全 文 :乳糖酰壳聚糖纳米粒形态圆整 ,粒径较小 ,分布均
匀 ,包封率稳定 ,载药量较高。有关半乳糖修饰纳米
粒的主动靶向特性尚需进一步考察。
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均匀设计优选舒胸片处方药材的微波辅助提取工艺的研究
张 萍 ,廖正根
①
,梁新丽 ,赵国巍
(江西中医学院 现代中药制剂教育部重点实验室 ,江西 南昌 330004)
摘 要 :目的 研究微波辅助提取舒胸片中阿魏酸和羟基红花黄色素 A 的优化工艺 ,并与传统工艺进行比较 ,确定
微波用于舒胸片中川芎、红花辅助提取工艺的可行性。方法 以阿魏酸、羟基红花黄色素 A 的提取率为指标 ,采用
均匀设计优选微波辅助提取工艺 ,比较微波辅助与传统提取工艺的提取效果。结果 微波功率、微波辐射时间、溶
剂用量对阿魏酸和羟基红花黄色素 A 的提取有交互作用 ,优选出的川芎提取工艺为微波功率 790 W ,提取时间 30
min ,料液比为 1 ∶24 ;红花提取工艺为微波功率 790 W ,提取时间 24 min ,料液比为 1 ∶22。结论 微波辅助提取时
间短、有效成分提取率高 ,可用于舒胸片的提取工艺。
关键词 :舒胸片 ;均匀设计 ;微波辅助提取
中图分类号 :R28411 ; R286102 文献标识码 :A 文章编号 :025322670 (2009) 0120045205
Microwave2assisted extraction of Shuxiong Tablets prescription by uniform design
ZHAN G Ping , L IAO Zheng2gen , L IAN G Xin2li , ZHAO Guo2wei
( Key Laboratory of Modern Preparation of Traditional Chinese Medicine , Minist ry of Education ,
J iangxi University of Traditional Chinese Medicine , Nanchang 330004 , China)
Abstract : Objective To optimize t he feasible technique on ext racting ferulic acid and hydrosafflower
yellow A f rom Shuxiong Tablet s by microwave2assisted ext raction and compare t he ext ract yield wit h t he
conventional ext raction. Methods Taking t he ext ract yield of ferulic acid and hydrosafflower yellow A as
indexes , microwave2assisted ext raction of Shuxiong Tablet s was investigated by uniform design. Results
Some parameters , such as t he microwave power , radiation time , and solvent consumption had t he interac2
tions on t he ext raction of ferulic acid and hydrosafflower yellow A , the optimal technique parameters of ex2
t racting chuanxiong and safflower were 790 W as the microwave power , 30 and 24 min as t he ext racting
time , 1 ∶24 and 1 ∶22 as t he ratio s of raw material to solvent , respectively. Conclusion The microwave
·54·中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月
①收稿日期 :2008204225
基金项目 :国家“十一五”科技支撑计划资助项目 (2006BAIO9B07205)
作者简介 :张 萍 (1983 —) ,女 ,江西省人 ,在读硕士研究生 ,主要从事中药新剂型与新技术。
Tel : (0791) 7119190 E2mail : dolphin_717 @sohu. com
assisted ext raction is found to be convenient and rapid for Shuxiong Tablet s wit h short time and high yield.
Key words : Shuxiong Tablet s ; uniform design ; microwave2assisted ext raction
舒胸片由三七、川芎、红花 3 味中药组成 ,具有
活血、祛瘀、止痛之功效。《中国药典》2005 年版一
部中该方的制备工艺为三七药材以细粉直接压片入
药 ,川芎和红花采用水回流提取。这种提取工艺不
仅加热时间长 ,而且有效成分提取率偏低。微波辅
助提取技术具有快速、提取率高、成本低、质量好等
许多优点 ,尤其是由于微波辅助提取具有提取时间
短 ,可减少有效成分在长时间高温提取过程中的损
失和化学转化等优点而备受关注[1~3 ] 。本实验采用
均匀设计优化微波辅助提取舒胸片处方中川芎、红
花的工艺条件 ,并比较微波法和药典方法对有效成
分提取率的影响 ,为微波提取舒胸片处方药材的可
行性提供依据。
1 仪器与试药
HWC —3L A 型微波提取设备 (广州兴兴微波
能设备有限公司) ;Agilent 1200 高效液相色谱系统
(美国) ; KDM 调温电热套 (鄄城华鲁电热仪器有限
公司) ;SL6001 电子天平 (上海民晰精密科学仪器有
限公司) ;111 型中药粉碎机 (瑞安高永历制药机械
有限公司) ; KQ —250 VDB 型双频数控超声波清洗
器 (昆山市超声仪器有限公司) 。
阿魏酸对照品 (中国药品生物制品检定所 ,批号
1107732200611) ,羟基红花黄色素 A 对照品 (中国
药品生物制品检定所 ,批号 1116372200502) ;川芎、
红花购自南昌黄庆仁栈药店 ,经本校教研室鉴定分
别为伞形科植物川芎 L i g usticum chuanx iong
Hort . 的干燥根茎和菊科植物红花 Cart ham us ti nc2
tori us L . 的干燥管状花。甲醇为色谱级 ,水为双蒸
水 ,其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
211 阿魏酸和羟基红花黄色素 A 的 H PL C 法测定
21111 色谱条件 :Agilent SB C18色谱柱 (250 mm ×
416 mm , 5 μm) ;流动相为甲醇20112 %磷酸水溶
液 ,其梯度洗脱 ,0~13 min ,28 %甲醇 ,13~25 min ,
38 %甲醇 ;体积流量为 018 mL/ min ;检测波长为
403 nm (0~13 min) 、320 nm (13~25 min) ;柱温
为 30 ℃;进样量 20μL 。此色谱条件下能实现阿魏
酸和羟基红花黄色素 A 的同时检测。色谱图见图 1。
21112 供试品溶液的制备 :精密量取川芎、红花提
取液 1 mL 置 10 mL 量瓶中 ,定容后摇匀 ,0145μm
微孔滤膜滤过 即得。
t/ min
12羟基红花黄色素 A 22阿魏酸
12hydrosafflower yellow A 22ferulic acid
图 1 混合对照品( A)和供试品( B)的 HPLC色谱图
Fig. 1 HPLC Chromatograms of mixed reference
substances ( A) and sample ( B)
21113 对照品溶液制备 :分别精密称取阿魏酸和羟
基红花黄色素 A 对照品 1103、2106 mg 置 100 mL
量瓶中 ,加 25 %甲醇溶解并定容至刻度 ,摇匀 ,即得
含阿魏酸 1013 μg/ mL 、羟基红花黄色素 A 2016
μg/ mL 的混合对照品溶液。
21114 标准曲线的绘制 :分别精密吸取阿魏酸和羟
基红花黄色素 A 混合对照品溶液 110、210、310、
410、510、610、710 mL ,置于 10 mL 量瓶中 ,加 25 %
甲醇定容至刻度。吸取上述各混合溶液 20μL 注入
液相色谱仪 ,记录色谱图及峰面积。以色谱峰面积
( Y) 对各质量浓度 ( X) 进行线性回归 ,得回归方程。
阿魏酸 : Y = 221173 X + 0114 , r = 01999 3 ,线性范
围 1103~7121 μg/ mL ;羟基红花黄色素 A : Y =
54106 X - 51788 , r = 01999 9 ,线性范围 2106~
14142μg/ mL 。
21115 精密度试验 :取适宜质量浓度的阿魏酸和羟
基红花黄色素 A 混合对照品溶液 ,连续 6 次测定 ,
以色谱峰面积计 ,其 RSD 分别为 0120 %、0141 % 。
21116 稳定性试验 :取供试品溶液 ,分别于 0、2、4、
8、10 h 进样测定。结果显示 ,供试品溶液在 10 h 内
测定结果稳定。以色谱峰面积计阿魏酸 RSD
1154 % ,羟基红花黄色素 A 的 RSD 1102 %。
21117 加样回收率试验 :在已测定的川芎、红花混
提液中分别加入已知量约 80 %、100 %、120 % 的阿
魏酸和羟基红花黄色素 A 对照品 ,制备供试品溶
液 ,进样测定 ,计算回收率 ,结果阿魏酸平均回收率
为 97176 % ,RSD 为 2125 % ;羟基红花黄色素 A 平
均回收率为 97193 % ,RSD 为 1153 %。
21118 样品的测定 :精密吸取供试品溶液和对照品
溶液各 20 μL , 注入液相色谱仪 , 测定 , 按外标
法计算。
·64· 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月
212 舒胸片处方药材的微波辅助提取工艺流程 :
《中国药典》2005 年版一部中舒胸片方提取工艺为
川芎加水煎煮 ,滤过 ,滤液另存 ,药渣与红花加水煎
煮 2 次 ,合并 3 次煎液 ,滤过 ,取上清液。
为了便于比较 ,在原煎煮的相应环节改用微波
提取。50 g 川芎粗粉 ,加入适量提取溶剂浸泡 20
min ,置于微波提取罐中进行微波提取 1 次 ,分别改
变微波提取时间、料液比 (药材质量与水体积比) 、微
波输出功率 ,将其滤过 ,即得提取液 ,计算阿魏酸的
提取率 (阿魏酸的提取率 = 提取液中阿魏酸的质量/
药材中阿魏酸的质量 ×100 %) 。25 g 红花药材 ,加
入适量提取溶剂浸泡 20 min ,置于微波提取罐中进
行微波提取 1 次 ,分别改变微波提取时间、料液比、
微波输出功率 ,将其滤过 ,即得提取液 ,计算羟基红
花黄色素 A 的提取率 (羟基红花黄色素 A 的提取
率 = 提取液中羟基红花黄色素 A 的质量/ 药材中羟
基红花黄色素 A 的质量 ×100 %) 。
参考单因素试验结果 , 选择均匀设计表安
排试验。
213 微波辅助提取川芎工艺优选
21311 微波辐射时间对阿魏酸的影响 : 50 g 川芎
粗粉 ,600 mL 水浸泡 20 min ,微波输出功率 530 W ,
动态提取 ,每 5 min 取样 2 mL ,并立即补加相应提
取溶剂 2 mL ,用微孔滤膜 (0145μm) 滤过 ,精密吸
取各时间点续滤液 20μL 注入液相色谱仪 ,测定 ,计
算阿魏酸的提取率 ,结果见图 2。阿魏酸的提取率
随微波辐射时间的延长而逐渐增大 ,但 25 min 后随
辐射时间的延长提取率变化不明显。故微波辐射时
间选择 25 min 左右为宜。
t/ min
图 2 微波辐射时间对阿魏酸提取率的影响
Fig. 2 Effect of microwave2assisted extraction
time on extract yield of ferulic acid
21312 料液比对阿魏酸的影响 :50 g 川芎粗粉 ,以
一定料液比的溶剂浸泡 20 min ,微波功率 530 W ,
提取 25 min ,测定提取液中阿魏酸的质量浓度 ,计
算提取率 ,结果见图 3。可知当料液比为 1 ∶15 时
阿魏酸的提取率趋于稳定。
21313 微波功率对阿魏酸的影响 :50 g 川芎粗粉 ,
以 的水浸泡 改变微波功率 提取
min ,测定提取液中阿魏酸的质量浓度 ,计算提取
率 ,结果见图 4。可知功率在 600 W 左右阿魏酸的
提取率趋于稳定。
21314 均匀试验设计 :根据单因素试验考察结果 ,
取 50 g 川芎粗粉 9 份 ,以适量的水浸泡 20 min ,选
择溶剂用量、微波功率、微波提取时间 3 个因素进行
试验 ,考察这 3 个因素对川芎有效成分阿魏酸提取
1 次时提取率的影响。按 U10 (10 ×52 ) 均匀设计表
安排试验 ,各试验条件及结果见表 1。
表 1 混合水平均匀设计结果
Table 1 Uniform design for mixed levels and result
试验号
X1 (溶剂
用量)
X2 (微波功
率) / W
X3 (微波提取
时间) / min
Y (阿魏酸提
取率) / %
1 10 610 35 46191
2 16 790 30 55147
3 22 520 25 47123
4 6 790 20 33132
5 12 520 15 35182
6 18 700 35 65117
7 24 430 30 34117
8 8 700 25 49188
9 14 430 20 33110
10 20 610 15 59178
21315 工艺条件优化 :将测定结果用数据处理系统
SPSS 1115 中的二次多项式逐步回归方法进行分
析 ,得 Y = 131700 0 - 01047 0 X1 2 + 01004 3 X1 X2 ,
其复相关系数 R = 01922 0 , F = 131566 0 ,方程在
α= 0105 水平上显著。根据回归方程分析 ,其最优
组合为 即 24 倍量的水
·74·中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月
790 W 提取 30 min。
214 微波辅助提取红花工艺优选
21411 微波辐射时间对羟基红花黄色素 A 的影
响 :25 g 红花药材 ,350 mL 水浸泡 20 min ,微波功
率 530 W ,提取 ,每 5 min 取样 2 mL ,并立即补加相
应提取溶剂 2 mL ,用微孔滤膜 (0145μm) 滤过 ,精
密吸取各时间点续滤液 20μL 注入液相色谱仪 ,测
定羟基红花黄色素 A 的质量浓度 ,计算提取率 ,结
果见图 5。可见选 15 min 左右能达较好效果。
t/ min
图 5 微波辐射时间对羟基红花黄色素 A提取率的影响
Fig. 5 Effect of microwave2assisted extraction time
on extract yield of hydrosafflower yellow A
21412 料液比对羟基红花黄色素 A 的影响 : 25 g
红花药材 ,以一定料液比的溶剂浸泡 20 min ,微波
功率 530 W ,提取 15 min ,测定提取液中羟基红花
黄色素 A 质量浓度 ,计算提取率 ,结果见图 6。可知
随料液比的增加 ,提取率逐渐增大 ,其原因可能是因
为羟基红花黄色素 A 为水溶性物质 ,溶于水。随料
液比的增加 ,红花药材浸润完全 ,使得有效成分很好
的溶出 ,当料液比为 1 ∶18 ,羟基红花黄色素 A 达到
最大提取率 ,此后 ,随着料液比的增加 ,提取率下降 ,
这可能是因为料液比增加 ,单位体积溶剂获得的微
波能相应减少 ,即在相同的微波加热时间内 ,溶剂量
大的体系温度较低 ,这必然会影响溶质在溶剂中的
扩散。
料液比
图 6 料液比对羟基红花黄色素 A提取率的影响
Fig. 6 Effect of ratio between ra w material and solvent
on extract yield of hydrosafflower yellow A
21413 微波功率对羟基红花黄色素 A 的影响 :
25 g 红花药材 ,450 mL 溶剂浸泡 20 min ,改变微波
功率 ,提取 15 min ,测定提取液中羟基红花黄色素
A 质量浓度 ,计算提取率 ,结果见图 7。可知当微波
功率在 550 W 左右羟基红花黄色素 A 的提取率趋
于稳定。
功率/ W
图 7 微波功率对羟基红花黄色素 A提取率的影响
Fig. 7 Effect of microwave power on extract yield
of hydrosafflower yellow A
21414 均匀设计试验 :根据单因素实验考察结果 ,
精确量取 25 g 红花药材 ,合并川芎提取一次得到的
药渣 ,选择微波辐射时间、溶剂用量、微波功率 3 个
因素进行试验 ,考察这 3 个因素对红花有效成分羟
基红花黄色素 A 提取率的影响 (药渣重复提取 1
次) 。按 U10 (10 ×52 ) 均匀设计表安排试验 ,各试验
条件及结果见表 2。
表 2 混合水平均匀设计结果
Table 2 Uniform design for mixed levels and result
试验号
X1 (辐射时
间) / min
X2 (溶剂
用量)
X3 (微波功
率) / W
Y (羟基红花黄色
素 A 提取率) / %
1 10 18 790 78149
2 16 26 690 67149
3 22 14 590 58158
4 6 26 490 48198
5 12 14 390 50121
6 18 22 790 85137
7 24 10 690 44175
8 8 22 590 71107
9 14 10 490 56142
10 20 18 390 68181
21415 工艺条件优化 :将测定结果用数据处理系统
SPSS1115 中的二次多项式逐步回归方法进行分
析 ,得 Y = 461928 0 + 01002 0 X2 X3 ,其复相关系数
R = 01910 0 , F = 151269 0 ,方程在α= 0105 水平上
显著。根据回归方程及单因素考察分析 ,其最优组
合为 X1 = 24 , X2 = 22 , X3 = 790 ,即 22 倍量的水 790
W 提取 24 min。
215 对比实验 :50 g 川芎粗粉加 1 200 mL 水浸泡
20 min ,功率 790 W ,提取时间 30 min ,滤过 ,滤液另
存 ,药渣与 25 g 红花加 550 mL 水 ,功率 790 W ,提
取 2 次 ,每次 24 min ,合并 3 次提液 ,滤过 ,得提取
液 ,测定有效成分的质量浓度 ,计算提取率。按《中
国药典》2005 年版一部中舒胸片项下方法 ,50 g 川
芎粗粉加 1 200 mL 水煎煮 2 h ,滤过 ,滤液另存 ,药
渣与 25 g 红花加 550 mL 水煎煮 2 次 ,每次 1 h ,合
并 次煎液 滤过 得提取液 测定有效成分的质量
·84· 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月
浓度 ,计算提取率。两种提取方法结果见表 3。可
知微波法对有效成分的提取率较药典法高 ,而且还
节约了时间。
表 3 微波辅助与《中国药典》法提取舒胸片中有效成分的
比较( n = 3)
Table 3 Comparison between microwave2assistant and
Pha rmacopeia method on extracting active
ingredients in Shuxiong Tablets ( n = 3)
提取
方法
阿魏酸提
取率/ %
羟基红花黄色素 A
提取率/ %
总耗时/ h
微波法 831 00 ±21 96 851 34 ±11 60 1123
药典法 791 13 ±31 15 701 84 ±21 79 4100
3 讨论
通过单因素试验确定了各影响因素的较优水平
范围 ,在此基础上采用均匀设计法进一步优化出微
波辅助提取舒胸片方的最优工艺条件 ,得出阿魏酸
的提取率为 83100 % ,羟基红花黄色素 A 的提取率
为 85134 % ,均高于药典法的提取率 ,其原因可能在
于微波辅助提取不同于传统加热方式的基于热传导
作用的外加热 ,而是通过偶极子旋转和离子传导两
种方式内外同时加热[4 ] ,升温迅速导致药材基质结
构组织发生变化 ,材料变得疏松 ,减小了传质阻力 ,
从而达到提高提取效果的目的。
《中国药典》2005 年版一部中舒胸片处方工艺
为三七粉碎成细粉直接压片 ,川芎先单提 1 次 ,药渣
再与红花混提 2 次 ,总共为提取 3 次。因此 ,本实验
首先优选川芎单次微波辅助提取的工艺条件 ,再优
选混提的工艺条件。由于混提过程中尚能提取部分
阿魏酸 (测得阿魏酸的提取率为 15 %左右) ,故最后
阿魏酸 3 次总提取率为 83100 %。
本实验以多成分提取率为考察指标 ,研究微波
技术对舒胸片方中活性成分提取率的影响 ,并将对
制剂的理化性质及有效成分的药理和药物疗效、不
良反应作进一步考察 ,为微波提取舒胸片方工艺的
可行性提供参考。
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均匀设计优选驱虫斑鸠菊的半仿生提取工艺研究
刘晓东1 ,闫 明2
①
,高丽丽3 ,霍仕霞1 ,张兰兰1
(1. 石河子大学药学院 ,新疆 石河子 832003 ; 2. 新疆维吾尔自治区维吾尔医药研究所 ,新疆 乌鲁木齐 830049 ;
3. 长江大学研究生学院 ,湖北 荆州 434023)
摘 要 :目的 优选驱虫斑鸠菊的半仿生提取的最佳工艺条件。方法 以指纹图谱共有峰 HPLC 总面积、总黄酮、
干浸膏得率等为综合评定指标 ,采用均匀设计及指纹图谱优选驱虫斑鸠菊半仿生提取法的条件。结果 优化条件
结合工业生产实际 ,确定其半仿生提取法工艺条件为 :3 次煎煮用 80 %乙醇的 p H 值依次 610、615、810 ;煎煮时间
依次为 1、015、015 h。结论 驱虫斑鸠菊的提取工艺采用半仿生提取 ,均匀设计优选相关参数效果较好。
关键词 : 驱虫斑鸠菊 ;半仿生提取法 ;均匀设计
中图分类号 :R28412 文献标识码 :A 文章编号 :025322670 (2009) 0120049204
Technical condition for semi2bionic extraction of Vernonia a nt helmintica by uniform design
L IU Xiao2dong1 , YAN Ming2 , GAO Li2li3 , HUO Shi2xia1 , ZHAN G Lan2lan1
(1. College of Pharmacy , Shihezi University , Shihezi 832003 , China ; 2. Xinjiang Institute of Traditional Uighur Medicine ,
Urumqi 830049 , China ; 3. Graduate School , Yangtze University , Jingzhou 434023 , China. )
Abstract : Objective To optimize t he best condition of semi2bionic ext raction for V ernoni a ant hel mi n2
·94·中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 1 期 2009 年 1 月
①收稿日期 :2008206205
基金项目 :国家科技支撑计划项目 (2007BAI30B00 ; 2007BAI48B06)
作者简介 :刘晓东 (1980 —) ,男 ,河南商丘人 ,硕士研究生 ,从事仪器分析新方法及新药研究。
Tel :15894683921 E2mail : xiaodongliu204 @hot mail . com