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RP-HPLC法测定干姜、炮姜和生姜中3种姜酚的含量



全 文 :China Pharmacy 2011 Vol. 22 No. 23 中国药房 2011年第22卷第23期
干姜、炮姜和生姜为姜科植物姜 Zingiber officinale Rosc.
的根茎及其加工品,3种药用姜的功效不同,在中医临床的使
用也存在一定的差异。现代药理研究表明,姜具有镇痛抗炎、
抗肿瘤、抗病原体、保肝利胆、抗溃疡、改善心血管系统等多种
药理作用[1~3]。姜的主要成分为挥发油和无挥发性的姜辣素类
化合物,2类化合物在组方入药的过程中均能产生药理作用。
以 6-姜酚、8-姜酚和 10-姜酚为代表的姜辣素类化合物是姜的
特征性化学成分之一,研究证实姜酚具有强心、调节血管舒缩
功能、抗血小板、降血脂、抗动脉粥样硬化、抗氧化与保护心肌
等药理作用[4]。
目前,姜酚类成分的含量测定方法以高效液相色谱
(HPLC)法为主,但以往的方法大多采用含酸的流动相体系,易
使姜酚脱水形成姜烯酚,降低测定结果的准确性[5]。另外,部分
方法的前处理过程需要柱层析分离等步骤,较为烦琐[6~8]。本试
验采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法,可以在 20 min内快
速测定干姜、炮姜和生姜中 6-姜酚、8-姜酚和 10-姜酚的含量,
方法简便、准确、高效,能够为药用姜的加工炮制和质量控制
提供参考和依据。
1 仪器与试药
Agilent 1200型HPLC仪(美国安捷伦公司);AW 120型电
子天平(日本岛津公司);ZN-100微型高速粉碎机(中南制药机
械厂);BRANSON 5510E超声仪(美国必能信公司)。
干姜(北京同仁堂饮片厂,批号:100520)、炮姜(北京同仁
堂饮片厂,批号:100429)、生姜(购自农贸市场),经山西省药
品检验所鉴定均为姜科植物姜 Z. officinale Rosc.的根茎及加
工品;6-姜酚(批号:E-0128)、8-姜酚(批号:E-0165)、10-姜酚
(批号:E-0135)标准品(上海同田生物技术有限公司,经HPLC
面积归一化法检查纯度均>98.5%);乙腈、甲醇为色谱纯,水
为重蒸馏水,其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
色谱柱:依利特 Hypersil ODS 2(250 mm×4.6 mm,5 μm);
流动相:乙腈-水(72 ∶ 28);流速:1 mL·min- 1;检测波长:280
nm;柱温:25℃;进样量:10 μL。在此色谱条件下,6-姜酚、8-
姜酚和 10-姜酚与样品中其他组分的色谱峰分离完全。色谱
见图1。
2.2 标准品贮备液的制备
精密称取6-姜酚标准品11.56 mg、8-姜酚标准品10.72 mg
和10-姜酚标准品10.31 mg,分别置于10 mL量瓶中,用甲醇定
容,摇匀,即得标准品贮备液(6-姜酚为1.156 mg·mL- 1、8-姜酚
为 1.072 mg·mL- 1、10-姜酚为 1.031 mg·mL- 1),置 4 ℃冰箱贮
藏,备用。
2.3 供试品溶液的制备
干姜和炮姜粉碎后过4号筛,分别精密称取约0.15 g;生姜
适量切成碎末,用滤纸擦干表面汁液,精密称取约0.15 g,分别
置于10 mL量瓶中,加甲醇45 mL超声(功率:100 W,频率:40
RP-HPLC法测定干姜、炮姜和生姜中3种姜酚的含量
孟喜成*(山西大同大学附属医院,大同市 037005)
中图分类号 R284.1;R927.2 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2011)23-2182-03
摘 要 目的:建立测定干姜、炮姜和生姜3种药用姜中6-姜酚、8-姜酚和10-姜酚含量的方法。方法:采用反相高效液相色谱法。
色谱柱为依利特 Hypersil ODS 2(250 mm×4.6 mm,5 m),流动相为乙腈-水(72 ∶ 28),流速为1 mL·min- 1,检测波长为280 nm,柱温
为 25 ℃,进样量为 10 μL。结果:6-姜酚、8-姜酚和 10-姜酚的进样浓度分别在 1.156~231.200 μg·mL- 1(r=0.999 9)、1.072~
214.400 μg·mL- 1(r=0.999 8)、1.031~206.200 μg·mL- 1(r=0.999 9)范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系;平均加样回收率
分别为97.50%、98.06%、96.39%,RSD分别为1.18%、0.87%、1.37%(n均为6)。结论:本方法快速、准确、简便、高效,可为药用姜
的质量控制和评价提供依据。
关键词 反相高效液相色谱法;干姜;炮姜;生姜;6-姜酚;8-姜酚;10-姜酚;含量测定
Content Determination of 3 Gingerols in Dried Ginger,Baked Ginger and Fresh Ginger by RP-HPLC
MENG Xi-cheng(The Affiliated Hospital of Shanxi Datong University,Datong 037005,China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To establish the method for the content determination of 6-gingerol,8-gingerol and 10-gingerol in 3
medicinal gingers including dried ginger,baked ginger and fresh ginger. METHODS:RP-HPLC method was adopted. Hypersil ODS
2(250 mm×4.6 mm,5 μm)column was used with acetonitrile-water(72 ∶ 28)as mobile phase at a flow rate of 1 mL·min- 1. The
detection wavelength was set at 280nm and column temperature was 25 ℃ with the inject volume of 10 μL. RESULTS:The calibra-
tion curves of 6-gingerol,8-gingerol and 10-gingerol were linear in the range of 1.156~231.2 μg·mL- 1(r=0.999 9),1.072~214.4
μg·mL- 1(r=0.999 8)and 1.031~206.2 μg·mL- 1(r=0.999 9),respectively. The average recoveries were 97.50%,98.06% and
96.39% with RSD at 1.18%,0.87% and 1.37%,respectively(n=6). CONCLUSION:The method is rapid,accurate,simple and
effective,which could provide reference for the quality control and evaluation of medicinal gingers.
KEY WORDS HPLC;Dried ginger;Baked ginger;Fresh ginger;6-gingerol;8-gingerol;10-gingerol;Content determination
*副主任药师。研究方向:中药制剂及质量标准。电话:
0352-7130031。E-mail:mengxichen2010@sina.cn
··2182
中国药房 2011年第22卷第23期 China Pharmacy 2011 Vol. 22 No. 23
kHz)处理20 min,放冷至室温,加甲醇至刻度,摇匀,过0.45 μm
滤膜,取续滤液,即得。
2.4 线性关系考察
分别精密吸取“2.2”项下标准品贮备液 0.1、0.5、1、10、20
mL,置于 100 mL容量瓶中,加甲醇稀释,摇匀,按上述色谱条
件分别进样 10 μL(每份重复进样 3次),测定峰面积。以标准
品浓度(X,μg·mL- 1)为横坐标,峰面积积分值(Y)为纵坐标,制
备标准曲线,得6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚的回归方程分别为Y=
1.137 7X+0.126 5(r=0.999 9,n=5)、Y=1.112 6X+0.134 3(r=
0.999 8,n=5)、Y=1.096 8X+0.156 4(r=0.999 9,n=5)。结果
表明,6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚的进样浓度分别在 1.156~
231.200、1.072~214.400、1.031~206.200 μg·mL- 1范围内与各
自峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
分别取3种姜酚低、中、高3种浓度标准品溶液,连续进样
3次,考察方法的日内精密度。结果,6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚
峰面积的RSD分别为0.25%、0.42%、0.52%(n=9);再连续3 d
进样,考察方法的日间精密度。结果,6-姜酚、8-姜酚、10-姜酚
峰面积的RSD分别为0.36%、0.63%、0.73%(n=9),表明方法
的精密度良好。
2.6 稳定性试验
精密称取干姜粉末适量,按“2.3”项下方法制备供试品溶
液,分别于 0、1、3、6、12、24 h测定 6-姜酚、8-姜酚和 10-姜酚的
峰面积。结果,3种姜酚峰面积的RSD分别为0.89%、1.13%、
1.05%(n=6),表明供试品溶液在24 h内稳定。
2.7 重复性试验
精密称取干姜粉末适量,共6份,分别按“2.3”项下方法制
备供试品溶液,测定 3种姜酚的含量。结果,6-姜酚、8-姜酚、
10-姜酚含量的RSD分别为0.55%、0.82%、0.49%(n=6),表明
方法重复性良好。
2.8 加样回收率试验
精密称取已知 3种姜酚含量的干姜样品粉末适量,共 6
份,精密加入适量3种姜酚标准品贮备液,按“2.3”项下方法制
备供试品溶液,按上述色谱条件进行测定,计算加样回收率,
结果见表1。
2.9 样品含量测定
精密称取干姜、炮姜和生姜样品粉末适量,分别按“2.3”项
下方法制备供试品溶液,按上述方法测定 3种姜酚的含量,结
果见表2。
表2 干姜、炮姜和生姜中3种姜酚的含量测定结果(n=5)
Tab 2 Results of the content determination of 3 gingerols in
dried ginger,baked ginger and fresh ginger(n=5)
样品
干姜
炮姜
生姜
6-姜酚/mg·g- 1
3.72
1.18
2.16
8-姜酚/mg·g- 1
1.92
0.21
1.54
10-姜酚/mg·g- 1
0.68
0.19
0.53
3 讨论
本试验对超声和回流等提取方法进行了比较,发现超声
提取的3种姜酚成分含量要高于回流提取,分析其原因为加热
回流提取会使姜酚类成分发生脱水转变,导致含量降低。另
外,分别采用 50%、75%和纯甲醇作为提取溶剂,发现纯甲醇
对此类成分具有更高的提取效率。通过对超声提取时间的考
察,发现到 20 min后 3种姜酚的含量不再增加,可保证提取完
全。故最终选择样品提取方法为加甲醇 45 mL超声处理 20
min。
选择230 nm和280 nm特征波长进行比较,发现230 nm处
于吸收曲线的肩峰位置,易受到干扰;选择280 nm作为检测波
长,色谱图峰形较好、灵敏度高。同时,本试验比较了甲醇-水
和乙腈-水流动相体系,从保留时间和分离度进行分析,结果发
现乙腈-水体系的分离效果更好,3种姜酚的色谱峰与相邻色
谱峰均可以达到基线分离。另外,在乙腈-水体系中添加不同
浓度的冰醋酸,对色谱峰峰形与保留时间没有明显影响,故最
终选择乙腈-水体系作为本试验的流动相,能够在20 min内完
成3种成分的含量测定。
本方法可以为药用姜及其相关产品的质量控制和评价提
供依据,为药典的含量测定方法提供有益的补充。
参考文献
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0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
A
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
C
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
D
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 min
B
1
2
3
1
2
3
1 2 3
1
2 3
图1 高效液相色谱图
A.干姜;B.炮姜;C.生姜;D.混合标准品;1. 6-姜酚;2. 8-姜酚;3.
10-姜酚
Fig 1 HPLC chromatograms
A. dried ginger;B. baked ginger;C. fresh ginger;D. mixed standard;
1. 6-gingerol;2. 8-gingerol;3. 10-gingerol
表1 加样回收率试验结果(n=6)
Tab 1 Results of recovery tests(n=6)
组分
6-姜酚
8-姜酚
10-姜酚
取样量/mg
0.57
0.58
0.58
0.59
0.59
0.59
0.30
0.30
0.30
0.30
0.30
0.30
0.06
0.06
0.06
0.06
0.06
0.06
加入量/mg
0.58
0.58
0.58
0.58
0.58
0.58
0.32
0.32
0.32
0.32
0.32
0.32
0.05
0.05
0.05
0.05
0.05
0.05
测得量/mg
1.14
1.14
1.15
1.16
1.16
1.15
0.61
0.62
0.62
0.62
0.62
0.62
0.11
0.11
0.11
0.11
0.11
0.11
回收率/%
97.43
96.67
97.62
97.90
99.38
96.02
99.67
98.94
98.69
97.66
99.93
99.58
95.93
95.77
95.59
98.57
97.41
95.08
x/%
97.50
98.06
96.39
RSD/%
1.18
0.87
1.37
··2183
China Pharmacy 2011 Vol. 22 No. 23 中国药房 2011年第22卷第23期
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(收稿日期:2010- 12- 17 修回日期:2011- 03- 16)
慢支咳喘膏的质量标准研究
陈 瑶 1*,肖 芳 1,冯琳珊 1,肖 鹏 2,董 慧 2,刘祖祥 1,邹启发 1(1.云南省第一人民医院药剂科,昆明市
650000;2.云南白药集团股份有限公司技术质量部,昆明市 650000)
中图分类号 R284.1;R283.621 文献标识码 A 文章编号 1001-0408(2011)23-2184-03
摘 要 目的:建立慢支咳喘膏的质量控制方法。方法:采用薄层色谱(TLC)法对方中麻黄、黄芪、甘草进行鉴别;采用高效液相
色谱法对制剂中盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱进行含量测定。结果:TLC专属性好、斑点清晰;盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱进样量分
别在1.3~32.5(r=0.999 7)、3.4~85 µg(r=0.999 8)范围内与其峰面积积分值呈良好线性关系,麻黄碱、盐酸伪麻黄碱的平均回收
率分别为97.84%、97.85%,RSD分别为0.63%、1.10%(n均为9)。结论:本试验建立的方法简便、准确、重现性好,能有效控制慢支
咳喘膏的质量。
关键词 慢支咳喘膏;质量标准;盐酸麻黄碱;盐酸伪麻黄碱;高效液相色谱法
Quality Standard of Manzhi Kechuan Cream
CHEN Yao,XIAO Fang,FENG Lin-shan,LIU Zu-xiang,ZOU Qi-fa(Dept. of Pharmacy,The First People’s
Hospital of Yunnan Province,Kunming 650000,China)
XIAO Peng,DONG Hui(Technical Quality Department,Yunnan Baiyao Group Co.,Ltd.,Kunming 650000,
China)
ABSTRACT OBJECTIVE:To establish the method for the quality control of Manzhi kechuan cream. METHODS:Herba Ephe-
drae,Astragalus membranaceus and Radix Glycyrrhizae in the preparation were identified by TLC. The content of ephedrine and
pseudoephedrine in preparation was determined by HPLC. RESULTS:TLC spots were specific and clear. A good linearity was ob-
tained over 1.3~32.5 µg(r=0.999 7)of ephedrine and 3.4~85 µg(r=0.999 8)of pseudoephedrine. The average recoveries of
ephedrine and pseudoephedrine were 98.23%and 99.51% and RSDs were 2.15% and 1.56% respectively(n=9). CONCLUSION:
The method is simple,accurate and reproducible for the quality control of Manzhi kechuan cream.
KEY WORDS Manzhi kechuan cream;Quality standard;Ephedrine;Pseudoephedrine;HPLC
*副主任药师。研究方向:医院药学,电话:0871-3641285。
E-mial:chyhdd@sina.com
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慢支咳喘膏是云南省第一人民医院临床使用40余年的协
定处方,由麻黄、黄芪、甘草、南沙参等药材组成,具有益气补
肺、止咳化痰、平喘的功效,主要用于治疗慢性支气管炎、肺气
肿、肺心病等所致的久咳喘症,效果显著。本试验对制剂中麻
黄、黄芪、甘草3味药材进行薄层色谱(TLC)鉴别,同时用高效
液相色谱(HPLC)法测定了制剂中盐酸麻黄碱和盐酸伪盐酸
麻黄碱的含量,旨在建立慢支咳喘膏质量控制的有效方法。
1 仪器与试药
Agilent1100 型 HPLC 仪,包括 G1315B 紫外检测器、
G1316A柱温箱、G1313A自动进样器、G1311A四元梯度泵、
G1379A真空脱气机、Agilent ChemStation工作站(美国Agilent
公司);薄层层析用硅胶G板(青岛海洋化工有限公司,规格:
100 mm×100 mm);乙腈为色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为
分析纯。
盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、黄芪甲苷、甘草酸铵对照品
和甘草对照药材(中国药品生物制品检定所,批号分别为
0090-9801、1237-200103、0781-200311、100731-200615、120904-
2004101);黄芪、麻黄、甘草饮片(批号分别为100401、100601、
100401)、样品(批号:20100122、20100518 20101025)及相应
阴性样品均由昆明道地中药厂提供。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
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