全 文 ：·718· 中草蔼 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第5期2008年5月
细胞进入S期开始下降，到G：／M期降为零[8]。
CyclinE／CDK2参与G。／S期的pRb磷酸化作用，
能加速S期，对DNA复制的启动十分重要。
Ohtsubo等[6]发现向G。期正常的人成纤维细胞微
注射抗cyclinE抗体可以抑制细胞进入S期。在乳
腺癌、结肠癌、前列腺癌中，均有cyclinE的过度表
达。研究报道E7,8]，cyclinE参与白血病的发生，在急
性白血病中cyclinE表达增高，其表达水平与疾病
恶性程度有关，高表达者预后差，生存期短。
在本实验中证实，对K562细胞进行甘草次酸
干预后，细胞中的两种G。期调控蛋白cyclinD1和
cyclinE表达水平均被下调，细胞周期发生改变，这
可能是甘草次酸抑制肿瘤细胞增殖的主要机制。然
而此过程中甘草次酸除了下调cyclinD1和cyclinE
的表达水平外，是否还牵涉到抑制CDKs的活性或
者激活CDI活性[6]，还有待进一步研究。同时，甘草
次酸在动物模型体内的作用研究尚在实验摸索中。
参考文献：
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大黄素对LoVo细胞水通道蛋白2表达的调节效应
张文生1，李锋1．，鲍军强1，王胜春2，尚刚伟3，李军昌1，王长海1
(1．第四军医大学西京医院中医科暨全军中医内科专科中心，陕西西安710032I2．第四军医大学西京医院
药剂科，陕西西安 710032；3．第四军医大学唐都医院疼痛生物医学研究所，陕西西安710038)
摘要：目的探讨大黄素对体外培养LoVo细胞水通道蛋白2(aquaporin2，AQP2)表达的调节效应。方法体
外培养LoVo细胞并予不同质量浓度大黄素含药培养液24h处理及大黄素含药培养液(20mg／L)不同时间处
理，采用免疫细胞化学方法观察LoVo细胞AQP2蛋白表达位置并初步观察AQP2蛋白表达的变化趋势，采用
Westernblotting及半定量RT—PCR检测AQP2蛋白及mRNA的表达。结果AQP2表达于LoVo细胞的细胞
膜，且与大黄素用药浓度及用药时间存在着相关性。进一步的Westernblotting证实，不同质量浓度大黄素含药培
养液均可抑制AQP2蛋白的表达，药物质量浓度愈大，AQP2蛋白的表达愈低，其中大黄素20mg／L组及40mg／L
组AQP2蛋白表达显著性降低I大黄素作用3、6h组，AQP2蛋白表达上升，但与对照组比较，无显著差异，作用
12、24、48h组，AQP2蛋白表达呈进行性下降趋势。半定量RT—PCR结果显示，随着大黄素质量浓度的增加，
AQP2mRNA表达呈进行性下降趋势；在时间一效应方面，随着用药时间的延长，AQP2mRNA表达呈进行性下降
趋势。结论大黄素可抑制LoVo细胞AQP2基因转录与翻译，这提示大黄素对AQP2表达的调节效应可能与大
黄的泻下作用有关。
关键词：大黄素；LoVo细胞系；水通道蛋白2
中图分类号：R285．5 文献标识码：A 文章编号：0253—2670(2008)05—0718—06
收稿日期：2007—09—20 一
基金项目：国家自然科学基金资助项目(30572385)
作者简介：张文生(1976一)，男，山西太原人，主治医师，硕士，研究方向为中药防治肾病效应机制与临床评价．
Tel：(029)82502068E—mail：zwsqhdpy@fmmu．edu．cn
*通讯作者李锋Tel：(029)84775351E—mail：lifeng@fmmu．edu．cn

万方数据
中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第5期2008年5月·719·
Regulativeeffectsofemodinonaquaporin2expressionin ntestinalepithelialcellineLoVo
ZHANGWen—shen91，LIFen91，BA0Jun—qian91，WANGSheng—chun2，
SHANGGang—wei3，LIJun—chan91，WANGChang—hail
(1．DepartmentofTraditionalChineseMedicineandSpecificDepartmentCenterforTraditionalChineseMedicineofPLA，
XijingHospital。FourthMilitaryMedicalUniversity，Xi’an710032，China；2．DepartmentofPharmaceu ics·Xijing
Hospital，FourthMilitaryMedicalUniversity，Xi
7
an710032，China；3．InstituteforBiomedicalSciencesofPain
andFunctionalBrainDisorders，TangduHospital，FourthMilitaryMedicalUniversity，Xi
7
an710038，China)
Abstract：ObjectiveToinvestigatetheffectsofemodininregulatingaquaporin2(AQP2)inLoVo
cellsculturedwithRPMI一1640mediumcontainingemodin．MethodsLoVocellswereculturedwith
RPMI一1640mediumcontainingemodinindifferentconcentrationfor24handwereculturedwithRPMI一
1640containingemodin(20mg／L)fordifferenttimes．ThelocationofAQP2proteininLoVocellswas
definitedbyimmuocytochemistrydy ingandtheffectsofemodinonregulatingaquaporin2wereinitially
evaluated．Westernblot inga dsemiquantitativeRT—PCRwereadoptedodetecttherelativeexpression
ofAQP2proteinandAQP2mRNA，respectively．ResultsAQP2walocatedinplasmaembraneof
LoVocell，andmoreover，thedegr eofdyeingcorrelatedwiththeconcentrationofem dinandthe
affectingtime．TherelativeexpressionofAQP2proteindecreasedwiththe。increasingofemodin
concentrationandhati 20and40mg／Lemodingroupsdecreasedsignificantly；Therelativexpressionof
AQP2proteinincreasedin3and6hgroups．Howevertherewasnosignificantdifferencecontrastedwith
thatinthecontrolgroup．Thent eproteinxpressiongraduallydecreasedin12，24，and48hgroups．
Theresultsof emiquantitativeRT—PCRd monstratedtha herelativeexpressionofAQP2mRNA
decreasedwiththeincreasingofemodinconcentration．Inhetime—effectr lationship，therela ive
expressionofAQP2mRNAalsodecreasedwiththeprolongationof heculturetime．ConclusionEmodin
couldinhibitthegeneticranscriptionandthetranslationofAQP2geneinLoVocells，whichdemonstrates
thathechangeofAQP2expressionregulatedby modinmaybecorrelatewiththecatharticeffectof
rhubarb．
Keywords：emodin；LoVocellline；aquaporin2(AQP2)
大黄是常用的中药之一，具有泻热通肠、凉血解
毒、逐瘀通经的作用。《本草经》记载大黄“下瘀血、血
闭寒热、破瘕瘕积聚、留饮宿食、荡涤肠胃、推陈致
新、通利水谷，调中化食，安和五脏”。《本草纲目》谓
其主“下痢赤白，里急腹痛，小便淋沥，实热燥结，潮
热谵语，黄疸，渚火疮”。大黄也是目前治疗便秘的主
要药物之一，在临床上得到广泛应用。大黄素(1、3、
8一三羟基一6一甲基蒽醌，emodin)是大黄发挥泻下作
用的主要直接活性物质之一，在大黄游离蒽醌中占
的比例较大且较稳定[1]。本研究以人结肠癌LoVo
细胞为靶细胞，采用免疫细胞组化、Western
blotting、RT—PCR等方法，观察大黄素对体外培养
LoVo细胞水通道蛋白2(aquaporin2，AQP2)蛋
白及mRNA表达的影响，为阐明大黄泻下作用的
具体机制提供理论依据。
1材料
1．1药品与试剂：大黄素对照品(化学对照品，定
量测定用)，购自中国药品生物制品检定所，20mg／
支，批号110756。RPMI一1640培养液、小牛血清、胰
蛋白酶、二甲基亚砜(DMSO)，均为Gibco公司产
品；AQP2兔抗多克隆抗体、SABC试剂盒，p
tubulin兔抗多克隆抗体、荧光标记二抗，SANTA
CRUZ公司；Trizol细胞裂解液，Invitrogen公司；
RevertAidTMFirstS randcDNASynthesis试剂盒，
Fermentas公司；GoTaqGreenMasterMixPCR试
剂盒，Promega公司。
1．2仪器：倒置相差显微镜，正置显微照相系统，日
本Olympus公司；CO。恒温细胞培养箱，德国
HERA公司；梯度PCR仪，日本Biometra公司；
Odyssey红外荧光成像仪；自动电泳凝胶成像分
析仪。
1．3 细胞系：LoVo细胞株，由第四军医大学动物
中心惠赠。
2方法
2．1 LoVo细胞的培养：LoVo细胞系来源于人结
肠腺癌，培养呈上皮样生长，于含10％小牛血清的
RPMI一1640培养液中，37℃、饱和湿度、5％C02条
件下培养，每隔24h更换培养液。细胞长满瓶底约
80％时，用2．5g／L胰蛋白酶消化3～5min，按
1：3分瓶传代。

万方数据
·720· 中草黄 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第5期2008年5月
2．2细胞爬片的制备：取8mm×8mm的盖玻片，
依次用浓硫酸、无水乙醇浸泡，高温高压消毒备用。
将消化好的细胞用含10％小牛血清的RPMI一1640
培养液稀释，吹打成浓度为5×104／mL的细胞悬
液，用吸管吸取细胞悬液，滴加到预置于培养皿中的
盖玻片上，待4～6h后，镜下观察细胞已贴壁，加入
含10％小牛血清的RMPI一1640培养液或含药培
养液。
2．3药物处理[2。】：实验分为大黄素含药培养液不
同剂量作用24h及大黄素含药培养液(20mg／L)
不同时间作用两大组。其中不同剂量处理分为大黄
素高、中、低剂量组(大黄素质量浓度分别为40、
20、10mg／L)，正常对照组4组。不同时间作用处理
分为作用时间48、24、12、6、3h，正常对照组6组。大
黄素为20mg加入DMSO1 mL，得20pg伽L的大
黄素一DMSO溶液。使用时取20pL溶液，移入离心
管中，加含10％小牛血清的RPMI一1640培养液10
mL，无菌滤过即得40mg／L的大黄素含药培养液，
依次倍比稀释，可得20、10mg／L的大黄素含药培
养液。
在已接种LoVo细胞的爬片上，观察细胞已贴
， 壁，即可加入不同质量浓度的大黄素含药培养液，作
用24h后，4％多聚甲醛固定30min，用中性树脂
贴于载玻片待行AQP2免疫细胞化学染色。在已接
种LoVo细胞的爬片上，观察细胞已贴壁，即可在其
中一个培养皿中加入20mg／L的大黄素含药培养
液，其他培养皿加入正常含10％小牛血清的
RPMI一1640培养液；24h后，在余下5个培养皿中
的一个加入20mg／L的大黄素含药培养液，其他4
个更换正常含lo％小牛血清的RPMI一1640培养
液，依次类推。作用结束后，固定爬片并用中性树胶
贴于载玻片待用。
同细胞爬片的药物处理，在75cm2的培养瓶中
接种细胞，给予不同质量浓度大黄素含药培养液作
用和大黄素含药培养液(20rag／L)不同时间作用。
作用结束后，消化收集细胞进行Westernblotting
检测及RT—PCR检测。
2．4免疫细胞化学染色：按试剂盒说明书进行。取
已固定的药物处理过的细胞爬片，用0．01mol／L
PBS(pH7．4)漂洗细胞5min×2次；滴加100×
Triton，37‘C保湿孵育10min，PBS漂洗5min×2
次；滴加1％H20：，37℃保湿孵育10rain，PBS漂
洗5min×2次；分别加入含1．5％BSA的PBS溶
液，按1：50稀释的兔抗AQP2抗体，4℃过夜，次
日复温1h，PBS冲洗5rain×3次．力Ⅱ人生物素化
抗兔IgG抗体，37℃保湿孵育30rain，PBS冲洗5
min×3次；滴加稀释好的SABC复合液，37℃保湿
孵育30min，PBS冲洗5rain×3次；用DAB显色
液反应10min，自来水冲洗2min；常规核衬染、脱
水、脱腊、封片。用Olympus显微照相系统摄取相片。
2．5 Westernblotting检测：用2．5g／L胰蛋白酶
收集细胞，PBS冲洗，转到1．5mL离心管中，加细
胞裂解液(含0．1mmol／LPBS；1％NonidetP一40；
质量分数0．05％去氧胆酸钠；质量分数0．1％十
二烷基磺酸钠；100mg／L苯甲基磺酰氟；1mg／L
亮肽素)1mL，充分震荡，裂解5min；冰上放置
15～30min；4℃，12000r／min，离心15min；上清
液转移入一新离心管中。利用去污剂蛋白定量试剂
盒进行总蛋白定量。采用SDS—PAGE凝胶不连续
缓冲系统进行电泳。取蛋白样品各20pg，经上样缓
冲 处理后上样，其中浓缩胶3％，80V，约30min；
分离胶10％，120V，约90min。硝酸纤维素膜100
V电转膜120min。转膜后丽春红染色2～3min观
察转膜效果。将转好的膜放人含有0．5％聚山梨酯
20的PBST中，洗膜5min；然后封入含有5％BSA
的塑料袋中，室温缓慢摇动60min；用5oABSA的
PBST溶液稀释一抗，其中AQP21 l 200，ptubulin
1：500；将膜封入塑料袋中，加入一抗稀释液，4℃
过夜；PBST洗膜5min×2次，10min×1次；加入
PBST稀释好的荧光标记二抗液(1：2000)，37℃
缓慢摇动60min；Odyssey红外荧光成像仪中观察
结果并摄片。
2．6 总RNA的提取及RT—PCR检测
2．6．1总RNA的提取：将收集细胞转入1．5mL
离心管中，离心弃去多余PBS液，每管加入Trizol
裂解液1mL，吸管吹打至无细胞团块，室温下放置
5min；加三氯甲烷200肛L，混匀，室温放置10min；
4℃、12000r／min，离心10min；转上层水相至另一
1．5mL离心管中，加三氯甲烷600vL，混匀，室温
放置10min；4℃、12000r／rain，离心10min，转上
层水相至另一1．5mL离心管中，加预冷的异丙醇
600pL，混匀，一20℃放置2h；4℃、12000r／min，
离心10min，弃上清，加预冷的75％乙醇一DEPC水
溶液500弘L，混匀；4℃、7500r／rain，离心10min，
弃上清，37℃、10min烘干；溶于DEPC处理水中
至20～40pL，测定RNA浓度及A26。／A28。值，以
A2。。／A28。值在1．8～2．0为合格；一80℃低温保存。
2．6．2RNA逆转录：取所提取的总RNA5 pg．

万方数据
中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第5期2008年5月·721·
oligo(dT)一18弓I物(0．5／xg／L)2弘L，奉h力ⅡDEPC
处理水至12弘L，70℃水浴5min；加入M—MulV
反转录酶1弘L，42℃水浴60min；70℃水浴10
min；冰浴2min；一20℃保存。
2．6．3PCR及产物电泳：AQP2基因序列由美国
nebi网站查询获得，其引物通过美国Primer5．0软
件完成设计，并通过ncbiblast核对其特异性，由上
海生工生物工程技术服务有限公司合成。其中
AQP2上游引物：5，_GGCGTTTGGCTTGGGT—
ATT一37；下游引物：5-CCGGTGTAATGGATT—
CCAAG一37；扩增长度：402bp；内参采用pactin，其
上游引物：5-TGGATTCCTGTGTCATCCATG—
AAAC一37；下游引物：57一TAAAACGCAGCTCAG—
TAACAGTCCG一37；扩增长度：346bp。采用25肛L
反应体系，其中GoTaq@GreenMasterMix2×
12．5弘L；上游引物(10mmol／L)0．5弘L；下游引物
(10mmol／L)0．5pL；去离子水10．5弘L；模板
1 pL。扩增条件：94℃、2min；94℃、60S，55℃、
60S，72℃、60S，共35个循环；72℃终末延伸10
min；4℃保温。取9pL产物，加负载缓冲液1pL，
在加入溴化乙淀的1％琼脂糖凝胶中电泳，电泳条
件为90V恒压，约40min。Marker为TaKaRa公
司的DNAMarkDL2000。电泳结束后，自动电泳
凝胶成像分析仪扫描成像。
2．7统计处理：药物不同质量浓度及不同作用时间
组均重复3次。利用Image—ProPlus软件进行
Westernblotting条带平均吸光度值分析，取目的
条带与对应内参18-tubulin条带比值，作为统计数据
(z±s)；利用Image—ProPlus软件进行RT—PCR电
泳条带的平均灰度值测定，取目的条带与其对应的
内参pactin条带的平均灰度值比值作为统计数据
(z±s)。用SPSS11．5统计软件进行单因素方差分
析和LSD—t检验。
3 结果
3．1 免疫细胞化学染色结果：AQP2蛋白表达在
LoVo细胞的细胞膜上。免疫细胞化学染色结果提
示，LoVo细胞AQP2蛋白的表达与大黄素的用药
剂量及用药时间存在着一定的相关性：随着用药剂
量的增加，染色程度呈下降趋势；随着用药时间的延
长，染色程度也呈下降趋势。其中大黄素40mg／L
组及作用48h组染色最浅。
3．2 Westernblotting检测结果：Westernblotting
辅证了免疫细胞化学结果。AQP2蛋白半定量免疫
印迹分析提示(图1)，细胞AQP2蛋白表达在剂量一
效应及时间一效应方面有相关性。在剂量一效应方面
(图2)，AQP2蛋白表达随着用药剂量的增加而下
降，其中高、中剂量组与对照组比较存在显著性差异
(P<0．05)，但各剂量组间比较，差异无显著性
(P>0．05)。在时间一效应方面(图3)，细胞AQP2
蛋白表达呈先上升后显著下降趋势，其中3、6h组
图1 不同质量浓度大黄素培养液作用24h及大黄素
培养液(20mg／L)不同作用时间处理的LoVo
细胞AQP2蛋白Westernblotting免疫印迹
Fig．1WesternblottingofAQP2proteininLoVocells
treatedwithRPMI一1640mediumcontaining
emodinindifferentco centrationfor24h
andculturedwithRPMI一1640containing
emodin(20mg／L)fordifferenttimes
兰
j
上
己
血
＼
邕
d
《
大黄素pt(mg·L“1
与对照组比较：’P’P图2不同质量浓度大黄素含药培养液处理24h后的
LoVo细胞AQP2蛋白相对表达量(善±S．一=3)
Fig．2RelativequantityofAQP2proteinxpression
inLoVocellstreatedwithRPMI·1640con—
tainingemodinindifferentco centration
for24h(；士l。n一3)
1．4
皇1．2
鲁 1 0
々08
＼ 06
￡0．4
旱0．2
nO
士 壬 ● ●
r]厂厂]
对照 3h 6h 12h 24h 48h
人黄桑P／(20mg·L“)
与对照组比较：‘P<0．05
。P<0．05口jcontrolgroup
图3大黄素含药培养液不同作用时间处理后的LoVo
细胞AQP2蛋白相对表达量(xis，n=3)
Fig．3RelativequantityofAQP2proteinxpressionin
LoVocellstreatedwithRPMI一1640mediumcon-
tainingemodinfordifferenttimeso±s，n一3)

万方数据
·722· 中草芮ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第5期2008年5月
AQP2蛋白表达上升，但无统计学意义(P>0．05)；
在作用12、24、48h组各组AQP2表达则显著下降
(P3．3 RT—PCR结果：RT—PCR也从mRNA角度证
实了LoVo细胞存在着AQP2mRNA的表达(图
4、5)。在剂量一效应方面(图6)，LoVo细胞AQP2
mRNA表达随着培养液含药浓度的增加而呈下降
趋势，与对照组相比，低剂量组AQP2mRNA有下
降但无统计学意义，但中、高剂量则呈显著下降
(P<0．05)；与上一剂量组比较，低剂量组与对照
组、中剂量组与高剂量组之间有下降趋势但无统计
学意义，但中剂量组与低剂量组比较，则呈显著下降
(P<0．05)。在时间一效应方面(图7)，3h组LoVo
细胞AQP2mRNA相对表达量即显著降低(P<
0．01)；随着用药时间的延长，AQP2rnRNA相对表
达量持续性降低，各时间组与前一时间组比较，
AQP2mRNA相对表达量都显著降低(除48h组
与24h组比较PM—Marker1-对照2～4一大黄素10、20、40mg·L“
M—Marker1一control2—4一emodin10，20，and40mg·L一1
图4不同质量浓度大黄素含药培养液处理的LoVo
细胞AQP2mRNA表达
Fig．4AQP2mRNAexpressioninL Vocellstreated
withRPMI一1640mediumcontainingemodin
indifferentco centration
图5大黄素含药培养液(20mg／L)处理不同
时间的LoVo细胞AQP2mRNA表达
Fig．5AQP2mRNAexpressioninL Vocellstreated
withRPMI一1640mediumcontainingemodin
(20mg／L)fordifferenttimes
．宴
芑
千
。
＼
盆
口
《
1．2
08
0．4
O．0
对照 10 20 40
大黄素p／(mg·L“)
与对照组比较：。P<0．05；
与大黄素10mg·L-1组比较：△P<0．05
。P<0．05口scontrolgroupI
△P<0．05wemodin10mg·L—lgroup
图6 不同质量浓度大黄素含药培养液处理后的LoVo
细胞AQP2mRNA的相对表达量(工士s，n=3)
Fig．6RelativequantityofAQP2mRNAexpression
inLoVocellstreatedwithRPMI一1640medium
containingemodinindifferentco centration
(j士s，n=3)
1．0
0．8
0．6
●04
0．2
、OO
大黄秉P“20mg‘L“)
与对照组比较：一P与前一时间组比较：△P<0．05AAp’。P<0．01u5controlgroup；
△P图7大黄素含药培养液(20mg／L)处理后不同时间LoVo
细胞AQP2mRNA的相对表达量(；士s，开=3)
Fig．7RelativequantityofAQP2mRNAexpressionin
LoVocellstreatedwithRPMI一1640mediumcon—
tainingemodinfordifferenttimes(；土s，糟=3)
4讨论
大黄通过多种机制而发挥泻下效应，其中大黄
素具有胆碱样作用，可兴奋肠道平滑肌上的M受
体，使肠蠕动增加而致泻；抑制细胞膜上的Na+，
K+-ATP酶的活性，减少Na+从肠腔至细胞的转
运，使肠内渗透压增加，进而大肠内水分增加、蠕动
亢进Ⅲ。郭世铎等‘51研究证实，大黄总苷、大黄素能
够抑制结肠道对葡萄糖及钠的吸收，水的吸收减少，
肠腔容积增大而导致泻下效应。
水通道蛋白(aquaporins，AQPs)是分布于细
胞膜上的，主要负责水分子转运的一类蛋白质家族。
目前已经确定至少有13种(AQPO～AQPl2)水通

万方数据
中革喃 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第5期2008年5月·723·
道蛋白家庭成员，其中AQP2、AQP3[6]、AQP4口’8]、
AQP8等[9]AQPs存在于结肠。AQPs在肠道上皮细
胞大量表达，肠道水液代谢是其主要功能之一。目前
认为AQPs参与了结肠腔内水分向体内的快速转
运，AQPs使肠内容物水分吸收而形成粪便。
Gallardo等[1们发现AQP2mRNA表达于大鼠远端
结肠隐窝细胞，表面吸收上皮细胞也有少量表达；
AQP2蛋白与H+，K+-ATP酶而不是Na+，K+一
ATP酶共表达于表面吸收细胞的顶部。这些结果表
明AQP2存在于远端结肠并参与了结肠水分的吸
收与分泌。
唐宇平等[11]发现大黄可通过抑制大鼠血脑屏
障AQP4基因的转录与表达，改善急性脑水肿大鼠
血脑屏障损伤。研究发现，中药复方泽黄颗粒能够显
著降低糖尿病大鼠肾小管AQP2的表达，这可能与
泽黄颗粒的肾脏保护作用有关[1幻；泽黄颗粒能增加
糖尿病大鼠肺微血管内皮AQPl的表达，减少肺组
织渗出，减轻肺水肿[1引。以上研究都证明，中药及其
复方在发挥药理作用时，参与机体AQPs的调节；
中药及其复方的某些药理作用可能是通过调节
AQPs的表达而实现的。
大黄发挥泻下作用机制特点之一就是改变结肠
肠腔内外水的分布，而AQP2是影响机体内水循环
及分布的重要通道分子之一。大黄素泻下效应的主
要作用机制能使结肠内水分增加、蠕动亢进。因此推
断，大黄对结肠AQP2的调节可能是影响结肠肠腔
内外水分子转运的重要机制：AQP2表达减少，可使
肠腔内容物水分增加而致泻。
本研究发现，AQP2主要位于LoVo细胞的细
胞膜上，并且大黄素可影响LoVo细胞AQP2
mRNA及蛋白的表达。在剂量一效应方面，大黄素用
药剂量增加，AQP2蛋白表达及mRNA表达线性
下调呈剂量依赖性。在时间一效应方面，随着大黄素
用药时间延长，AQP2蛋白表达表现为先上升后下
降趋势；但其AQP2mRNA表达呈线性下调。这可
能是在用药时间较短时(3、6h)，大黄素虽然下调
了AQP2mRNA的表达，考虑功能蛋白的合成与
降解之间有一时间差，所以形成在大黄素含药培养
液(20mg／L)培养3、6h组所检测结果AQP2蛋
白升高而mRNA下降的分离现象。随着作用时间
的延长，AQP2蛋白表达随着mRNA的下调而表
现为下降趋势。
本实验结果表明，大黄素可有效抑制LoVo细
胞AQP2基因转录与翻译。由此推测，在体内大黄
素也可能有效下调AQP2表达而使结肠对水的吸
收减少、结肠肠腔内水分增加；这一机制在大黄泻下
效应中可能发挥了重要作用。但大黄素下调AQP2
蛋白及基因表达的具体机制尚需进一步深入研究。
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万方数据
大黄素对LoVo细胞水通道蛋白2表达的调节效应
作者： 张文生， 李锋， 鲍军强， 王胜春， 尚刚伟， 李军昌， 王长海， ZHANG Wen-sheng，
LI Feng， BA Jun-qiang， WANG Sheng-chun， SHANG Gang-wei， LI Jun-chang， WANG
Chang-hai
作者单位： 张文生,李锋,鲍军强,李军昌,王长海,ZHANG Wen-sheng,LI Feng,BA Jun-qiang,LI Jun-
chang,WANG Chang-hai(第四军医大学西京医院中医科暨全军中医内科专科中心,陕西,西安
710032)， 王胜春,WANG Sheng-chun(第四军医大学西京医院药剂科,陕西,西安,710032)，
尚刚伟,SHANG Gang-wei(第四军医大学唐都医院疼痛生物医学研究所,陕西,西安710038)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(5)
被引用次数： 6次

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