全 文 ：0125 g ,精密称定 ,分别精密加入含山姜素 01220
μg/ mL 、和厚朴酚 01150 μg/ mL 、小豆蔻明 01010
μg/ mL 、厚朴酚 01280μg/ mL 对照品溶液 015、110、
115 mL ,每个样品平行 3 份 ,制备供试品溶液。在
上述色谱条件下进行分析 ,计算山姜素、和厚朴酚、
小豆蔻明、厚朴酚的质量分数 ,根据加入量计算回收
率 ,结果加样回收率分别为 9717 %～ 10013 %、
9713 % ～ 9817 %、9010 % ～ 10010 %、9816 % ～
9913 % ,RSD 分别为 114 %、115 %、413 %、018 %。
2111 　样品测定 :取 3 批厚朴温中汤浸膏样品 ,制备供
试品溶液 ,取供试品溶液 10μL 进样分析 ,按外标法计
算 ,得相当于每 1 g 总药材的厚朴温中汤中山姜素、和
厚朴酚、小豆蔻明、厚朴酚的质量分数 ,结果见表 1。
表 1 　厚朴温中汤中山姜素、和厚朴酚、小豆蔻明
与厚朴酚的测定结果( n = 3)
Table 1 　Determination of alpinetin , honokiol , cardamonin ,
and magnolol in Houpu Wenzhong Decoction ( n = 3)
批号
山姜素/
(mg ·g - 1)
和厚朴酚/
(mg ·g - 1)
小豆蔻明/
(mg ·g - 1)
厚朴酚/
(mg ·g - 1)
01 01224 01145 01 010 01278
02 01226 01143 01 012 01286
03 01230 01148 01 009 01290
3 　讨论
311 　流动相的选择 :分别用甲醇2水、甲醇2水2醋酸、
乙腈2水、乙腈2水2醋酸以不同的比例进行考察 ,结果
表明采用甲醇2水2醋酸系统所得色谱峰峰形良好 ,
保留时间适宜 ,可达到理想的分离度。
312 　检测波长的选择 :厚朴酚与和厚朴酚的最大吸
收为 294 nm ,山姜素的最大吸收 286 nm ,小豆蔻明
的最大吸收为 346 nm ,在 294 nm 也有较灵敏的吸
收。因此选择 294 nm 可同时测定 4 种成分。
313 　柱温的选择 :分别选择了 20、25、30 ℃柱温进
行比较 ,通过对比各种柱温的色谱图发现在 25 ℃的
柱温下有较好的峰形。所以选择了 25 ℃的柱温进
行 H PL C 分析。
314 　样品提取条件的选择 :采用回流提取法 ,考察
了水、不同体积分数的甲醇、乙醇作为提取溶剂时 4
种成分的提取结果 ,发现以甲醇为提取溶剂时提取
率较高 ,分离效果较好 ,故采用甲醇为提取溶剂。考
察了超声法、回流提取法 ,发现回流提取 015 h 效果
较好 ,且操作简单 ,节省时间 ,故选择该提取方法。
参考文献 :
[ 1 ] 　王立青 ,江荣高 ,陈蕙芳1 厚朴酚与和厚朴酚药理作用的研究
进展 [J ]1中草药 ,2005 ,36 (10) :1591215941
[ 2 ] 　陈泉生1 厚朴的活性成分厚朴酚 ( Magnolol) 对胃液分泌及实
验性溃疡的作用 [J ]1国外医药 : 植物药分册 ,1981 ,3 :381
[ 3 ] 　Lee S E , Shin H T , Hwang H J , et al1 Antioxidant activity of
ext ract s f rom A l pinia katsumadai seed [J ]1 Phytother Res ,
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[ 6 ] 　黄家瑜1 厚朴温中汤加味治疗慢性浅表性胃炎[J ]1安徽中医
临床杂志 ,1997 ,9 (2) :972981
[ 7 ] 　干国平 ,江　维 ,刘焱文1 厚朴温中丸质量标准的研究[J ]1中
国药师 ,2007 ,10 (5) :43824401
HPLC法测定安神颗粒中金丝桃苷和芦丁
兰 　静 3
(天津市药品审评中心 ,天津 　300070)
摘 　要 :目的 　建立测定安神颗粒中金丝桃苷和芦丁的高效液相色谱法。方法 　采用 Dimark 十八烷基键合硅胶
色谱柱 (200 mm ×416 mm ,5μm) ;柱温 :40 ℃;流动相 :甲醇21 %冰醋酸 (28 ∶72) ;体积流量 :110 mL/ min ;检测波
长 :359 nm ;进样量 :20μL 。结果 　金丝桃苷和芦丁在 21246～51242μg/ mL 和 21110～41922μg/ mL 与峰面积呈
良好的线性关系 , r分别为 01999 9 和 01999 8。平均回收率分别为 10114 %、9919 %。结论 　用此法测定安神颗粒
中金丝桃苷和芦丁简单易行 ,结果准确。
关键词 :安神颗粒 ;金丝桃苷 ;芦丁 ;高效液相色谱
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :025322670 (2009) 1021583203
　　在国外贯叶金丝桃的研究主要集中在抗抑郁作
用。安神颗粒采用以贯叶金丝桃为主药。贯叶金丝
桃中含有黄酮类化合物 ,笔者拟采用亚硝酸钠、硝酸
铝法测定总黄酮的量 ,但因干扰较大 ,在显色后 510
·3851·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 10 期 2009 年 10 月
3 收稿日期 :2008212220　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :兰　静 (1980 —) ,女 ,天津人 ,主管药师 ,硕士 ,主要从事新药审评。Tel : (022) 60255283 　E2mail : bluejing80 @yahoo. com. cn
nm 处未见最大吸收峰 ,无法测定。金丝桃苷和芦
丁是贯叶金丝桃中的主要成分 ,因此本实验采用高
效液相色谱法对金丝桃苷和芦丁定量测定 ,用以控
制安神颗粒的质量。
1 　仪器及试剂
　　日本 Shimadzu 公司 L C —2010A 型高效液相
色谱仪系统 ,CL ASS2V P Work Station 工作站。甲
醇 (色谱纯 ,天津康科德科技有限公司) ;冰醋酸 (天
津市化学试剂一厂 ) , 金丝桃苷 ( 批号 : 15212
200202) 、芦丁 (批号 :008029705) 对照品均为中国药
品生物制品检定所提供。安神颗粒 (自制) 。
2 　方法与结果
211 　色谱条件与系统适用性试验 :Dimark 十八烷
基键合硅胶色谱柱 (200 mm ×416 mm ,5μm) ;柱
温 :40 ℃;流动相 :甲醇21 %冰醋酸 (28 ∶72) ;体积
流量 :110 mL/ min ;检测波长 : 359 nm ;进样量 : 20
μL 。理论塔板数以金丝桃苷计不低于 2 000 ,金丝
桃苷和芦丁的分离度大于 115 ,拖尾因子符合要求。
212 　供试品溶液的制备 :取本品约 0125 g ,精密称
定 ,置 25 mL 量瓶中 ,加甲醇适量 ,超声处理 20
min ,取出 ,放冷至室温 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,滤过 ,
取续滤液 ,作为供试品溶液。
213 　对照品贮备液的配制 :分别精密称取金丝桃苷
和芦丁对照品适量 ,加甲醇分别制成 71488、71032
μg/ mL 的金丝桃苷和芦丁对照品溶液。
214 　线性关系考察 :对照品贮备液中分别取 3、4、
5、6、7 mL ,并分别置 10 mL 量瓶中 ,加甲醇至刻度。
分别取 20μL 注入液相色谱仪 ,测定 ,记录峰面积。
以质量为横坐标 ,峰面积为纵坐标 ,分别绘制标准曲
线 ,拟合回归方程 ,分别为金丝桃苷 : Y = 41733 X -
6 51117 , r = 01999 9 ;芦丁 : Y = 30 239 X - 5 44319 ,
r = 01999 8 ,结果表明金丝桃苷和芦丁分别在21246～
51242μg/ mL 和 21110～41922μg/ mL 与峰面积线
性关系良好。
215 　干扰试验 :按制法项下制备不含贯叶金丝桃的
阴性颗粒 ,并用甲醇分别制成阴性溶液、安神颗粒供
试液、金丝桃苷和芦丁对照品溶液 ,注入液相色谱仪
进行测定。在不含贯叶金丝桃的阴性颗粒剂色谱图
中 ,在金丝桃苷和芦丁出峰的时间范围内未见任何
杂质峰 ,见图 1。
21 6 　精密度试验 :取对照品贮备液重复进样 6 次 ,
以金丝桃苷和芦丁的峰面积计算 ,其 RSD 分别为
018 %、116 %。
217 　重现性试验 :取同一批样品 6 份 ,制备供试品
t/ min
12金丝桃苷　22芦丁
12hyperoside 　22rutin
图 1 　对照品( A) 、安神颗粒( B)和阴性对照( C)的 HPLC
图谱
Fig11 　HPLC Chromatograms of reference substances ( A) ,
Anshen Granula ( B) , and negative sample ( C)
溶液 ,分别取 20μL 注入液相色谱仪 ,分别计算金丝
桃苷和芦丁的质量分数 ,结果 RSD 分别为 118 %、
119 %。
218 　稳定性试验 :取样品按上述方法制备供试品溶
液 ,在室温自然光下分别于 0、2、4、8、12、24 h 测定
样品中金丝桃苷和芦丁的质量分数 ,结果其 RSD 均
为 112 % ,表明供试品溶液在 24 h 内稳定。
219 　加样回收率试验 :分别取安神颗粒细粉 9 份 ,
每份 01125 g ,精密称定 ,分别置 25 mL 量瓶中 ,每 3
份分别加入对照品贮备液 (金丝桃苷 71488μg/ ml
和芦丁 71032μg/ ml) 510、6125、715 mL ,制备供试
品溶液 ,取续滤液 20μL 注入液相色谱仪 ,计算得金
丝桃苷和芦丁回收率分别为 10114 %、9919 % ; RSD
分别为 1100 %、1143 %。
2110 　样品测定 :分别精密称不同批号的样品 ,制备
供试品溶液 ,在上述色谱条件下进行测定 ,计算金丝
桃苷和芦丁的质量分数 ,结果见表 1。
表 1 　安神颗粒中金丝桃苷和芦丁测定结果
Table 1 　Determination of hyperoside and rutin
in Anshen Granula
批号 金丝桃苷/ (mg ·g - 1) 芦丁/ (mg ·g - 1)
021128 01 41 01 43
021206 01 42 01 42
021218 01 43 01 43
3 　讨论
311 　检测波长的确定 :金丝桃苷和芦丁均属于黄酮
类物质 ,两者以甲醇为溶剂时的紫外最大吸收波长
非常接近 ,分别为 360、359 nm[ 1 ,2 ] ,故选择紫外检测
波长为 359 nm。
312 　流动相的选择 :因金丝桃苷和芦丁均属于黄酮
类物质 , 且其色谱行为比较接近 , 根据文献报
·4851· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 10 期 2009 年 10 月
道[ 3 ,4 ] ,采用甲醇21 %冰醋酸 (30 ∶70) ,金丝桃苷和
芦丁保留时间分别约为 21、22 min ,但本品采用该
色谱条件时 ,两者不能达到基线分离 ,为使其达到完
全分离的目的 ,实验对流动相甲醇与 1 %冰醋酸的
比例进行了筛选 ,甲醇与 1 %冰醋酸的比例分别为
30 ∶70、29 ∶31 及乙腈与冰醋酸的比例为 20 ∶80
时 ,样品中金丝桃苷和芦丁均不能达到基线分离 ,最
终确定甲醇与 1 %冰醋酸的比例为 28 ∶72 时 ,两者
的分离度达到了 115 ,采用 HPL C2二极管阵列检测
器检测峰纯度为 01999 ,理论板数分别为 4 805、
4 228 ,保留时间分别约为 37、40 min。
313 　提取方法的研究 :采用乙醇和 70 %乙醇加热 回流 30 min 的方法处理样品 ,发现安神颗粒的70 %乙醇溶液黏度大 ,不易滤过 ,而乙醇溶液色谱峰形不理想。另外取本品加甲醇分别采用加热回流30 min、超声处理 20、30 min 进行测定 ,测定结果无明显差异 ,因此选择超声 20 min 处理样品。参考文献 :[ 1 ] 　万德光 ,裴　瑾 ,严铸云 ,几种金丝桃属药用植物的金丝桃苷含量测定[J ]1中药材 ,2004 ,27 (6) :39723981[ 2 ] 　许乾丽 ,熊慧林 ,芧向军1 黔产 3 种金丝桃属植物药中金丝桃苷的含量测定[J ]1药物分析杂志 ,2003 ,23 (6) :41424171[ 3 ] 　Wu Y , Zhou S D , Li P1 Drtermination of flavonoids in H y2pericum per f oratum by HPLC analysis [J ]1 A cta Pharm S in ,2002 , 37 (4) : 28022821[ 4 ] 　黄琴伟 ,张文婷 ,赵维良1 HPLC 法测定鱼腥草不同生长季节、不同药用部位中黄酮类成分 [J ]1 中草药 ,2007 ,38 (8) : 1253212551
热毒宁注射液中细菌内毒素的测定研究
刘 　涛1 ,2 ,萧 　伟1 ,王振中1 ,万德光2 ,彭国平3 ,王永香1 3
(11 江苏康缘药业股份有限公司 ,江苏 连云港 　222001 ;21 成都中医药大学 ,四川 成都 　610075 ;
31 南京中医药大学 ,江苏 南京 　210046)
摘 　要 :目的 　对热毒宁注射液进行细菌内毒素定量检查试验 ,建立定量检测热毒宁注射液中细菌内毒素的试验
方法。方法 　采用《中国药典》2005 年版二部附录检测细菌内毒素的动态浊度法。结果 　热毒宁注射液在稀释至
120 倍时用细菌内毒素定量法检测无干扰因素影响 ,内毒素回收率在 50 %～200 %。结论 　使用动态浊度法可以
高效地测定热毒宁注射液的细菌内毒素。
关键词 :热毒宁注射液 ;细菌内毒素 ;动态浊度法 ;干扰试验
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 1021585203
　　热毒宁注射液主要组成药味为青蒿、栀子、金银
花 ,具有清热、疏风、解毒之功效 ,临床用于上呼吸道
感染 (外感风热症) 所致的高热、微恶风寒、头身痛、
咳嗽、痰黄等症 ,其疗效显著。热毒宁注射液质量标
准中对注射剂采用家兔法进行热原检查 ,但家兔法
进行热原检查操作复杂 ,时间长。根据细菌内毒素
定量检测方法 (动态浊度法)具有灵敏度高、快速、准
确、操作简便等优点 ,本实验按《中国药典》2005 年
版二部附录的细菌内毒素法及其应用指导原则建立
热毒宁注射液细菌内毒素定量检测方法 ,确保临床
用药安全。
1 　仪器与材料
　　B ET —16M 细菌内毒素测定仪 (天津市天大天
发科技有限公司) ;涡旋混合器 (天津天大天发科技
有限公司) ; FZQ —2 型涡旋混合器 (江苏泰县医疗
器械厂) 。
　　鲎试剂 (批号 0812062 ,λ= 0103 EU/ mL ,规格
016 mL/ Amp ,湛江博康海洋生物有限公司) ;细菌
内毒素工作标准品 (批号 150601220086 , 160 EU/
Amp ,中国药品生物制品检定所) ;细菌内毒素检查
用水 (批号 080320 ,规格 5 mL/ Amp ,湛江博康海洋
生物制品有限公司) 。热毒宁注射液由江苏康缘药
业股份有限公司生产。
2 　方法和结果
211 　细菌内毒素细菌内毒素限值 (L ) 的确定 :按
《中国药典》2005 年版二部附录可知人每千克每小
·5851·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 10 期 2009 年 10 月
3 收稿日期 :2009203212　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家科技攻关项目 (2004BA721A42)
作者简介 :刘　涛 (1976 —) ,男 ,四川南充人 ,高级工程师 ,成都中医药大学在读博士 ,研究方向为中药品种、质量及资源开发研究 ,已在
各类核心期刊发表论文 15 篇 ,曾荣获江苏省科技进步二等奖、连云港市科技进步特等奖等 8 项市级以上奖励 ,享受连云港市
政府特殊津贴。Tel : (0518) 85521943 　E2mail :liutao0578 @sina1com3 通讯作者　王永香　Tel : (0518) 85521933