全 文 ：白首乌新苷 A抗肿瘤及诱导肿瘤细胞凋亡作用的研究
王一奇1 ,刘玉兰2 ,张如松1 3
(11 浙江中医药大学药学院 ,浙江 杭州 　310053 ; 21 养生堂有限公司 ,浙江 杭州 　310007)
摘 　要 :目的 　评价白首乌新苷 A (CA) 的体内外抗肿瘤活性及诱导肿瘤细胞凋亡的作用。方法 　以 3 种人肿瘤
细胞株为模型 ,用 M TT 法检测药物对肿瘤细胞增殖的影响 ;以小鼠移植性肉瘤 S180为模型 ,检测药物对在体肿瘤
生长的影响 ;以人乳腺癌细胞株 MCF27 为模型 ,用 Wright′s2Giemsa 染色观察药物对细胞核形态的影响 ,并用流式
细胞仪检测肿瘤细胞凋亡率 ;以体外培养的大鼠皮层神经元细胞为模型 ,评价药物对正常细胞的毒性。结果 　CA
对 3 种人肿瘤细胞株的生长呈浓度依赖性抑制 ,其半数抑制浓度 ( IC50 ) 为 35168～39178 mg/ L ; CA 40、80、160
mg/ kg 对 S180内瘤生长的抑制率分别为 2010 %、2810 %、4811 % ;CA 80 mg/ L 处理后 ,MCF27 细胞的凋亡率显著
增高 ( P < 0101) ,细胞核出现固缩、断裂 ;CA 100 mg/ L 对体外培养 8 d 的神经元无毒性。结论 　CA 有明显的体
内外抗肿瘤活性 ,诱导肿瘤细胞凋亡是其作用机制之一。
关键词 :白首乌新苷 A ; 抗肿瘤 ; 凋亡
中图分类号 :R286191 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0620920205
Antitumor activity of cynanauriculoside A and its effect of apoptosis induction in tumor cells
WAN G Yi2qi1 , L IU Yu2lan2 , ZHAN G Ru2song1
(11 College of Pharmacy , Zhejiang University of Traditional Chinese Medicine , Hangzhou 310053 , China ;
2. Yangshengtang CO. , Ltd. , Hangzhou 310007 , China)
Abstract : Objective 　To investigate t he antit umor effect of cynanauriculoside A ( CA) isolated f rom
t he root of Cy nanchum auricul at um and it s effect of apoptosis induction in tumor cells. Methods 　CA was
evaluated for it s cytotoxicity i n v i t ro against MCF27 , B EL27402 , and HO28910 cells by determining M T T
assay and it s antit umor effect s i n v i vo on S180 t umor2bearing mice by calculating t umor2inhibited rate.
Measures of apoptosis including Wright′s2Giemsa staining and flow cytomet ry ( FCM) assay were involved
to explore the mechanism. And the toxcity of CA on normal cells was also evaluated on i n vi t ro cult ured
rat cortical neurons. Results 　CA showed a definite cytotoxicity to t hree t umor cell lines wit h IC50 in t he
range of 35. 68 —39. 78 mg/ L . And it significantly inhibited t he tumor growt h of S180 t umor2bearing mice at
t he dose of 40 , 50 , and 160 mg/ kg by ig administ rated , t he inhibitory rates were 20. 0 % , 28. 0 % , and
48. 1 % , respectively. At t he concent ration of 80 mg/ L , CA induced obvious apoptosis in MCF27 cells
( P < 0101) associated with marked morp hological changes such as cytoplasm cont raction and nuclear chro2
matin condensation , while it showed no toxcity to rat cortical neurons cult ured 8 d i n vi t ro at t he concen2
t ration of 100 mg/ L . Conclusion 　CA has significant antit umor effect i n vi t ro and i n vi vo , and has
moderate effect of inducing t umor cells apoptosis , which may be one of the mechanisms of CA antit umor
activity.
Key words : cynanauriculoside A (CA) ; antit umor ; apoptosis
　　白首乌系萝藦科鹅绒藤属植物耳叶牛皮消
Cy nanchum auricul at um Royle ex Wight 的干燥块
根 ,是传统的补益中药。研究表明 ,C21 甾体苷是白
首乌的主要活性成分 ,它可以有效清除羟自由基和
氧自由基 ,调节免疫 ,保护肝脏和神经细胞[1 ,2 ] 。近
年来报道 C21甾体总苷对体外培养的肿瘤细胞和小
鼠体内的移植肿瘤均具有确切的抑制作用[3～6 ] 。白
首乌新苷 A (CA) 是本实验室从白首乌 C21甾体总
苷中首次分离得到的新单体化合物 , 结构式见
图 1[ 7 ] 。为较系统地研究 CA 的抗肿瘤活性 ,本实验
采用体外培养的人肿瘤细胞株和小鼠移植性肿瘤模
型进一步评价CA的抗肿瘤作用 ,并初步探讨其抗
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3 收稿日期 :2008210231　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :浙江省自然科学基金重点项目资助 ( ZD0016)
作者简介 :王一奇 (1978 —) ,女 ,浙江省台州市人 ,讲师 ,在读博士 ,主要研究方向为中药药理。
Tel/ Fax : (0571) 86613798 　E2mail : wangyiqi @263. net3 通讯作者　张如松　Tel/ Fax : (0571) 86613798 　E2mail : zrs789 @hot mail . com
图 1 　白首乌新苷 A的化学结构
Fig. 1 　Chemical structure of CA
肿瘤作用机制。
1 　材料与方法
111 　药物的提取、分离及配制 :白首乌总苷 B 部分
(CGB) 及单体化合物 CA 由本实验室从白首乌中
提取分离纯化。提取分离工艺 :白首乌药材 (经浙
江中医药大学张如松教授鉴定为耳叶牛皮消
Cy nanchum auricul at um Royle ex Wight 的干燥块
根) 80 kg 粉碎后 ,以甲醇提取 ,再经氯仿提取 ,氯仿
可溶部分投入正己烷 ,得正己烷不溶部分 ,干燥 ,得
到白首乌总苷 (CG) 约 214 kg (3 %) ,CG 先后用
100 目和 200～300 目硅胶经柱色谱分离纯化 ,上样
用硅胶与样品的质量之比为 8～10 ∶1 ,洗脱剂为氯
仿和甲醇的混合溶剂 ,其体积比例在分离过程中视
分离情况依次调整为 40 ∶1 →30 ∶1 →25 ∶1 →20 ∶
1 →15 ∶1 →5 ∶1 ,薄层色谱分析 ,取薄层板上的中部
斑点的流分 ,减压回收 ,所得的白首乌苷 B 部分
(CGB) 65 g (0108 %) 。65 g CGB 样品以流动相溶
解 ,平均质量浓度为 50 mg/ L ,进样量约 3 mL ,流
动相为甲醇和水 ,其体积比为 7 ∶3 ,体积流量 6
mL/ min ,检测波长 222 nm ,柱温为 35 ℃。进样后 ,
经制备型 HPL C 分离 ,得到 CA (质量分数 99 %)
约 210 g (01002 5 %) 。体外试验时 CGB、CA 以二
甲基亚砜 (DMSO) 配制成 400 mg/ L 的贮存液 ,试
验前用培养基稀释至相应浓度 ;体内试验时 CA 先
以纯净水溶解 ,加少量聚山梨酯和植物油助溶并研
磨使之分散 ,再用蒸馏水稀释至相应浓度 ,4 ℃冷
藏保存。
112 　试剂 :100 目和 200～300 目硅胶 ,青岛海洋化
工厂 ;硅胶柱色谱用甲醇、氯仿为分析纯 ,液相用甲
醇为色谱纯 ;DM EM 培养基、RPMI 1640 培养基、
胰蛋白酶 , Gibco 公司产品 ;新生小牛血清 ,杭州四
季青生物材料公司产品 ;M T T ,Sigma 公司。
113 　动物与瘤株 :清洁级 ICR 雄性小鼠 ,体质量
18～22 g ,由浙江中医学院实验动物中心提供 ,许可
证号 :220010004。S180肉瘤瘤株 ,由浙江省医学科学
院提供。人乳腺癌细胞 MCF27、人肝癌细胞 B EL2
7402 和人卵巢癌细胞 HO28910 ,均购自中国科学院
上海细胞研究所细胞库。
114 　主要仪器 : 制备型高效液相色谱仪 , 美国
Waters 公司 ; Thermo Forma 细胞培养箱 ,生命科
学国际有限公司 ;DMIRB 型倒置生物显微镜 ,德国
Leica 公司 ; Elx800 型酶标仪 ,美国 Biotech 公司 ;
FACSCalibur 型流式细胞仪 ,美国 Becton Dickson
公司 ;AB1042N 型电子天平 ,瑞士 Mettler Toledo
公司 ;Sony P71 , 日本 Sony 公司。
115 　药物对体外肿瘤细胞增殖的抑制作用 :常规细
胞培养法培养肿瘤细胞。在 96 孔培养板中以 3 ×
107 / L 的密度接种对数生长期的单细胞悬液 ,每孔
011 mL ,设只加培养液、不加细胞和药物的空白调
零孔和不加药、加细胞及培养液的对照孔 ,均设 4 个
复孔 ,预培养 1 d 后分别加入 CGB 和 CA ,使药物
终质量浓度为 15、30、60、120 mg/ L ,继续培养至第
4 天 ,每孔加入 5 g/ L M T T 溶液 20μL ,孵育 4 h ,
吸净孔内液体 , 每孔加入 DMSO 150 μL , 震荡
10 min ,使结晶物充分溶解 ,用酶标仪于 570 nm 处测
各孔吸光度 ( A) 值 ,按下面的公式计算各用药组细
胞生长抑制率 ,NDST 统计软件进行数据处理计算抑
制细胞生长达 50 % 的各药物浓度 ,以 IC50值表示。
生长抑制率 = (1 - 实验组 A 值/ 对照组 A 值) ×100 %
116 　药物对小鼠移植性 S180肉瘤的作用 :取处于对
数生长期的 S180 细胞 ,计数后用无菌生理盐水调为
1 ×1010 / L 浓度 ,接种于小鼠右腋窝皮下 ,每只 012
mL ,即 2 ×106个细胞 ,接种 1 d 后 ,随机分为模型组
(NS) ,阳性对照组 (环磷酰胺 40 mg/ kg) ,CA 低、
中、高剂量 (40、80、160 mg/ kg) 5 组。环磷酰胺组
ip 给药 ,于接种后第 1、5 天两次给药 ,其余组均 ig
给药 ,每天 1 次 ,连续 9 d。第 10 天处死小鼠 ,称体
质量、瘤质量 ,按下列公式计算抑瘤率。
抑瘤率 = (模型组平均瘤质量 - 药物组平均瘤质量) / 模
型组平均瘤质量 ×100 %
117 　肿瘤细胞形态学观察 : MCF27 细胞按 1 ×
108 / L 接种于预置盖玻片的 6 孔培养板或培养皿
中 ,预培养 1 d 后分别加入质量浓度为 80 mg/ L 的
CA ,设不加药、只加培养液的细胞对照 ,继续培养
2～4 d ,以 D2hank′s 液洗涤 ,充分晾干 ,95 % 乙醇
室温固定约 2 min , Wright′s2Giemsa 染液染色
6～7 min ,蒸馏水轻轻漂洗 ,晾干 , 95 % 乙醇分色
10～30 s ,无水酒精脱水 10～30 s ,二甲苯透明 ,中
·129·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
性树脂封片 ,光镜观察 ,数码相机拍照。
118 　肿瘤细胞凋亡率检测 : 数量为 7 ×104 的
MCF27 细胞于 50 mL 培养瓶中预培养 1 d 后 ,加入
质量浓度为 80 mg/ L 的 CA ,继续培养 1、2、3、4、5
d。蛋白酶消化收集约 1 ×106 个细胞 , PBS 洗涤 2
次 ,预冷的 70 % 乙醇 4 ℃固定保存 24 h 以上 ,
RNA 酶消化 ,碘化丙啶染色 ,流式细胞仪 ( FCM)
测定细胞凋亡百分率。
119 　药物对体外神经细胞生长的作用 :参照文献方
法[8 ] ,培养大鼠皮层神经元细胞。神经元体外培养
至第 8 天 ,加不同质量浓度的 CA 作用 24、48、72
h ,观察药物的直接作用。培养结束后于倒置显微
镜下观察细胞形态 ,并以 015 g/ L M T T 在 37 ℃染
色 2 h 后 ,用二甲亚砜 100μL 溶解结晶 ,振荡 10
min ,在酶标仪测定波长 570 nm 处测吸光度值。
1110 　数据统计 :各组数据采用 x ±s 表示 , t 检验
进行组间差异显著性比较。
2 　结果
211 　CA 对人肿瘤细胞增殖的抑制作用 : CA 对 3
种人肿瘤细胞均有明显抑制作用 ,且呈剂量依赖性
(图 2) ;对 3 种肿瘤细胞作用 96 h 的 IC50 值为
35168～39178 mg/ L ,与 CGB 比较明显降低 ( P <
0105) ,见表 1。
图 2 　不同质量浓度 CA 处理 96 h 对 3 种人肿瘤
细胞株生长抑制作用 ( x ±s , n = 4)
Fig. 2 　Inhibition on three human tumor cell lines
treated with CA at various concentration
for 96 h ( x ±s , n = 4)
表 1 　CGB 和 CA 对 3 种人肿瘤细胞的 IC50值 ( x ±s , n = 4)
Table 1 　IC50 Values of CGB and CA on three
human tumor cell lines ( x ±s , n = 4)
组别
IC50值/ (mg ·L - 1)
MCF27 Bel27402 HO28910
CGB 5012 ±212 6917 ±514 4715 ±115
CA 3710 ±314 3 3918 ±315 3 3 3517 ±213 3 3
　　与 CGB 比较 : 3 P < 0105 　3 3 P < 0101
　　3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 vs CGB
212 　CA 对小鼠移植性肉瘤 S180生长的抑制作用 :
阳性药环磷酰胺明显降低小鼠移植性肉瘤 S180的瘤
质量 ,与模型组比较 ,差异有统计学意义 ( P <
0101) 。CA 80、160 mg/ kg 剂量组也明显降低瘤质
量 ,与模型比较 ,差异显著 ( P < 0101) ,见表 2。
表 2 　CA 对 S180荷瘤小鼠肿瘤生长的影响 ( x ±s , n = 10)
Table 2 　Effect of CA on tumor growth of S180
tumor2bearing mice ( x ±s , n = 10)
组别
剂量/
(mg ·kg - 1)
体质量 (开始/
结束) / g
瘤质量/
g
抑瘤率/
%
模型 - 181 3/ 251 3 21 35 ±01 48 -
环磷酰胺 40 191 7/ 191 2 01 34 ±01 19 3 3 851 5
CA 40 191 1/ 261 5 11 88 ±01 70 201 0
80 181 6/ 241 8 11 69 ±01 52 3 3 281 0
160 181 2/ 241 7 11 22 ±01 37 3 3 481 1
　　与模型组比较 : 3 3 P < 01 01
　　3 3 P < 0101 vs model group
213 　CA 作用不同时间对 MCF27 细胞核形态的影
响 :见图 3。MCF27 细胞经 Wright′s2Giemsa 染色
后 ,正常细胞胞质染色均一 ,细胞间隙不明显 ,核大 ,
呈圆形或椭圆形。MCF27 细胞经 CA 80 mg/ L 作
用 2 d 后 ,细胞质浓聚、胞核开始固缩变小 ,出现少
量环状或马蹄状核 ;细胞经 CA 80 mg/ L 作用 3 d
时 ,上述改变加重 ,表现为细胞间隙增大、胞体急剧
缩小 ,细胞核明显固缩呈现环状、马蹄状 ,但胞膜完
整 ;细胞经 CA 80 mg/ L 作用 4 d ,细胞除以上改变
外 ,还出现了核断裂现象 ,细胞膜皱缩、破裂 ,胞质出
现空泡样变化。
214 　CA 作用不同时间对 MCF27 细胞凋亡率的影
图 3 　CA ( 80 mg/ L) 处理 MCF27 细胞后的形态学改变
Fig. 3 　Morphological changes of MCF27 cells treated with CA ( 80 mg/ L)
·229· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
响 :80 mg/ L CA 处理 1、2、3、4、5 d 后的细胞 ,其凋
亡细胞率与正常细胞相比均有极显著性差异 ( P <
01001) ,其中作用 1～3 d 的细胞凋亡率随药物作用
时间延长而逐渐增加 ,到第 3 天达到最大 ,至第 4 天
后又逐渐下降 ,见表 3。
215 　CA 对神经细胞生长的作用 : CA 1215～100
mg/ L 作用 24 h 后 ,体外培养 8 d 的神经元形态无明
显改变 ,神经元 MTT 染色吸光度值不下降 ,见表 4。
表 3 　CA ( 80 mg/ L) 处理 MCF27 细胞不同时间的凋亡率
( x ±s , n = 3)
Table 3 　Apoptosis rate of MCF27 treated with CA ( 80 mg/ L)
at different time pionts ( x ±s , n = 3)
组别
细胞凋亡率/ %
1 d 2 d 3 d 4 d 5 d
对照 0163 ±0116 1170 ±0130 2105 ±0154 2139 ±0161 2132 ±0113
CA 3147 ±1104 3 3 8124 ±1100 3 3 3 23114 ±0195 3 3 315178 ±2112 3 3 311126 ±2127 3 3
　　与对照组比较 : 3 3 P < 0101 　3 3 3 P < 01 001
　　3 3 P < 0105 　3 3 3 P < 01 001 vs cont rol group
表 4 　不同质量浓度 CA 对体外培养 8 d 的原代皮层
神经元活性的影响 ( MTT 染色) ( x ±s , n = 3)
Table 4 　Effect of CA at different concentration on viability
of primary cortical neurons of 8 d in vit ro
cultures ( MTT assay) ( x ±s , n = 3)
CA/
(mg ·L - 1 )
A 值
24 h 48 h 72 h
0 (对照) 01 77 ±0103 01 58 ±0104 0169 ±01 09
1215 01 75 ±0107 01 56 ±0104 0165 ±01 08
25 01 82 ±0102 01 71 ±0101 3 3 0180 ±01 15
50 11 04 ±0102 3 3 3 01 78 ±0102 3 3 3 0183 ±01 03 3
100 11 04 ±0107 3 3 3 01 78 ±0107 3 3 3 0197 ±01 08 3 3 3
　　与对照组比较 : 3 P < 0105 　3 3 P < 0101 　3 3 3 P < 01 001
　　3 P < 01 05 　3 3 P < 01 01 　3 3 3 P < 01001 vs cont rol group
3 　讨论
　　CA 是本实验室从白首乌甾体总苷中首次分离
得到的新单体化合物。本实验在前期实验基础上 ,
更系统地评价了化合物 CA 的体内外抗肿瘤活性。
结果显示 ,CA 对人乳腺癌细胞株 MCF27 ,人肝癌细
胞株 Bel27402 ,人卵巢癌细胞株 HO28910 的增殖均
有明显抑制作用 ,对这些细胞增殖抑制的 IC50 在
35168～39178 mg/ L ,明显小于总苷 ( CGB) ( P <
0105) ,表明 CA 有确定的体外抗肿瘤活性 ,且作用
强度高于总苷。体内抗肿瘤实验结果显示 ,CA 40、
80、160 mg/ kg 剂量 ig 给药对 S180肉瘤生长的抑制
率分别为 2010 %、2810 %、4811 % ,表明 CA 有较高
的体内抗肿瘤活性。本实验中药物体外 M T T 实验
结果 IC50值与其他高活性细胞毒类药物比较似乎较
大 ,但是体内抑瘤实验表明 ,药物对小鼠体内生长的
肿瘤抑制率较高 ,提示该药物可能不仅仅是通过对
体外肿瘤细胞的细胞毒性作用而发挥抗肿瘤作用 ,
其他的机制如抑制血管生成、增强免疫等作用也有
可能参与 ,而这些机制还有待进一步研究。药物对
体外细胞的作用是非常直接的 ,给药的浓度就是药
物作用于细胞的浓度。而药物口服给药 ,可能存在
首过消除效应 ,使药物利用率降低。本实验中 CA
口服给药抑制肿瘤生长的浓度明显高于其 IC50 ,推
测胃肠道、肝脏对该药物的代谢转化作用较强。
有文献报道 ,白首乌提取物及 C21 甾体总苷可
通过增加 bcl22 基因表达诱导小鼠移植性肿瘤细胞
凋亡[5 ,6 ] 。推测 C21 甾体苷类单体化合物 CA 抗肿
瘤作用机制也可有是诱导肿瘤细胞凋亡。故本实验
在评价 CA 体内外抗肿瘤活性的基础上 ,进一步在
细胞水平评价了 CA 诱导肿瘤细胞凋亡的作用。结
果表明 ,CA 处理的 MCF27 细胞经 Wright′s2Giem2
sa 染色后 ,细胞质浓聚、胞核固缩变小呈环状、马蹄
状 ,甚至出现了核断裂现象 ,符合细胞凋亡的形态学
特征。流式细胞仪结果也表明 ,CA 处理后 MCF27
细胞凋亡率明显增高 ( P < 0101) ,证明诱导细胞凋
亡是 CA 体外抗肿瘤的机制之一。在观察 CA 对
MCF27 细胞核形态的影响的过程中 ,发现药物作用
第 1 天核形态没有明显改变 ,第 2 天开始出现变化 ,
第 3 天开始变化非常明显 ,第 4 天虽然核形态变化
仍很明显 ,但仔细观察已伴随细胞膜破裂的改变。
结合细胞凋亡率在第 3 天最高 ,而第 4 天下降的结
果 ,推测到达第 4 天 ,细胞损伤的机制不仅仅是凋亡
(凋亡时细胞膜是完整的) 。另外 ,在本实验前期摸
索浓度的过程中 ,发现较低浓度的 CA 不能引起肿
瘤细胞形态明显改变 ,肿瘤细胞凋亡率也不高 ,最后
采用较高的质量浓度 (80 mg/ L ) 诱导细胞凋亡。
从药物诱导凋亡的浓度较高 ,以及形态学损伤的严
重程度与凋亡率不一致这两点结果 ,推测诱导凋亡
机制不是 CA 体外抗肿瘤的主要机制 ,其他机制有
待进一步研究。
本实验还利用体外培养的大鼠皮层神经元细胞
来研究药物对神经细胞的毒性。实验结果表明 ,不
同质量浓度 CA 作用 72 h 对体外培养 8 d 的大鼠
皮层神经元形态无影响 ,M T T 染色吸光度不下降 ,
证明 CA 对肿瘤细胞的毒性有选择性。值得注意的
是 ,在较高质量浓度时 , CA 还可以使神经元细胞
M T T 染色吸光度显著增加 ( P < 01001) 。这一现
象在白首乌 C21甾体总苷中也有发现。但是在显微
镜下观察神经元的形态数量并无明显改变 ,故初步
·329·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
推断 CA 使神经元细胞 M T T 染色吸光度显著增加
的原因是药物增强了活细胞对染料的摄取。
综上所述 ,本实验证明了从白首乌 C21 甾体总
苷中分离得到的单体化合物 CA 具有确定的体内外
抗肿瘤活性 ,并初步证实诱导凋亡是 CA 体外肿瘤
细胞毒机制之一 ,但不是最主要机制。本实验研究
了 CA 的体内外抗肿瘤作用及作用机制 ,同时也为
CA 作用机制的进一步研究提供了线索 ,为白首乌
C21甾体苷类抗肿瘤药物的研究奠定了基础。
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羟基红花黄色素 A缓解大鼠心肌细胞凋亡作用的研究
金 　鸣 ,董宁宁 ,吴 　伟 ,李金荣 ,臧宝霞 ,童 　静 3
(首都医科大学附属北京安贞医院 - 北京市心肺血管疾病研究所 药理研究室 ,北京 　100029)
摘　要 :目的 　以整体和离体实验观察羟基红花黄色素 A ( HSYA) 缓解心肌细胞凋亡的作用。方法 　以异丙肾
上腺素 ( ISO) 造成大鼠急性心肌缺血 ,以 TUN EL 法检测心肌组织细胞凋亡 ,免疫组化法和 RT2PCR 法观察心肌
组织中 bax、bcl22 基因表达的变化 ;用缺糖缺氧/ 再复氧模型诱导原代培养心肌细胞凋亡 ,以 PI 流式细胞法观察凋
亡情况 ,以 Rhodamine 123 荧光法考察线粒体膜电位的变化。结果 　60、120、240 mg/ kg HSYA ip 给药可以减轻
心肌缺血大鼠的线粒体肿胀、核凝集及固缩 ,降低心肌细胞凋亡率 ( P < 0101) ,下调心肌组织 Bax 蛋白 ( P < 0105)
及 bax mRNA 的表达 ( P < 0101) 。0164、113、215 mmol/ L HSYA 可减少缺氧/ 再复氧造成的细胞凋亡 ( P <
0105) ,且可缓解该损伤造成的心肌线粒体膜电位下降 ( P < 0105) 。结论 　抑制心肌细胞凋亡是 HSYA 缓解心肌
缺血的重要机制。
关键词 :羟基红花黄色素 A ( HSYA) ; 凋亡 ; 心肌缺血 ; 线粒体
中图分类号 :R28612 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 0620924207
Inhibition of hydroxysafflor yellow A against rat cardiomyocyte apoptosis
J IN Ming , DON G Ning2ning , WU Wei , L I J in2rong , ZAN G Bao2xia , TON G Jing
(Department of Pharmacology , Beijing Anzhen Hospital of Capital University of Medical Sciences2Beijing Institute
of Heart , L ung , and Blood Vessel Diseases , Beijing 100029 , China)
Abstract : Objective 　To investigate t he inhibitory effect of hydroxysafflor yellow A ( HSYA) against
cardiomyocyte apoptosis. Methods 　Rat myocardial apoptosis was induced by ip isoproterenol ( ISO) and
t hen HSYA was ip given to alleviate t he apoptosis. Rat neonatal cardiomyocyte apoptosis was t riggered by
oxygen/ glucose2deprivation/ reperf usion (O GDR) injury. Cardiac tissue was observed by t ransmission elec2
t ron microscopy ( TEM) and cardiac cell apoptosis was assayed by terminal deoxynucleotidyl t ransferase
dU TP nick2end labeling ( TUN EL) staining. Bcl22 and bax gene exp ression was observed by immunohisto2
chemical staining and R T2PCR. The effect of HSYA to inhibit cardio myocyte apoptosis was assayed wit h
t he Flow Cyto Meter . Rhodamine 123 staining was used to measure the change of mitochondrial membrane
potential . Results 　TEM showed t hat mitochondrion swelling and nucleus pyknosis were alleviated by
·429· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 6 期 2009 年 6 月
3 收稿日期 :2008210231　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家自然科学基金资助项目 (30171146) ; 北京市中医局科技资助项目 (JJ22006226)
作者简介 :金　鸣 (1957 —) ,男 ,北京人 ,首都医科大学附属北京安贞医院2北京市心肺血管疾病研究所药理研究室主任 ,研究员 ,医学博
士 ,研究方向为中药红花活血化瘀作用机制。Tel : (010) 64456308 　E2mail : jinzang @public3. bta. net . cn