免费文献传递   相关文献

Inducement,subculture,and plantlets regeneration of callus from Salvia miltiorrhiza

裕丹参愈伤组织诱导、继代及植株再生的研究



全 文 :·1078· 中草蒋ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月
speciesgrownu derfieldconditions[J].PlantCellEnviro,
1992,15:25—35. ,
C8]LalAM。KuSB,EdwardsGE.Analysisofinhibitionof
photosynthesisduetowaterstressintheCsspeciesHordeum
vulgarendViciaf ba:electrontransport,C02fixationand
carboxylationc pacity[J].PhotosynthRes,1996,49:57—69.
[9]张岁岐,山仑.植物水分利用效率及其研究进展[J].干旱
地区农业研究,2002,20(4):1—4.
[10]赵丽英,邓西平,山 仑.不同水分处理下冬小麦旗叶叶绿素荧
光参数的变化研究[J].中国生态农业学报,2007,15:63—66.
裕丹参愈伤组织诱导、继代及植株再生的研究
李明军,刘 杰,周 娜,张晓丽,孙琳静,涂荣涛
(河南师范大学生命科学学院,河南新乡453007)
摘要:目的建立裕丹参愈伤组织的诱导、继代及植株再生体系。方法 比较不同的外植体基本培养基及植物生
长调节剂对裕丹参愈伤组织的诱导、继代及植株再生的影响。结果MS+6一BA2mg/I。+NAA0.2~2mg/l。有利
于叶柄和叶片愈伤组织的诱导,其出愈率均为100%,但叶柄出愈量更大;MS+6-BA2mg/L有利于叶片芽的分
化,其分化率达55.6%,并有直接成芽现象;B;十6-BA1mg/L+2,4-D1mg/L是愈伤组织继代培养的最佳培养
基。结论 愈伤组织诱导的最佳外植体为叶柄,最佳培养基为MS+6-BA2mg/L+NAA0.2~2mg/L;诱导芽分化
的最佳外植体为叶片。最佳培养基为MS+6-BA2mg/L;愈伤组织继代培养的最佳培养基为B;+6-BA1mg/L+2,
4一D1mg/[。。
关键词:裕丹参;愈伤组织;芽分化;植物生长调节剂
中图分类号:R282.1 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2008)07—1078—04
Inducement,subculture,andplantletsr generationofcallusfromSalviamiltiorrhiza
LIMing—jun,LIUJie,ZHoUNa,ZHANGXiao-li,SUNLin-jing,TURong—tao
(1.CollegeofLifeSciences,HenanNorm lU iversity,Xinxiang453007,China)
Abstract:ObjectiveToes ablishthe ystemofinducement,subculture,andplantletsr generation
ofcallusfromSalviam ltior,I^iza.MethodsComparedwiththeffectofdifferentexplants,basicmedia,
andplantgrowthregulatorontheinducement,subcultureofcal us,andthedifferentiationofbuds.
ResultsMS+6一BA2mg/L+NAAo.2—2mg/Lwaspropitioustotheinducementofcallusandtheratio
ofinducedallus,forboththeleafstalkandamina,was1OO%,butquantityofinducedalluswasmoreof
Theratioofbudsdifferentiationwas55.6%onthemediumofMS+6一BA2mg/L,anditcouldgrowninto
budsdirectly.B5+6一BA1 mg/L+2,4-Dl mg/Lwasthebettersubculturemediumofcallus.Conclusion
Soforthecallusinducement。thebetterxptantdmediumareleafstalkandMS+6一BA2mg/L+NAA
0.2—2mg/L,respectively;Forthbudsdifferentiation,thebetterexplantdmediumarelaminaand
MS+6-BA2mg/L,respectively;Forthesubcultureofcallus,Bs+6-BA1mg/L+2,4-D1mg/Lisbet—
ter.
Keywords:SalviamiltiorrhizaBunge;callus;budsdifferentiation;plantgrowthregulator
裕丹参Salviam ltiorrhizaBunge属唇形科多
年生草本植物,产于河南省方城县,是我国传统的道
地中药材。具有祛瘀止痛、活血通经、清心除烦等功
效[1],在抗癌、抗衰老等方面具有良好的效果[23,经
中国医学科学院、国家参茸产品质量检测中心等单
位检测,丹参酮取的量为《中国药典》规定标准的
3.25倍,居全国众多产地生产的丹参之首。近年来,
对裕丹参优良品种的脱毒快繁、脱分化和高频率植
株再生等进行了系统的研究,为其产量和质量的提
高、新品种的选育和工厂化生产次生代谢物奠定了
基础。本实验报告其中的部分内容。
1材料与方法
1.1材料:裕丹参,采自方城县丹参野生品种抚育
基地,由裕丹参科研所所长曹金斌鉴定。
收稿日期:2007—10—27
基金项目:河南省重点科技攻关项目(0623030700)
作者简介:李明,军(1962~),男,河南温县人,教授,博士,硕士生导师。长期从事植物生理学及药用植物生物技术的教学和研究工作。
Tel:(0373)3328189E—mail:limingjun2002@263.net
万方数据
中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月·1079·
1.2方法
1.2.1无菌体系的建立:参照相关文献将材料表面
消毒[3]后接入MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.02
mg/L中,30d时获得无菌试管苗。
1。2.2愈伤组织的诱导及芽分化:将叶片切成1
cm×1cm,叶柄切成1cm分别接种在表1的培养
基中。每瓶接种叶7小片,叶柄7小段,叶片接种方
式为背接(背面向上),叶柄接种方式为横接,每种培
养基接种6瓶。30d时统计叶片和叶柄的出愈率和
芽分化率。
1.2.3植物生长调节剂组合对愈伤组织继代培养
的影响:将愈伤组织分别接种于(1)MS+6-BA1
mg/L+NAA1 mg/I。,(2)MS+6-BA1mg/L+2,
4一D1 mg/L,(3)MS+6一BA0.5mg/L+2,4一D2
mg/L上,每种培养基接7瓶,每瓶1.5g(平均分为
3份均匀地接于瓶中),30d时称其鲜质量。
1.2.4基本培养基对愈伤组织继代培养的影响:将
愈伤组织接种于以MS、B。、N。、LS为基本培养基并
附加1.2.3项筛选出的植物生长调节剂组合的培养
基中,接种瓶数和方法同1.2.3项,25d时称其鲜质
量和千质量。
所用培养基均加入冷凝脂6g/L、蔗糖30g/L,
pH调至5.8~6.0,在121℃,1.1kg/cm2压力下灭
菌20min。培养条件均为:温度(25土2)℃,光照14
h/d,光强2000lx。
1.2.5试验数据处理:数据应用SPSS统计软件进
行方差分析。采用LSD法进行多重比较检验,
在尸一0.01水平上差异达到显著。
2结果与分析
2.1愈伤组织的诱导及芽分化
2.1.1不同外植体对裕丹参愈伤组织诱导的影响:
1号培养基中,叶片和叶柄均在接种5d后陆续褐化
枯死;其他培养基中,叶柄在接种3~5d时开始启
动脱分化,两端膨大,颜色变白,6~9d时膨大部位
开始出现愈伤组织,呈浅黄绿色(2和3号培养基)
或淡黄色(4号培养基),疏松且生长旺盛;叶片在接
种5~7d时开始启动脱分化,其边缘膨大、卷曲,9
d时边缘膨大处开始出现愈伤组织,呈黄绿色(2和
3号培养基)或灰黄色(4号培养基),透明且增殖较
慢。30d时,不同外植体对裕丹参愈伤组织诱导的
影响见表1。可知2号培养基上叶柄的出愈率高于
叶片,但出愈率较低,3、4号培养基上叶片和叶柄的
出愈率均为100%;从出愈量上看,叶柄(图1—3)明
显好于叶片(图1—2)。
表1不同外植体对裕丹参愈伤组织诱导及芽分化的影响
Table1 Effectofdifferentexplantsoncallusinduction
andbudsdifferentiationofS.miltiorrhiza
1-MS2-MS+6-BA2mg/L3一MS+6一BA2mg/L+NAA
0.2mg/I,4-MS+6-BA2mg/L+NAA2mg/L“一、+、++、
+++”分别表示愈伤组织没有、少、多和最多
1-MS2-MS+6-BA2mg/L3-MS+6-BA2mg/L+NAA
0.2mg/L4-MS+6-BA2lng/L+NAA2mg/L。一、+、++、
+++”meancallusarenone,little,more,andst respectively
2.1.2不同外植体对裕丹参芽分化的影响:2号和
3号培养基中,叶柄形成的愈伤组织在15~20d时
开始出现绿色芽点,25~28d时芽点分化成芽,为
丛生芽(图1—5),间接成芽;叶片在接种13-q5d时
边缘处或愈伤组织上出现绿色芽点,20d时芽点分
化成芽,多数是从叶片边缘直接成芽,为单生芽(图
1—6),少数是经愈伤组织再分化成芽,为丛生芽。30
d时,不同外植体对裕丹参芽分化的影响见表l。由
表1可知,2、3号培养基上均有芽分化现象,且叶片
的芽分化率高于叶柄,其中以2号培养基芽的分化
率最高。
2.2愈伤组织的继代培养
2.2.1植物生长调节剂组合对愈伤组织继代培养的
影响:3种不同培养基对裕丹参愈伤组织的增殖达到
了极显著影响。愈伤组织在MS+6-BA1mg/L+
NAA1mg/L上生长缓慢(30d时增殖1.2倍),呈
灰褐色,且易褐化死亡;在MS+6-BA1 mg/L+2,
4一D1mg/L和MS+6一BA0.5mg/L+2,4一D2
mg/L上生长旺盛(前者30d时增殖2.6倍,图1—
4;后者30d时增殖1.9倍),呈淡黄色且无分化。
2.2.2基本培养基对愈伤组织继代培养的影响:由
表2可知,B。培养基在鲜质量、干质量和增殖倍数
方面均与N。培养基、LS培养基达到极显著差异,
MS培养基在鲜质量和增殖倍数方面与Ne培养基、
LS培养基达到极显著差异,而B。和MS培养基对
愈伤组织的生长没有显著差异。另外,愈伤组织在
B。培养基上从第10天起开始变为红褐色,可能是
其中丹参酮的量较高所致。
3讨论
3.1 外植体对愈伤组织诱导及芽分化的影响:不同
植物以及同一植物的不同器官对诱导条件的反应是
万方数据
·1080· 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月
图1 裕丹参愈伤组织的诱导、继代及植株再生
Fig.1Inducement,subculture,andplantletsr generationofcallusfromS.miltiorrhiza
表2基本培养基对愈伤组织继代培养的影响(25d)
Table2 Effectofbasicmediaonsubcultureofcallus(25d)
培养基中均添加6-BA1 rag/L+2,4一Dlmg/Lt大写字母表示P=0.01水平差异达显著
Thereare6-BA1mg/L+2,4-D1 mg/LinallmediaICapitallettersrererep sentignificantdifferences,P;0.01
不同的。在诱导丹参愈伤组织和植株再生的研究中, 分化的最佳外植体为叶片,最佳培养基为MS+6一
多数选用叶片为外植体ms.,也有用叶柄、茎段、根与 BA≥mg/L,且可直接分化成芽,NAA对叶片的芽
叶片相比较的,但均无明显差异[6’7]。本实验发现裕
丹参叶片和叶柄均能诱导形成愈伤组织,但愈伤组
织的出现时间、方式、形态、数量、出愈率及芽分化等
方面均表现出很大的差异,诱导愈伤组织以叶柄为
佳,诱导芽的分化以叶片为佳。
3.2植物生长调节剂对裕丹参愈伤组织诱导及芽
分化的影响:植物生长调节剂是诱导愈伤组织形成
的重要因素。冯玲玲等口]发现,单独使用5种植物生
长调节物质在一定质量浓度范围均可诱导丹参产生
愈伤组织,但最佳组合的诱导培养基为MS+2,4一D
0.5mg/L+6一BA1.0mg/L;客绍英等口1研究表明,
丹参茎段在MS+2,4一D5.0mg/L+NAA0.2mg/
L+6一BA1.0mg/L上易形成愈伤组织。本实验发
现,裕丹参叶柄和叶片的脱分化需要植物生长调节
剂,且6一BA与NAA配合使用的效果明显优于单独
添加6一BA,当6一BA质量浓度一定时,出愈量随
NAA(O~2mg/L)的升高而增多;诱导愈伤组织再
分化具有一定抑制作用。
3.3基本培养基对愈伤组织继代培养的影响:MS
培养基中的硝酸盐、钾和铵的量高,I。S培养基由
MS演变而来;B。培养基的主要特点是含有较低的
铵和较高的烟酸;N。培养基钾盐的量较高。Gam—
burg[8]在研究中发现烟酸能够刺激愈伤组织的生长。
铵可能对不少培养物的生长有抑制作用。本实验表
明,裕丹参愈伤组织继代培养的最佳基本培养基为
B。。因此,推测B5能够促进愈伤组织的增殖,可能与
其含有较低浓度的铵和较高浓度的烟酸有关。
参考文献:
[1]中国药典Is].V01.I.2005.
[2JLiuJ。ShenHM。NamongC.Salviam ltiorrhizainhibits
cellgrowthandinducesapoptosisinhumanhepatomaHepG2
cellsI-J].CancerLett,2000,153:85—93.
[33客绍英,石洪凌,马作东.利用正交试验优化丹参愈伤组织培
养[J].中药材,2005,28(2):82—83.
[4]赵洁,陈志胜,万钧.丹参叶片无性系快速繁殖及植株再
生研究EJ].华中师范大学学报:自然科学版,1999,33(1):
万方数据
中草蔼 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第7期2008年7月·1081·
108—111.
[5]粱红,何宇清,赵
根芽分化的效应口].
31(3):228—231.
洁.生长调节物质对丹参叶片脱分化及 [7]
华中师范大学学报:自然科学版,1997,
[63强小利,闫亚平,王☆;之.植物生长因子对丹参愈伤组织有效
成分积累的影响[J].陕西师范大学学报:自然科学版,2004,
[8]
32:115一118·
冯玲玲,范美华,周吉源.丹参愈伤组织的诱导及增殖效应
口].生物学杂志。2004,21(5):25—27.
GamburgOL,MurashigeT,ThorpeTA.Planttissuecul—
turemedia[J].InVitroc扰DevelopBi l—Plant,1976,1z
(10):473.
川贝母种子休眠及萌发特性的研究
于婧1,魏建和1-,陈士林1,代勇2,杨成民1
(1.中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所,北京100193;2.成都恩威集团有限公司,四川成都610041)
摘要:目的 了解川贝母种子休眠原因及层积处理打破种子休眠的作用。方法浸种称重法测定种皮透水性;生
物鉴定法检测发芽抑制物;解剖种子观察层积种子种胚发育;光照培养箱发芽检测层积种子萌发温度。结果 浸种
8h后川贝母种子吸水率达80%以上;种子浸提液显著抑制白菜种子的萌发和生长;层积处理促进种胚后熟,60d后
胚率由处理前12%增至43%;层积种子25℃发芽率显著高于其他发芽温度。结论JII贝母种皮无吸水障碍;种子休
眠的主要原因是胚形态后熟及存在发芽抑制物,属于混合休眠类型;层积处理可有效打破休眠,25℃发芽适温。
关键词:川I贝母;种子休眠;胚后熟;发芽抑制物
中图分类号:R282.2 文献标识码:A 文章编号:0253—2670(2008)07—1081一04
DormancydgerminationcharacteristicsofFritillariaci rhosaseed
YUJin91,WEIJian—hel,CHENShi—linl,DAIYon92,YANGCheng—minl
(1.InstituteofMedicinalPl ntDevelopment,ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCo lege,
Beijing100094,China;2.ChengduEnweiGroupLimitedCompany,Chengdu610041,China)
Abstract:ObjectiveToinvestigatethemechanismoftheseeddormancyofFritillariaci rhosaand
thestratificationeffectonseeddormancy.MethodsThesoakedseedswereusedtotestwaterpermeabili—
tybyweighting.Thebiologicaltestwasappliedfor etectinghegerminationinhibitor.Seeddiss ction
wasusedtoinvestigatethembryodevelopmentafterstratification.Theemperaturesofseedsgermination
afterstratificationweredeterminedbyartificiallimatechamberatdifferentt mperatures.ResultsTh
waterabsorptionratefF.cirrhosaseedswasmorethan80%aftersoakingfor8h.Theextractssignifi—
cantlyinhibitedboththegerminationofseedandtherootgrowthofChinesecabbage.Thestratificaton
couldeffectivelyacceleratethe mbryoafterripeningandincreasethembryoratefrom12%to43%after
60d.Germinationra eoftheseedafterstratificatonn25℃wassignificantlyhigherthanthatinother
temperatures.ConclusionThereiSnoobstacleofwaterpermeabilityontestaofF.cirrhosa.Theseed
embryoafterripeningandthegerminationinhibitorarethemainmechanismofseedormancyofF·cir—
rhosa,whereasitisatypeofmix-dormancy.Thestratificationiseffectivefors eddormancyreliefandthe
optimumgerminationtemperatureis25℃.
Keywords:FritillariacirrhosD.Don;seeddormancy;embryoafte ripening;germinationi hibitor
川贝母Fritillariaci rhosaD.Don属百合科多
年生草本植物,分布于云南、四川、甘肃和西藏等海
拔3500m以上的高原地区。鳞茎药用,有清热润
肺、止咳化痰的功效,是一味常用大宗名贵药材。野
生资源已趋于濒危,目前正在开展大规模野生抚育
工作‘¨。生产上曾采用鳞茎繁殖,但繁殖系数太低;
用种子繁殖,繁殖系数高,但种子地处高原,不易采
集,休眠期长,出苗率低,整齐度不理想。已有研究指
收稿日期:2007—11—07
基金项目:国家高技术产业化专项(2005一I);北京市科技新星计划项目(2004A60);国家中医药管理局科技专项(2004ZX06—2);国家中
药材生产扶持资金项日(2005—1)
作者简介:于婧(1981一),女,农学学士,2005年毕业于北京农学院,主要从事药用植物繁殖生物学、细胞生物学及育种研究。
Tel:(010)62895272E—mail:yujing@impladac.cn
*通讯作者魏建和Tel:(010)6281884iE—mail:wjianh@263.net
万方数据
裕丹参愈伤组织诱导、继代及植株再生的研究
作者: 李明军, 刘杰, 周娜, 张晓丽, 孙琳静, 涂荣涛, LI Ming-jun, LIU Jie, ZHOU
Na, ZHANG Xiao-li, SUN Lin-jing, TU Rong-tao
作者单位: 河南师范大学生命科学学院,河南新乡,453007
刊名: 中草药
英文刊名: CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年,卷(期): 2008,39(7)

参考文献(8条)
1.中华人民共和国药典(一部) 2005
2.Liu J;Shen H M;Namong C Salvia miltiorrhiza inhibits cell growth and induces apoptosis in human
hepatoma HepG2 cells[外文期刊] 2000
3.客绍英;石洪凌;马作东 利用正交试验优化丹参愈伤组织培养[期刊论文]-中药材 2005(02)
4.赵洁;陈志胜;万钧 丹参叶片无性系快速繁殖及植株再生研究 1999(01)
5.梁红;何宇清;赵洁 生长调节物质对丹参叶片脱分化及根芽分化的效应 1997(03)
6.强小利;闫亚平;王喆之 植物生长因子对丹参愈伤组织有效成分积累的影响 2004
7.冯玲玲;范美华;周吉源 丹参愈伤组织的诱导及增殖效应[期刊论文]-生物学杂志 2004(05)
8.Gamburg O L;Murashige T;Thorpe T A Plant tissue culture media 1976(10)

本文读者也读过(10条)
1. 信金娜.韩烈保.刘君.罗莉.李雪 草地早熟禾愈伤组织诱导及植株再生[期刊论文]-中国草地2004,26(4)
2. 周忠泽.曹蘅.许仁鑫.李玉成 葶苈子植物愈伤组织诱导及植株再生的研究[期刊论文]-安徽大学学报(自然科学
版)2001,25(4)
3. 邱奉同.Q1U Feng-Tong 何首乌愈伤组织诱导和植株再生[期刊论文]-植物生理学通讯2000,36(4)
4. 马艳红.于卓.李小雷.李造哲.MA Yan-hong.YU Zhuo.LI Xiao-lei.LI Zao-zhe 加拿大披碱草与2种国产披碱草
杂种F1愈伤组织诱导及植株再生研究[期刊论文]-西北植物学报2006,26(9)
5. 李德祥.陈超.王治伟.吴印爱 丹参对梗阻性左半结肠癌一期切除术后患者自由基水平的影响[期刊论文]-中国普
通外科杂志2008,17(4)
6. 顾健.韩乔燕.薛永骥.刘灵峰.刘丹.Gu Jian.Han Qiaoyan.Xue Yongji.Liu Lingfeng.Liu Dan 丹参影响CIA大
鼠血清MMP-9水平与易栓关系[期刊论文]-医学研究杂志2008,37(10)
7. 翟彩霞.温春秀.王凯辉.张彦才.王丽英.李巧云.陈丽莉.ZHAI Cai-xia.WEN Chun-xiu.WANG Kai-hui.ZHANG
Yan-cai.WANG Li-ying.LI Qiao-yun.CHEN Li-li 氮、磷、钾肥对丹参根系生长及养分含量的影响[期刊论文]-华
北农学报2008,23(z1)
8. 冯玲玲.范美华.周吉源 丹参愈伤组织的诱导及增殖效应[期刊论文]-生物学杂志2004,21(5)
9. 姚振.季静.王萍.王罡.YAO Zhen.JI Jing.WANG Ping.WANG Gang 安祖花愈伤组织诱导和植株再生的研究[期刊
论文]-吉林农业大学学报2006,28(1)
10. 李师翁.范小峰.卢东平 大果良种沙棘愈伤组织诱导及植株再生的研究[期刊论文]-西北植物学报2001,21(2)


本文链接:http://d.wanfangdata.com.cn/Periodical_zcy200807042.aspx