全 文 ：中草蒋ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38嚣第10期2007年10月·1493·
小半夏汤HPLC指纹图谱的研究
张科卫，梅阳，吕爱娟，蔡
(南京中医药大学
皓，李伟，崔小兵，吴皓
江苏南京210029)
摘要：目的研究小半夏汤的高教液相色谱指纹图谱。方洼RP—HPLC方法，采用LichrospherC”(250illm×
4．6mlTl，5严m)色谱柱，二元梯度洗脱，检测波长为254rim，以鸟嘌呤棱昔为参照物。结果共有11个共有峰，通过
与对照品的保留时间及紫外光谱比较。1、2、3、5、6号峰分别鉴定为是尿嘧啶，黄嘌呤、尿嘧啶核苷、次黄嘌呤棱苷、
鸟嘌呤核苷。相同色谱条件下测定了半夏药材的HPLC图谱．其结果与小半夏汤有很好的褶若性。结论小半夏汤
的指纹图谱特征性、专属性根强．该方法稳定、可靠，重现性好，可为小半夏汤的质量控制研究提供参考。
关键词州、半夏汤；高效液相色谱{指纹图谱
中围分类号：R286．1 文献标识码：A 立章编号：0253—2670(2007)10—1493—03
HPLCFingerprintofX aobanxiaDecoction
ZHANGKe—wei，MEIYang，LUAi—juan，CAIHao，LIWci，CUIXiao—bing，wUHao
(NanjingUniversityofTraditionalChineseMedicine，Narijing210029，China)
Keywords：XiaobanxiaDecoctionHPLC；fingerprint
小半夏汤由半夏和生姜组成，出自张仲景的《金
匮要略》，由于其止呕效果很好而被称为。呕家圣
剂”，为历代医家所推崇。目前国内外对其的研究主
要集中在药理药效方面“]。中药复方的药效是依靠
其所包含的多种化学成分发挥综合、协调的整体调
节作用而达到抗病的目的，色谱指纹图谱可以“框
定”具某些特定疗效的植钫药的质量，也可以区别不
同提取工艺生产的植物药产品口]。本研究采用高效
液相色谱法进行了小半夏汤的指纹图谱研究，为全面
控制小半夏汤的质量提供了一种可借鉴的方法。
1仪器、试剂与药品
Waters2690型高效液相色谱仪，996PDA检测
器，Millennium32色谱管理系统；SartoriusBP211D
型电子天平；乙腈为色谱纯，承为亚沸蒸馏水(自
制)；尿嘧啶，黄嘌呤，尿嘧啶核苷由Sigma公司提
供，鸟嘌呤核苷由中国科学院上海生化研究所提供，
次黄嘌呤核苷对照品由本实验室分离纯化制得，经
Uv、IR、MS、NMR等结构测定；所有对照品均经
HPLC检测为单一成分，质量分数达到99％以上}
小半夏汤制剂。由南京中医药大学中医药研究院提
供；半夏药材样品来源见表1，生姜药材样品(5个)
购于菜市，经南京中医药大学中药鉴定教研室王春
根教授鉴定分别为天南星科植物半夏Pinelliater一
衰1半夏样品来擐
Table1 OriginsofP．terwotasamples
样品号 产地 收集时间 样品号 产地 收集时间
1 贵州 2004—06 6 四川 Z005一10
2 贵州 Z006—01 7 江苏 Z005—06
3 贵州 2006—02 8 江西 2006—04
4 四川 Z004—07 9 湖北 Z004—07
5 四川 2005—08
nata(Thunh．)Breit．的干燥块茎及姜科植物姜
ZingiberofficinaleRos ．的新鲜根茎。
2方法与结果
2．1色谱条件：色潜柱：LichrospherC1B(250mmx
4．6mm，5pm)；流动相：乙腈一水，梯度洗脱：o～24
min乙腈一水(1；99)，24～35min乙腈由1％升为
13％，保持15min，50～58min乙腈由13％升为
50％，58～65min乙腈由50％降为1％再保持15
min至80min。体积流量：1．0mL／min；柱温：
30℃；检测波长；254rim。
2．2对照品溶液的制备：分别精密称取经五氧化二
磷干燥过夜的尿嘧啶、黄嘌呤、尿嘧啶核苷、次黄嘌
呤核苷、鸟嘌呤核苷对照品适量，各加水后制成
50g-g／mL的溶液．作为对照品溶液。
2．3供试品溶液的制备
2．3．1小半夏汤供试品溶液的制备；取小半夏汤，
收稿El期：2007—0121
基金耵日：南京中医药大学青年科技刨新基金项目(05XZR08)
作者简介：张科卫(】97l一)．女，助理研究员，博士研究生，主要从事中药炮制及复方研究
Td：(025)86798269Emll=kewei一3】画,153．tom
万方数据
·1494· 十草菊CMn怖eTraditionalandHerbalDrugs第30卷第10期2007年10月
加无水乙醇适量，使溶液含醇量达60％，放置，滤 稳定。
过，滤液于水浴上蒸于，残渣加水溶解，制成含生药 2．4．3重现性试验：取同一批号的小半夏汤样品6
zg／mL的溶液，即得。 份，分别按供试品溶液的制备方法制备供试品并测
2．3．2半夏供试品溶液的制备：取半夏药材适量， 定，计算其11个共有峰的相对保留时间和相对峰面
加水煎煮，浓缩，浓缩液照z．3．1项下处理，郎得。 积的RSD，维果均小于3％。
2，3．3生姜供试品溶液的制备：取生姜药材适量， 2．5指纹图谱的建立
照2．3．2项下处理．即得。 2．5．1指纹图谱的制备：分别精密吸取对照品溶液
2．4方法学考察 与小半夏汤供试品溶液各10pL，注入液相色谱仪，
2．4．1精密度试验：取同一小半夏汤供试品溶液， 进样，测定，记录80rain色谱图，即得。
连续进样6次，测得共有峰11个，各共有峰的相对 2．5．2共有峰的确定：测定了lo批小半夏汤供试
保留时间和相对峰面积的RSD均小于3％。 品溶液，比较其色谱图，以6号峰鸟嘌呤核苷峰为参
2．4．2稳定性试验：取同一小半夏汤供试品溶液， 比峰(s)，计算各共有指纹峰的相对保留时间及相
分别在0、2．5、5．0、7．5、10．0、12．5h进样，测定，计 对峰面积比值。根据结果，确定11个共有色谱峰，相
算得各共有峰的相对保留时间和相对峰面积的 对保留时间和相对峰面积结果见表2，3，色谱图
RSD均小于3％，结果表明供试品溶液在12．5h内 见图1。
裹2小半夏汤共有峰的相对保留时间
Table2 RelativeretentionmefcommonpeaksforfingerprintofXiaobanxiaDecoction／
样 共有蜂相对保留时间
品 1 2 3 4 5 6(S) 7 8 9 10 11
1 0．236 0 375 0．443 0 663 0．909 1．000 1．211 1 650 1．780 2 46l 2．687
2 0．238 0．378 0．445 0．662 0899 1．000 1．212 1．654 1．786 2．469 2 695
3 0．236 0．375 0．443 0．659 0．908 1．000 1．206 1．652 1．784 2．469 2．698
4 0．237 0．377 0．444 0 660 0909 1．000 1．208 1．658 1．792 2．476 2．704
5 0．239 0．378 0．445 0660 0．909 l，000 1．212 1 666 1．803 2．487 2．713
6 0．238 0．379 0．446 0．654 0．909 1．000 1．212 1．666 1．802 2．486 2．709
7 0．239 0．379 0．446 m661 0．909 1．000 1．212 1．666 1，802 2．484 2 71l
8 0．239 0．378 0．445 0．647 0．909 1，000 1．212 1．667 1．802 2．492 2．716
9 0．234 0．374 0．441 0．650 0，908 1．000 1．199 1．637 1．765 2．45Z 2．685
10 m233 0．373 仉440 o．648 0，908 1．000 1．194 】，626 1．749 2．435 2．668
牙0．2370．377 0．444 0．656 0．908 1．000 1．208 l，654 1．786 2．471 2．699
RSD／“0．900．58 0．46 0．93 0．34 0 0 53 0．83 1．Ol 0．72 0．56
裹3小半夏汤共有峰的相对峰面积值
Table3 RdativepeakareaofcommonpeaksforfingerprintofXlaobanxiaDecoctinn
样 共有峰相对峰面积
品 1 2 3 4 5 6(S) 7 8 9 10 11
Z 0．294 0．188 1．138 1．630 0．027 1．000 0．149 0091 0．154 0．058 0．106
3 0．409 0。278 1．592 I．843 轨028 1．000 0．106 0。101 0。405 0，085 0。l弛
4 0410 0．284 I．522 1．83l 0，031 1．000 0一110 0．103 0．404 乱082 0．142
5 0．535 0-2971，732 2．176 0．059 1．000 0．271 0．123 0．497 0．085 0．1lZ
6 0．623 0．622 1．516 2．242 0．026 1．000 0．151 0 117 0．534 0．093 0．100
7 0．640 0 419 1．782 2．607 0．038 1．000 0．471 0 197 0．437 0．098 0 148
8 2 076 2．178 2．867 4．193 0．064 1．000 1．047 0 340 0．351 0．926 0．424
9 0．696 0 236 1．344 ＼1．566 0．111 1，000 0．147 0．132 1．265 0．934 0．453
1 1 2：!坐 !：!§! !：丝2 l!：坠! Q：!≥Z 2：!业 !：丝! Q：!垫 !：±丝 Q：韭2 1：!塑
2．5．3共有峰的归属：取对照品溶液各10pL，注 上述色谱条件下分别进样，对比各吸收峰的紫外吸
人液相色谱仪，在上述色谱条件下分别进样，对比各 收光谱和相对保留时间可知，小半夏汤指纹图谱中
吸收峰的紫外吸收光谱和相对保留时间可知，指纹 的吸收蜂均来自于半夏药材，制荆与药材之间存在
谱中，1号峰为尿嘧啶(4．40rain)，2号峰为黄嘌呤很强的相关性。色谱图见图1。
(7．07min)，3号峰为尿嘧啶核苷(8．36rain)，5号3讨论
峰为次黄瞟呤核苷(17．38min)。6号峰为鸟嘌呤核
苷(19．14rain)。
2．6制剂与药材之间的相关性研究：取半夏药材、
生姜药材供试品溶液各10pL，注入液相色谱仪，在
3．1核苷类成分的检测及确认：小半夏汤仅由半夏
生姜两味药组成，半夏的水溶性成分中含有次黄嘌
呤核苷和鸟嘌呤核苷[”，而核苷又是一类生理活性
很强的物质，因此推测小半夏汤中也可能含有棱苷
万方数据
中草焉ChJrmeseTraditional。蝴HerbalDrugs第38卷第10期20D7牟10月
曲屯：j．也。
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1一展嘧睫2黄嘌畸3一屎嘧啶棱昔
5一故黄摩睁棱苷6一鸟曛睁棱苷
l-uracil2-xanthine3一uridine5-inosine6一guanosine
固1小半夏汤(A)、半夏药材(B)和生姜药材(c)的·
HPLC指垃田谱
Fig．1HPLCFinRerprtnt0fXiaobanxiaDecoction
(A)，RkizomaPinelliae(B)，andRhizoma
ZingiberJkcPⅢf(C)
类成分，于是采用HPLC—PDA法对该方成分进行
检测。同时，为确认小半夏汤中上述5种核苷类成分
的存在，采用了甲醇一水(2：98)、乙腈一0．2％三乙胺
(磷酸调pH3．5)(1I 50)的色谱系统，井经紫外区
全波长扫描，结果发现在这两种洗脱条件下，供试品
溶液中该5种成分的保留时间及紫外光谱与各相对
应的对照品完全一致。
3．2参照物的选择：由于鸟嘌呤核苷的量相对较高
(其面积占总峰面积的5％以上)，保留时间在整个
色谱图中处的位置叉比较恰当。因此，本实验以乌嘌
呤核苷为参照物。
3．3色谱条件的选择
3．3．1色谱柱的选择：比较了不同品牌的色谱柱对
各峰分离度的影响，结果Intersil．Kromasil及
Liehrospher等都能使各成分得到较好分离，考虑到
汉邦公司的Lichrospher色谱柱价廉易得，适用范
围广，故使用该品牌色谱柱进行试验。
3．3．2流动相的选择：比较了甲醇～水、甲醇一水一醋
酸、甲酵一水一磷酸、甲酵一永～磷酸盐、乙腈一水、乙猜一
水醋酸、乙腈一水一三乙胺系统对出峰的数目及各峰
分离度的影响，结果发现，使用乙腈、水、甲醇一水、乙
腈一水一三乙胺系统，调整梯度洗脱程序，都能使各峰
达到良好的分离；由于乙腈水系统操作简单，出峰
较多，因此本实验采用乙腈一水系统进行程序洗瞄，
3．3本实验中所得10批小半夏汤中所含各成分的
量存在较大差异，各成分之间量上并不成恒定的比例
关系。原因可能在于不同批次问所用原料药材的产
地、采收季节、炮制加工及制剂制备过程中工艺的些
微差异有关。在本实验对收集的9批半夏药材进行的
研究中发现其所含成分的量上确实存在很大差异。
3．4本实验采用梯度洗脱，在对溶刺和供试品溶液
分别在该色谱条件下进行研究时发现，供试品溶液
中的成分峰基本都集中在50rain之前，50rain以后
的峰大都是溶剂梯度峰，因此本实验出具的色谱图
均为50rain的色谱图。
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鼻通喷雾剂的质量标准研究
张何1，吏公良2，张景云1，韩健1，何晓明1，崔培红，，赵余庆”
(1·豇宁中医药大学职业技术学院，辽宁沈阳110101；2．辽宁中医药大学药学院，辽宁沈阳110032
3．沈阳药科大学．辽宁沈阳 110016)
摘要：目的建立鼻埔喷雾剂的质量标准。方法对制剂中细辛、菊花和冰片采用薄层色谱法进行定性鉴别；采
用HPLC法测定制剂中欧前胡素。结果薄层色谱法能检出细辛，菊花和冰片；欧前胡紊在0．07232～o． 61Pg
与峰面积具有良好的线性关系．平均回收率为98．59“，RSD为I．04“。结论建立的方=；击简便、准确、可靠．重现
性好，可作为该制剂的质量标准。
望鍪最眢：翌翠；}蠢銎计划项目。。。02：。。，
*通讯作者赵杂庆Tel，(024)23986522Emailtzyq4885@126．咖
万方数据
小半夏汤HPLC指纹图谱的研究
作者： 张科卫， 梅阳， 吕爱娟， 蔡皓， 李伟， 崔小兵， 吴皓， ZHANG Ke-wei， MEI Yang
， L(U) Ai-juan， CAI Hao， LI Wei， CUI Xiao-bing， WU Hao
作者单位： 南京中医药大学,江苏,南京,210029
刊名： 中草药
英文刊名： CHINESE TRADITIONAL AND HERBAL DRUGS
年，卷(期)： 2007,38(10)
被引用次数： 7次

参考文献(3条)
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5.王欣 小半夏汤研究述要[期刊论文]-中成药 2010(9)
6.孔祥玲.张曜武.王超 中药色谱指纹图谱研究的回顾与展望[期刊论文]-西北药学杂志 2010(1)
7.张科卫.蒋征.王茜茜.温强蔚 小半夏汤研究进展[期刊论文]-中成药 2012(3)


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