2～2mg／l。有利
于叶柄和叶片愈伤组织的诱导，其出愈率均为100％，但叶柄出愈量更大；MS+6-BA2mg／L有利于叶片芽的分
化，其分化率达55．6％，并有直接成芽现象；B；十6-BA1mg／L+2，4-D1mg／L是愈伤组织继代培养的最佳培养
基。结论 愈伤组织诱导的最佳外植体为叶柄，最佳培养基为MS+6-BA2mg／L+NAA0．2～2mg／L；诱导芽分化
的最佳外植体为叶片。最佳培养基为MS+6-BA2mg／L；愈伤组织继代培养的最佳培养基为B；+6-BA1mg／L+2，
4一D1mg／[。。
关键词：裕丹参；愈伤组织；芽分化；植物生长调节剂
中图分类号：R282．1 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)07—1078—04
Inducement，subculture，andplantletsr generationofcallusfromSalviamiltiorrhiza
LIMing—jun，LIUJie，ZHoUNa，ZHANGXiao-li，SUNLin-jing，TURong—tao
(1．CollegeofLifeSciences，HenanNorm lU iversity，Xinxiang453007，China)
Abstract：ObjectiveToes ablishthe ystemofinducement，subculture，andplantletsr generation
ofcallusfromSalviam ltior，I^iza．MethodsComparedwiththeffectofdifferentexplants，basicmedia，
andplantgrowthregulatorontheinducement，subcultureofcal us，andthedifferentiationofbuds．
ResultsMS+6一BA2mg／L+NAAo．2—2mg／Lwaspropitioustotheinducementofcallusandtheratio
ofinducedallus，forboththeleafstalkandamina，was1OO％，butquantityofinducedalluswasmoreof
Theratioofbudsdifferentiationwas55．6％onthemediumofMS+6一BA2mg／L，anditcouldgrowninto
budsdirectly．B5+6一BA1 mg／L+2，4-Dl mg／Lwasthebettersubculturemediumofcallus．Conclusion
Soforthecallusinducement。thebetterxptantdmediumareleafstalkandMS+6一BA2mg／L+NAA
0．2—2mg／L，respectively；Forthbudsdifferentiation，thebetterexplantdmediumarelaminaand
MS+6-BA2mg／L，respectively；Forthesubcultureofcallus，Bs+6-BA1mg／L+2，4-D1mg／Lisbet—
ter．
Keywords：SalviamiltiorrhizaBunge；callus；budsdifferentiation；plantgrowthregulator
裕丹参Salviam ltiorrhizaBunge属唇形科多
年生草本植物，产于河南省方城县，是我国传统的道
地中药材。具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦等功
效[1]，在抗癌、抗衰老等方面具有良好的效果[23，经
中国医学科学院、国家参茸产品质量检测中心等单
位检测，丹参酮取的量为《中国药典》规定标准的
3．25倍，居全国众多产地生产的丹参之首。近年来，
对裕丹参优良品种的脱毒快繁、脱分化和高频率植
株再生等进行了系统的研究，为其产量和质量的提
高、新品种的选育和工厂化生产次生代谢物奠定了
基础。本实验报告其中的部分内容。
1材料与方法
1．1材料：裕丹参，采自方城县丹参野生品种抚育
基地，由裕丹参科研所所长曹金斌鉴定。
收稿日期：2007—10—27
基金项目：河南省重点科技攻关项目(0623030700)
作者简介：李明，军(1962～)，男，河南温县人，教授，博士，硕士生导师。长期从事植物生理学及药用植物生物技术的教学和研究工作。
Tel：(0373)3328189E—mail：limingjun2002@263．net
万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月·1079·
1．2方法
1．2．1无菌体系的建立：参照相关文献将材料表面
消毒[3]后接入MS+6-BA2．0mg／L+NAA0．02
mg／L中，30d时获得无菌试管苗。
1。2．2愈伤组织的诱导及芽分化：将叶片切成1
cm×1cm，叶柄切成1cm分别接种在表1的培养
基中。每瓶接种叶7小片，叶柄7小段，叶片接种方
式为背接(背面向上)，叶柄接种方式为横接，每种培
养基接种6瓶。30d时统计叶片和叶柄的出愈率和
芽分化率。
1．2．3植物生长调节剂组合对愈伤组织继代培养
的影响：将愈伤组织分别接种于(1)MS+6-BA1
mg／L+NAA1 mg／I。，(2)MS+6-BA1mg／L+2，
4一D1 mg／L，(3)MS+6一BA0．5mg／L+2，4一D2
mg／L上，每种培养基接7瓶，每瓶1．5g(平均分为
3份均匀地接于瓶中)，30d时称其鲜质量。
1．2．4基本培养基对愈伤组织继代培养的影响：将
愈伤组织接种于以MS、B。、N。、LS为基本培养基并
附加1．2．3项筛选出的植物生长调节剂组合的培养
基中，接种瓶数和方法同1．2．3项，25d时称其鲜质
量和千质量。
所用培养基均加入冷凝脂6g／L、蔗糖30g／L，
pH调至5．8～6．0，在121℃，1．1kg／cm2压力下灭
菌20min。培养条件均为：温度(25土2)℃，光照14
h／d，光强2000lx。
1．2．5试验数据处理：数据应用SPSS统计软件进
行方差分析。采用LSD法进行多重比较检验，
在尸一0．01水平上差异达到显著。
2结果与分析
2．1愈伤组织的诱导及芽分化
2．1．1不同外植体对裕丹参愈伤组织诱导的影响：
1号培养基中，叶片和叶柄均在接种5d后陆续褐化
枯死；其他培养基中，叶柄在接种3～5d时开始启
动脱分化，两端膨大，颜色变白，6～9d时膨大部位
开始出现愈伤组织，呈浅黄绿色(2和3号培养基)
或淡黄色(4号培养基)，疏松且生长旺盛；叶片在接
种5～7d时开始启动脱分化，其边缘膨大、卷曲，9
d时边缘膨大处开始出现愈伤组织，呈黄绿色(2和
3号培养基)或灰黄色(4号培养基)，透明且增殖较
慢。30d时，不同外植体对裕丹参愈伤组织诱导的
影响见表1。可知2号培养基上叶柄的出愈率高于
叶片，但出愈率较低，3、4号培养基上叶片和叶柄的
出愈率均为100％；从出愈量上看，叶柄(图1—3)明
显好于叶片(图1—2)。
表1不同外植体对裕丹参愈伤组织诱导及芽分化的影响
Table1 Effectofdifferentexplantsoncallusinduction
andbudsdifferentiationofS．miltiorrhiza
1-MS2-MS+6-BA2mg／L3一MS+6一BA2mg／L+NAA
0．2mg／I，4-MS+6-BA2mg／L+NAA2mg／L“一、+、++、
+++”分别表示愈伤组织没有、少、多和最多
1-MS2-MS+6-BA2mg／L3-MS+6-BA2mg／L+NAA
0．2mg／L4-MS+6-BA2lng／L+NAA2mg／L。一、+、++、
+++”meancallusarenone，little，more，andst respectively
2．1．2不同外植体对裕丹参芽分化的影响：2号和
3号培养基中，叶柄形成的愈伤组织在15～20d时
开始出现绿色芽点，25～28d时芽点分化成芽，为
丛生芽(图1—5)，间接成芽；叶片在接种13-q5d时
边缘处或愈伤组织上出现绿色芽点，20d时芽点分
化成芽，多数是从叶片边缘直接成芽，为单生芽(图
1—6)，少数是经愈伤组织再分化成芽，为丛生芽。30
d时，不同外植体对裕丹参芽分化的影响见表l。由
表1可知，2、3号培养基上均有芽分化现象，且叶片
的芽分化率高于叶柄，其中以2号培养基芽的分化
率最高。
2．2愈伤组织的继代培养
2．2．1植物生长调节剂组合对愈伤组织继代培养的
影响：3种不同培养基对裕丹参愈伤组织的增殖达到
了极显著影响。愈伤组织在MS+6-BA1mg／L+
NAA1mg／L上生长缓慢(30d时增殖1．2倍)，呈
灰褐色，且易褐化死亡；在MS+6-BA1 mg／L+2，
4一D1mg／L和MS+6一BA0．5mg／L+2，4一D2
mg／L上生长旺盛(前者30d时增殖2．6倍，图1—
4；后者30d时增殖1．9倍)，呈淡黄色且无分化。
2．2．2基本培养基对愈伤组织继代培养的影响：由
表2可知，B。培养基在鲜质量、干质量和增殖倍数
方面均与N。培养基、LS培养基达到极显著差异，
MS培养基在鲜质量和增殖倍数方面与Ne培养基、
LS培养基达到极显著差异，而B。和MS培养基对
愈伤组织的生长没有显著差异。另外，愈伤组织在
B。培养基上从第10天起开始变为红褐色，可能是
其中丹参酮的量较高所致。
3讨论
3．1 外植体对愈伤组织诱导及芽分化的影响：不同
植物以及同一植物的不同器官对诱导条件的反应是
万方数据
·1080· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月
图1 裕丹参愈伤组织的诱导、继代及植株再生
Fig．1Inducement，subculture，andplantletsr generationofcallusfromS．miltiorrhiza
表2基本培养基对愈伤组织继代培养的影响(25d)
Table2 Effectofbasicmediaonsubcultureofcallus(25d)
培养基中均添加6-BA1 rag／L+2，4一Dlmg／Lt大写字母表示P=0．01水平差异达显著
Thereare6-BA1mg／L+2，4-D1 mg／LinallmediaICapitallettersrererep sentignificantdifferences，P；0．01
不同的。在诱导丹参愈伤组织和植株再生的研究中， 分化的最佳外植体为叶片，最佳培养基为MS+6一
多数选用叶片为外植体ms．，也有用叶柄、茎段、根与 BA≥mg／L，且可直接分化成芽，NAA对叶片的芽
叶片相比较的，但均无明显差异[6’7]。本实验发现裕
丹参叶片和叶柄均能诱导形成愈伤组织，但愈伤组
织的出现时间、方式、形态、数量、出愈率及芽分化等
方面均表现出很大的差异，诱导愈伤组织以叶柄为
佳，诱导芽的分化以叶片为佳。
3．2植物生长调节剂对裕丹参愈伤组织诱导及芽
分化的影响：植物生长调节剂是诱导愈伤组织形成
的重要因素。冯玲玲等口]发现，单独使用5种植物生
长调节物质在一定质量浓度范围均可诱导丹参产生
愈伤组织，但最佳组合的诱导培养基为MS+2，4一D
0．5mg／L+6一BA1．0mg／L；客绍英等口1研究表明，
丹参茎段在MS+2，4一D5．0mg／L+NAA0．2mg／
L+6一BA1．0mg／L上易形成愈伤组织。本实验发
现，裕丹参叶柄和叶片的脱分化需要植物生长调节
剂，且6一BA与NAA配合使用的效果明显优于单独
添加6一BA，当6一BA质量浓度一定时，出愈量随
NAA(O～2mg／L)的升高而增多；诱导愈伤组织再
分化具有一定抑制作用。
3．3基本培养基对愈伤组织继代培养的影响：MS
培养基中的硝酸盐、钾和铵的量高，I。S培养基由
MS演变而来；B。培养基的主要特点是含有较低的
铵和较高的烟酸；N。培养基钾盐的量较高。Gam—
burg[8]在研究中发现烟酸能够刺激愈伤组织的生长。
铵可能对不少培养物的生长有抑制作用。本实验表
明，裕丹参愈伤组织继代培养的最佳基本培养基为
B。。因此，推测B5能够促进愈伤组织的增殖，可能与
其含有较低浓度的铵和较高浓度的烟酸有关。
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川贝母种子休眠及萌发特性的研究
于婧1，魏建和1-，陈士林1，代勇2，杨成民1
(1．中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所，北京100193；2．成都恩威集团有限公司，四川成都610041)
摘要：目的 了解川贝母种子休眠原因及层积处理打破种子休眠的作用。方法浸种称重法测定种皮透水性；生
物鉴定法检测发芽抑制物；解剖种子观察层积种子种胚发育；光照培养箱发芽检测层积种子萌发温度。结果 浸种
8h后川贝母种子吸水率达80％以上；种子浸提液显著抑制白菜种子的萌发和生长；层积处理促进种胚后熟，60d后
胚率由处理前12％增至43％；层积种子25℃发芽率显著高于其他发芽温度。结论JII贝母种皮无吸水障碍；种子休
眠的主要原因是胚形态后熟及存在发芽抑制物，属于混合休眠类型；层积处理可有效打破休眠，25℃发芽适温。
关键词：川I贝母；种子休眠；胚后熟；发芽抑制物
中图分类号：R282．2 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)07—1081一04
DormancydgerminationcharacteristicsofFritillariaci rhosaseed
YUJin91，WEIJian—hel，CHENShi—linl，DAIYon92，YANGCheng—minl
(1．InstituteofMedicinalPl ntDevelopment，ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCo lege，
Beijing100094，China；2．ChengduEnweiGroupLimitedCompany，Chengdu610041，China)
Abstract：ObjectiveToinvestigatethemechanismoftheseeddormancyofFritillariaci rhosaand
thestratificationeffectonseeddormancy．MethodsThesoakedseedswereusedtotestwaterpermeabili—
tybyweighting．Thebiologicaltestwasappliedfor etectinghegerminationinhibitor．Seeddiss ction
wasusedtoinvestigatethembryodevelopmentafterstratification．Theemperaturesofseedsgermination
afterstratificationweredeterminedbyartificiallimatechamberatdifferentt mperatures．ResultsTh
waterabsorptionratefF．cirrhosaseedswasmorethan80％aftersoakingfor8h．Theextractssignifi—
cantlyinhibitedboththegerminationofseedandtherootgrowthofChinesecabbage．Thestratificaton
couldeffectivelyacceleratethe mbryoafterripeningandincreasethembryoratefrom12％to43％after
60d．Germinationra eoftheseedafterstratificatonn25℃wassignificantlyhigherthanthatinother
temperatures．ConclusionThereiSnoobstacleofwaterpermeabilityontestaofF．cirrhosa．Theseed
embryoafterripeningandthegerminationinhibitorarethemainmechanismofseedormancyofF·cir—
rhosa，whereasitisatypeofmix-dormancy．Thestratificationiseffectivefors eddormancyreliefandthe
optimumgerminationtemperatureis25℃．
Keywords：FritillariacirrhosD．Don；seeddormancy；embryoafte ripening；germinationi hibitor
川贝母Fritillariaci rhosaD．Don属百合科多
年生草本植物，分布于云南、四川、甘肃和西藏等海
拔3500m以上的高原地区。鳞茎药用，有清热润
肺、止咳化痰的功效，是一味常用大宗名贵药材。野
生资源已趋于濒危，目前正在开展大规模野生抚育
工作‘¨。生产上曾采用鳞茎繁殖，但繁殖系数太低；
用种子繁殖，繁殖系数高，但种子地处高原，不易采
集，休眠期长，出苗率低，整齐度不理想。已有研究指
收稿日期：2007—11—07
基金项目：国家高技术产业化专项(2005一I)；北京市科技新星计划项目(2004A60)；国家中医药管理局科技专项(2004ZX06—2)；国家中
药材生产扶持资金项日(2005—1)
作者简介：于婧(1981一)，女，农学学士，2005年毕业于北京农学院，主要从事药用植物繁殖生物学、细胞生物学及育种研究。
Tel：(010)62895272E—mail：yujing@impladac．cn
*通讯作者魏建和Tel：(010)6281884iE—mail：wjianh@263．net
万方数据
裕丹参愈伤组织诱导、继代及植株再生的研究
作者： 李明军， 刘杰， 周娜， 张晓丽， 孙琳静， 涂荣涛， LI Ming-jun， LIU Jie， ZHOU
Na， ZHANG Xiao-li， SUN Lin-jing， TU Rong-tao
作者单位： 河南师范大学生命科学学院,河南新乡,453007
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(7)
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本文链接：http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200807042.aspx