全 文 ：HPLC法测定千金子中 4 个二萜类化合物
郑飞龙1 ,宁火华1 ,马双成2 ,罗跃华1 3
(11 江西省食品药品检验所 ,江西 南昌 　330029 ; 21 中国药品生物制品检定所 ,北京 　100050)
摘 　要 :目的 　为进一步探讨千金子中药材的质量标准 ,建立了千金子中 4 个二萜类化合物的正相高效液相色谱
测定法 ,对千金子中该 4 种成分进行定量分析。方法 　色谱柱为 Agilent zorbax rx2C18 ,流动相为正己烷2醋酸乙酯2
乙腈 (8715 ∶10 ∶215) ,体积流量 110 mL/ min ,柱温 30 ℃,检测波长为 275 nm。结果 　千金二萜醇23 ,152二乙酸2
52苯甲酸酯 ;72羟基2千金二萜醇2二乙酸2二苯甲酸酯 ;172羟基2异千金二萜醇25 ,15 ,172三乙酸232苯甲酸酯 ;6 ,202环
氧千金二萜醇苯乙酸二乙酸酯的线性范围分别为01030 1 ～31011μg ,01010 3～11028μg ,01005 0～01990μg ,
01020 5～21052μg ,平均回收率分别为 104185 % ,101181 % ,100130 % ,101186 %( n = 6) 。结论 　该法操作简便 ,快
速 ,结果准确。二萜类成分是千金子的毒性成分 ,又是活性成分 ,本法为进一步控制千金子毒性提供了测定标准。
关键词 :千金子 ;高效液相色谱 ;千金二萜醇酯
中图分类号 :R28216 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :025322670 (2009) 1021656203
　　千金子为大戟科植物续随子 Eu p horbi a l at hy2
ris L1 的干燥成熟种子 ,是一种传统中药材。其地
域分布广泛 ,主产地为河南、河北、浙江、四川、吉林
等省。千金子具有导泻、抗炎、镇静等生理活性 ,主
要功效为泻下逐水、破血通经 ,用于治疗水肿、痰饮、
积滞胀满、二便不通、血瘀经闭 ,外治顽癣、疣赘[1 ] 。
现代药理研究发现千金子在抗肿瘤和治疗白血病方
面有确切疗效[2 ,3 ] ;在治黑子、去疣赘、美白等护肤
美容方面有一定效果[ 4 ] 。另一方面 ,千金子辛、温 ,
有毒 ,有剧烈的泻下作用 ,属有毒中药。急性毒性试
验显示其毒性较大[5 ] 。在化学成分方面 ,已对其萜
类成分 ,尤其是二萜类化合物进行了大量研究[6～8 ] ;
千金子泻下药的主要成分是脂肪油 ,为了防止千金
子油脂润肠致泻作用过猛影响健康 ,采用去油制霜
的炮制方法以减低毒性、缓和其峻泻作用 ,故临床多
使用千金子霜而少用千金子。但是 ,目前千金子霜
炮制品的去油程度都是凭经验掌握 ,没有统一的标
准 ,因此在炮制过程中也没有科学有效的质控办法。
有关千金子中化学成分的定量测定 ,仅见秦皮
乙素[9 ] 、秦皮甲素[10 ]的测定及气质联用定量测定其
挥发油的量。本实验测定了千金子的 4 个二萜化合
物 ,即千金二萜醇23 ,152二乙酸252苯甲酸酯、72羟基2
千金二萜醇2二乙酸2二苯甲酸酯、172羟基2异千金二
萜醇25 ,15 ,172三乙酸232苯甲酸酯、6 ,202环氧千金
二萜醇苯乙酸二乙酸酯 ,建立了千金子中 4 个二萜
类化合物的定量测定方法。
1 　材料
Waters 2695 型高效液相色谱仪 , Waters 2487
型检测器 ;BU G25 —06 型超声波清洗机 (上海必能
信超声有限公司) 。
4 种对照品均为从该属植物中提取、分离并经
波谱鉴定 ,质量分数均在 95 %以上。乙腈为色谱
纯 ,其他试剂均为分析纯 ;千金子 (河南 : 080510042
08051006 , 0806007 ;广西 : 080600220806005 ;新疆 :
0806006 ; 河 北 : 0806008 ) ; 千 金 子 霜 ( 河 南 :
08051007208051009 , 0806001 , 080813 ; 广 西 :
08051010208051012 ;新疆 :080812 ;河北 :080814) 均
由江西省食品药品检验所袁桂平副主任药师鉴定。
2 　方法与结果
211 　色谱条件与系统适应性试验 :色谱柱为 Agi2
lent Zorbax rx2C18 (250 mm ×416 mm ,5μm) ;流动
相 :正己烷2醋酸乙酯2乙腈 (8715 ∶10 ∶215) ;体积
流量 : 110 mL/ min。检测波长 : 275 nm ,柱温 : 30
℃。理论塔板数按二萜峰计算应不低于3 000。在上
述色谱条件下 ,峰呈较好分离 ,色谱图见图 1。
212 　对照品溶液的制备 :分别精密称取千金二萜
醇23 ,152二乙酸252苯甲酸酯 ( Ⅰ) 、72羟基2千金二萜
醇2二乙酸2二苯甲酸酯 ( Ⅱ) 、172羟基2异千金二萜
醇25 ,15 ,172三乙酸232苯甲酸酯 ( Ⅲ) 、6 ,202环氧千
金 二萜醇苯乙酸二乙酸酯 ( Ⅳ) 对照品1 01 8 1 、
·6561· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 10 期 2009 年 10 月
3 收稿日期 :2008211227　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家“十一五”科技支撑项目 (2006BAI14B00)
作者简介 :郑飞龙 (1984 —) ,男 ,江西鹰潭人 ,硕士 ,从事药品检验工作 ,研究方向为天然活性产物分析。　
Tel : (0791) 8158656 　E2mail :feilongok21 @1631com3 通讯作者　罗跃华
t/ min
12千金二萜醇23 ,152二乙酸252苯甲酸酯　2272羟基2千金二萜醇2二乙酸2二苯甲酸酯
32172羟基2异千金二萜醇25 ,15 ,172二乙酸232苯甲酸酯　6 ,202环氧千金二萜醇苯乙酸二乙酸酯
12 Euphorbia factor L 3 　22Euphorbia factor L 2 　32 Euphorbia factor L 7b 　42 Euphorbia factor L 1
图 1 　混合对照品( A) 、千金子( B)和千金子霜( C) HPLC图
Fig11 　HPLC Chromatograms of mixed reference substances ( A) , Semen Euphorbiae ( B) , and Semen Euphorbiae Pulveratum ( C)
11165、11124、9148 mg ,置于 100 mL 量瓶中 ,用醋
酸乙酯溶解并定容 ,制成对照品储备液 ;依次准确吸
取 5、2、1、4 mL 置于 25 mL 量瓶中 ,混匀 ,制成混合
对照品储备液 (使质量浓度分别为 49114、21118、
10122、34147μg/ mL) 。
213 　供试品溶液的制备 ;取千金子粉末 ,精密称定
012 g ,置具塞锥形瓶中 ,精密加醋酸乙酯 25 mL ,称
定质量 ,超声处理 (功率 250 kW ,频率 25 k Hz) 20
min ,放冷 ,再称定质量 ,用醋酸乙酯补足减失的质
量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 ,即得。
214 　线性关系考察 :分别精密称取 Ⅰ～ Ⅳ对照品
30111、10128、9190 和 20152 mg ,置于 50 mL 量瓶
中 ,用醋酸乙酯溶解并定容 ,制成对照品储备液 ;分
别将上述对照品储备液用醋酸乙酯稀释成 1、2、5、
10、25、100 倍 ,形成 6 个质量浓度梯度的标准溶液。
依次吸取 5μL 进样 ,在 275 nm 处检测 ,以峰面积
( X) 为横坐标 ,进样质量 ( Y) 为纵坐标 ,得回归方程、
相关系数及线性范围 ,结果见表 1。
表 1 　化合物 Ⅰ～ Ⅳ的线性关系( n = 6)
Table 1 　Calibration data of compounds Ⅰ—Ⅳ( n = 6)
对照品 保留时间/ min 回归方程 R2 线性范围/μg
Ⅰ 81 23 Y = 61 383 4 ×10 - 7 X - 91 555 2 ×10 - 3 01999 9 01 030 1～31011
Ⅱ 121 38 Y = 81 387 9 ×10 - 7 X - 41 024 4 ×10 - 3 01999 9 01 010 3～11028
Ⅲ 171 36 Y = 71 529 7 ×10 - 7 X - 51 854 8 ×10 - 5 01999 9 01 005 0～01990
Ⅳ 181 65 Y = 71 170 8 ×10 - 7 X + 11 473 9 ×10 - 4 01999 9 01 020 5～21052
215 　精密度试验 :精密吸取同一对照品溶液5μL ,
连续重复进样 6 次 ,测定峰面积积分值。结果 RSD
分别为 0147 %、0142 %、0156 %、0144 %( n = 6) 。
216 　稳定性试验 :精密吸取同一供试品溶液 (批号 :
08051006) 5μL ,分别于配制后 0、4、8、12、16、20 h
进样 , 测定峰面积积分值。结果 RSD 分别为
1182 %、1177 %、1124 %、1180 %( n = 6) ,表明供试品
溶液在 20 h 内基本稳定。
217 　重现性试验 :分别称取同一批样品 (批号 :
08051006)共 6 份 ,每份约 012 g ,精密称定 ,制备供
试品溶液 ,依法测定二萜的量。结果 RSD 分别为
1184 %、1167 %、1178 %、1122 %( n = 6) 。
218 　加样回收率试验 :取样品 (批号 :08051006) 约
011 g ,共 6 份 ,精密称定 ,分别精密加入二萜对照品
溶液 (二萜质量浓度分别为 22194、10115、5130、19176
μg/ mL) 25 mL ,制备供试品溶液 ,进样测定 ,计算回收
率。结果化合物Ⅰ～Ⅳ平均回收率和 RSD 值分别为
104185 %、1130 %; 101181 %、1162 %; 100130 %、 1146 %;101186 %、1188 %( n = 6) 。219 　样品测定 :分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 5μL ,注入液相色谱仪 ,测定 ,用外标法计算样品的量。千金子测定结果见表 2 ,千金子霜测定结果见表 3。表 2 　10 批千金子中二萜测定结果Table 2 　Determination of diterpene in ten batchesof Semen Euphorbiae批　号 质量分数/ (mg ·g - 1)Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ08051004 51 49 21 60 11 11 31 7708051005 61 19 21 29 01 99 31 9508051006 61 29 21 71 11 15 41 570806002 61 58 31 13 11 32 51 270806003 51 17 21 60 11 12 41 180806004 51 96 21 84 11 19 41 770806005 61 09 21 46 11 04 41 710806006 61 14 21 66 11 14 41 800806007 61 39 21 61 11 13 41 820806008 61 12 21 47 11 04 41 39
·7561·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 40 卷第 10 期 2009 年 10 月
表 3 　10 批千金子霜中二萜测定结果
Table 3 　Determination of diterpene in ten batches
of Semen Euphorbiae Pulveratum
批　号
质量分数/ (mg ·g - 1)
Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ
08051007 2160 01 98 01 43 21 97
08051008 2143 01 93 01 42 21 80
08051009 2115 01 82 01 38 21 01
08051010 2161 01 98 01 46 21 45
08051011 1188 01 73 01 34 11 50
08051012 1189 01 75 01 34 11 54
0606001 2151 01 76 01 38 21 03
080812 2152 01 85 01 37 11 86
080813 2161 01 94 01 40 11 82
080814 2171 11 08 01 46 21 40
3 　讨论
311 　本实验在液相方法的选择过程中 ,运用反相高
效液相系统分离 ,流动相分别为乙腈2011 %磷酸系
统 ,甲醇2水系统 ,乙腈2011 %甲酸系统 ,分离效果都
不理想。换用正相高效液相系统分离 ,流动相为正
己烷2醋酸乙酯系统 ,峰分离效果改善 ,最后选择流
动相为正己烷2醋酸乙酯2乙腈 (8715 ∶10 ∶215) 。
此次实验中 ,由于千金子中二萜类化合物的极性较
小 ,用正相柱分离效果优于反相柱。
312 　检测波长的选择 :取二萜对照品 ,加甲醇制成
对照品溶液 ,照分光光度法 (《中国药典》2005 年版
一部附录 VA) ,在 190～400 nm 进行扫描。结果 4
个化合物分别在 27615、27314、27513、27213 nm 波
长处有吸收峰 ,结合本品 HPL C 色谱分析条件 ,选
择 275 nm 作为检测波长。
313 　样品预处理方法的选择 :提取溶剂 ,笔者选用
了甲醇、正己烷及醋酸乙酯 ;提取方法 ,加热回流提
取和超声提取 2 种方法 ;提取时间 20、40、60 min。
结果发现 ,甲醇提取样品中干扰测定的杂质较多 ,而
正己烷和醋酸乙酯提取效率差异不明显 ,加热回流
提取和超声提取效率差异不明显。3 种提取时间提
取效率差异不明显。决定采用醋酸乙酯超声提取
20 min ,该法提取效率高 ,既溶剂毒性小于正己烷 ,
所得样品干扰杂质少 ,且操作也较为简单 ,是一种较
为理想的样品处理方法。
药理试验表明 ,千金子具有泻下和抗肿瘤作
用[11 ] 。脂肪油含有的千金子甾醇能产生峻泻 ,其泻
下作用为蓖麻油的 3 倍[12 ] ,既是千金子中的有毒成
分 ,也是有效成分 ,故需炮制入药。千金子传统炮制
方法多为 (去油)制霜法 ,制霜的目的是减毒、缓和其
峻泻之性。《中国药典》2005 年版要求“去皮取净
仁 ,研碎如泥状 ,经微热后 ,压去部分油脂”、“含脂肪
油应为 1810 %～2010 %”。实验结果显示 ,千金子
中二萜总量高于千金子霜。对千金子及千金子霜中
的二萜类化合物进行了测定 ,从化合物角度来监测
千金子及千金子霜脂肪油成分 ,初步探讨了千金子
炮制去油的合理性 ,为其炮制工艺的制定和炮制意
图的揭示奠定基础。
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