全 文 ：5μm)和 Aichrom C18柱(250 mm×416 mm ,5μm)做相
关考察 ,均可基本达到基线分离。综合考虑分析时间、
峰形对称度及美观度等因素 ,用 KromasilC18 柱 (250
mm×416 mm ,5μm)为本实验的分析用色谱柱。
　　取五味子醇甲对照品用流动相甲醇2水 (60 ∶
40)溶解 ,对五味子醇甲进行紫外扫描 (190～400
nm) ,结果五味子醇甲在 251 nm 波长处有最大吸
收 ,因此确定测定波长为 250 nm。
　　五味子醇甲的提取溶液一般有甲醇、乙醇等。
本实验分别采用甲醇、乙醇、50 %甲醇作为提取溶
剂 ,以其中五味子醇甲的质量分数作为衡量指标 ,结
果 3 种提取溶剂得出的五味子醇甲的质量分数分别
是 0172、0171、0169 mg/ g ,所以当提取溶剂为甲醇 时 ,五味子醇甲的提取效率最高 ,本实验予以选用。　　实验对样品提取方法进行了筛选考察 ,对超声处理、回流提取两种方法进行了对比 ,以五味子醇甲的质量分数作为衡量指标 ,结果五味子醇甲分别为0172、0171 mg/ g ,没有明显区别 ,而且超声方法相对简单 ,故选定。分别超声处理 15、30、45 min ,结果五味子醇甲的质量分数分别为 0167、0172、0172mg/ g ,由上可见 ,超声处理 30 min 可基本将样品中五味子醇甲提取完全 ,而且时间相对较短 ,故选择超声处理时间为 30 min。参考文献 :[ 1 ] 　王怡君 ,郭兰建 ,周文生 ,等1 HPLC 法测定中风康丸中五味子醇甲的含量[J ]1 中草药 ,1990 ,30 (7) :5111
HPLC法测定黄连明目丸中盐酸小檗碱
苏 　亚1 ,卢 　敏2 3
(11 台州市黄岩区红十字医院 ,浙江 台州 318020 ;21 浙江永宁药业股份有限公司 ,浙江 台州 318020)
　　黄连明目丸由黄连、决明子、五味子等组成 ,具
有滋肾明目、平肝熄风功效 ,用于肝肾亏虚 ,视力模
糊 ,畏光流泪等。黄连为该方君药 ,盐酸小檗碱为其
主要活性成分 ,具清热解毒作用。本实验拟测定制
剂中盐酸小檗碱以控制产品质量。
1 　仪器与试药
　　Agilent1100 液相色谱仪 , Agilent 1100 DAD
检测器 ;岛津 UV —260 紫外分光光度计。
　　盐酸小檗碱 (批号 1107132200805) 由中国药品
生物制品检定所提供。乙腈为色谱纯 ,其余为分析
纯。黄连明目丸样品由实验室自制 (批号 :080801、
080802、080803) 。
2 　方法及结果
211 　色谱条件[1 ] :色谱柱 Discovery C218 (250 mm ×
416 mm , 5 μm) ;乙腈 - 0105 mol/ L 磷酸二氢钾
(10 %氢氧化钾试液调节 p H 510) (30 ∶70) 为流动
相 ;检测波长为 350 nm ;体积流量 :1 mL/ min ;进样
量为 5μL 。
212 　对照品溶液的制备 :精密称取以五氧化二磷为
干燥剂减压干燥 24 h 的盐酸小檗碱对照品适量 ,加
甲醇制成 20μg/ mL 的溶液 ,即得。
213 　供试品溶液的制备 :取黄连明目丸适量研细 ,取
约 015 g ,精密称定 ,置 25 mL 量瓶中 ,加入盐酸2甲醇
(1 ∶100)适量 ,浸渍 30 min 后超声处理 30 min ,放冷 ,加
溶剂至刻度 ,摇匀 ,用微孔滤膜(0145μm)滤过 ,即得。
214 　空白试验 :取缺黄连样品按供试品制备法制
备 ,并取适量注入液相色谱仪 ,结果显示在盐酸小檗
碱相同保留时间处无吸收峰。见图 1。
215 　线性关系考察 :精密量取 21132μg/ mL 盐酸
小檗碱对照品溶液 1、2、4、6、8、10、12μL 注入液相
色谱仪 ,测定峰面积。以峰面积为纵坐标 ,进样量为
横坐标 , 得回归方程 Y = 01287 X + 01929 , r =
01999 5。显示盐酸小檗碱进样量在 21132 ～
255184 ng 有良好的线性关系。
216 　精密度试验 :取盐酸小檗碱对照品溶液 ,按以上色
谱条件重复进样 6次 ,测定 ,峰面积的 RSD为 117 %。
217 　稳定性试验 :取黄连明目丸供试品溶液 ,按以
上色谱条件 ,分别在 0、8、12、24、33 h 进样 ,测定盐
酸小檗碱峰面积 ,结果 RSD 为 111 % ( n = 5) ,显示
供试品溶液至少在 33 h 内稳定。
21 8 　重现性试验 :取批号080801黄连明目丸样品
(下转第 967 页)
·419· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
3 收稿日期 :2009202220
作者简介 :苏　亚 (1967 —) ,女 ,浙江黄岩人 ,主管中药师 ,毕业于北京中医药大学。Tel : 13575809997 　E2mail : 420068841 @qq. com
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
图 3 　土牛膝根及茎 HPLC图谱( S1 ,S2 为茎 ,S3 为根)
Fig13 　HPLC Chromatogram for root and stem
of E. chinense ( S1 and S22stem; S32root)
腈2013 %磷酸水溶液、乙腈2012 %磷酸水溶液等度
和梯度洗脱方式 ,并对梯度洗脱程序进行优化 ,结果
表明以乙腈2水系统为最佳。各色谱峰分离度较好 ,
峰型尖锐 ,保留时间适中。
313 　供试品溶液制备条件的选择 :考察了回流、超
声提取方式及甲醇、95 %乙醇、70 %乙醇提取溶剂。
结果表明 ,回流提取方式得到的色谱峰峰面积大 ,峰
数多 ,优于超声提取。甲醇提取的色谱峰最多 ,提取
完全。故供试品溶液制备采用甲醇回流提取 1 h。
314 　指纹图谱的建立 :通过指纹图谱整体图形、共
有特征峰、相对保留时间等参数可对药材进行鉴定 ,
通过各共有峰相对峰面积可对药材的质量进行评
价。10 批广东土牛膝药材指纹图谱中 ,13 个共有峰
相对保留时间符合程度较好 ,说明不同来源的广东
土牛膝药材中组分有其一致性。但是 10 批药材共
有峰相对峰面积有一定的差异 ,说明 10 批药材的质
量是有差异的。
315 　广东土牛膝根茎指纹图谱比较 :在收集样品的
过程中 ,发现市售部分药材含有茎 ,个别甚至以茎为
主 ,因此本实验对广东土牛膝的茎进行 H PL C 测
定。结果表明 ,与广东土牛膝对照图谱差异显著 ,说
明广东土牛膝根和茎成分差异较大。
参考文献 :
[ 1 ] 　广东省中药材标准 [ S]1 20041
[ 2 ] 　张丹雁 , 王　宏 , 赖秀珍1 广东土牛膝化学成分的初步研究
[J ]1 中国民族民间医药杂志 , 1999 , 39 (4) : 2321
[ 3 ] 　曾品会1 土牛膝根对白喉杆菌的抑制和对动物实验的观察
[J ]1 广东中医 , 1959 (9) : 34523471
[ 4 ] 　陈国清 , 邱小梅 , 郑鸣金 , 等1 14 种草药对白喉菌的抗生力
中及其对白喉毒素作用的观察 [J ]1 福建中医药 , 1964 (9) :
13721471
[ 5 ] 　刘晓燕 , 曾晓春 , 江剑东 , 等1 广东土牛膝抗炎镇痛的研究
[J ]1 中医药学刊 , 2004 , 22 (9) : 63526361
[ 6 ] 　中药注射剂色谱指纹图谱研究技术要求 [ S]1 20001
　　(上接第 914 页)
图 1 　黄连明目丸( A) 、盐酸小檗碱对照品( B)和缺黄连的阴性样品( C)的 HPLC图谱
Fig. 1 　HPLC Chromatorams of Huanglian Mingmu Pills ( A) , berberine hydrochloride reference substance ( B) ,
and negative sample ( C)
6 份 ,分别精密称定 ,制备供试品溶液 ,进样测定盐
酸小檗碱峰面积 ,计算得盐酸小檗碱的质量分数为
11313 mg/ g ,其 RSD 为 1112 %。
219 　回收率试验 :取批号 080801 黄连明目丸样品
5 份 ,每份 0125 g ,精密称定 ,加入 01277 4 mg 盐酸
小檗碱对照品 ,制备供试品溶液 ,进样测定 ,计算 ,结
果平均回收率为 10011 % ,RSD 为 018 %。
2110 　样品测定 :取 3 批黄连明目丸样品 ,制备供试
品溶液。分别精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液与供
试品溶液各 5μL 注入液相色谱仪 ,测定 ,计算 ,结果
见表 1。
3 　讨论
　　采用加盐酸2甲醇 (1 ∶100) 直接超声处理15 、 表 1 　黄连明目丸中盐酸小檗碱的测定结果 ( n = 3)Table 1 　Determination of berberine hydrochloridein Huanglian Mingmu Pills ( n = 3)批　号 盐酸小檗碱/ (mg ·g - 1)080801 11 31080802 11 38080803 11 3930 min、预浸 30 min 后超声 30 min、预浸 60 min 后超声60 min ,2 倍溶剂预浸 60 min 后超声 30 min 方法提取对盐酸小檗碱的影响 ,结果显示上述方法测定结果无明显差异 ,为保证提取完全 ,选择超声提取 30 min。参考文献 :[ 1 ] 　丘文珍1 HPLC 法测定障眼明片中盐酸小檗碱 [J ]1中草药 ,2007 ,38 (7) :1030210311
·769·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月