全 文 ：·药理与临床·
苦参碱对人卵巢癌细胞株 HO-8910PM 增殖及侵袭运动能力的影响
申志华1 ,揭　伟2X ,陈　锦1,黄培春1
( 1. 广东医学院 病理生理学教研室,广东 湛江　524023; 2. 广东医学院 病理教研室,广东 湛江　524023)
摘　要: 目的　研究苦参碱对人高转移卵巢癌细胞系 HO-8910PM 增殖及转移相关能力的影响及其作用机制。方
法　以 MT T 法和台盼蓝拒染法检测苦参碱对人高转移卵巢癌 HO-8910PM 细胞增殖的影响; T r answ ell 小室法
检测其对 HO-8910PM 细胞侵袭运动能力的影响;考马斯亮蓝染色法检测不同质量浓度苦参碱对 HO-8910PM 细
胞细胞骨架的改变及免疫细胞化学方法检测药物作用前后 HO-8910PM 细胞 Ezr in 蛋白的表达。结果　苦参碱对
HO-8910PM 细胞增殖抑制呈明显剂量和时间效应; 1. 5 g/ L 苦参碱能明显抑制细胞的增殖, 作用 6 h 后能抑制
HO-8910PM 细胞体外侵袭人工基底膜和运动能力, 抑制率分别为 ( 41. 52±10. 76) % 和 ( 39. 73±10. 67) % ; 1. 0、
1. 5 g / L 苦参碱作用 HO-8910PM 细胞 24 h 后使细胞骨架明显改变, 并上调 Ezrin 蛋白的表达。结论　苦参碱能抑
制高转移性人卵巢癌细胞 HO-8910PM 的增殖能力和侵袭运动能力, 其抗肿瘤侵袭运动的机制与细胞骨架和
Ezr in 蛋白表达的改变有关。
关键词: 苦参碱; 卵巢癌; 增殖; 侵袭; 细胞骨架; Ezrin
中图分类号: R286. 91　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253- 2670( 2008) 03- 0386- 05
Effects of matrine on proliferation and metastasis abilities of human
ovarian carcinoma HO-8910PM cells line
SHEN Zhi-hua1 , JIE Wei2 , CHEN Jin1 , HUANG Pei-chun1
( 1. Depar tment of Pathophysiolog y, Guangdong Medica l College, Zhanjiang 524023, China; 2. Depar tment
o f Pat holog y, Guangdong Medica l College, Zhanjiang 524023, China)
Abstract: Objective　T o study the ef fect of matrine on proliferation and metastasis associated the
abilit ies o f human highly metastatic ovarian cancer HO-8910PM cells and its possible mechanism. Methods
The trypan blue staining and M T T assay were used to examine the ef fect of matrine on prolifer at ion of
HO-8910PM cells; Tr answ ell chamber assay w as performed to determ ine the effect of matrine on the inva-
sive and mig rato ry abilit ies of the cells; Coomassie brilliant blue staining assay w as used to detect the
changes in cytoskeleton t reated by matrine at dif ferent concentrat ions and immunocy to chem ical methods
w er e used to observe the expression o f Ezrin pr otein in HO-8910PM cell line befores and af ter matrine
t reatment . Results　There w as an obvious dose-dependent and t ime-consuming ef fect on the inhibit ion of
HO-8910PM cells prol iferation by matrine; 1. 5 g/ L matrine inhibited cell prolifer at ion signif icant ly , for
6 h after the tr eatment in vitr o, the invasive and migr ato ry abilit ies of HO-8910PM cel ls w ere also obvious-
ly dow n-regulated w ith the inhibito ry rates ( 41. 52±10. 76) % and ( 39. 73±10. 67) % , respect iv ely ;
M atrine distinct ly changed the cytoskeleton and up-r egulated the expression of Ezrin pr otein in HO-
8910PM cell line t reated w ith 1. 0 g and 1. 5 g / L matrine for 24 h. Conclusion　Matr ine inhibits the proli-
ferat ion, migrat ion, and invasion abilit ies of HO-8910PM cell line in v itro, w hich may associate w ith the
changes of cy toskeleton and Ezrin protein expr ession.
Key words : matrine; ov ar ian carcinoma; pr oliferat ion; invasion; cytoskeleton; Ezrin
　　卵巢癌是女性生殖系统常见恶性肿瘤之一,其
发病率占妇科恶性肿瘤的第 3位, 占妇女各种恶性
肿瘤的第6位,占全身恶性肿瘤的5%。卵巢癌的治
疗是以手术为主,辅以放化疗、中医药及生物治疗的
综合性治疗,但其5年存活率始终停留在30%左右,
死亡率已居女性生殖系统肿瘤的首位 [ 1]。苦参是传
·386· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第39卷第 3期 2008 年3 月
X 收稿日期: 2007-07-10基金项目:广东医学院青年科研基金资助项目 ( XQ0205) ; 广东省湛江市科技立项课题 ( ZK0535)作者简介:申志华( 1975—) ,女,硕士,讲师,主要从事肿瘤免疫及转移相关机制研究。　E-mail : s zh75@ 126. com
* 通讯作者　揭　伟　Tel: ( 0759) 2388587　E-mail: jiewei74@ 126. com
统的中草药, 具有抗肿瘤、抗炎等广泛生物学效应。
苦参碱是其重要的生物碱,对某些肿瘤细胞及移植
瘤有较高的抑制率 [ 2～4] , 提示苦参碱在抗肿瘤方面
具有潜在的临床应用价值。目前尚未见苦参碱在卵
巢癌治疗中的研究报道。本研究探讨苦参碱对人高
转移性卵巢癌细胞株 HO-8910PM 增殖及侵袭转移
等方面的影响,为进一步阐明苦参碱用于卵巢癌临
床治疗的可能机制奠定基础。
1　材料与方法
1. 1　细胞株、药品和主要试剂: 人高转移性卵巢癌
细胞株 HO-8910PM 购自上海细胞生物研究所,由
浙江省肿瘤研究所许沈华教授等建立[ 5]。苦参碱注
射液购自广州明兴制药厂 (批号 051104-1) ; RPM I-
1640 培养基购自 Gibco 公司;小牛血清购自杭州四
季青生物工程和材料研究所; M TT 购自 Sigma 公
司;纤维黏连蛋白 ( FN)、人基底膜胶 ( matrigel) 购
自 BD 公司; T ransw ell 小室 (直径 6. 5 mm, 孔径
8. 0 Lm) 购自 Corning 公司。鼠抗人 Ezrin 一抗购
自 Neo M arker s 公司 (克隆号 3C12)。
1. 2　细胞培养和分组: HO-8910PM 细胞在含体积
分数为 10% 热灭活小牛血清、1×105U / L 青霉素
和 100 mg / L 链霉素的 RPMI-1640 完全培养液中,
置 37 ℃、5% CO 2、饱和湿度的培养箱内培养。细胞
经过消化传代,取对数生长期的细胞进行培养及实
验。实验前用台盼蓝拒染法确保所用细胞拒染率在
97% 以上。细胞接种 8 h 后进行换液和药物处理。
处理组在培养液中加入苦参碱注射液,终质量浓度
分别为 0. 5、1. 0、1. 5、2. 0 g/ L , 以不含苦参碱的
RPMI-1640 完全培养液为对照。
1. 3　MTT 法测定苦参碱对 HO-8910PM 细胞增
殖的影响: 选取对数生长期的 HO-8910PM 细胞,
0. 2% 胰酶消化后调整细胞浓度为 3×107 / L ,加入
96 孔板中,每孔 200 LL,设 6 个复孔。放入 37 ℃、
5% CO 2的培养箱内培养。细胞加药(苦参碱1. 0 g/
L ,剂量依赖 IC50值确定)后分别培养 24、48 h。培养
结束后加入 MT T ( 5 g / L ,每孔 20 LL) , 再置于 37
℃、5% CO 2条件下培养 4 h。取出, 吸弃上清液,加
入 DMSO 每孔 200 LL, 平板摇床上摇动混匀 10
min,酶标仪上测 490 nm 处吸光度 ( A ) 值。计算增
殖抑制率[增殖抑制率= (对照组A 值- 实验组 A
值) /对照组A 值×100%]。
1. 4　台盼蓝拒染法测定苦参碱对 HO-8910PM 细
胞生长的影响: 选取对数生长期的 HO-8910PM 细
胞,消化后调整细胞浓度为 1×107 / L , 加入 24 孔
板, 每孔 1 mL。放入 37℃、5% CO 2的培养箱内培
养。细胞加药(苦参碱 1. 0 g/ L , 剂量依据 IC50值确
定) 后每隔 12 h 每组各取 4 孔,消化后细胞计数板
计数,共做 72 h,绘制细胞生长曲线。
1. 5　细胞-基质黏附试验: 参照苟新敏等 [ 6]所用方
法配制 Matir gel 胶, 并铺于 96 孔板内 (每孔
2 Lg)。挑选生长状态良好的细胞,消化计数, 用含有
不同质量浓度苦参碱 ( 0. 5、1. 0、1. 5、2. 0 g / L ) 的生
长液调整细胞浓度, 以 4×104/孔接种在铺胶的 96
孔板中;不加苦参碱的生长液组为阴性对照;每组 6
个复孔。置 37 ℃、5% CO 2培养箱内培养 60、120
m in 后, 弃上清, 加入结晶紫染液 100 LL/孔, 染色
10 m in, PBS 冲洗3次除去未黏附细胞;每孔加入醋
酸乙酯 100 LL,酶联免疫检测仪上 570 nm 处测定
各孔的 A 值, 以 A 值代表黏附细胞数。计算黏附抑
制率[黏附抑制率= (对照组A 值- 实验组A 值) /对
照组A 值×100% ]。
1. 6　细胞运动侵袭试验 [ 6] : 在 24孔培养板中每孔
加入含有 10 Lg/ mL 纤维黏连蛋白的 RPMI-1640
培养基 600 LL。收集对数生长期的 HO-8910PM 细
胞, 分别用加有苦参碱 (终质量浓度为 1. 0、1. 5 g /
L ) 和未加苦参碱的含 1% BSA 的 RPM I-1640 培
养基重悬, 并调整浓度为 1×109 / L。将 Transw ell
小室浸于 24 孔板的条件培养基中, 每个小室加细
胞悬液 100 LL,置 37 ℃、5% CO 2培养箱内培养 6
h。将 T ransw ell 小室取出,滤膜用甲醇固定 1 min,
结晶紫染色 15 min,水洗,棉签小心擦去未穿膜的
细胞, 中性树胶封片, 于 400 倍显微镜下计数穿过
滤膜的细胞数。每膜计数上下左右中5个随机不同
视野,每组平行设3个滤膜。计算运动抑制率[运动
抑制率= (对照组穿膜细胞数- 实验组穿膜细胞
数) /对照组穿膜细胞数×100%]。侵袭试验时在
T ransw ell 小室膜的内表面涂基底膜成分 Matrigel
5 Lg ( 10 LL) , 超净台通风过夜使之干燥, 形成人工
重组基底膜,其余步骤同细胞运动实验。计算侵袭抑
制率[侵袭抑制率= (对照组穿膜细胞数- 实验组穿
膜细胞数) /对照组穿膜细胞数×100% ]。
1. 7　细胞骨架观察: 取对数生长期的细胞,常规消
化, 调整细胞浓度为 5×107 / L ,接种于预先铺好盖
玻片的 6 孔细胞培养板内, 置于 37 ℃、5% CO 2培
养箱内培养。细胞贴壁后更换为含有不同质量浓度
苦参碱的培养液, 继续培养 24 h 后取出, PBS 洗
3×5 m in, 1. 5% T rton-X100 震荡洗涤 3×8 min,
M 缓冲液洗 3×4 min, 3% 戊二醛固定 10 min, M
·387·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第39卷第 3期 2008 年3 月
缓冲液洗 3×3 m in, 考马斯亮蓝染液染色 40 m in,
PBS 洗去多余染液, 空气干燥, 二甲苯透明, 中性树
胶封片。显微镜下观察,摄像。
1. 8　免疫细胞化学方法测定 Ezrin 蛋白的表达:细
胞消化爬片及药物处理同 1. 7 项。培养结束后取
出,用甲醇-丙酮 ( 1∶1) 固定 10 m in,晾干。参照 S-
P 试剂盒说明进行操作: 细胞水化, PBS 洗 3×5
min, 滴加过氧化物酶阻断剂, 室温孵育 15 m in,
PBS 洗 3×5 min; 滴加正常山羊血清封闭剂,室温
孵育 20 min, 甩去多余血清, 不洗; 滴加鼠抗人
Ezrin 一抗 ( 1∶100 稀释) ,同时以 PBS 代替一抗作
空白对照, 4 ℃ 孵育过夜;滴加生物素标记的羊抗
鼠二抗,室温孵育 10 m in, PBS 洗 3×5 min;滴加链
菌素亲生物蛋白-过氧化物酶溶液, 室温孵育 10
min, PBS 洗 3×5 min; DAB 显色,苏木素复染, 自
来水返蓝,晾干后中性树胶封片,显微镜下观察阳性
细胞的百分率及阳性染色程度。结果判断: 光镜下观
察,胞质或胞膜出现棕黄色颗粒者为阳性细胞。
1. 9　统计学分析:数据分析采用 SPSS11. 5 统计软
件进行方差分析。
2　结果
2. 1　苦参碱对 HO-8910PM 细胞增殖的影响: 用不
同质量浓度苦参碱作用于细胞后, M T T 法测定对
HO-8910PM 细胞增殖的抑制效应。数据显示, 随着
苦参碱质量浓度的增加和作用时间的延长, A 值逐
渐降低,提示活细胞数量逐渐减少, 表明苦参碱对
HO-8910PM 细胞增殖的抑制能力逐渐升高, 呈明
显剂量和时间依赖效应 (表1)。
表 1　苦参碱对 HO-8910PM 细胞增殖的影响 ( x±s, n= 6)
Table 1　Ef fect of matrine on prolif eration
of HO-8910PM cells ( x±s, n= 6)
作用时间 剂量/ ( g·L - 1) A 值 增殖抑制率/ %
24 h 0. 0 (对照) 0. 954±0. 037 　　-
0. 5 0. 825±0. 073 13. 34±8. 69
1. 0 0. 547±0. 158 47. 64±7. 80*
1. 5 0. 392±0. 049* * 58. 86±5. 83* *
2. 0 0. 341±0. 063* * 64. 36±5. 64* *
48 h 0. 0 (对照) 0. 773±0. 048 　　-
0. 5 0. 694±0. 052 10. 34±5. 88
1. 0 0. 455±0. 113 44. 14±6. 97# #
1. 5 0. 279±0. 041# # 64. 12±3. 81# #
2. 0 0. 286±0. 059# # 68. 19±5. 26# #
　　与 24 h 对照组比较: * P < 0. 05　* * P < 0. 01
　　与 48 h 对照组比较: # # P < 0. 01
　　* P < 0. 05　* * P< 0. 01 v s 24 h cont rol group
　　# # P< 0. 01 v s 48 h cont rol group
2. 2　苦参碱对 HO-8910PM 细胞生长曲线的影响:
如图1所示,随着苦参碱作用时间的延长,实验组的
生长曲线前期 ( 48 h 之前) 较平坦,后期 ( 48 h 之
后) 开始降低, 与阴性对照组比较差异具有显著统
计学意义 ( P< 0. 01)。
图 1　苦参碱 ( 1. 0 g/ L) 对 HO-8910PM 细胞生长曲线的
影响 ( x±s, n= 4)
Fig. 1　Ef fect of matrine ( 1. 0 g/L) on growth curve
of HO-8910PM cells ( x±s, n= 4)
2. 3　苦参碱对 HO-8910PM 细胞黏附能力的影响:
随药物质量浓度的增加及作用时间的延长, A 值逐渐
降低, 提示黏附细胞数量逐渐减少, 处理后的 HO-
8910PM 细胞对基质的黏附能力逐渐降低,表明苦参
碱对细胞黏附能力的抑制效应逐渐增高 (表2)。
表2　苦参碱对 HO-8910PM 细胞基质黏附能力的
影响 ( x±s, n= 6)
Table 2　Ef fect of matrine on adhesion ability
of HO-8910PM to matrix ( x±s, n= 6)
作用时间 剂量/ ( g·L- 1) A 值 黏附抑制率/ %
1 h 0. 0 (对照) 1. 369±0. 041 　　-
0. 5 1. 248±0. 039 8. 85± 2. 49
1. 0 1. 098±0. 109 19. 80± 7. 93
1. 5 1. 093±0. 040* 20. 19± 3. 24
2. 0 0. 981±0. 103* 28. 36± 6. 99
2 h 0. 0 (对照) 1. 378±0. 065 　　-
0. 5 1. 091±0. 100 20. 80± 7. 44
1. 0 0. 960±0. 076# 30. 36± 2. 35
1. 5 0. 833±0. 112# 39. 54± 7. 96
2. 0 0. 688±0. 098# # 40. 03±10. 38
　　与 1 h对照组比较: * P < 0. 05
　　与 2 h对照组比较: # P < 0. 05　# # P< 0. 01
　　* P < 0. 05 v s 1 h cont rol group
　　# P < 0. 05　# # P < 0. 01 v s 2 h cont rol group
2. 4　苦参碱对 HO-8910PM 细胞侵袭运动能力的
影响: 将游离的聚乙烯吡咯烷酮膜 ( PVP-F 膜) 取
下, 在显微镜下计数细胞侵袭试验中穿过 PVP-F
膜的细胞数。1. 0、1. 5 g / L 苦参碱处理 6 h 后, 对
HO-8910PM 细胞的侵袭基底膜成分能力的抑制率
分别为 ( 14. 33±11. 29) % 和 ( 41. 52±10. 76) %。
对 HO-8910PM 细胞运动能力的抑制率分别为
·388· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第39卷第 3期 2008 年3 月
( 13. 67±11. 29) % 和 ( 39. 73±10. 67) %,见表3。
表3　苦参碱对 HO-8910PM 细胞侵袭和运动能力的
影响 ( x±s, n= 3)
Table 3　Effect of matrine on invasion and movement
ability of HO-8910PM cells ( x±s, n= 3)
组　别 剂量/
( g·L- 1)
侵　袭
细胞个数 抑制率/ %
运　动
细胞个数 抑制率/ %
阴性对照 0. 0 66. 80±7. 40 0. 00± 0. 00 69. 80±7. 95 0. 00± 0. 00
苦参碱 1. 0 56. 80±6. 30 14. 33±11. 29* 59. 40±6. 22 13. 67±10. 60*
1. 5 38. 60±5. 03 41. 52±10. 76* * 43. 40±3. 85 39. 73±10. 67* *
　　与阴性对照组比较: * P< 0. 05　* * P < 0. 01
　　* P < 0. 05　* * P< 0. 01 v s negat ive con trol grou p
2. 5　苦参碱对 HO-8910PM 细胞骨架的影响: 无苦
参碱作用时 HO-8910PM 细胞大致呈卵圆形,中间
染色较深的为细胞核, 细胞质内蛋白呈蓝色丝状结
构,近核区域较致密,细胞骨架相对丰富, 呈丝状交
错排列, 在胞浆内分布不均匀。1. 0 g / L 苦参碱作用
后细胞骨架结构收缩, 染色变淡、稀疏、变细,排列方
式发生变化; 1. 5 g / L 苦参碱作用后细胞骨架变化
更加明显,表现为细胞骨架的量明显减少, 见图2。
图2　苦参碱 HO-8910PM 细胞的细胞骨架的影响
Fig. 2　Effect of matrine on cytoskeleton
of HO-8910PM cells
2. 6　苦参碱对 HO-8910PM 细胞 Ezrin 蛋白表达
的影响: 对照组 HO-8910PM 细胞胞浆未见空泡,
Ezrin 蛋白少量表达, 主要位于核周胞质; 处理组细
胞胞质出现大量空泡, Ezr in 蛋白表达明显增强,胞
质内见弥漫棕黄色颗粒状阳性信号, 见图3。
图3　苦参碱 HO-8910PM 细胞 Ezrin 蛋白表达的影响
Fig. 3　Ef fect of matrine on expression of Ezrin
protein in HO-8910PM cells
3　讨论
　　苦参为豆科槐属植物苦参 Sophor a f lavescens
Ait . 的根, 味苦,性寒,归心、肝、胃、大肠、膀胱经,
功能清热燥湿、杀虫、利尿,为常用抗肿瘤中药。现代
药理研究证实苦参中所含的苦参碱、氧化苦参碱等
生物碱成分对多种恶性肿瘤具有较好的抗肿瘤活
性。近年来,随着恶性肿瘤的综合疗法的日益兴起,
苦参碱作为一种具有潜在临床应用价值的肿瘤中药
引起越来越多的关注和兴趣。
细胞持续分裂和不断增殖是肿瘤细胞区别于正
常细胞的重要特征,抑制肿瘤细胞的生长是治疗肿
瘤的基本途径之一。本实验中采用 MTT 比色法和
生长曲线实验两种方法观察苦参碱对 HO-8910PM
细胞的生长抑制作用。实验结果均显示苦参碱对
HO-8910PM 细胞有明显的增殖抑制效应, 该效应
随着苦参碱质量浓度的逐渐增加和作用时间的逐步
延长而升高,具有剂量和时间依赖效应。
侵袭和转移是恶性肿瘤的主要生物学特征, 是
导致手术、放疗及化疗等治疗失败和患者死亡的最
主要原因, 也是一个极其复杂、多步骤的过程, 包括
癌细胞从原发部位脱落, 结合并降解基底膜, 癌细胞
侵入血管、淋巴管,癌细胞在循环中运行和滞留, 最
后穿出血管、淋巴管并增殖形成转移灶[ 7]。本研究通
过细胞黏附实验、运动实验和细胞侵袭实验全面评
价了苦参碱对细胞侵袭转移能力的影响。实验数据
显示,经过不同质量浓度苦参碱处理后,无论是黏附
于 FN 的细胞数还是运动穿膜细胞率和侵袭穿膜细
胞率均显著低于对照组, 差别具有统计学意义。结果
表明苦参碱可明显抑制 HO-8910PM 细胞与 FN 的
黏附,并可降低肿瘤细胞的运动力及降解穿透基底
膜的侵袭力,从而证实苦参碱不是仅仅通过侵袭转
移的某个环节, 而是通过多个环节全面实现其抑制
作用的。
细胞骨架是细胞机构的重要成分, 不但参于维
持细胞形态,还参于细胞信号传导、物质运输, 并与
细胞膜外结构及细胞基质相连,影响细胞黏附及运
动能力。细胞骨架连接蛋白 Ezrin 属于 ERM
( Ezrin-Radix in-M oesin) 家族成员之一, 其编码基
因为 villin2, ERM 蛋白 N 端约 300 个氨基酸残基
形成的结构域同胞膜发生作用, C 端的结构域则同
细胞骨架发生作用[ 8]。Ezrin作为连接膜和细胞骨架
的蛋白, 通过组成膜细胞骨架相关复合体和形成特
殊膜结构对细胞活动进行调节,如细胞存活、黏附和
运动。Ezr in 蛋白在肿瘤的侵袭转移中起到了重要
的作用。在骨肉瘤和前列腺癌等类型的肿瘤中,
Ezrin 蛋白的表达与肿瘤的侵袭转移能力呈正相
关[ 9, 10] ,但是卵巢癌中二者之间的关系则存在争议。
·389·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第39卷第 3期 2008 年3 月
Kobel 等[ 11]认为卵巢癌中二者之间也呈正相关,而
Moilanen 等[ 12]则认为 Ezrin 蛋白表达和卵巢癌侵
袭转移能力之间呈负相关。本研究发现,不同质量浓
度的苦参碱作用于 HO-8910PM 细胞后, 引起该细
胞侵袭转移能力降低的同时伴随有细胞骨架结构的
稀疏化和细胞骨架连接蛋白 Ezrin 量的增多,与后
一种观点相吻合。由此推测, 苦参碱对 HO-8910PM
细胞侵袭运动的抑制作用可能部分是通过改变细胞
骨架连结蛋白 Ezr in 的表达进而影响细胞骨架来实
现的,但其具体分子联系机制仍需进一步研究。
本研究发现,苦参碱可以抑制 HO-8910PM 细
胞的增殖速度,使细胞骨架结构发生改变, 重要的细
胞骨架连接蛋白 Ezrin 表达上调, 这可能是苦参碱
抗 HO-8910PM 细胞侵袭转移的作用机制之一,为
临床上卵巢癌的综合治疗提供实验依据。
参考文献:
[ 1]　汤钊猷 . 现代肿瘤学 [ M ] . 第二版 . 上海:上海医科大学出
版社, 2000.
[ 2]　李先荣, 方　增 . 苦参生物碱的药理研究及其临床应用 [ J ] .
山西中医, 1985, 9( 3) : 49-51.
[ 3]　Liu X S, Jiang J, Jiao X Y, et al . Mat rine-induced apoptosis
in leu kem ia U937 cells : involvement of caspas es act ivation
an d MAPK-independent pathw ays [ J] . Planta M ed, 2006,
72( 6) : 501-506.
[ 4]　李贵海, 王　玫, 孙付军,等 . 苦参碱逆转小鼠 S180肿瘤细
胞获得性多药耐药基因相关表达产物过度表达的研究 [ J] .
中药材, 2006, 29( 1) : 40-42.
[ 5]　许沈华, 钱丽娟, 牟瀚舟, 等 . 高转移人卵巢癌细胞系 HO-
8910PM 的建立及其生物学特性 [ J] . 中华病理学杂志,
1998, 27( 6) : 451-452.
[ 6]　苟新敏, 陈　燕, 陈小毅, 等 . EBV-LMP1 对鼻咽癌细胞系
CNE1 细胞转移相关因素的影响 [ J] . 癌症, 2003, 22 ( 5) :
481-485.
[ 7]　Gassm ann P, Enns A, Haler J. Role of tum or cel l adhes ion
and migrat ion in organ-sp ecif ic metas tas is form at ion [ J] .
Onkologie, 2004, 27( 6) 577-582.
[ 8]　Cr epaldi T, Gaut reau A, Com og lio P M, et al . Ezrin is an
ef fector of h epatocyte grow th factor 2 mediated migr at ion and
m orp hogenesis in epithelial cell s [ J] . J Cel l Biol , 1997,
138: 423-434.
[ 9]　Park H R, Jung W W, Bacchini P, et al . Ezrin in os teosar-
com a: Comparison betw een convention al high-grad e and cen-
t ral low -grade osteos arcom a [ J] . P athol-R es Pr ac, 2006,
202( 7) : 509-515.
[10]　Valdm an A, Fang X L, Pang S T , et al . Ezrin expres sion in
pros tate cancer and benign prostat ic tis sue [J ] . E ur Urol ,
2005, 48( 5) : 852-857.
[11]　Kobel M , Gradhand E, Zeng K, et al . Ez rin prom otes ovari-
an carcinom a cel l invasion and its retained expres sion predict s
poor progn os is in ovarian carcinoma [ J] . I nt J Gy necol
P athol , 2006, 25( 2) : 121-130.
[12]　M oilan en J, Lassus H, Leminen A, et al . Ezrin immunore-
act ivity in relat ion to su rvival in s erous ovarian carcinoma pa-
t ien ts [ J ] . Gynecol Oncol , 2003, 90( 2) : 273-281.
表没食子儿茶素没食子酸酯影响慢性紫外线辐射诱导的
人皮肤成纤维细胞凋亡和突变的研究
朱　洁1, 2 ,骆　丹2X ,金颂良2,沈春花2,明亚玲2
( 1. 江苏省中医院 皮肤科,江苏 南京　210029; 2. 南京医科大学第一附属医院 皮肤科, 江苏 南京　210029)
摘　要 :目的　研究紫外线 ( U V) 照射对人皮肤成纤维细胞的细胞凋亡率、细胞周期变化和次黄嘌呤磷酸核糖转
移酶 ( HPRT ) 基因位点突变频率的影响以及表没食子儿茶素没食子酸酯 ( EGCG ) 的干预作用。方法　采用一定
剂量的中、长波紫外线 ( UVA 和 UVB) 慢性照射培养的新生儿包皮成纤维细胞。通过流式细胞仪检测细胞凋亡率
和细胞周期变化, HPRT 突变分析法检测突变频率。结果　慢性 UVA 组引起的细胞凋亡率低于 UVB 组 (P <
0. 05) , 而 HPRT 基因位点突变的频率是 UVB 组的 4. 79 倍。EGCG 干预组与单纯 UV 辐射组相比,成纤维细胞的
凋亡率增加, HPRT 基因位点突变的频率降低。结论　慢性照射日常剂量 UVA,其损伤性高于 UVB。EGCG 可以
升高慢性 UV 照射引起的细胞凋亡率, 降低 UV 照射引起的突变频率,提示 EGCG 可以诱导不可逆损伤细胞的凋
亡, 从而减少突变细胞。
关键词: 紫外线; 成纤维细胞; 表没食子儿茶素没食子酸酯 ( EGCG) ; 细胞凋亡; 突变频率
中图分类号: R285. 5　　　文献标识码: A　　　文章编号: 0253- 2670( 2008) 03- 0390- 04
·390· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第39卷第 3期 2008 年3 月
X 收稿日期: 2007-06-26作者简介:朱　洁( 1980—) ,女,江苏省南京人,硕士研究生,医师,研究方向为皮肤光生物学。
* 通讯作者　骆　丹