全 文 ：复叶叶柄可以产生体胚 ,而萌发 30 d 以后的叶柄在
整个实验周期内均未见胚胎发生 ,产生的愈伤组织
量也极少。
参考文献 :
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不同款冬花药材中槲皮素和山柰素的定量分析及 HPLC 指纹图谱研究
马致洁1 ,2 ,董红红2 ,李振宇2 ,周玉枝2 ,秦雪梅1 ,2 3 ,郭小青2 ,孙海峰2 ,张丽增2 3
(11 山西大学化学化工学院 ,山西 太原 　030006 ; 21 山西大学 化学生物学与分子工程国家教育部
重点实验室中医药现代研究中心 ,山西 太原 　030006)
摘 　要 :目的 　建立款冬花药材中槲皮素和山柰素的定量测定方法 ,测定不同来源的药材中槲皮素和山柰素的量 ,
评价产地、生长方式及炮制对款冬花中槲皮素和山柰素量的影响 ;并建立款冬花中黄酮醇苷类成分指纹图谱 ,为款
冬花质量控制的制定提供依据。方法 　采用 HPLC 建立款冬花药材中槲皮素和山柰素的定量测定方法 ,色谱条
件 :Diamonsil C18 (200 mm ×4. 6 mm , 5μm) ,流动相为乙腈2水 (77 ∶23) ,检测波长 :365 nm。采用 HPLC 法建立
款冬花药材中黄酮醇苷类成分指纹图谱 ,色谱条件 :ODS2BP C18 (200 mm ×4. 6 mm , 5μm) ;流动相 :乙腈2011 %
H3 PO4水溶液梯度洗脱 ;检测波长为 365 nm。结果 　不同产地 ,炮制品与生品之间 ,其槲皮素和山柰素的量差异
较大 ,不同生长方式的药材之间无明显差异 ;不同产地及批次的款冬花药材的指纹图谱相似度较高。结论 　本研
究建立的槲皮素和山柰素的定量测定方法简便、准确、重现性好 ,可用于款冬花药材中黄酮醇苷类成分的质量控
制 ;不同来源的款冬花药材中的槲皮素和山柰素的量有明显差异 ;所建立的黄酮醇苷类成分的指纹图谱方法操作
性强、重现性好 ,可作为款冬花黄酮醇苷类成分指纹图谱研究的基础。
关键词 :款冬花 ; 槲皮素 ; 山柰素 ; HPLC ; 指纹图谱
中图分类号 :R28217 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0821305204
Quantitative analysis and HPLC f ingerprint of quercetin and kaempferide
from different Flos Fa r f a raes
MA Zhi2jie1 ,2 , DON G Hong2hong2 , L I Zhen2yu2 , ZHOU Yu2zhi2 , Q IN Xue2mei1 ,2 ,
GUO Xiao2qing2 , ZHAN G Li2zeng2
(11 College of Chemist ry and Chemical Engineering , Shanxi University , Taiyuan 030006 , China ; 2. Modern Research
Key Laboratory of Chemical Biology and Molecular Engineering Centre for Traditional Chinese
Medicine , Minist ry of Education , Shanxi University , Taiyuan 030006 , China)
Abstract : Objective 　To establish t he method for quantitative analysis of quercetin and kaempferide in
Flos Far f arae , to determine t he content s of quercetin and kaempferide in Flos Far f arae f rom various
habitat s , to evaluate t he effect s of habitat s , growt h way , and p rocessing on the content s of quercetin and
kaempferide in Flos Far f arae , and to establish the fingerp rint of flavone glycosides in Flos Far f arae , so
as to p rovide the information for quality cont rol of Flos Far f arae. Methods 　Quantification of quercetin
and kaempferide in Flos Far f arae was performed by H PL C on Diamonsil C18 column (200 mm ×4. 6 mm ,
5μm) using acetonit rile2H2 O (77 ∶23) as mobile p hase and detected at 365 nm. And fingerp rint analysis
of flavone glycosides in Flos Far f arae was performed by HPL C on ODS2BP C18 column (200 mm ×4. 6
·5031·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 8 期 2009 年 8 月
3 收稿日期 :2008210217　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :马致洁 (1983 —) ,天津人 ,在读硕士 ,主要从事中药质量控制及中药代谢组学研究。E2mail : zhijiesy @yahoo. com. cn3 通讯作者 :秦雪梅 ,教授 ,研究生导师。Tel : (0351) 7011202 　E2mail : qinxm @sxu. edu. cn
mm , 5μm) , eluted wit h acetonit rile20. 1 % H3 PO4 gradiently , and detected at 365 nm. Results 　The
content s of quercetin and kaempferide in Flos Far f arae ralated to t he habitat s and processing obviously ,
but unrelated to growt h way. The similarity of fingerp rint s of Flos Far f arae f rom different habitat s and
batches was higher . Conclusion 　The quantification met hod of quercetin and kaempferide in Flos Far f arae
is convenient , accurate , stable , and could be used for quality cont rol of flavone glycosides in Flos
Far f arae. The content s of quercetin and kaempferide are obviously different f rom various Flos Far f arae .
The met hod of t he fingerp rint analysis is feasible and rep roductive , and could be used as t he foundation for
st udy on the fingerp rint s of flavone glycosides in Flos Far f arae.
Key words : Flos Far f arae ; quercetin ; kaempferide ; HPL C ; fingerp rint
　　款冬花为菊科款冬属 ( T ussi l ago L . ) 植物款
冬 T ussi l a go f ar f are L . 未开放的干燥头状花序 ,
又名冬花 ,主产于陕西榆林地区[ 1 ] ,山西、河南、河
北、甘肃等地均有分布 ,始载于《本草纲目》,为历版
《中国药典》收载中药 ,具润肺下气 ,止咳化痰之功
效[ 2 ] 。大量研究表明 ,款冬花的主要化合物类型包
括萜类、黄酮和生物碱。但对款冬花的质量控制研
究报道较少 ,仅有对芦丁等[3 ] 单一成分及总黄酮[4 ]
的定量测定 ,对药材的质量控制专属性不强。而黄
酮醇类物质对心血管系统具有明显的药理作用 ,是
其药效成分 ,采用高效液相色谱法对黄酮醇苷类成
分中槲皮素和山柰素同时进行测定 ,可为其质量控
制提供依据 ;建立了款冬花中黄酮醇苷类成分指纹
图谱 ,可作为款冬花黄酮醇苷类成分指纹图谱研究
的基础 ,并对不同产地、不同生长方式及炮制品款冬
花药材中槲皮素和山柰素的量进行测定。
1 　仪器与试药
　　Waters 高效液相色谱仪 (1525 泵 ,2487 紫外检
测器) ;Breeze 工作站 ;电子分析天平 (BS210S ,北
京赛多利斯天平有限公司) ;数控超声波清洗器
( KQ2200DB 型) 。槲皮素、山柰素对照品 (中国药
品生物制品检定所提供 ,供定量测定用) ;乙腈 :色谱
纯 ;水 :重蒸水 ;其他试剂均为分析纯。实验所用药
材见表 1、2 ,经山西大学秦雪梅教授鉴定为款冬未
开放的干燥头状花序 ,所有药材均留样于山西大学
中医药现代研究中心。
2 　方法与结果
211 　槲皮素和山柰素的定量分析
21111 　色谱条件 :色谱柱为 Dikma Technologies
(美国迪马公司) ,流动相为乙腈2水 (77 ∶23) ,体积
流量 : 1 mL/ min ,柱温 : 25 ℃,检测波长 : 365 nm。
色谱图见图 1。
21112 　对照品溶液的制备 :精密称取槲皮素、山柰
素对照品适量 ,加甲醇制成分别含 27 μg/ mL ,17
μg/ mL 溶液即得。
12槲皮素　22山柰素
12quercetin 　22kaempferol
图 1 　款冬花药材( A)与对照品( B)高效液相色谱图
Fig. 1 　HPLC Chromatograms of Flos Fa r f a rae ( A)
and reference substance ( B)
21113 　供试品溶液的制备 :取款冬花药材 (过 2 号
筛) 115 g ,精密称定 ,加甲醇 30 mL ,超声提取 20
min ,滤过 ,滤液加 25 % 的 HC 溶液 8 mL ,水浴加
热回流 30 min ,放冰水中迅速冷却至室温 ,转移至
50 mL 量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,即得。
21114 　标准曲线与线性关系考察 :分别精密吸取质
量浓度为 215、715、1215、2010、3010、4510、6010
μg/ mL 的槲皮素对照品溶液各 20μL ,质量浓度为
0115、0130、0160、1150、7150、15100、20100 μg/ mL
的山柰素对照品溶液 20μL ,注入高效液相色谱仪 ,
记录色谱图 ,测定峰面积 ,以峰面积 ( Y) 对其质量
( X) 进行回归 ,得槲皮素回归方程 : Y = 2 E + 06 X -
22 35716 , r = 01999 6 ,山柰素回归方程 : Y = 3 E + 06
X - 7 61815 , r = 01999 8 ,结果表明 ,在 01005～
112μg 槲皮素峰面积与进样量呈良好的线性关系 ;
在 01000 3～014μg 山柰素峰面积与进样量呈良好
的线性关系。
21115 　精密度试验 :各精密吸取同一对照品溶液
20μL ,分别连续进样 5 次 ,照 21111 项下色谱条件
测定 ,槲皮素峰面积的 RSD 为 1196 % ,山柰素峰面
积的 RSD 为 2112 %。
21116 　重现性试验 :精密称取同一批药材 6 份 ,并
制成供试品溶液 ,照 21111 项下色谱条件 ,平行测
定 ,测得槲皮素质量分数的 RSD 为 2111 % ,山柰素
质量分数的 RSD 为 2131 %。
·6031· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 8 期 2009 年 8 月
21117 　加样回收率试验 :取已测定的款冬花药材适
量 ,精密称定 ,分别加入槲皮素和山柰素对照品 ,按
样品制备方法制备溶液 ,平行测定 6 次 ,记录色谱
图。按外标法进行计算 ,结果款冬花中槲皮素和山
柰素的平均回收率分别为 10111 %、10112 % , RSD
分别为 1112 %、1171 %。
21118 　样品测定 :分别精密吸取对照品溶液与样品
溶液各 20μL ,注入液相色谱仪 ,7 个款冬花样品的
测定结果见表 1。结果表明 ,不同款冬花药材中槲
皮素和山柰素的量均较高。
表 1 　不同产地药材的定量测定结果 ( n = 3)
Table 1 　Contents of quercetin and kaempferol of Flos
Fa r f a rae from different habitats ( n = 3)
药材产地 来　源 槲皮素/ % 山柰素/ %
山西灵丘种植 采集于山西灵丘种植基地 1113 0184
山西灵丘野生 采集于山西灵丘种植基地 1115 0183
山西 (购买) 购买于太原药店 1318 0191
河南 山西华阳药业有限公司 1017 0176
河北 山西华阳药业有限公司 818 0141
甘肃 购买于同仁堂药店 511 0128
甘肃蜜炙 购买于同仁堂药店 316 0128
212 　黄酮醇苷类 H PL C 指纹图谱研究
21211 　色谱条件 :ODS2BP C18 (200 mm ×4. 6 mm ,
5μm) 色谱柱 ; 流动相 : 乙腈 ( A )2011 % H3 PO4
(B) ,梯度洗脱 (0～30 min , 10 %A ; 30～35 min ,
10 %A～20 %A ;35～45 min ,20 %A ;45～55 min ,
20 %A～30 %A ;55～60 min ,30 %A ;60～65 min ,
30 %A～40 %A ;65～70 min ,40 %A ;70～75 min ,
40 %A～60 %A ;75～80 min ,60 %A ;80～90 min ,
60 %A～10 %A ;90～100 min ,10 %A) ;体积流量 :
1 mL/ min ;柱温 25 ℃;检测波长为 365 nm。色谱
图见图 2。
图 2 　槲皮素、山柰素混合对照品( A)和
山西样品( B) HPLC 图谱
Fig. 2 　HPLC Chromatograms of mixture of quercetin
and kaempferol ( A) and Shanxi sample ( B)
在选定条件下 ,色谱图相邻两峰分离度之和
ΣR 与色谱峰总峰面积之和ΣS 均为最大 ,理论塔板
数按槲皮素和山柰素峰计算 ,均不低于 2 000。
21212 　对照品溶液的制备 :精密称取槲皮素、山柰
素对照品适量 ,加甲醇制成各含 30、20 μg/ mL
即得。
21213 　供试品溶液的制备 :取款冬花药材粗粉 115
g ,精密称定 ,加甲醇 30 mL ,超声提取 20 min ,滤过 ,
滤液加 25 % 的 HCl 溶液 8 mL。80 ℃水浴加热回
流 30 min ,放冰水中迅速冷却至室温 ,转移至 50 mL
量瓶中 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,即得。取 20μL 进样。
21214 　方法学考察 :按照《中国药典》2005 年版一
部中药质量标准分析方法验证指导原则的要求 ,对
上述方法进行方法学验证。稳定性实验表明样品在
16 h 内稳定性良好 ;精密度和重现性试验测得各共
有峰相对保留时间和相对峰面积的 RSD 均小于
3 % ,表明精密度和重现性良好。
21215 　指纹图谱分析结果和相似度分析 :按照确定
的方法 ,对所选 13 批款冬花药材进行分析 ,结果共
有 12 个共有峰 ,其色谱图见图 3 ,保留时间 ( min)
分别为 : 171433、241116、341596、371848、391537、
471777、511767、551279、571984、591541、611640。
以甘肃的色谱图作为参照谱对 13 批不同产地款冬
花药材的色谱图进行自动匹配 ,匹配结果见图 4 ;相
似度分析见表 2。
·7031·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 8 期 2009 年 8 月
表 2 　13 批款冬花药材相似度计算结果
Table 2 　Results of similarity of 13 batches of Flos Fa r f a rae samples
编号 产　地 来　源 相似度 编号 产　地 来　源 相似度
1 甘肃 购买于同仁堂药店 0195 8 山西灵丘 (野生 2) 采集于山西灵丘种植基地 01 95
2 河北蔚县 购买于荣华大药房 0198 9 山西灵丘 (种植 1) 采集于山西灵丘种植基地 01 98
3 河南 万民大药房 0194 10 山西 购买于太原长城大药房 01 97
4 河南 山西华阳药业有限公司 0198 11 山西 黄河药店 01 99
5 河南 购买于太原长城大药房 0198 12 山西 万民大药房 01 97
6 河南 购买于太原万民大药房 0196 13 山西灵丘 (种植 2) 采集于山西灵丘种植基地 01 95
7 山西灵丘 (野生 1) 采集于山西灵丘种植基地 0197
21216 　PL S2DA 分析 :对 13 批药材指纹数据乾地
PL S2DA 分析 ,所得结果见图 5。由图 5 可知 ,各产
地药材分散较明显 ,其中 7 批山西产药材与 4 批河
南产药材聚集较集中 ,甘肃产药材与河南产药材聚
集在一起 ,说明这两个产地之间无明显差异 ,河北药
材与其他几产地有差异。从整体上看 ,不同产地药
材之间有一定的差异性。
图 5 　13 批药材 PLS2DA 分析结果
Fig. 5 　PLS2DA Analysis of 13 batches of samples
3 　结论与讨论
311 　所建立的 H PL C 同时测定款冬花中槲皮素和
山柰素方法简便、准确、重现性好 ,可用于款冬花药
材中黄酮醇苷类成分的质量控制 ;通过对不同主产
区不同品种款冬花药材指纹图谱研究 ,得到了对照
指纹图谱 ,该图谱可代表款冬花的特性成分 ,作为款
冬花药材鉴别依据。
312 　13 批药材的指纹图谱用中药色谱指纹图谱相
似度评价软件分析 ,结果显示相似度均大于 018 ,说
明各产地款冬花其所含化学成分无明显差异 ;而
PL S2DA 分析结果显示 ,不同产地分组较好 ,药材之
间有一定的差别。
313 　不同产地款冬花药材槲皮素和山柰素质量分
数比较 ,本研究收集了 4 个主产区的款冬花药材 ,由
表 1 的数据可知 ,山西所产的药材槲皮素和山柰素
的量都最高 ,而甘肃所产的药材槲皮素和山柰素的
量最低。
314 　不同生长方式款冬花药材槲皮素和山柰素量
的比较 ,本研究收集了山西灵丘种植和野生两种不
同生长方式的药材 ,由表 1 可知 ,两种药材中槲皮素
和山柰素的量无明显差异 ,所以生长方式不是款冬
花中槲皮素和山柰素量的主要影响因素。
315 　炮制与不炮制款冬花药材槲皮素和山柰素量
比较 ,从甘肃蜜炙与生品所得结果可以看出 ,蜜炙品
中槲皮素的量降低 ,只有生品的 70 % ,山柰素的量
基本不变 ,可知蜜炙对款冬花药材槲皮素影响较大。
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易智彪1 ,2 ,薄雯映1 ,许冬瑾1 ,赖小平2 3
(11 康美药业股份有限公司 ,广东 普宁 　515300 ; 21 广州中医药大学中药学院 ,广东 广州 　510405)
摘 　要 :目的 　建立太子参 HPLC 指纹图谱共有模式 ,并进行方法学考察。方法 　采用 HPLC 分析方法 ,色谱柱
为 Kromasil C18柱 ;流动相 :乙腈2水梯度洗脱 ;时间为 70 min。体积流量 : 110 mL/ min ;柱温 : 25 ℃;检测波长 :
·8031· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 8 期 2009 年 8 月
3 收稿日期 :2008211215　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :易智彪 (1979 —) ,男 ,博士后 ,研究方向为系统生物学及中药质量控制。Tel : (0663) 3883713 　E2mail : zhibiaoyi @163. com