全 文 ：富集。实验分别考察了预进水和乙腈对富集效果的
影响。结果表明: 在实验电泳条件下,预进水和乙腈
时,与常规电迁移进样相比, 检测灵敏度分别提高
400、250倍。故选择水为预进溶液。
进样时间的长短主要影响进样量的大小,从而
影响富集效果。实验考察了进样时间在 20 ~ 40 s
对富集效果的影响。结果表明: 随着进样时间的增
加,峰高明显增加,在 30 s之前无减缓趋势, 继续增
加进样时间, 峰高不再增加,峰展宽明显,柱效降低,
而不利于定量测定,故选择进样时间为 30 s。
实验考察了在 60 mmol/ L 磷酸二氢钠 ( pH
61 0)-乙腈( 8B2)缓冲体系下, 不同进样电压( 8、10、
12、14、16 kV)对富集效果的影响。结果表明:峰高
随进样电压的增加而增高,但是随着进样电压的增
大,组分保留时间减小,而乌头碱峰与样品中其他组
分峰分离度减小,不利于分离测定。当进样电压为
12 kV时,乌头碱峰峰形良好, 各组分均完全分开,
故选择最佳进样电压为 12 kV。
31 2 提取条件的选择: 乌头碱的提取常采用冷浸
法[ 7] 和超声提取法[ 5] , 但提取的效果不尽相同。由
于乌头碱为亲脂性生物碱,并且对热很不稳定[ 8] ,因
此实验利用生物碱的碱性, 加酸冰浴超声提取 40
m in使生成盐溶于水,加乙醚萃取去除脂溶性杂质,
再碱化,用乙醚萃取,去除水溶性杂质。该法效果良
好,使待测组分处无干扰。同时采用冰浴超声提取
既防止成分遇热分解又大大提高了提取效率。
本实验建立了毛细管电泳场放大富集技术快速
检测温胃舒颗粒中痕量有效毒性成分乌头碱的方
法。该方法样品预处理简单、分离效率高、分析速度
快、灵敏度高、线性范围宽、实验成本低、环境污染
小。检测灵敏度与常规进样相比提高 400倍, 达到
了文献报道的高效液相色谱法 [ 6]的水平且有较高的
分离选择性。
参考文献:
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HPLC法测定小半夏汤中 6-姜酚和 6-姜醇
张科卫,吴 皓* , 崔小兵
(南京中医药大学,江苏 南京 210029)
摘 要: 目的 研究以 H PLC 法同时测定小半夏汤中 6-姜酚、6-姜醇的方法。方法 采用 Kromasil C18柱( 250 mm @
41 6 mm, 5 Lm) ; 流动相:甲醇-水( 65B35) ;检测波长: 280 nm; 柱温: 30 e ;体积流量: 01 8 mL / min。结果 6-姜酚
在 11 273~ 111 457 Lg 与峰面积呈现良好的线性关系, r= 01 999 9; 6-姜醇在 01 444~ 31 996 Lg 与峰面积呈现良好的
线性关系, r= 01 999 8。平均加样回收率( n= 5) : 6-姜酚为 991 82% ; 6-姜醇为 1001 30%。结论 本法操作简便, 结
果可靠, 重现性好,可作为小半夏汤质量控制的方法。
关键词: 小半夏汤; 6-姜酚; 6-姜醇;高效液相色谱
中图分类号: R2861 02 文献标识码: A 文章编号: 0253-2670( 2009) 10-1579-03
小半夏汤出自张仲景的5金匮要略6, 虽然仅由
半夏、生姜两味药组成, 却有着很好的止呕效果, 所
以历代医家对其倍加推崇, 称其为/呕家圣剂0。目
前对其的研究主要集中在药理药效方面 [ 1]。本课题
#1579#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 10 期 2009年 10 月
* 收稿日期: 2008-12-10 基金项目:南京中医药大学青年科技创新基金项目( 05XZR08)作者简介:张科卫( 1971 ) ) ,女,博士研究生,助理研究员,主要从事中药复方与炮制研究。
Tel: ( 025) 86798269 E-m ail: kew ei_31@ 1631 com
* 通讯作者 吴皓
组前期的研究发现, 小半夏汤水溶性部位中含有多
种具强烈生理活性的核苷类物质[ 2]。该方中, 生姜
虽为臣药,但现代研究表明, 其中所含的姜酚、姜醇
类物质为其止呕主要活性物质[ 3]。因此本实验对该
方中 6-姜酚和 6-姜醇进行了测定,为全面研究小半
夏汤作进一步的探索。
1 仪器、试剂与药品
Waters2690型高效液相色谱仪, 996PDA 检测
器, M il lennium 32 色 谱 管 理 系 统; Sar to rius
BP211D型电子天平。
甲醇为色谱纯, 水为亚沸蒸馏水(自制) ; 6-姜
酚、6-姜醇对照品为由本实验室分离纯化制得的黄
色油状物,经 UV、IR、MS、NMR 等结构测定, 并经
HPLC 检测为单一成分, 质量分数达到 99%以上;
小半夏汤由南京中医药大学中医药研究院提供。
2 方法与结果
21 1 色谱条件的确定
21 11 1 测定波长的选择:采用紫外区全波长扫描的
方法,对 6-姜酚和 6-姜醇的最大吸收波长进行研
究,结果见图 1。发现两者均在 280 nm 处呈现最大
吸收,因此确定了在 280 nm 进行测定的方法。
21 11 2 色谱条件: Kr omasil C18柱( 250 mm @ 41 6
图 1 6-姜酚( A)和 6-姜醇( B)的紫外光谱图
Fig1 1 UV Spectrum of 6-gingerol ( A) and 6-shogaol ( B)
mm, 5 Lm) ; 流动相: 甲醇-水( 65 B 35) ; 检测波长:
280 nm;柱温: 30 e ;体积流量: 01 8 mL/ min。理论
塔板数以 6-姜酚计不低于 4 000, 并且 6-姜酚、6-姜
醇与其他组分的分离度均大于 11 5。
21 2 溶液的制备
21 21 1 对照品溶液的制备:分别取减压干燥至恒重
的 6-姜酚、6-姜醇对照品适量, 精密称定, 加甲醇溶
解,分别配成含 6-姜酚 61 365 mg / mL、6-姜醇 21 22
mg/ mL 的对照品贮备液。
21 21 2 供试品溶液的制备:精密吸取装量差异项下
的本品约 40 mL,置 150 mL 分液漏斗中,加入等量
无水乙醚,萃取两次,取乙醚层,蒸干,残渣用甲醇溶
解,定量转移至 25 mL 量瓶中,定容,摇匀, 滤过, 取
续滤液,即得。
21 3 线性关系的考察: 分别精密吸取含 6-姜酚
61 365 mg/ mL、6-姜醇 21 22 mg / mL 的对照品贮备
液各 01 2、01 6、11 0、11 4、11 8 mL 置 10 mL 量瓶中,
加甲醇稀释至刻度, 摇匀, 制得系列混合对照品溶
液。取 10 LL 进样, 测定峰面积。以进样质量对峰
面积值作图, 回归分析, 结果 6-姜酚在 11 273 ~
111 457 Lg 有良好的线性关系, 回归方程为 Y =
61 207 @ 105 X - 11 998 @ 104 , r= 01 999 9; 6-姜醇在
01 444~ 31 996 Lg 有良好的线性关系, 回归方程为
Y= 31 273 @ 105 X- 21 278 @ 104 , r= 01 999 8。
21 4 阴性对照试验:按处方比例制得缺生姜的阴性
样品,按供试品溶液的制备项下方法制备阴性样品
溶液。按上述色谱条件分别取对照品溶液、供试品
溶液和阴性样品溶液进样,记录色谱图, 见图 2。结
果在与对照品色谱相对应处未出现色谱峰。表明按
本实验条件,处方中的其他成分不干扰 6-姜酚、6-姜
醇的测定。
图 2 对照品( A)、阴性样品( B)和小半夏汤( C)的 HPLC色谱图
Fig1 2 HPLC Chromatograms of reference substances ( A) , negative sample (B) , and Xiaobanxia Decoction ( C)
21 5 精密度试验:取供试品溶液(批号 20071016) 1
份,重复进样 6次,进样量 10 LL, 记录所测各组分
峰面积积分值, 计算, 结果 6-姜酚、6-姜醇峰面积积
分值的 RSD分别为 11 54%、11 43%。
21 6 重现性试验:取同一批样品(批号 20071016) 6
份,制备供试品溶液, 依法测定, 计算各组分的质量
浓度,结果 6-姜酚、6-姜醇质量浓度的 RSD 分别为
01 43%、11 48%。
#1580# 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 10 期 2009年 10 月
21 7 稳定性试验:吸取新配制的供试品溶液(批号
20071016) 1份,分别于 0、2、4、6、8、10、12 h 进样,
测定 6-姜酚、6-姜醇的峰面积, 结果其 RSD分别为
11 56%、11 41%,表明供试品溶液在 12 h内稳定。
21 8 回收率试验:分别精密吸取装量差异项下的批
号 20071016本品约 20 mL, 平行 5份, 精密加入含
6-姜酚 11 498 mg/ mL, 6-姜醇 498 Lg / mL 的混合对
照品储备液 51 0 mL,制备供试品溶液, 按上述色谱
条件进行 H PLC 测定, 计算回收率, 结果 6-姜酚的
平均回收率为 991 82%, RSD为 11 40% ; 6-姜醇的平
均回收率为 1001 30%, RSD为 11 44%。
21 9 样品测定:取不同批号的小半夏汤制备供试品
溶液。分别取供试品溶液和对照品溶液各 10 LL 进
样测定,以外标一点法计算质量浓度,结果见表 1。
3 讨论
由于 6-姜酚、6-姜醇在水中的溶解度很小,而在
醚中和醇中的溶解度较大。因此在制备供试品溶液
时,试验采用乙醚作为萃取溶剂。萃取过程中发现,
用等量乙醚萃取两次即能将该两种成分提取完全。
表 1 小半夏汤中 6-姜酚、6-姜醇的测定结果(n= 3)
Table 1 Determination of 6-gingerol and 6-shogaol
in Xiaobanxia Decoction ( n= 3)
批号 6-姜酚/ ( mg # mL- 1) 6-姜醇/ ( mg # mL- 1 )
20071016 01372 1 01 122 5
20071018 01403 2 01 119 3
20071022 01356 8 01 126 5
目前对于小半夏汤中有效成分的研究不多。本
实验采用 HPLC 法对其中的主要活性物质 6-姜酚、
6-姜醇进行测定,为全面研究小半夏汤提供参考, 也
为中药复方研究做了一些初步的探索。
参考文献:
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HPLC法测定厚朴温中汤中山姜素、和厚朴酚、小豆蔻明和厚朴酚
唐 倩,石 珊, 赵云丽,高晓霞,王新桃, 于治国*
(沈阳药科大学药学院,辽宁 沈阳 110016)
摘 要: 目的 建立同时测定厚朴温中汤中山姜素、和厚朴酚、小豆蔻明及厚朴酚的反相高效液相色谱法。方法
Scienhome C18柱( 250 mm @ 41 6 mm, 5 Lm) ; 流动相:甲醇-01 5 %醋酸水溶液( 75B 25) ; 体积流量: 11 0 mL/ min;柱
温: 25 e ; 检测波长: 294 nm;进样量 : 10 LL, 按外标法计算。结果 在上述条件下, 山姜素、和厚朴酚、小豆蔻明、厚
朴酚分别在 11 14~ 221 8、01 9~ 18、01 16~ 31 2、11 9~ 38 Lg / mL 呈良好的线性关系, 加样回收率分别为 971 7% ~
1001 3%、971 3% ~ 981 7%、901 0% ~ 1001 0%、981 6% ~ 991 3 %。结论 该方法简便、快速、准确, 可作为厚朴温中
汤质量控制的有效方法。
关键词: 厚朴温中汤;山姜素; 和厚朴酚;小豆蔻明; 厚朴酚;高效液相色谱
中图分类号: R2861 02 文献标识码: A 文章编号: 0253-2670( 2009) 10-1581-03
厚朴温中汤源于5内外伤辨惑论6, 由厚朴、陈
皮、甘草、茯苓、草豆蔻、木香、干姜组成,温中行气,
燥湿除满,主治脾胃伤于寒湿, 脘腹胀满或疼痛, 不
思饮食, 四肢倦怠等症。方中君药厚朴具有下气除
满、燥湿消痰功效,主要成分和厚朴酚与厚朴酚具有
镇痛抑菌、抗炎、抗肿瘤等广泛的药理作用[ 1, 2]。草
豆蔻燥湿健脾、温胃止呕 [ 5] , 主要成分小豆蔻明、山
姜素能够抗菌、止呕、健脾[ 3, 4]。现代药理学研究表
明厚朴温中汤用于治疗胃肠痉挛, 十二指肠溃疡, 病
毒性肝炎等症具有明显疗效[ 5, 6] 。目前有关其质量
控制方面研究报道较少, 且定量指标仅限于厚朴 [ 7]。
本实验以和厚朴酚、厚朴酚、小豆蔻明和山姜素为指
标性成分进行了同时测定,可以更全面、有效地控制
厚朴温中汤质量。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪(日本岛津公司) , 包括 LC )
#1581#中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 40 卷第 10 期 2009年 10 月
* 收稿日期: 2008-12-19 作者简介:唐 倩( 1981 ) ) ,女,辽宁沈阳人,沈阳药科大学药物分析专业硕士研究生,主要从事中药复方的质量控制研究及药动学研究。Tel: (024) 23986295 E- mail : t angqian8111@ 1631 com
* 通讯作者 于治国 Tel: ( 024) 23986295 E-m ail: zh iguo-yu@ 1631 com