全 文 ：·1180· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月
20)；体积流量：1．0mL／min；紫外检测波长：
205rim；进样量为20pL。
2．5．2待测液的制备：把制备所得样品用流动相定
容于100mL量瓶中，超声处理20min，用0．45弘m
微孔滤膜滤过，即得。
2．5．3测定法：精密吸取待测液20弘L注入高效液
相色谱仪，平行测定5次并取平均值，结果九节龙皂
苷I的保留时间为11．968min，面积归一化定量确
定产品质量分数大于99％，外标法定量确定产品质
量分数为99．3％，色谱图见图3。通过对制备色谱系
统的色谱条件优化，从九节龙皂苷I粗品中可分离
出九节龙皂苷I，其质量分数达到了99％以上。从
色谱图可以看出其分离度较好，无杂质峰的干扰，该
方法适用于分离纯化九节龙皂苷I单体，为工业化
生产提供了依据。
O 5 lO o 5 lo 15 o 5 10
t／min
*一九节龙皂苷I
*一ardipusillosideI
图3九节龙皂苷I对照品(A)、粗品(B)和分离后产品
(C)的HPLC圈
Fig．3HPLCChromatogramsofa dipusIIIoside
referencesubstance(A)，crudeproduct(B)，
andIsolatedproduct(C)
3讨论
本实验所用的技术是依托于制备色谱系统，采
用的是SinochromODS—BP为填充剂，即反向技术。
分离皂苷一般均使用阳离子柱色谱以及重结晶技
术，但是运用柱色谱以及重结晶技术进行分离的时
候，因为九节龙总皂苷中有性质相近的九节龙皂苷
I，较难分离出来，而且柱色谱和重结晶需反复操
作，相当麻烦，且耗时长，不利于工业化生产。而本法
具有简便、快捷、科学、周期短、改良后自动化程度
高、收集全面等优点，而且样品质量分数高，为工业
化的生产奠定了基础。
在实验条件的摸索中发现当增大体积流量时，
九节龙皂苷I的保留时间会提前，但是分离度也随
之降低，而且检测系统的压力也随之增大，而减小体
积流量后虽然分离较好，但峰变宽且保留时间变长；
因此选择了1．5mL／min的体积流量既使保留时间
缩短又能达到良好的分离度。
在流动相选择方面，在考察了多种溶剂以及化
合物本身的性质后，最终选择了甲醇和水的混合体
系作为流动相，然而在选择水一甲醇比例时发现，当
水一甲醇比例大于20t 80时对色谱柱造成的压力相
当大，很容易堵塞柱子，当水一甲醇溶液的比例小于
20z 80时，样品的分离度又不好，因此最终确定
20：80的比例。
参考文献：
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[33张清华，王晓娟，缪振春，等．川产九节龙皂甙的化学研究[J]．
药学学报，1993，28(9)：673—678．
牛膝不同炮制品中多糖的测定
林肖惠1’2，刘 鹏1，徐为人1，汤立迭3
(1．天津药物研究院天津市新药设计与发现重点实验室，天津300193；2．天津大学药物科学与技术学院，天津300072；
3．天津药物研究院天津药代动力学与药效动力学省部共建国家重点实验室，天津300193)
摘要：目的探讨不同炮制方法对牛膝中多糖的影响。方法采用苯酚一硫酸法测定牛膝不同炮制品中多糖，比
较各炮制品中多糖的差异。结果 牛膝酒制品、盐制品、牛膝炭和生品中多糖分别为9．06％、8．20％、4．88％、
6．05％。以酒制品中的多糖最多，牛膝炭中最少。结论不同炮制方法能够影响牛膝中多糖。
关键词：牛膝；炮制品；多糖；苯酚一硫酸法
中图分类号：R286．02 文献标识码：B 文章编号：0253—2670(2008)08—1180一03
收稿日期：2008一Ol一30
基金项目：天津市应用基础研究计划项目(06YFJZJC02800)
作者简介：林肖惠(1984～)，女，硕士研究生．Tel：13821613202E—mail：8 14143@163．corn
万方数据
中草焉ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月·1181·
牛膝为苋科植物牛膝Achyranthesbidentata
B1．的干燥根，味苦、酸，性平，归肝、肾经，具有补肝
肾，强筋骨，逐瘀通经，引血下行等功效，临床多用于
腰膝酸痛，筋骨无力，经闭癞瘕，肝阳眩晕等症状[1]。
近年来在人工流产、关节炎、肿瘤化疗所致的白细胞
减少等方面的治疗应用增加。牛膝含糖类、皂苷类、
甾类成分[引。多糖是牛膝中的重要成分，在对牛膝化
学成分和药理作用的研究中占有很大的比例[1~3】。
牛膝多糖的研究多集中于对不同产地牛膝的比较，
或是针对某种炮制品的测定。临床上牛膝常以生牛
膝、酒牛膝、盐牛膝、牛膝炭人药，因此本实验研究了
牛膝炮制品中多糖的差异，为阐明牛膝I临床应用提
供依据。
1材料
Spectrumlab54型紫外可见分光光度计(上海
棱光技术有限公司)；KQ--250DB型数控超声波清
洗器(昆山市超声仪器有限工司)；Fwl77型中草药
粉碎机(天津市泰斯特仪器公司)。
牛膝药材购自泰安市永春堂中药饮片有限公
司，经泰山医学院鉴定教研室鉴定为苋科植物牛膝
A．bidentataB1．的干燥根；D一无水葡萄糖对照品
(中国药品生物制品检定所，批号：110833—200511)；
绍兴黄酒(浙江萧山二垦酒厂)；食盐(天津)；浓硫
酸、苯酚、乙醇等均为分析纯。
2方法与结果
2．1不同炮制品的制备
酒制牛膝：取生牛膝，加黄酒拌匀，闷透；置锅
内，用文火加热，炒干，取出，放凉。每100g牛膝用
黄酒10g。
盐制牛膝：取生牛膝，加盐水拌匀，闷透；置锅
内，用文火加热，炒干，取出，放凉。每100g牛膝用
食盐2g。
牛膝炭：取生牛膝，置锅内，用武火炒至外表黑
色，断面深棕色，取出，晾干。
2．2对照品溶液的配制：取D一无水葡萄糖对照品
约4mg，精密称定，置100mL量瓶中，加蒸馏水溶
解并稀释至刻度，即得。
2．3 5％苯酚溶液的配制：将结晶的苯酚置55℃水
浴锅中加热使其溶解，然后常压蒸馏收集馏分25
mL，置500mL量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻
度，放人冰箱中备用。
2．4．供试品溶液的制备：将牛膝样品于50℃下干
燥4h，粉碎，过60目筛，取粉末10g，精密称定，置
500mL圆底烧瓶内，加蒸馏水250mL，加热提取1
h，提取液4000r／min离心10min，去除残渣，上清
液加热浓缩至100mL，加2倍量的95％乙醇，静置
12h，4000r／min离心10min，分离沉淀，干燥后用
蒸馏水溶解并定容至500mL，氯仿一正丁醇(4：1)
与溶液按体积比4t 1脱蛋白H]，分取上清液，精密
量取1．0mL，加无水乙醇至乙醇体积分数达70％，
冷藏，5000r／min离心30min，取沉淀，依次加乙
醚、无水乙醇洗涤3次，挥干，沉淀加水溶解，定容至
100mL备用。
2．5最大吸收波长的选择：精密量取葡萄糖对照品
溶液0．6mL，加蒸馏水至2．0mL，加入5％苯酚溶
液1mL，混匀，迅速加人浓硫酸5mL，振摇5min，
置沸水浴中15min，取出，立即置冷水浴中冷却30
min；精密量取蒸馏水2．0mL，同法制得空白溶液；
在紫外一可见分光光度计上于200一--800nm扫描，确
定最大吸收波长为490nm。
2．6线性关系考察：精密量取葡萄糖对照品溶液
0．2、0．4、0．6、0．8、1．0mL，分别加蒸馏水至2．0
mL，加入5％苯酚溶液1mL，按照苯酚一硫酸法处
理，于490nm处测定吸光度值。以吸光度为纵坐
标，质量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程Y=
0．01281X一0．0211，r一0．998。结果表明葡萄糖
在2～6mg／mL与吸光度呈良好的线性关系。
2．7精密度试验：精密量取供试品溶液0．6mL，加
蒸馏水至2．0ml，按照苯酚一硫酸法处理，测定吸光
度值，重复操作测定5次，计算，RSD为1．95％。
2．8稳定性试验：精密量取供试品溶液0．6mL，加
蒸馏水至2．0mL，按照苯酚一硫酸法处理，测定吸光
度值，每隔20min测定1次，结果在2h内测定结
果稳定。
2．9重现性试验：精密量取牛膝生品，共6份，制备
供试品溶液，每份0．6mL，分别加蒸馏水至2．0
mL，按照苯酚一硫酸法处理，测定吸光度值，计算多
糖的质量分数，RSD为1．42％。
2．10回收率试验：精密称取牛膝生品约5g左右，
加入定量的葡萄糖对照品，制备供试品溶液，按照苯
酚一硫酸法处理，测定吸光度值，计算回收率，结果平
均回收率为99．09％，RSD为0．92％。
2．11不同炮制品中多糖的测定：分别取生牛膝、酒
制牛膝、盐制牛膝和牛膝炭粉末各10g，精密称定，
制备供试品溶液，按照苯酚一硫酸法处理，测定吸光
度值，代入回归方程进行计算，得到生牛膝、酒制牛
膝、盐制牛膝和牛膝炭中多糖的质量分数，见表1。
结果表明，不同的炮制方法影响牛膝多糖的量，以酒
制品中的多糖最多，牛膝炭中的最少。
万方数据
·1182· 中草菊 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第39卷第8期2008年8月
表l不同牛膝炮制品中多糖的测定结果(一=6)
Table1 DeterminationofpoIysacchoride
IndifferentprocessingsofRadix
AchyranthisBidentatae(矗一6)
炮制品 多糖／％ 0 炮制品 多糖／％
生牛膝
盐制品
6．05
8．20
酒制品
牛膝炭
9．06
4．88
3讨论
苯酚一硫酸法较为稳定，而且不同的多糖和单糖
显色反应后显示不同的最大吸收峰，是较为理想的
多糖测定方法[5]。本研究利用苯酚一硫酸法对牛膝不
同炮制品中多糖进行了测定，结果表明该方法比较
可靠。
本研究通过测定牛膝不同炮制品中的多糖，发
观炮制后牛膝中多糖发生变化，酒制牛膝及盐制牛
膝中多糖均有不同程度的升高，而牛膝炭中多糖下
降，这可能是由于高温使部分糖类成分炭化损失所
致。而酒炒后的牛膝中多糖有明显升高，这可能是酒
炒后使牛膝中糖类有效成分溶解度增加。牛膝多糖
是牛膝中主要化学成分，而药理活性必定与化学成
分相联系，故不同炮制品中多糖的量不同，必定引起
药理活性的不同。故有生牛膝侧重于活血通经、利水
通淋，酒牛膝补肝肾，强筋骨，活血通经的力量增强，
盐牛膝增强了入肾的力量，引药入肾，长于通淋，而
牛膝炭主要是止血作用。
参考文献：
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丹参中总酚酸测定的前处理方法研究
魏惠珍1，张洁1，饶毅”，吴有根1，方海红1，陈银芳1，朱圣生1
(1．江西中医学院，江西南昌 330004，2．中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，江西南昌330006)
丹参是唇形科植物丹参Salviamiltiorrhiza
Bunge的干燥根茎，其有效成分包括水溶性成分和
脂溶性成分。脂溶性成分是以丹参酮为代表的醌类
化合物，具有很好的抗炎作用；水溶性成分总称为总
酚酸，主要有丹参素、原儿茶醛、丹酚酸B[1]。总酚酸
具有明显的抗血栓形成、抗脂质过氧化和溶纤的作
用，是治疗心绞痛、心肌缺血、心肌梗死等心血管疾
病的有效成分，其中丹酚酸B的量最高，而且是主
要的活性成分。丹参总酚酸的前处理方法多采用酸
提或提取完后调pH值至2左右[2~8]，提取效率低。
因此本实验对丹参中总酚酸的前处理方法进行了改
进，并同时采用比色法和高效液相色谱法对丹参总
酚酸进行了测定。
1仪器与材料
日本岛津UV2550紫外分光光度计；Waters
2695高效液相谱仪，Empower色谱工作站；日本岛
津LClOAtvp高效液相色谱仪。
原儿茶醛、丹酚酸B、丹参素钠对照品均购于中
国药品生物制品检定所；乙腈为色谱纯，其余试剂均
为分析纯，去离子水。丹参药材产自山东，经笔者鉴
定为丹参S．miltiorrhizaBunge的干燥根茎。
2方法与结果
2．1总酚酸的比色法测定：取样品溶液0．2mL于
10mL量瓶中，分别加入5％NaNOz0．5mL、10％
Al(N03)。0．5mL、4％NaOH溶液4mL，用水补足
至刻度，立即进行紫外扫描。以缺NaOH溶液的样
品溶液作参比，置1cm的吸收池中，在500nm处测
定吸光度，以丹酚酸B计，按线性回归方程计算。
2．2总酚酸的HPLC法测定
2．2．1色谱条件：色谱柱为伊利特ODS：；流动相：
乙腈一0．1％磷酸，梯度洗脱(O～15rain，5％乙腈；
16-30rain，25％乙腈)；检测波长281nm；进样量：
10弘L。
2．2．2测定：配制适宜质量浓度的各对照品溶液，
收稿日期：2008—02—25
作者简介：魏惠珍(1965一)，女，江西南昌人，副主任药师．研究方向：中药质量控制。
Tel：(0791)7119625E—mail：weihuizhen101@126．corn
*通讯作者饶毅Tel：(0791)7119609E～mail：raoyi99@126．COrn
万方数据
牛膝不同炮制品中多糖的测定
作者： 林肖惠， 刘鹏， 徐为人， 汤立达
作者单位： 林肖惠(天津药物研究院天津市新药设计与发现重点实验室,天津,300193;天津大学药物科学
与技术学院,天津,300072)， 刘鹏,徐为人(天津药物研究院天津市新药设计与发现重点实验
室,天津,300193)， 汤立达(天津药物研究院天津药代动力学与药效动力学省部共建国家重
点实验室,天津,300193)
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2008,39(8)
被引用次数： 2次

参考文献(5条)
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4.齐慧玲;魏绍云;王继伦 Sevag法去除白及多糖中蛋白的研究 2000(03)
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5. 罗霄山.孙冬梅.张诚光.吴星火 正交实验优选盐炙怀牛膝的最佳炮制工艺[期刊论文]-中药新药与临床药理
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7. 朱京祎 黔产牛膝炮制工艺及饮片质量标准研究[学位论文]2009
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10. 邓乐华.田庚元 羧甲基牛膝多糖的制备、结构及生物活性研究[期刊论文]-化学学报2002,60(11)

引证文献(2条)
1.杨国夫.宋国胜.张涛.徐洪伟.董锋 牛膝提取物对去卵巢大鼠骨密度、骨转换及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响[期刊论
文]-中国骨质疏松杂志 2011(2)
2.孙丽莎.冯婷.路静.黄幼田.杨洪艳.董子明.赵明耀 牛膝多糖与锌对小鼠树突状细胞增殖分化和抗原提呈能力的
影响[期刊论文]-中草药 2010(8)


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